当前位置：文档之家 › 生物实验室常用试剂的配制ppt课件

生物实验室常用试剂的配制ppt课件

  • 格式：ppt
  • 大小：473.50 KB
  • 文档页数：16

下载文档原格式

  / 16

合集下载

试剂配制操作及注意事项PPT教学课件

试剂配制操作及注意事项PPT教学课件
2020/12/10
1
试剂配制及一般注意事项
2020/12/10
2
配制试剂的顺序
1.计算 2.称量或量取 3.溶解 4.转移 5.洗涤 6.定容 7.摇匀 8.转移至试剂瓶中 9.标签
2020/12/10
3
注意事项
溶液应用纯化水配制，容器应用纯化水洗三次以上 溶液要用带塞（盖）的试剂瓶盛装
2020/12/10
4
计算
摩尔数的计算 百分比的计算
固体：g/v 溶液100ml中含有溶质若干克 液体：v/v 溶液100ml中含有溶质若干毫升
2020/12/10
5
试剂分类
按其使用时限来分：即配即用型、短效型、中效型、 长效型
按其毒性：无毒、低毒、中等毒性、剧毒 用途：如缓冲液、清洗液、主要组份
三是称量辅助器具。称固体一般可用称量纸，也可用 容器；称液体要用容器。
四是称量剩余的固体及不小心洒落的液体要清除干净。 固体以毛刷刷去；液体可用吸水纸吸干，并更换纸轻 拭。
2020/12/10
12
对于固体，一般要尽量以小勺捣至成粉末或小颗粒， 再以牛角勺轻抖至称量纸上或容器中。
对吸湿性强的固体，尤其注意环境中的湿度，并迅速 完成称量。NaOH
2020/12/10
17
量筒有大少不同的规格。 容量瓶比较精确。但不能配成随意的容量。 移液器。
注意：玻璃量器均不能高温，以免容量不准。只能吹 干。
2020/12/10
18
容量瓶的使用六忌
一忌用容量瓶进行溶解（体积不准确） 二忌直接往容量瓶倒液（洒到外面） 三忌加水超过刻度线（浓度偏低） 四忌读数仰视或俯视（仰视浓度偏低， 俯视浓度偏高） 五忌不洗涤玻璃棒和烧杯（浓度偏低） 六忌标准液存放于容量瓶（容量瓶是量器，不是容器）

生物学实验室常用试剂的配制方法

生物学实验室常用试剂的配制方法

一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA 的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

试剂配制操作与注意事项PPT教学课件

试剂配制操作与注意事项PPT教学课件
放置天平的房间要控制温湿度，放置天平的台子要平。
水平仪在天平的正后方，视线要与其垂直，视水平仪 水泡置于正中之时，即可。要细心、耐心地调好。切 忌动作粗暴。
2020/12/10
11
天平
一是预先插电预热，至电子天平的屏幕显示稳定后再 称量。
二是配制时，除极少数特殊情况外，一般是从侧面加 入试剂原料。
9.8249=9.82, 9.82671=9.83 9.8350=9.84, 9.8351 =9.84 9.8250=9.82, 9.82501=9.83
2020/12/10
16
量器的使用
量器主要有：带刻度烧杯、带刻度试管、带刻度吸管、 量杯、量筒、容量瓶、移液管、移液枪、微量进样器。
前面四个都是比较粗略的量器，基本上只作一个估计 值。对于一些不需精确浓度的试剂的配制是可行的。
配制好的试剂应及时盛入试剂瓶，试剂瓶上必须有标明名 称、浓度与配制人，配制日期，复核人，复核日期的标签， 有效期限
溶液储存时应注意不要使溶液变质 配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液时，应把酸倒入水中
防护措施：不能用手直接接触腐蚀性及有剧毒的溶液，剧 毒废液应作解毒处理，不可直接倒入下水道
应熟悉一些常用溶液的配制方法及常用试剂的性质
三是称量辅助器具。称固体一般可用称量纸，也可用 容器；称液体要用容器。
四是称量剩余的固体及不小心洒落的液体要清除干净。 固体以毛刷刷去；液体可用吸水纸吸干，并更换纸轻 拭。
2020/12/10
12
对于固体，一般要尽量以小勺捣至成粉末或小颗粒， 再以牛角勺轻抖至称量纸上或容器中。
对吸湿性强的固体，尤其注意环境中的湿度，并迅速 完成称量。NaOH
2020/12/10
19

实验室常用试剂的配制

实验室常用试剂的配制

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮 存于-20℃ 17. DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以 使残余的DEPC失活。DEPC 会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 18. TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml 19. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L
16. 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠 颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅 拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定 容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前 配制）

《试剂配制方法》课件

《试剂配制方法》课件

提高试剂配制效率的方法
1 2
制定详细的配制计划
在配制前制定详细的计划，明确所需的试剂、溶 剂、浓度等，有助于提高配制效率。
使用合适的容器和工具
选择合适的容器和工具，如精确的称量瓶、移液 管和滴定管等，能够提高配制精度和效率。
3
优化配制流程
合理安排配制顺序和混合方式，减少不必要的操 作和等待时间，有助于提高配制效率。
标签标识
配制完成后，对容器进行标签标识 ，注明试剂的名称、浓度、配制日 期等信息。
实验操作技巧
精确称量
加热方法
对于需要精确称量的试剂，使用天平 进行称量，确保精度。
根据需要选择合适的加热方式，如水 浴、油浴等，控制加热温度和时间， 避免温度过高或过低。
搅拌技巧
在搅拌试剂时，采用合适的搅拌方式 和工具，确保搅拌均匀，避免局部浓 度过高或过低。
THANKS
将一定量的硝酸铵固体溶 解在水中，根据需要调整 浓度。
氢氧化镁悬浊液
将一定量的氢氧化镁固体 溶解在水中，搅拌均匀后 静置至沉淀完全。
其他试剂的配制
01
甲酸溶液
将一定量的甲酸液体缓慢加入 水中，同时搅拌，根据需要调
整浓度。
将一定量的醋酸液体缓慢加入水 中，同时搅拌，根据需要调整浓
度。
02
醋酸溶液
03
试剂的储存与使用
试剂的储存
不同试剂需要存放在干燥、阴凉 、通风良好、远离火源的地方， 有些试剂还需要特别注意密封、 避光等储存条件。
试剂的使用
使用试剂时，需要遵循正确的操 作步骤，控制好用量，避免浪费 和安全事故。
试剂的安全防护
试剂的安全警示标识
对于有毒、易燃、易爆、腐蚀性等危 险性试剂，需要设置明显的安全警示 标识。

实验室常用试剂配制

实验室常用试剂配制

实验室常用溶液的配制1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

试剂配制操作及注意事项PPT课件

试剂配制操作及注意事项PPT课件

2019/11/3
9
试剂的溶解度
易溶性的：像绝大多数的酸、碱、盐类试剂，都是易 溶性，且一般是水溶性的。有机溶剂。
难溶性的：有用DMSO来配的。
在配制难溶性物质的时候，有的可以加加热，有的可 以搅拌，有的可以用超声。
2019/11/3
10
天平
固体配制成试剂时，通常要用到天平。
每一个天平都有它的量程范围。超过或接近最大量程， 都是不妥的。
配制好的试剂应及时盛入试剂瓶，试剂瓶上必须有标明名 称、浓度和配制人，配制日期，复核人，复核日期的标签， 有效期限
溶液储存时应注意不要使溶液变质 配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液时，应把酸倒入水中
防护措施：不能用手直接接触腐蚀性及有剧毒的溶液，剧 毒废液应作解毒处理，不可直接倒入下水道
一忌用容量瓶进行溶解（体积不准确） 二忌直接往容量瓶倒液（洒到外面） 三忌加水超过刻度线（浓度偏低） 四忌读数仰视或俯视（仰视浓度偏低， 俯视浓度偏高） 五忌不洗涤玻璃棒和烧杯（浓度偏低） 六忌标准液存放于容量瓶（容量瓶是量器，不是容器）
2019/11/3
19
pH计的使用
有些对pH 要求比较精确的溶液是用要pH计来测定的 pH计的校准，标准液体的有效期。 按照SOP去操作。 要注意保护好电极。不用时多以氯化钾饱和溶液来保
放置天平的房间要控制温湿度，放置天平的台子要平。
水平仪在天平的正后方，视线要与其垂直，视水平仪 水泡置于正中之时，即可。要细心、耐心地调好。切 忌动作粗暴。
2019/11/3
11
天平
一是预先插电预热，至电子天平的屏幕显示稳定后再 称量。
二是配制时，除极少数特殊情况外，一般是从侧面加 入试剂原料。

实验室常用溶液及试剂配制

实验室常用溶液及试剂配制

实验室常用溶液及试剂配制实验室常用溶液、试剂的配制表一普通酸碱溶液的配制名称（分子式）比重（d）含量（w/w%）近似摩尔浓度（mol/L）欲配溶液的摩尔浓度（mol/L）6 3 2 1配制1L溶液所用的ml数（或g）盐酸（HcL） 1.18～1.19 36～38 12 500 250 167 83硝酸（HNO3） 1.39～1.40 65～68 15 381 191 128 64硫酸（H2SO4） 1.83～1.84 95～98 18 84 42 28 14冰醋酸（Hac） 1.05 99.9 17 253 177 118 59磷酸（H3PO4） 1.69 85 15 39 19 12 6氨水（NH3•H2O） 0.90～0.91 28 15 400 200 134 77氢氧化钠（NaOH）（240）（120）（80）（40）氢氧化钾（KOH）（339）（170）（113）（56.5）表二常用酸碱指示剂指示剂 PKHIn 变色范围pH 酸色碱色配制方法百里酚蓝（麝香草酚蓝） 1.65 12.～2.8 红黄 0.1%的20%乙醇溶液甲基橙 3.4 3.1～4.4 红橙黄 0.05%水溶液溴甲酚绿 4.9 3.8～5.4 黄蓝 0.1%的20%乙醇溶液或0.1g指示剂溶于2.9ml 0.05mol/L NaOH加水稀释至100ml甲基红 5.0 4.4～6.2 红黄 0.1%的60%乙醇溶液溴百里酚蓝（麝香草酚蓝） 7.3 6.2～7.3 黄蓝 0.1%的20%乙醇溶液中性红 7.4 6.8～8.0 红黄橙 0.1%的60%乙醇溶液百里酚蓝（第二变色范围） 9.2 8.0～9.6 黄蓝 0.1%的20%乙醇溶液酚酞 9.4 8.0～10.0 无色红 0.5%的90%乙醇溶液百里酚酞 10.0 9.4～10.6 无色蓝 0.1%的90%乙醇溶液表三混合酸碱指示剂指示剂组成（体积比）变色点pH 酸色碱色备注一份0.1%甲基橙水溶液一份0.25%靛蓝二磺酸钠水溶液 4.1 紫绿灯光下可滴定一份0.02%甲基橙水溶液一份0.1溴甲酚绿钠盐水溶液 4.3 橙蓝绿 PH3.5黄色PH4.05绿黄PH4.3浅绿三份0.1%溴甲酚绿20%乙醇溶液一份0.2%甲基红60%乙醇溶液 5.1 酒红绿颜色变化极鲜明一份0.2%甲基红乙醇溶液一份0.1%次甲基蓝乙醇溶液 5.4 红紫绿 PH5.2红紫PH5.4暗蓝PH5.6绿色一份0.1%溴甲酚绿钠盐水溶液一份0.1%绿酚红钠盐水溶液 6.1 黄绿蓝紫 PH5.6蓝绿PH5.8蓝色PH6.0浅紫PH6.2蓝紫一份0.1%溴甲酚紫钠盐水溶液一份0.1溴百里酚蓝钠盐水溶液 6.7 黄紫蓝 PH6.2黄紫PH6.6紫PH6.8蓝紫一份0.1中性红乙醇溶液一份0.1次甲基蓝乙醇溶液 7.0 蓝紫绿 PH7.0为蓝绿必须保存在棕色瓶中一份0.1甲酚红钠盐水溶液三份0.1%百里酚蓝钠盐水溶液 8.3 黄紫 PH8.2玫瑰色PH8.4紫色一份0.1%百里酚蓝50%乙醇溶液三份0.1酚酞50%乙醇溶液 9.0 黄紫 PH9.0绿色表四容量分析基准物质的干燥基准物质干燥温度和时间基准物质干燥温度和时间碳酸钠（NaCO3） 500～650℃，40-50min 氯化物（NaCl） 500-650℃，干燥40-50min草酸钠（H2C2O4） 150-200℃，1-1.5h 硝酸银（AgNO3）室温，硫酸干燥器中至恒温草酸（H2C2•2H2O）室温，空气干燥2-4h 碳酸钙（CaCO3）120℃，干燥至恒重硼砂（Na2B2O•10H2O）室温，在NaCl和蔗糖饱和液的干燥器中，4h 氧化锌（ZnO）800℃灼烧至恒重邻苯二甲酸氢钾（KHC6H4O4） 100-120℃，干燥至恒重锌（Zn）室温，干燥器24h以上重铬酸钾（K2Cr2O7） 100-110℃，干燥3-4h 氧化镁（MgO）800℃灼烧至恒重表五缓冲溶液的配制1、氯化钾-盐酸缓冲溶液0.2mol/LKCl（ml） 50 50 50 50 50 50 500.2mol/LHCl（ml） 97.0 64.3 41.5 26.3 16.6 10.6 6.7 水（ml） 53.0 85.5 108.5 123.7 133.4 139.4 143.3PH（20℃） 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.22、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液0.2mol/LKHC6H4O4（ml） 50 50 50 50 500.2mol/LHCl（ml） 46.70 32.95 20.32 9.90 2.63水（ml） 103.30 117.05 129.68 140.10 147.37PH（20℃） 2.2 2.6 3.0 3.4 3.83、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液0.2mol/LKHC6H4O4（ml） 50 50 50 50 500.2mol/LHCl（ml） 0.40 7.50 17.70 29.95 39.85水（ml） 149.60 142.50 132.20 120.05 110.15PH（20℃） 4.0 4.4 4.8 5.2 5.64、乙酸-乙酸钠缓冲溶液0.2mol/LHAc（ml） 185 164 126 80 42 190.2mol/LNaAc（ml） 15 36 74 120 158 181PH（20℃） 3.6 4.0 4.4 4.8 5.2 5.65、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液0.2mol/LKH2PO4（ml） 50 50 50 50 50 500.2mol/LNaOH（ml） 3.72 8.60 17.80 29.63 39.50 45.20 水（ml） 146.26 141.20 132.20 120.37 110.50 104.80 PH（20℃） 5.8 6.2 6.6 7.0 7.4 7.86、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液0.2mol/L硼砂（ml） 90 80 70 60 50 400.2mol/LNaOH（ml） 10 20 30 40 50 60PH（20℃） 9.35 9.48 9.66 9.94 11.04 12.327、氨水-氯化铵缓冲溶液0.2mol/LNH3•H2O（ml） 1 1 1 2 8 320.2mol/LNH4Cl（ml） 32 8 2 1 1 1PH（20℃） 8.0 8.58 9.1 9.8 10.4 11.08、常用缓冲溶液的配制PH 配制方法3.6 NaAc•3H2O 8g，溶于适量水中，加6mol/LHAc 134ml，稀释至500ml4.0 NaAc•3H2O 20g溶于适量水中，加6mol/LHAc 134ml，稀释至500ml4.5 NaAc•3H2O 32g溶于适量水中，加6mol/LHAc 68ml，稀释至500ml5.0 NaAc•3H2O 50g溶于适量水中，加6mol/LHAc 34ml，稀释至500ml8.0 NH4Cl 50g 溶于适量水中，加15mol/LNH3•H2O 3.5ml，稀释至500ml8.5 NH4Cl 40g 溶于适量水中，加15mol/LNH3•H2O 8.8ml，稀释至500ml9.0 NH4Cl 35g 溶于适量水中，加15mol/LNH3•H2O 24ml，稀释至500ml9.5 NH4Cl 30g 溶于适量水中，加15mol/LNH3•H2O 65ml，稀释至500ml10 NH4Cl 27g 溶于适量水中，加15mol/LNH3•H2O 197ml，稀释至500ml实验室常用试验方法2九、柠檬酸（C6H8O7•H2O）称取试样1.5g（精确到0.0002g）于三角瓶内，加入水50ml溶解，加酚酞指示剂3滴，用1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色为终点，同时做空白试验。

实验室常用试剂配方

实验室常用试剂配方

常用试剂的配方常用贮液与溶液 (1)1mol/L亚精胺（Spermidine） (1)1mol/L精胺（Spermine） (1)10mol/L乙酸胺（ammonium acetate） (1)10mg/ml牛血清蛋白(BSA） (1)1mol/L二硫苏糖醇（DTT） (1)8mol/L乙酸钾（potassium acetate） (1)1mol/L氯化钾（KCl） (1)3mol/L乙酸钠（sodium acetate） (1)L EDTA (1)1mol/L HEPES (1)1mol/L HCl (1)25mg/ml IPGT (2)1mol/LMgCl2 (2)100mmol/L PMSF (2)20mg/ml蛋白酶K（proteinase K） (2)10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase） (2)5mol/L氯化钠（NaCl） (2)10N氢氧化钠（NaOH） (2)10％SDS（十二烷基硫酸钠） (2)2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol） (2)100％三氯乙酸（TCA） (2)％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷） (2)100×Denhardt试剂（Denhardt’s regent） (2)10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） (3)100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） (3)20％PEG 8000/2.5M NaCl (4)20×SSC (4)DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 (4)甲酰胺（deionized formamide） (4)TE（用于悬浮和贮存DNA） (4)Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） (5)30%丙烯酰胺溶液 (5)40%丙烯酰胺 (5)放线菌素D溶液 (6)L腺苷三磷酸（A TP）溶液 (6)10mol/L乙酸酰溶液 (6)10%过硫酸铵溶液 (6)BCIP溶液 (6)2×BES缓冲盐溶液 (7)1mol/L CaCl2溶液 (7)L CaCl2溶液 (7)1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 (7)脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液 (7)L EDTA溶液 (8)溴化乙锭（10mg/ml溶液） (8)2×HEPES缓冲盐溶液 (9)IPTG溶液 (9)1mol/L乙酸镁溶液 (9)1mol/L MgCl2溶液 (9)β-巯基乙醇（BME）溶液 (9)NBT溶液 (10)酚/氯仿溶液 (10)10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液 (10)磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 (10)1mol/L乙酸钾（）溶液 (11)乙酸钾溶液（用于碱裂解） (11)3mol/L乙酸钠（和）溶液 (11)5mol/L NaCl溶液 (11)10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液 (11)20×SSC溶液 (12)20×SSPE溶液 (12)100%三氯乙酸溶液 (12)1mol/L Tris溶液 (12)Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/L Tris） (13)X-gal溶液 (13)PBS: (13)TBS： (13)枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）： (14)胰酶（Trypsin）： (14)胃酶（Pepsin）： (14)DAB： (14)AEC： (15)RIPA： (15)9、Blotto A： (15)10、Blotto B： (15)电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 (15)电泳缓冲液 (15)染料 (16)10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide） (16)凝胶上样液（gel loading solutions） (16)6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） (17)6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） (17)6×甘油凝胶上样液（4℃贮存） (18)6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） (18)10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） (18)常用培养基 (19)LB培养基 (19)SOC培养基 (20)TB培养基 (20)YPD培养基 (20)常用抗生素 (21)氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） (21)羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） (21)甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） (21)卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） (21)氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） (21)链霉素（streptomycin）（50mg/ml） (21)萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） (21)四环素（tetracyyline）（10mg/ml） (21)实验室常用贮存液的配制参数 (22)一、核酸及蛋白质常用数据 (22)2．常用核酸的长度与分子量 (22)3．常用核酸蛋白换算数据 (23)4．常用蛋白质分子量标准参照物 (24)5．常用DNA分子量标准参照物 (24)二、常用缓冲液 (26)1．分子克隆常用缓冲液 (26)2．磷酸缓冲液 (26)3．电泳缓冲液 (27)4．凝胶加样缓冲液 (29)5．各种pH值的Tris缓冲液的配制 (30)7．温度对常用缓冲液pH的影响 (33)三、常用酶的配制 (33)1．溶菌酶 (33)2．蛋白水解酶类 (33)3．无DNA酶的RNA酶 (34)四、常用抗生素溶液 (34)五、杂交试验中用于降低背景的封闭剂 (35)六、常用凝胶的技术参数 (36)1．葡聚糖凝胶的某些技术数据 (36)2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 (38)3．琼脂糖凝胶的技术数据 (39)4．各处凝胶所允许的最大操作压 (40)5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围 (40)6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 (40)7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 (41)七、氨基酸的特性 (41)八、遗传密码 (43)九、常用酸碱技术参数 (44)1．常见的市售酸碱的浓度 (44)2．各种浓度的酸碱贮存液的近似pH值 (45)常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

【优】常 用 试 剂 的 配 制缓冲液的配制最全PPT

【优】常 用 试 剂 的 配 制缓冲液的配制最全PPT

如试剂为有机溶剂，欲加热，则需隔水加热，待完全溶解，置室温冷却，倒入容量瓶中，以溶剂补充体积至刻度，混匀，倒入试剂瓶，
保存备用。
5
6.
8
8.
三、缓冲液的配制
原理：缓冲液是由一共轭酸及一共轭碱所组 成，能够抵抗外来少量酸、碱或稀释而自身 PH不发生显著改变，具有缓冲作用的溶液。
操作方法： 2HPO4贮存液100ml（A液） 2. NaH2PO4贮存液100ml（B液） 液81ml，B液19ml，混匀 4.用PH计测定溶液PH，并校正。
7 7 5
9130..解：31. 即称取氢氧化钠40g,溶于800 ml蒸馏水
中，最后以蒸馏水稀释至1000ml即可 5
31.
根据实验要求选取合格溶质，称取所需重量，加适量溶质溶解，必要时可办热助溶，待冷至室温，转入适量的量器中，以溶剂补足至
刻度。
原理：缓冲液是由一共轭酸及一共轭碱所组成，能够抵抗外来少量酸、碱或稀释而自身PH不发生显著改变，具有缓冲作用的溶液。
一般注意事项：
配制试剂时，应根据试验要求选用不同规格的试剂。配
制标准溶液的试剂应符合GR或AR级，必要时要进行干
7 10. 燥、提纯。一般溶液无特殊要求者可选用CP级试剂。
0
5.
配制试剂所用的水都应是蒸馏水或离子交换水，有特殊 7根据实验要56求.选取合格溶质，称取所需重量，加适量溶质溶解，必要时可办热助溶，待冷至室温，转入适量的量器中，以溶剂补足至
2.质量—体积浓度（g/L）： 3.物质的量浓度：简称浓度C，是指1L溶液中所
含溶质的量。溶质的量可用mol、mmol、umol 等表示。
举例：
例：欲配制1mol/L的氢氧化钠溶液1000ml,
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

化能力，要现配现用。
4.甲醛溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以2～
5%溶液消毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。
5.漂白粉 本品含有效氯为25～30%，有强杀菌力，
能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。
十二、麻醉剂 它可分挥发性 (如乙醚)和非挥发性 (如
氨基甲酸乙酷)两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，
等。在用乙醇脱水时，为了避免材料萎缩、僵硬，应从低
到高使用不同的浓度，逐渐脱水，有时还用无水乙醇脱水。
一般组织 (除神经组织，柔软组织外)可从70%乙醇开始经
80%、95%、100%乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组
织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从50%或30%或
20%乙醇开始，否则组织收缩较严重。
九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能
浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目的在于使组织中的乙醇或
丙酮被透明剂所替代，使石蜡能很顺利进进入组织和增强
组织的折光系数，便于显微镜的观察，并能和封藏剂混和
进行封藏。透明剂的种 .
类很多，常用的有二甲苯、甲苯、苯、氯仿和香柏油。
如二甲苯是应用最广的廉价透明剂。易溶于乙醇又能溶解
取2g碘化钾，溶解在10mL蒸馏水中，再加1g碘，
待溶解后用蒸馏水稀释到300mL。即成碘液。溶液在光亮
处溶容于易水，变当成加氢入碘K酸I，后须可保大存大在增棕加色I2的玻溶瓶解里度。。因为I2，不易 .
3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制10%氢氧化钠溶
液和1%硫酸铜溶液，待用。在3毫Байду номын сангаас待测液中加入1mL10%氢
甲醛
.
溶液。甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好
的动、植物材料固定液，有强烈的杀菌能力，穿透力大(仅次于
乙酸)，防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材
料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，因此对于精细
的解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。
2.乙醇(C2H5OH) 有强烈的杀菌作用，渗透力较大，但固
20mL的蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边
滴边搅拌，以免产生不溶性的磷酸钙沉淀。常用于变温动物，
如两栖类。
3.乐氏(Locke's)生理盐水 先把9g氯化钠、0.42g氯化钾、
0.1~0.3g碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到
980mL。再取0.24g氯化钙溶解在20mL蒸馏水中，逐滴加入
里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢固，可长期保存。
2.甘油 临时封片常用的封藏剂，材料先用 10%的甘
油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。
3.松香 取纯松香将其磨碎，放入烧杯内，置于80～
100℃处加热1～2h后，待松香熔解时其中挥发性杂质和
气泡外逸，加入约为松香重量一半的二甲苯，搅拌均匀即
上述溶液中，常用于恒温动物，如哺乳类。
七、固定液和保存液 固定液能把有生命的材料迅速杀死，
并尽可能保持它原有的形态和结构，具有防腐和保存和作用。
1.甲醛也叫福尔马林液(Fomalin)，固定材料常用5%甲
醛溶液，保存生物标本常用4一5%的，消毒常用3%的。市售的
是40%甲醛溶液，加7、9、12倍水分别稀释成5%、4%、3%
自配碘酒时，可取5g碘化钾和7g碘溶解在5mL蒸馏水中，
再加无水乙醇到1OOmL。
3.高锰酸钾 强氧化剂，遇到有机物即放出新生态氧
而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有
刺激及腐蚀作用；0.1%水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使
皮肤消毒;2~5%水溶液能在24h内杀死细菌芽孢。本液在
空气中易分解，失去氧 .
3.溴甲酚紫指示剂 将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的
0.02mol/L氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至250mL制得。
当pH值由6.2~6.8时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点
在pH6.7。
二、定性鉴定某些物质的试剂
1.鉴定葡萄糖的试剂
(1)班氏(Benedict)试剂
a.在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无
(1)马克凯郎(MaecalIum)氏液 也叫硝酸甘油溶液，
取1份浓硝酸、2份甘油、2份水混合制得。适于分离横纹
肌和心肌组织。
(2)30%氢氧化钾溶液或30%氢氧化钠溶液 肌肉小块
浸泡时间0.5一1小时。
2.用于分离神经细胞的试剂
(1)甲醛－生理盐水溶液 称取58.44g氯化钠，用蒸馏
水溶解，再稀释到1000mL加入2g40%甲醛溶液，可得甲
固，故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是0.3~0.5%。乙酸能
凝固细胞核内的蛋白质 (核蛋白)，对染色质或染色体的固定，
染色较好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，
组织也不会硬化。它常跟乙醇、甲醛、铬酸等易引起硬变的收
缩的液体组成混合固定液，效果较好。
.
4、乙酸－乙醇溶液 由冰乙酸1份与纯乙醇3份混和而
醛－生理盐水溶液。这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，
既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液
里，分离小肠和气管上皮组织需2小时，口腔和皮肤上皮
组织需3天。
.
(2)硼酸－生理盐水溶液 在0.75%生埋盐水中加入硼
酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位
的神经组织。
3.用于分离神经纤维的试剂 硝酸银溶液:取0.5G硝酸
生物实验室常用试剂的配制
一、检验酸碱性的试剂
1.酚酞试液 取0.1酚酞，溶解在100mL60~90%的乙
醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液
中呈红色。
2.麝香草酚酞(百里酚酞)试液 把0.1g白色的麝香草酚
酞溶解在100mL90%乙醇里制得。当pH值由9.4~10.6时，
颜色为无色至蓝色。
氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色
反应。
4.鉴定脂肪的试剂 苏丹IV溶液的配制：取0.2g苏丹IV，
放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。
过滤后倒迸试剂瓶内密闭保存备用。苏丹Ⅲ溶液的配制：0.1g
苏丹Ⅲ粉末加入95%乙醇100mL待全部溶解后便可使用。
5.鉴定DNA的二苯胺试剂
菌。且对人毒性小，适用于皮肤及器械等消毒。
95~100%乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，
使乙醇分子不易继续透入，杀菌能力反而减弱。
2.碘酒 它是碘和碘化钾的乙醇溶液，有稀碘酒和浓
碘酒两种。市售的是2%的稀碘酒，在10min内能杀死细
菌及芽抱，可用于消毒皮肤，但对皮肤的刺激性很大，故
用后应以70%乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。
四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器
是无色透明的，必须经染色剂染色，才能在显微镜下观察
清楚，常用染色剂的制法和适用范围见Ｐ122表。
.
五、干燥剂
干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附
作用或两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥
的物质有无化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。
六、生理盐水
1.各类动物实验常用的生理盐水 两栖类生理盐水是
0.65%的氯化钠溶液;鸟类是0.75%的;哺乳类和人是0.9%。
2.任氏(Ringer's)生理盐水 先把6.5g氯化钠、0.14g氯化
钾、0.2g碳酸氢钠和0.01g磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水
中，混和后用蒸馏水稀释到980mL。取0.12g氯化钙溶解在
遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。
.
(3)溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1溴代麝香草酚蓝，溶
解在100mL蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使
它成为碱性溶液而呈蓝色。本溶液pH值变化范围是6.0(黄)
至7.6(蓝)。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液
变成黄色。
三、分离液
1.用于分离肌纤维的试剂
a.取35g硫酸铜溶解在400mL蒸馏水里，加蒸馏水到
500mL。
b.取85g氢氧化钾 (或70g氢氧化钠)和175g酒石酸
钾钠，溶解在400mL蒸馏水里，加水馏水到500mL。
上述两种溶液耍分别保存，使用时再等量地混和并搅
拌。如溶液里有葡萄糖，加等量裴林试剂，煮沸，会产生
红色的氧化亚铜沉淀。
2.鉴定淀粉用的碘液
常用干燥有:
1、氧化钙 (cao) 白色固体，碱性氧化物，可干燥
氧、氨、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧
化碳、氯化氢、硫化氢。
2、碱石灰 白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加
入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于200～250℃
下干燥而成。可以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二
氧化碳进入反应系统的装置中。
水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。
.
b.在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却
后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠－碳酸
钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂
配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层
清液使用，不必重配。
(2)裴林氏(Fehling's Solution)试剂
成松香封藏剂，本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。
缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。
.
十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力强、性质
稳定，易于溶解和穿透力大的特性，此外还要求对人和动
物组织的毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。
1.乙醇 它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐
的作用。70%乙醇的杀菌力最强，可在3~5mim内杀死细