血浆葡萄糖测定 SS

血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法。

它可以检测血清中的水溶性葡萄糖的含量，从而可以反映机体的糖代谢情况。

血清葡萄糖测定方法有多种，其中最常用的是酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK）。

2、酶联免疫法（ELISA）
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的血清葡萄糖测定方法。

ELISA技术利用免疫反应原理，把糖尿病患者血清中的葡萄糖水解酶以抗原或抗体的形式结合起来，然后用抗体识别，经过可见性染料和酶的底物分解，用放大效应得到明显的反应信号，通过测量信号来确定葡萄糖的浓度。

ELISA对葡萄糖的检测灵敏度很高，但是分析时间比较长，且需要有特殊的仪器。

3、磷酸二氢钾滴定法（HK）
磷酸二氢钾滴定法（HK）是另一种检测血清葡萄糖浓度的常用方法。

它是一种血清中葡萄糖的滴定法，用40-50℃的磷酸二氢钾溶液作为比色剂，通过比色分析得到血清中的葡萄糖含量。

这种方法分析速度快，结果准确，但是需要较高的技术要求。

4、结论
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法，它可以准确反映机体的糖代谢状况。

目前最常用的血清葡萄糖测定方法有酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK），它们具有自己的优缺点，根据实际情况选择合适的方法。

本次课主要介绍: 葡萄糖氧化酶(GOD)法 测定血糖
卫生部临床检验中心血糖测定专 题协作组 推荐方法。
反应原理
葡萄糖氧化酶(GOP)
葡萄糖 + O2 + H2O
葡萄糖酸+H2O2
过氧化物酶（POD）
2H2O2+苯酚+4-氨 基安替吡啉
醌亚胺 +4H2O
醌亚胺在A480nm-A550nm波长有最大吸收， 所产生颜色的强度与血清中葡萄糖的含量 成正比。我们再通过测定标准葡萄糖液和 样品的光密度值相比较，根据公式就可计 算出血清中葡萄糖的含量。
4、标本的采集与处理
标本的采集 样品为血清。空腹采集静脉血1.0ml，注入
于1.5ml试管中，以3000r/分的速度离心10 分钟，分离血清备用。
（二）操作步骤
蒸馏水 葡萄糖标准
样品 工作液
空白管 （ul）
10.0
标准管 （ul）
—
—
10.0
—
—
1000.0 1000.0
测定管 （ul）
—
—
2、材料
注射器（2.0ml）一支; 离心管(1.5ml) 1个; 测定管3支/样品等； 加样器（1000.0ul、20.0ul）各1 支; 吸头50.0ul、1000.0ul数个。
3、仪器设备
（1）分光光度计； （2）微型离心机(1.5ml微量离心管用)； （3）恒温水浴箱（37℃）。
血液葡萄糖测定
一、目的
通过学习血糖检测方法，熟悉和掌握一 些生化指标的检测方法并练习静脉采血 技能，有助于慢性病的流行病学调查与 研究。
二、实验原理
糖尿病的诊断一般根据家族史、患病 史、临床体检和实验室的化验结果综 合而定，其中血糖浓度的测定最为重 要。一些轻症或无症状的糖尿病，主 要依据血糖测定而诊断。

实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖【实验原理】葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。

醌的产量与葡萄糖量成正比。

醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。

【实验准备】一、材料（1）血清（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。

（2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。

（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml）（4）生理盐水。

（5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。

三、器材（1）试管和试管架（2）移液枪（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条（8）生化培养箱【实验步骤】（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按【实验结果】葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55参考值：3.89~6.11mmol/L测得数据为A2 A3 A4 A50.085 0.05 0.03 0.037(0.037+0.030)/2——×5.55 ﹦2.75mmol/L（0.085+0.050/2【实验讨论】①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。

④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引起误差。

实验器材与试剂
（一）器材 5ml移液管，50或100ul微量可调式移液器 721E型分光光度计 ，37度恒温水浴锅 （二）试剂 （1）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）：称取 无水磷酸二氢钠8.67g,称取无水磷酸二氢钾5.3g， 溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L （2）酶试剂：取过氧化物酶12 000 U，葡萄糖 氧化酶1 200 U,4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠 100mg，溶入磷酸盐缓冲液80ml中，用磷酸盐缓冲 液定容至100ml，置于4℃保存。
临床意义
• 生理性高血糖：可见于摄于高糖食物后，或情绪 紧张导致肾上腺分泌增加时。 • 病理学高血糖：a 糖尿病:病理性高血糖常见于胰 岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。b 内分泌腺 功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及 髓质功能亢进，引起各种对抗胰岛素的激素分泌 过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现 已归入特异性糖尿病中。c 颅内压增高：刺激血 糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑膜炎等，引起 血糖增高。d 脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻 和高热等也可使血糖轻度增高。
血清葡萄糖浓度的测定 （GOD-POD法）
小组成员：石子涛 习文 盛世豪 蒋勇
实验目的
1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理。
2.掌握血糖变化的临床生理意义。
知识窗
酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物
质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的 底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。
其分类如下：
实验原理
• 酶法测定血清葡萄糖是用以过氧化物酶作指示酶 的偶联酶反应定量法。 • 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化成葡 萄糖酸，同时释放出过氧化氢。过氧化物酶 (POD)催化过氧化氢氧化色素原，并使色素原氧 化成红色醌类化合物（色素），即Trinder反应。 其生成量与葡萄糖含量成正比。