“Cocktail”探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP450亚型的影响

应用Cocktail探针药物法分析中药对CYP450酶活性影响的研究进展Cocktail探针药物法作为一种快速、准确、高通量的评价CYP450酶活性的研究方法广泛应用于药物研发早期筛选、药物代谢途径及机制研究、药物相互作用研究、指导临床合理用药、上市药物再评价及协助肝肾病理研究等诸多领域。

该文对Cocktail探针药物法的特点做简要说明，着重介绍其在中医药领域内的应用进展，从中药活性成分的代谢机制研究，炮制过程，方剂配伍对CYP450的影响，揭示中成药CYP450代谢特点规律，民族药学应用情况，中药保肝作用及中医证候模型研究等，并总结归纳现有研究成果，比较其在中西医药领域内应用的异同点，为该领域的深入研究工作提供参考。

标签：Cocktail探针药物法；细胞色素P450酶；中医药；代谢[Abstract] Cocktail probe substrates approach is a fast，sensitive and high through put method to determine cytochrome P450 enzymes activity. It has been widely used to screen early drug development，analyze drug metabolism types and confirm the metabolism pathways，study drug-drug interactions，optimize clinical regimen，evaluate post marketing drugs and help liver/kidney pathological studies. This article reviewed characteristics of Cocktail probe substrates，focused on the application to traditional Chinese medicine to CYP450 system as follows：the metabolic pathway research of Chinese herb active ingredients；processing way and compatibility of medical herbs affect CYP450；find out the metabolic characteristic of Chinese patent medicine，study in pharmacy of national minority；do research in liver protective effect of traditional Chinese medicine and evaluate traditional Chinese medicine syndromes in animal models. This article make a summary of existing research results and also make a comparison of cocktail probe substrates approach application to western medicine and Chinese medicine.[Key words] Cocktail probe substrates approach；cytochrome P450；traditional Chinese medicine；metabolismdoi：10.4268/cjcmm20162410肝脏细胞色素P450（CYP450）是肝脏微粒体混合功能氧化酶系的主要成分，是一组由许多同工酶组成的超基因大家族，具有遗传多态性，承担着大部分内源性、外源性化合物在生物体内的Ⅰ相转化作用，对药理学和药物代谢的研究具有重要意义。

Cocktail探针药物法评价小檗碱对肝微粒体CYP450酶的抑制作用目的：研究小檗碱对人肝微粒体CYP活性的影响。

方法：以苯海拉明为内标，建立LC-MS/MS同时测定5种探针药物：咪达唑仑、非那西丁、右美沙芬、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的含量，采用鸡尾酒（cocktail）法探针药物法评价不同浓度小檗碱对混合人肝微粒体CYP不同亚型活性的影响。

结果：与对照组相比，咪达唑仑、非那西丁和甲苯磺丁脲的代谢速率基本没有变化，而氯唑沙宗的代谢速率明显变慢，对于右美沙芬，当小檗碱的质量浓度为50 μg·L-1时，其代谢速率基本没有变化，当小檗碱的质量浓度大于200 μg·L-1时，其代谢速率明显变慢。

结论：小檗碱质量浓度在2 000 μg·L-1以下时对人肝微粒体中CYP3A4，CYP1A2和CYP2C9活性没有明显影响，但对CYP2E1和CYP2D6有明显的浓度依赖性抑制作用。

标签：鸡尾酒法；探针药物；混合人肝微粒体；小檗碱；P450酶抑制细胞色素P450酶（CYP）是肝微粒體混合功能氧化酶系的主要成分，是多种药物在体内代谢的最主要酶系[1]。

药物代谢与其体内浓度和药理活性密切相关，与此同时，药物也会对CYP产生诱导或抑制作用，从而引发药-药物相互作用和不良反应[2]。

复方是中药临床用药常见形式，配伍是中药的特色和优势，研究中药和CYP的关系，不但可以揭示药物的体内代谢过程，而且有助于了解药物间的相互作用与药效之间的内在联系，为组方配伍和临床合理用药提供直接依据[3]。

小檗碱，是中药黄连、黄柏等的主要有效成分，在临床上一直作为抗菌药和清热解毒药，随着研究不断深入，发现其具有抗高血压、抗肿瘤、降血糖等多方面的药理作用[4]。

目前研究表明小檗碱主要由小肠吸收，其口服吸收较差，生物利用度较低[5]，有关小檗碱的肝代谢酶表征及代谢产物的研究较清楚，小檗碱主要由CYP1A2和2D6代谢，代谢产物为小檗红碱和去亚甲基小檗碱及其葡萄糖醛酸苷共价结合物[6-7]。

Cocktail探针药物法评价生、醋莪术对CYP450酶亚型的影响王菊;陆兔林;毛春芹;肖永庆;顾娟娟【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)011【摘要】Aim To research and compare the influences of Rhizoma Curcumae and processed Rhizoma Curcumae on the cytochrome P450 isoforms, and to explore the tropism processed of Rhizoma Curcumae to enhance or change the role. Methods Rats were randomly divided into three groups. The treatment groups were received Rhizoma Curcumae and processed Rhizoma Curcumae respectively. The other group were received saline as blank control group. Blood samples were collected aL different time points and the plasma concentration of cocktail probe drugs was determined by IIPLC. Results There was insignificant difference of the ophylline, dapsone, chlorzoxazone between the Rhizoma Curcumae group and the blank group. Compared with the blank group, the half-life time,Tmax and the area under curve increased significantly and the clearance lowered significantly of ophylline and chlorzoxazone in the processed Rhizoma Curcumae group; There was insignificant difference in the half-life time of dapsone , the area under curve lowered significantly and the clearance increased significantly in the processed Rhizoma Curcumae group. Conclusion Rhizoma Curcumae has no significant effecton the cytochrome P450 isoforms of CYP1A2, CYP3A4 and CYP2E1. But the processed Rhizoma Curcumae can in-hibit CYP1A2 and CYP2E1 and has an indue tive effect on the CYP3A4.%目的用Cocktail探针药物法,研究生、醋莪术对大鼠CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响并进行比较,探讨其通过炮制增强或改变作用的趋向性.方法将SD大鼠随机分组,生、醋莪术组分别给予生、醋莪术提取液(9 g·kg-1),以生理盐水为空白对照,在一定时间点采集血样,用HPLC检测探针药物在大鼠体内的代谢情况,以评价生、醋莪术对CYP450酶的影响.结果生莪术的茶碱、氨苯酚和氯唑沙宗的代谢情况与空白组相比差异无显著性;但醋莪术与空白组相比,茶碱和氯唑沙宗的T12、Tmax 和AUC明显增加,CL/F明显降低;氨苯酚的T12 变化不明显,AUC明显降低,CL/F明显增加;氯唑沙宗的T12、Tmax 、AUC明显增加,CL/F明显降低.结论单次给予大鼠生、醋莪术后,生莪术对CYP450酶的作用不明显,醋莪术对CYP1A2和CYP2E1具有抑制作用,对CYP3A4具有诱导作用.【总页数】4页(P1562-1565)【作者】王菊;陆兔林;毛春芹;肖永庆;顾娟娟【作者单位】国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心、国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室、rn江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210046;国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心、国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室、江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210046;南京中医药大学药学院,江苏,南京,210046;国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心、国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室、rn江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210046;中国中医科学院中药研究所,北京,100700;国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心、国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室、rn江苏省中药炮制重点实验室,江苏,南京,210046【正文语种】中文【中图分类】R-332;R282.71;R345.99;R977.3【相关文献】1."Cocktail"探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠CYP450酶活性的影响 [J], 洪小凤;林晶;杨强丽2.Cocktail探针药物法评价糖尿病大鼠体内细胞色素P450不同亚型的活性 [J], 汪云;马莎莎;崔桅;焦建杰;娄建石3.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青4.Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响 [J], 冯星月;余辉;蒋志涛;张咏梅5.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

#药理#Cocktail探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P450的影响闫淑莲,扈金萍,徐艳霞,张锦楠*(首都医科大学基础医学院化学药理系,北京100054)摘要:目的用Cocktail探针药物法,研究连翘对大鼠肝CYP450的影响。

方法将SD`大鼠随机分组,给予连翘的水提物,以生理盐水组为空白对照,通过HPL C检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组CYP450。

结果给予连翘组的大鼠CY P1A2的水平显著低于对照组,CYP3A4的水平显著高于对照组,CYP2E1的水平没有显著变化。

结论连翘对大鼠CY P1A2有抑制作用,对大鼠CY P3A4有诱导作用,但对大鼠CYP2E1的影响不显著。

关键词:Co cktail;CY P450;咖啡因;氨苯砜;氯唑沙宗;探针药物;连翘中图分类号:R285文献标识码:A文章编号:1001-2494(2003)10-0761-03Simultaneous evaluation of activity of hepatic CYP450following administration of Fisch Fructus Forsythiae by C ocktail probe drugsYAN Shu-lian,HU Jin-ping,XU Yan-xia,ZHANG Jin-nan(Dep ar tment of Chem-Phar macology,Cap ital Univer sity of M edical Sciences,Beij ing100054,China)ABSTRAC T:OBJECTIV E T o study t he change o f the hepat ic CY P450act ivity follow ing administration of Fisch Fr uctus Forsy thiae by Cocktail probe drugs in rats.METHODS T he rats were randomly div ided into two groups.One group of rats w ere giv en Fisch Fr uctus For sy thiae plant ex tracts once daily orally for six days.A nother group received orally normal saline o nce daily as the blank con-trol group.T he plasma concentrations of Cocktail probe drugs w ere determined by HPLC.RESULTS T he CY P1A2content after re-ceived Fisch Fructus Forsy thiae plant ex tracts was reduced,but the CYP3A4content w as enhanced.A t the same time the CY P2E1 content was no t markedly changed.CONCLUSION It suggested that Fisch Fr uctus For sy thiae tended to be the inhibitor o f the CY P1A2and inducer of CYP3A4.But the CYP2E1was hardly affected.KEY WORDS:Cocktail;CYP450;caffeine;dapso ne;chlorzox azone;probe drugs;Fisch Fr uctus For sythiae作者简介:闫淑莲,女,实验师*通讯作者:张锦楠,教授,硕士生导师Tel:(010)63051497E-mail:j nz hang-cums@细胞色素P450(CY P450)是肝微粒体混合功能氧化酶中最重要的一族,在外源性物质和内源性物质的代谢中起着极其重要的作用[1~2],但与此同时CY P450酶的活性也能被许多化合物诱导或抑制,从而引起药物间的相互作用。

第 29 卷第 1 期分析测试技术与仪器Volume 29 Number 1 2023年3月ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Mar. 2023浙江省大型科研仪器开放共享平台—质谱专栏(76 ~ 82)Cocktail探针药物法评价玄参对大鼠细胞色素P450酶的影响魏艳丽，应晓倩，谈文状，吴美玲，江悦娟，丁明星，杜洪建（金华职业技术学院，浙江金华　321007）摘要：采用Cocktail探针药物法研究玄参对大鼠4种细胞色素P450（CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2）活性的影响. 24只健康雄性SD大鼠（Sprague-Dawley rat）随机分为三组：A组为多剂量组，连续7 d给予150 mg/kg 玄参. B组为单剂量组，第7 d给予150 mg/kg玄参. C组为对照组. 第7 d，各组在给予玄参30 min后，再给予4种探针药物的混合溶液，其中咪达唑仑3 mg/kg、美托洛尔20 mg/kg、氯沙坦5 mg/kg、非那西汀5 mg/kg，分别用以评价CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2的活性. 根据设定的时间点收集大鼠血浆样品，处理后的样品采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）法测定样品中4种探针药物的浓度. 结果可见，玄参对大鼠体内氯沙坦和非那西汀的药代动力学参数无显著影响. 单剂量的玄参导致咪达唑仑代谢减慢，多剂量给予的玄参显著诱导美托洛尔代谢. 玄参对CYP2C9和CYP1A2的酶活性无明显影响，可以抑制CYP3A4或诱导CYP2D6的酶活性.关键词：玄参；鸡尾酒疗法；细胞色素P450；中药-西药相互作用；超高效液相色谱-串联质谱中图分类号：O657. 63 文献标志码：B 文章编号：1006-3757（2023）01-0076-07DOI：10.16495/j.1006-3757.2023.01.012Evaluation of Effect of Scrophularia Ningpoensis on Cytochrome P450 Enzymes Using Cocktail Probe Drug MethodWEI Yanli， YING Xiaoqian， TAN Wenzhuang， WU Meiling， JIANG Yuejuan，DING Mingxing， DU Hongjian（Jinhua Polytechnic, Jinhua 321007, Zhejiang China）Abstract：The effects of Scrophularia ningpoensis on the activities of 4 Cytochrome P450 enzymes (CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9 and CYP1A2) in rats was investigated using the Cocktail probe drug method. Twenty-four healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: group A (multiple-doses of 150 mg/kg Scrophularia ningpoensis for 7 d), group B (single-dose of 150 mg/kg Scrophularia ningpoensis), and group C (control group). To each group after administering Scrophularia ningpoensis for 30 min, the mixture solution of probe drugs midazolam (3 mg/kg, evaluation of CYP3A4 activity), metoprolol (20 mg/kg, evaluation of CYP2D6 activity), losartan (5 mg/kg, evaluation of CYP2C9 activity) and phenacetin (5 mg/kg, evaluation of CYP1A2 activity) were administered orally on the 7th d. Rat plasma samples were collected at the arranged time points, and the plasma concentrations of 4 probe drugs in the samples were simultaneously determined using the ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC–MS/MS) method after processing. The results showed that Scrophularia ningpoensis had almost no significant effect on the pharmacokinetic parameters of losartan and phenacetin. However, a single-dose of Scrophularia ningpoensis induced a slow metabolism of midazolam. In addition, the pharmacokinetics of metoprolol was affected significantly by收稿日期：2023−01−31；　修订日期：2023−02−27.作者简介：魏艳丽（1978−），女，副教授，主要研究领域：临床药理学，E-mail：通信作者：杜洪建（1972−），男，讲师，主要研究领域：药物制剂方向，E-mail：.the multiple doses of Scrophularia ningpoensis, which induced rapid metabolism. The results suggested that Scrophularia ningpoensis has no significant effect on the enzymatic activities of CYP2C9 and CYP1A2, but it might inhibit enzymatic activities of CYP3A4 or induce CYP2D6.Key words：Scrophularia ningpoensis；cocktail；CYP450；herb-drug interactions；UHPLC-MS/MS玄参是一种在中国广泛分布的地方性多年生草本植物，主要以根入药，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、神经保护和心脏保护等作用，可用于治疗发烧、肿胀、便秘、糖尿病和各种炎症[1-3]. 由于其多样的功能，应用非常广泛，因此也成为学者研究的热点. 相关研究涉及玄参的活性成分、药理学、基因组学[4-6]. 目前玄参对肝药酶细胞色素P450的作用尚未被研究，影响尚未明确. 因此，设计了本次研究以评估玄参对4种细胞色素P450（CYP450）活性的影响.CYP450基因超家族在内源性与外源性物质的代谢中均起到重要的作用，临床中将近90%的用药经过CYP450酶代谢[7-8]. 目前已经确定的CYP450亚型中，CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2是主要的CYP酶亚型，参与药物代谢，各个酶分别占P450酶的40%~50%、20%~30%、10%和5%[9].草药/药物-药物相互作用的发生常常涉及药物间争夺相同的P450酶结合位点[10]. 异种生物对P450酶的抑制/诱导会改变底物在体内的代谢、消除过程，影响药物的血浆浓度和保留时间，从而对药物的疗效、不良反应等产生影响.“鸡尾酒”疗法是通过使用酶的特异性探针药来评估药物代谢酶的活性，是监测药物对P450酶活性影响、评估潜在的草药-药物相互作用的有效工具. 此次研究中，通过测定4种特异性探针药的药代动力学，评定特异性底物的代谢情况，从而确定4种CYP450酶的体内实时活性. 研究中分别选取咪达唑仑、美托洛尔、氯沙坦和非那西汀作为CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2的探针药物，从而评估了玄参对大鼠P450酶活性的影响. 试验结果为玄参和其他药物是否能够合用提供理论依据，为草药-药物相互作用提供有意义的信息.1　试验部分1.1　仪器与试剂超高效液相色谱（Agilent 1290，安捷伦科技有限公司）；三重四级杆质谱仪（Agilent G6420A，安捷伦科技有限公司）.美托洛尔（98.0%）、氯沙坦（98.0%）和非那西汀（98.0%）购于上海创赛有限公司. 咪达唑仑由温州医科大学附属第二医院育英儿童医院提供. 内标地西泮（>99.0%）购买于美国Sigma公司. 玄参粉末（≥98%）购自北京中科华标化学技术研究所. HPLC级的甲醇和乙腈购自德国Merck公司. 超纯水通过Milli-Q系统自制.1.2　仪器条件使用Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18柱（2.1 mm×50 mm, 1.8 µm）分离化合物. 柱温设定为30 ℃. 流动相由0.1%的甲酸（A）和乙腈（B）组成，设计梯度流动相如下：0~0.5 min 20% B，0.5~3 min 20%~80% B，3~4 min 80% B，4~4.1 min 80%~20%B. 跑样时间4.1 min，平衡时间1 min，总跑样时间5.1 min. 过程中，流速为0.4 mL/min，进样量2 µL.Agilent G6420A三重四级杆LC/MS配备电喷雾离子源（ESI）用于样品分析和检测. CYP450酶的探针药和内标在正离子模式下进行多反应监测（MRM）. 将[M-H]+设为母离子，选择各化合物特异的片段离子作为子离子（如表1所列）. 毛细管电压和雾化器压强分别设定为4 kV和0.31 MPa. 分析中采用氮气作为雾化气，气体温度设定为350 ℃.数据的采集和量化由Mass Hunter（B.07.00）工作站完成.表 1 4种探针药和地西泮的质谱参数信息Table 1　Mass spectrometric parameters of four probedrugs and diazepam化合物母离子/(m/z)子离子/(m/z)碰撞能/eV碎裂电压/V 咪达唑仑326.1290.828170美托洛尔268.2115.917130氯沙坦423.2206.822130非那西汀180.1109.924122地西泮285.0192.9341641.3　试验动物和药代动力学研究24只健康雄性SD大鼠[Sprague-Dawley rat，第 1 期魏艳丽，等：Cocktail探针药物法评价玄参对大鼠细胞色素P450酶的影响77（250±20） g]由温州医科大学实验动物中心提供. 试验前，大鼠被安置在室温25 ℃、昼夜循环交替的条件下一周以适应环境，期间给予大鼠水和标准饲料.为研究玄参对CYP450酶活性的影响，24只大鼠被随机分为3组：A组为多剂量组，连续7 d给予150 mg/kg的玄参水提取液（n=8）. B组为单剂量组，第7 d给予150 mg/kg玄参水提取液（n=8）. C组为对照组（n=8）. 采血前，大鼠被禁食一夜，但正常供应水. 第7 d，各组按计划给予玄参水提取液30 min后，给予咪达唑仑（3 mg/kg）、美托洛尔（20 mg/kg）、氯沙坦（5 mg/kg）和非那西汀（5 mg/kg）的混合溶液. 随后，在0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12 h时间点分别在尾静脉取血0.3 mL到经肝素化的1.5 mL离心管中. 在13 000 r/min的转速下离心10 min，取出100 µL血浆到干净的1.5 mL离心管中. 接着，在血浆样品中加入200 µL乙腈用于蛋白沉淀，加入30 µg/mL的地西泮作为内标.将样品充分涡旋2 min，在13 000 r/min转速下离心10 min. 取出100 µL上清液到0.5 mL离心管中，用等体积的超纯水稀释. 涡旋混匀后，将2 µL混合物注入超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）检测分析.1.4　方法验证根据美国食品药品监督管理局（US-FDA）和欧洲药品管理局（EMA）的指导方针，开发了4种P450探针药的检测方法，并从线性关系、回收率、基质效应、精密度和准确度几个方面对方法进行确立.为评估方法的线性关系，设计了各分析物的标准曲线：曲线包含8个浓度点，每个浓度点样品一式三份，分别在3 d测定. 回收率的测定中，配制了低中高三个浓度的分析物溶液，每个浓度点样品一式六份，通过比较质控样品与提取后空白血浆中相同浓度的标准分析物的峰面积，得出各分析物的回收率. 类似地，得到内标的回收率. 基质效应的测定中，同样配制了低中高三个浓度的分析物溶液，每个浓度点样品一式六份，通过比较提取后空白血浆标准品和相同浓度标准品溶液中分析物的峰面积，得出基质效应. 而精密度和准确度是通过连续3 d 测定低中高三种浓度的质控样品（样品一式六份）而得出.1.5　统计分析数据均以平均值±标准差（Mean±SD）表示. 药代动力学参数通过应用DAS软件中的非房室模型计算得出. 两组试验组与控制组的统计学差异由SPSS软件分析得出. 其中，*p低于0.05或**p低于0.01被认为具有统计学意义.2　结果与讨论2.1　方法的验证咪达唑仑、美托洛尔、氯沙坦和非那西汀的血浆浓度通过UHPLC-MS/MS法同时测定. 在各探针药和内标的保留时间附近没有发现内源性的干扰.每个探针药的标准曲线选取了特定的浓度范围，其中咪达唑仑的质量浓度范围为0.25~25 ng/mL，氯沙坦为2.5~250 ng/mL，美托洛尔和非那西汀为5~500 ng/mL. 标准曲线均采用线性回归分析方法构建，各分析物线性关系均良好，标准曲线的回归系数r2高于0.99. 这4种底物的标准曲线如下：咪达唑仑（y=0.888 4x−3.443×10−4）、氯沙坦（y=0.708 9x−8.001×10−4）、美托洛尔（y=0.238 7x+0.015 3）和非那西汀（y=0.414 8x−0.003 9）. 咪达唑仑、氯沙坦、美托洛尔、非那西汀的定量下限（LLOQ）分别为0.25、2.50、5.00、5.00 ng/mL. 本研究中，各分析物LLOQ的精密度和准确度良好，相对标准偏差（RSD）和相对误差（RE）分别低于7.72%和2.75%. 各物质平均回收率范围为89.49%~99.89%，基质效应范围为86.89%~ 100.38%，表明各分析物回收情况良好，基质效应可忽略不计. 各化合物在不同浓度下，日间和日内精密度的RSD均小于7.72%，RE范围为−4.12%~ 10.19%. 结果如表2所列.2.2　玄参对大鼠肝CYP450酶的影响2.2.1　玄参对大鼠肝CYP3A4酶活性的影响CYP3A4的酶活性是通过比较对照组（C组）和试验组（A组和B组）间咪达唑仑的药代动力学特征来评估的（如表3所列）. 三组间咪达唑仑的平均血药浓度-时间曲线如图1（a）所示. 与C组相比，A 组咪达唑仑药的代动力学参数（AUC0-∞，t1/2z，V z/F，CLz/F和C max）无明显变化. 然而，给单剂量玄参的B 组咪达唑仑的AUC0-∞值显著变化（p<0.01），相比对照组增加了62.8%，CL z/F值也发生显著变化（p<0.01），降低了42.2%. 以上结果表明，多剂量的玄参给药对咪达唑仑的代谢没有明显的影响，单剂量的玄参会使咪达唑仑的代谢减慢. 玄参对大鼠CYP3A4的酶78分析测试技术与仪器第 29 卷活性存在抑制作用.CYP3A4酶活性的抑制会改变药物的药代动力学特性，导致药物体内血浆药物浓度过高，发生毒性反应. 研究表明，临床应用中许多药物发生不良反应就与酶抑制作用相关[11-12]，提示临床注意监测及调整药物剂量[13]. 这种抑制作用也被利用于提高药物临床疗效，如备受关注的新冠特效药奈玛特韦片/利托那韦片就利用了利托那韦抑制CYP3A4酶而提高治疗药物奈玛特韦的浓度以达到临床治疗目的[14]. 通过本次试验得出，玄参会对其他经过CYP3A4代谢的药物产生抑制作用. 因此，临床用药中要注意草药-药物的相互作用，尤其应当注意玄参与治疗窗狭窄的药物合用.2.2.2　玄参对大鼠肝CYP2D6酶活性的影响CYP2D6的酶活性是通过比较对照组（C组）和试验组（A组和B组）间美托洛尔的药代动力学特征来评估的（如表4所列）. 不同组间美托洛尔的血药浓度-时间曲线如图1（b）所示. 单剂量与多剂量给玄参组的C max均显著低于对照组（p<0.01）. 多剂量组的AUC0-t也显著降低（p<0.01）. 与对照组相比，试验组的AUC0-∞略降低，但无统计学差异. 我们认为，玄参会影响CYP2D6的酶活性，且这种作用是诱导药物代谢的，尤其在多次服用玄参后尤为显著.酶诱导剂会加速药物在体内的处置过程，加速药物表 2 咪达唑仑、美托洛尔、氯沙坦和非那西汀在血浆中的精密度、准确度、回收率和基质效应Table 2　Precision, accuracy, recovery and matrix effects of metoprolol, phenacetin, midazolam and losartan in rat plasma分析物加入质量浓度/(ng/mL)日内精密度日间精密度回收率/%基质效应/% Mean±SD/(ng/mL)RSD/%RE/%Mean±SD/(ng/mL)RSD/%RE/%咪达唑仑0.250.26±0.027.72 2.510.25±0.02 6.520.7093.2388.792.5 2.41±0.11 4.53−3.73 2.62±0.187.034.7091.9799.572524.98±1.62 6.48−0.1025.59±0.58 2.29 2.3690.8092.59美托洛尔5 5.14±0.19 3.60 2.75 5.02±0.11 2.160.3493.9293.16 5054.47±3.67 6.738.9351.50±2.71 5.27 2.9989.4994.32500539.34±28.64 5.317.87532.06±15.41 2.90 6.4191.2898.14氯沙坦 2.5 2.46±0.17 6.77−1.72 2.43±0.11 4.52−2.6999.8997.72 2523.97±1.15 4.81−4.1224.12±0.79 3.26−3.5290.9598.11250248.35±7.12 2.87−0.66251.63±3.79 1.510.6596.31100.38非那西汀5 5.12±0.15 2.84 2.31 4.98±0.13 2.54−0.4798.0486.89 5055.09±2.45 4.4510.1953.90±1.18 2.197.7995.8693.57500524.67±28.01 5.34 4.93525.57±6.00 1.14 5.1197.5992.38表 3 大鼠血浆中咪达唑仑的主要药代动力学参数（Mean±SD, n=8）Table 3　Main pharmacokinetic parameters of midazolam in rat plasma (Mean±SD, n=8)参数单位A B CAUC0-tµg/ (L·h)29.47+7.4740.13+5.15**24.70+8.03AUC0-∞µg/ (L·h)30.35+7.8641.95+5.55**25.77+8.12t1/2zh 1.04+0.19 1.25+0.33 1.19+0.40Tmaxh0.66+0.19**0.75+0.00**0.50+0.00Vz/FL/kg154.94+40.55131.93+45.08*211.88+80.31CLz/FL/h/kg104.35+24.7672.67+10.24**125.63+35.25Cmaxµg/L13.80+1.4419.95+6.3618.18+4.91A:多剂量组，B:单剂量组，C:对照组. *：p<0.05，**：p<0.01代表与对照组相比存在显著性差异第 1 期魏艳丽，等：Cocktail探针药物法评价玄参对大鼠细胞色素P450酶的影响79代谢消除，可能会导致治疗失败、耐药发展，还可能导致毒性风险[15]. 酶诱导剂会加速肝药酶的合成速度、增强酶活性，长期服用酶诱导药物之后，人体易出现耐受，常常需要加大剂量或者更换其他药物以达到治疗目的. 本研究发现玄参对CYP2D6具有诱导作用，临床诊疗中使用经CYP2D6代谢的药物时需详细问诊，患者是否有长期服用/正在服用玄参及其制品，若有这种情况出现需注意调整药物的剂量或者暂停服用.2.2.3　玄参对大鼠肝CYP2C9酶活性的影响CYP2C9的酶活性是通过比较对照组和试验组间氯沙坦的药代动力学特征来评估的. 主要药动表 4 大鼠血浆中美托洛尔的主要药代动力学参数（Mean±SD, n =8）Table 4　Main pharmacokinetic parameters of metoprolol in rat plasma (Mean±SD, n =8)参数单位ABCAUC 0-t µg/ (L·h) 4 632.88±608.22** 5 084.97±604.10 5 807.72±694.60AUC 0-∞µg/ (L·h)5 886.34±832.51 5 816.49±774.526 804.05±1 069.87t 1/2z h 3.96±1.25 2.84±0.70 3.03±0.54T max h 0.50±0.130.54±0.090.56±0.18V z/F L/kg 19.42±5.63*14.20±3.2812.90±1.80CL z/F L/h/kg 3.46±0.53 3.50±0.51 3.00±0.46C maxµg/L1 532.22±153.54**1 707.39±176.29**2 140.76±220.66A ：多剂量组，B ：单剂量组，C ：对照组. *：p <0.05，**：p <0.01代表与对照组相比存在显著性差异28(a)(c)(b)(d)Multiple dose groupSingle dose group Control groupC o n c e n t r a t i o n o f m i d a z o l a m /(n g /m L )24201612840123t /h456Multiple dose group Single dose group Control groupC o n c e n t r a t i o n o f m i d a z o l a m /(n g /m L )2 4002 0001 6001 20080040000246t /h8350Multiple dose group Single dose group Control groupC o n c e n t r a t i o n o f m i d a z o l a m /(n g /m L )300250200150100500246t /h81012Multiple dose group Single dose group Control groupC o n c e n t r a t i o n o f m i d a z o l a m /(n g /m L )2 4002 0001 6001 2008004000123t /h4图1　玄参多剂量组、单剂量组和对照组（n =8）中（a ）咪达唑仑、（b ）美托洛尔、（c ）氯沙坦和（d ）非那西汀的血药浓度-时间曲线图Fig. 1　Mean plasma concentration-time curves of (a) midazolam, (b) metoprolol, (c) losartan and (d) phenacetin aftermultiple doses or single dose of Scrophularia ningpoensis and control group (n =8)80分析测试技术与仪器第 29 卷学参数如表5所列，各组间氯沙坦的血药浓度-时间曲线如图1（c）所示. 三组间各药代动力学参数均无统计学差异，说明玄参对CYP2C9酶活性的影响不显著.2.2.4　玄参对大鼠肝CYP1A2酶活性的影响CYP1A2的酶活性是通过比较对照组和试验组间非那西汀的药代动力学特征来评估的. 非那西汀的药代动力学参数如表6所列，各组非那西汀的血药浓度-时间曲线如图1（d）所示. 试验组中t1/2z值远小于对照组，但仅多剂量组的t1/2z值有统计学意义.与对照组相比，两组试验组的其他药代动力学参数均无统计学意义，说明玄参对非那西汀的药代动力学过程有影响，但对CYP1A2酶活性的影响不明显.表 5 大鼠血浆中氯沙坦的主要药代动力学参数（Mean±SD, n=8）Table 5　Main pharmacokinetic parameters of losartan in rat plasma (Mean±SD, n=8)参数单位A B CAUC0-tµg/ (L·h) 1 750.73±353.28 1 380.02±245.57 1 735.48±416.06AUC0-∞µg/ (L·h) 1 917.43±436.75 1 591.20±334.33 1 973.85±433.96t1/2zh 2.94±0.83 4.14±2.09 3.53±0.67Tmaxh 2.00±0.00 2.00±0.58 2.25±0.46Vz/FL/kg11.36±3.0918.48±6.4513.73±4.70CLz/FL/h/kg 2.73±0.61 3.25±0.63 2.64±0.58Cmaxµg/L290.92±40.33268.25±73.28271.89±73.62 A：多剂量组，B：单剂量组，C：对照组表 6 大鼠血浆中非那西汀的主要药代动力学参数（Mean±SD, n=8）Table 6　Main pharmacokinetic parameters of phenacetin in rat plasma (Mean±SD, n=8)参数单位A B CAUC(0-t)µg/ (L·h) 1 454.88±452.60 1 149.00±360.03 1 580.96±446.16AUC(0-∞)µg/ (L·h) 1 455.83±453.30 1 161.96±360.64 1 619.49±431.26t1/2zh0.52±0.08*0.67±0.18 1.14±0.65Tmaxh0.24±0.030.25±0.000.27±0.10Vz/FL/kg 2.82±1.05 4.59±2.08 5.85±4.07CLz/FL/h/kg 3.77±1.29 4.67±1.37 3.37±1.29Cmaxµg/L 1 460.41±323.01 1 404.60±323.73 1 822.10±558.58A：多剂量组，B：单剂量组，C：对照组. *：p<0.05代表与对照组相比存在显著性差异3　结论本研究中玄参对不同的酶产生了不同的作用，这与其影响酶表达的结果不同有关：诱导CYP2D6酶活性表达，抑制CYP3A4酶活性表达，对CYP2C9和CYP1A2的酶活性无影响. 从而表现出玄参增强CYP2D6的酶活性，抑制CYP3A4的酶活性，而对CYP2C9和CYP1A2的酶活性无显著影响. 临床上玄参和其他经CYP2D6或CYP3A4代谢的药物合用时需注意监测底物的血药浓度，及时进行疗效评估，增加用药安全性.参考文献：Ren D, Shen Z Y, Qin L Q, et al. 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Cocktail探针药物法在中药研究中的应用标签：探针药物；Cocktail法；细胞色素P450；药物代谢；中药；综述早在20世纪80年代末，Breimer和Schellens等[1]就首次提出同时使用多个探针药物（Cocktail法）来评价多个细胞色素P450（CYP450）亚型酶的活性，并对其可行性和用途作了充分的阐述。

目前Cocktail法主要用于西药的药物代谢研究，有关中草药对CYP450的影响作用的报道尚不多见，其在中药的药物代谢研究方面还是一个比较新的研究领域，其应用价值和重要意义不容忽视。

笔者现就国内外采用Cocktail法在中药代谢研究中的应用进行综述，为该领域的研究工作提供参考。

1 关于Cocktail探针药物法Cocktail法是指同时给予多种相对低剂量的探针药物，测定生物样本中每个探针药的代谢率或其他代谢分型指标，以获取多个代谢酶的表型信息，对于那些有多重代谢途径的剂量设计有极为重要的意义。

该方法的优点在于多个代谢途径的信息可在单个试验过程中获得，真实地反映出药物对CYP450不同亚型代谢酶的影响，并将个体间影响降至最低，此方法简便、快捷、准确、灵敏，适合进行探针药物血清浓度的测定。

2 Cocktail探针药物法研究中药对细胞色素P450酶的影响由于中药含有多种成分，很难用一种或几种药效成分来说明其疗效的机制，而且中药在临床上常常是复方应用，更增加了疗效作用机制阐释的难度。

因此，研究人员开始尝试以中药单一药效成分或药效部位或中成药复方等为研究对象，探讨其对CYP450的作用机制，以期解释中药在临床发挥疗效的机制以及配伍用药的合理性和安全性，为临床合理应用中药提供依据。

目前研究主要有以下几个方面：①中药单体药效成分对CYP450的影响；②单味中药提取物对CYP450的影响；③从中药配伍药对和十八反、十九畏的角度进行CYP450的研究；④中成药（如中药注射液）对CYP450的影响。

“Cocktail”探针药物法评价CYP450酶的研究进展“Cocktail”鸡尾酒探针药物法是一种给予两种或多种的探针药物的方法。

“Cocktail”探针药物法作为一种快速、有效的评价药物对CYP450酶活性影响的方法，有着不可替代的优势和广阔的应用前景。

本文综述了国内外运用“Cocktail”探针药物法评价其在人体和动物中CYP450酶应用，了解此方面的研究进展。

标签：Cocktail；探针药物法；动物模型；探针药物法即某些经细胞色素P450代谢的药，以其代谢物与原型药的比例或速率衡量酶代谢能力变化的方法。

最初主要评价药物在体内代谢方面的相互作用。

现在“Cocktail”探针药物法则应用更为广泛，它可以用于体内外细胞色素P450酶的代谢活性。

对体内药物代谢活性的定量测定更具有广泛的应用价值。

它可以用于研究代谢酶活性与疾病之间的关系，研究药物间的相互作用，同时也可以应用在遗传变异的研究中。

不仅如此，随着多种新的探针药物组合出现，该方法也在临床研究中得到了应用。

如使用“Cocktail”探针药物来证明某些疾病的假说和评价肾功能的改变等[1]。

1.“Cocktail”探针的方法学研究特点“Cocktail”探针用于体内药物酶代谢研究，可以采用探针药物的清除率或者探针药物与代谢产物在血浆中，尿液中和唾液中的浓度比值等指标来评价酶的活性，采用液相色谱或者液相色谱质谱串联法进行测定[2]。

一个理想的用于体内药物代谢酶活性测定的“Cocktail”探针要求具备以下条件[3]：（1）探针药物可得而且易得，能被特定的亚型催化或者即使被几种亚型催化但已确知其各种代谢途径及产物。

（2）为有效的评估同时使用探针底物后的药动学变化，必须保证每种探针药物有选择地作用于一种同工酶，具有高度敏感性，即使被其他几种亚型催化但已确知其各种代谢途径及产物。

（3）在抑制药存在的条件下，探针药物在高浓度下仍维持其作用专属性，不发生对其他同工酶的抑制作用。

Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对人CYP450酶活性的影响作者：魏文增赵宁宁林颖烽王瑾王宫来源：《科技风》2021年第03期摘要：目的：研究牛樟芝醇提物对人肝CYP450酶的影响。

方法：建立HPLC方法，通过Cocktail探针检测樟芝醇提物对人CYP450酶的影响。

结果：牛樟芝各剂量组对CYP3A4/5有抑制作用;低剂量组对CYP2E1有促进作用，中、高剂量对CYP2D6、1A2、2E1、2C9亚型作用具有促进作用。

结论：牛樟芝醇提物能促进人CYP1A2、2C9、2D6、2E1的活性;可以抑制CYP3A4/5代谢。

关键词：Cocktail;探针底物;HPLC;牛樟芝;人肝微粒体牛樟芝（Antrodia camphorata）又称樟菇、红樟等，原产于台湾的一种珍稀药用真菌，被称为“森林红宝石”，近年来，研究表明其具有解毒保肝、补肾强心、抗癌等[1]神奇功效。

目前，中药与西药治疗各有其优缺点，而在临床治疗中，为了标本兼治，提高疗效，中西药合用越趋频繁，但也有许多文献报道中药与西药合用后产生严重的不良反应。

基于牛樟芝的功效，其在疾病预防与保健方面也受到关注;而牛樟芝与其他药物合用是否会产生相互作用，导致药效降低或增强以及毒性反应，还尚未有文献报道。

因此有必要对牛樟芝的代谢进行深入的研究。

1 仪器与试药1.1 仪器U3000型高效液相色谱仪，戴安公司;MQD-S3恒温振荡箱，上海旻泉公司。

1.2 試药非那西汀，美托洛尔，奥美拉唑，氯唑沙宗，甲苯磺丁脲，硝苯吡啶，甲硝唑（批号：62-44-2，56392-17-7，73590-58-6，95-25-0，64-77-7，21829-25-4，443-48-1）源叶生物;NADPH（2646-71-1）TCI公司。

1.3 人肝微粒体人肝微粒体（3MSMC004）武汉普莱特生物有限公司。

2 方法与结果2.1 终止液配制取适量的甲硝唑，加乙腈溶解，配成13mg·mL-1备用。

基于Cocktail探针法的玉屏风散复方配伍研究目的：以Cocktail探针药物法评价玉屏风散对肝微粒体CYP450主要亚型活性的影响，探讨复方配伍规律。

方法：按拆方设计，设计7个组方，采用大鼠肝微粒体孵育体系，测定其对CYP主要亚型的半数抑制浓度（IC50）。

结果：玉屏风散及拆方对肝药酶CYPs的IC50均大于生药1.0 g·L-1，对CYP1A2，CYP2C19，CYP3A4而言，玉屏风散及拆方配伍后的IC50较方中主要影响因子的IC50有增大的趋势（对酶活性的影响减小）；对CYPs而言，配伍后的实测IC50较线性预测值有减小的趋势。

结论：从药物对代谢酶活性影响的角度而言，玉屏风散配伍应用具有一定优势和合理性。

标签：玉屏风散；CYP450；中药配伍；IC50；Cocktail探针药物法“辨证论治”是中医认识和治疗疾病特有的思维方法，中药配伍应用是体现中医理论和“辨证论治”思想的现实载体。

探究中药配伍规律及内在联系[1]，对阐明中医辨证论治理论的科学内涵和中药复方的作用机制是必不可少，是中药复方研究领域期待解决的关键问题。

既往的研究结果表明[2-3]：复方配伍后，指标成分的体内药代行为显著改变，配伍影响主要组分的吸收和吸收-代谢情况，也就是说配伍影响复方组份的ADME行为，对这些药动学行为差异的深层次原因探究，药物代谢酶可能是破解方剂配伍规律研究的着眼点之一。

细胞色素P450酶对进入机体外源物的代谢起重要作用，FDA和EMEA新药研究指南中强调药物代谢酶间相互作用研究[4-5]，常见的研究方法是通过体外测定药物对肝微粒体中CYP450不同亚型酶活性的影响来评估候选药物对细胞色素P450抑制作用，常规的方法费时、费力成本很高。

近年来，使用混合的CYP底物法，例如Cocktail 法[6-7]，在体内外试验中已被广泛运用[8]，本文以玉屏风散为例，采用Cocktail 法来探索中药复方对药物代谢酶影响的规律。

Cocktail 探针药物法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的应用*刘高峰,甄立棉,杨　芳(哈尔滨医科大学附属第二医院药学部,黑龙江省高校重点实验室,150086) [摘　要]　细胞色素P450酶是人体内最重要的药物代谢酶,中药可抑制或诱导某个或某些细胞色素P450亚酶,从而影响合用药物的代谢,导致药物相互作用发生㊂中药代谢研究是中药现代化研究的重要方面,可提高中药使用的有效性和安全性,促进临床合理用药㊂Cocktail探针药物法能全面㊁真实地反映药物代谢的过程,其优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得,并将个体间影响降至最低,此法省时㊁经济㊂Cocktail探针药物法用于中药的代谢研究是一个比较新的研究领域,近几年开始有文献报道㊂该文介绍了Cocktail法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的国内外应用进展,以期系统了解并指导该领域的研究㊂[关键词]　细胞色素P450酶;中药;Cocktail探针药物法;代谢;研究进展[中图分类号]　R286;R965 [文献标识码]　A [文章编号]　1004⁃0781(2009)08⁃1049⁃04 细胞色素P450酶系(CYP450)是人体内最重要的药物代谢酶,由许多同工酶组成㊂与药物代谢密切相关的同工酶有CYP1A2,CYP2A6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4[1]㊂据西北大学王玲玲等报道,其中有55%的药物经CYP3A4代谢,20%经CYP2D6代谢,15%经CYP2C9和CYP2C19代谢㊂细胞色素P450可受多种因素的影响,尤其是药物,可显著影响药酶的活性,使其诱导或抑制,并加速或减缓底物和其他药物代谢,这些构成了药物体内过程和药物相互作用的主要机制[2]㊂探针药物法是指某些经CYP450代谢的药物,以其代谢物和原型药的比例或速率衡量酶代谢能力变化的方法㊂将两种及两种以上经不同酶代谢的药物同时给予的方法称为 Cocktail”探针药物法,即 鸡尾酒”探针药物法㊂该方法最初主要用于评估药物在体内代谢方面的相互作用,现在的应用则更加广泛,可用于体内外测定CYP450酶的活性[3]㊂目前Cocktail法主要用于西药的药物代谢研究,在中药的药物代谢研究方面还是一个比较新的研究领域,但其应用价值和重要意义不容忽视㊂现就国内外Cocktail探针药物法在中药CYP450代谢研究中的应用进行综述,为该领域的研究工作提供参考㊂1　Cocktail探针药物法的应用特点　Cocktail探针药物法可以采用探针药物的清除率或者是探针药物与代谢产物在尿中㊁血中和唾液中的浓度比值等指标来评价酶的活性,采用液相色谱或者液相色谱质谱串联法等进行测定[2]㊂Cocktail法的优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得,并将个体间影响降至最低,此法省时㊁经济㊂根据樊慧蓉等的观点,Cocktail法摒弃了体外研究中实验模型与[收稿日期]　2008⁃10⁃15[基金项目]　*黑龙江省教育厅基金资助项目(基金编号: 11531114)[作者简介]　刘高峰(1965-),女,黑龙江人,主任药师,硕士生导师,博士,研究方向:中药代谢与药物相互作用㊂电话:0451-********,E⁃mail:liugaofengwty@㊂体内真实环境差异大㊁不能较好反映体内代谢全过程等的缺点,能全面㊁真实地反映药物代谢的过程㊂Cocktail法可以同时测定几种主要的CYP450酶的亚型,在药物代谢酶研究中起着重要作用㊂使用Cocktail法应符合以下条件[1,3]:①探针药物可得且易得,同时使用的探针药物在体内不能产生相互作用;②为有效评估同时使用探针底物后的药动学变化,必须保证每种探针药物有选择地作用于一种同工酶,具有高度敏感性,即使被几种亚型催化但已确知其各条代谢途径及其产物;③在抑制药存在的条件下,探针药物在高浓度下仍维持其作用专属性,不发生对其他同工酶的抑制作用;④探针药物在给予的剂量下应对所检测亚型的活性无影响;⑤活体中在给予探针药物的剂量下其代谢应遵循一级动力学变化,并且其代谢不受肝血流和蛋白结合的影响;⑥给药和采样应简单和无损伤,在给药剂量下应确保安全性;⑦不存在潜在的对分析方法的干扰㊂2　用Cocktail法研究中药有效成分对CYP450的影响见表1㊂2.1　倍半萜内酯类　青蒿素(artemisinin,别名arteannuin㊁artemisinine㊁qinghaosu)又名黄花蒿素㊁黄蒿素,是从中药青蒿中提取的倍半萜内酯物质,主要用于间日疟㊁恶性疟的症状控制㊂SARA等[4]研究了有关青蒿素类药物对不同细胞色素P450酶的影响,75例健康成人每天随机口服治疗剂量青蒿素㊁二氢青蒿素㊁蒿甲醚㊁青蒿琥酯,共计5d,用咖啡因㊁香豆素㊁美芬妥英㊁美托洛尔㊁氯唑沙宗和咪达唑仑6种探针药物构成的鸡尾酒法,在第-6,1,5和10天口服,分别考查青蒿素等药物对CYP1A2,CYP2A6,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A活性的影响㊂结果显示,二氢青蒿素㊁蒿甲醚对CYP1A2有抑制作用,青蒿素第1天使CYP1A2活性下降,但到第5天又使CYP1A2活性增加;上述几种青蒿素类药物对CYP2A6的活性均无影响;青蒿素㊁蒿甲醚使CYP2C19的活性增加;二氢青蒿素对CYP2D6有抑制作用,青蒿素第1天使CYP2D6活性下降,但㊃9401㊃医药导报2009年8月第28卷第8期到第5天又使CYP2D6活性增加;青蒿素对CYP2E1有抑制作表1　Cocktail 法研究中药有效成分对CYP 450的影响　中药有效成分Cocktail 法中CYP 探针药物对CYP 各亚型的影响倍半萜内酯类1A22A62C192D62E13A 青蒿素1A22A62C192D62E13A+*10*2++-*3+　二氢青蒿素咖啡因香豆素美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪达唑仑-00-0+　蒿甲醚-0+00+　青蒿琥酯00000+生物碱类　青藤碱1A22C92C192D62E13A4(体外)1A22C92C192D62E13A4(体外)咖啡因甲苯磺丁脲S⁃美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪达唑仑00-0001A22C192D62E13A4(体内)1A22C192D62E13A4(体内)咖啡因S⁃美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪达唑仑0-000黄酮类化合物　绿茶儿茶素1A22C92D63A41A22C92D63A4咖啡因氯沙坦右美沙芬丁螺环酮000-皂苷类　人参皂苷Re (1)1A23A4(1)1A23A4咖啡因氨苯砜　++(2)2C192E1(2)2C192E1奥美拉唑氯唑沙宗00糖类　硫酸多糖1A23A42E11A23A42E1(体内)1A23A42E1(体外)　SPMG⁃911咖啡因咪达唑仑氯唑沙宗0-0-00　AOSC⁃9710+00+*1药物对CYP 亚型有诱导作用,*2药物对CYP 亚型无影响,*3药物对CYP 亚型有抑制作用用;上述几种青蒿素类药物均对CYP3A 有诱导作用㊂2.2　生物碱类　青藤碱是我国沿用已久的抗风湿中药,具有消炎镇痛㊁活血化瘀㊁增强免疫力㊁降低血沉(ESR)㊁使类风湿因子(RF)阴转㊁改善功能障碍等作用,并有延缓类风湿关节炎(RA)复发时间及减轻复发症状的作用㊂YAO 等[5]利用Cocktail 法对青藤碱的代谢进行了研究㊂用6个探针药物对多种CYP 450酶进行人体外研究(咖啡因CYP1A2㊁咪达唑仑CYP3A4㊁氯唑沙宗CYP2E1㊁S⁃美芬妥英CYP2C19㊁美托洛尔CYP2D6㊁甲苯磺丁脲CYP2C9),结果发现青藤碱使CYP2C19的活性下降了69%,对其他CYP450酶无显著影响㊂用5个探针药物对多种CYP450酶的活性进行的人体内研究,发现美芬妥英的消除增大了73%,即青藤碱使CYP2C19的活性降低了73%,对其他CYP450酶无显著影响㊂2.3　黄酮类　绿茶儿茶素有除臭㊁抗腐蚀㊁抗菌㊁抗氧化㊁抑制胆固醇升高㊁除去活性氧和抗癌作用等㊂对于可引发癌症和衰老等各种疾病的活性氧,绿茶儿茶素可以充分发挥其在细胞膜表面除去活性氧之功能㊂CHOW 等[6]用Cocktail 法考查了绿茶儿茶素对CYP450的影响,42例健康志愿者经过4周清洗期(即不饮茶及与茶有关的产品)后,给予4个不同的CYP450探针药物咖啡因㊁右美沙芬㊁氯沙坦和丁螺环酮,分别评估CYP1A2,CYP2D6,CYP2C9,CYP3A4的活性,再进行4周绿茶儿茶素的干预试验,结果发现绿茶儿茶素的干预并没有改变CYP1A2,CYP12D6,CYP12C9的活性,却使丁螺环酮的血药浓度⁃时间曲线下面积增大了20%,显示CYP3A4活性有轻微的降低㊂表明反复给予绿茶儿茶素不太可能引起由CYP450酶介导的药物代谢发生显著性变化㊂2.4　皂苷类　人参皂苷Re(Ginsenoside Re)来自五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根,具有益心宁神的功效㊂樊慧蓉等使用4种Cocktail 探针药物氨苯矾㊁咖啡因㊁氯唑沙宗和奥美拉唑,通过药动学参数变化评价人参皂苷Re 对大鼠肝细胞色素氧化酶P450亚型CYP3A4㊁CYP1A2㊁CYP2E1㊁CYP2C19的诱导或抑制作用㊂实验分两组进行:①大鼠尾静脉同时注射探针药物氨苯砜(CYP3A4)㊁咖啡因(CYP1A2),于0.183,0.25,0.5,0.75,1,2,5,8和12h 眼球采血,提取溶剂为三氯甲烷︓异丙醇(90︓10,V /V );②大鼠尾静脉同时注射探针药物氯唑沙宗(CYP2E1)㊁奥美拉唑(CYP2C19),于2,5,10,15,30,45,60,220,250和300min 经眼球采血,提取溶剂为己酸己酯㊂经高效液相色谱法测定,比较实验组和对照组的药物动力学参数,结果表明,人参皂苷Re 对大鼠肝细胞色素氧化酶P 450亚型CYP1A2㊁CYP3A4有诱导作用,而对CYP2E1㊁CYP2C19无影响㊂2.5　糖类　海洋硫酸多糖SPMG⁃911(简称911)和AOSC⁃971(简称971)都是中国海洋大学海洋药物与食品研究所研发的㊁具有自主知识产权的国家I 类新药㊂采用 Cocktail”探针药物法,分大鼠整体实验㊁大鼠离体实验以及人体离体试验3个途径,使用3种探针药物咖啡因㊁咪达唑仑㊁氯唑沙宗,通过药物代谢的药动学参数评价911和971对CYP450亚型CYP1A2㊁CYP3A4㊁CYP2E1的诱导或抑制作用,以及这种作用是否存在性别差异㊂通过3个途径的试验,发现971对不同性别㊁不同受试者的CYP1A2和CYP3A4均无影响,体内外试验中对雄性大鼠CYP2E1均有明显的诱导作用㊂911在大鼠的整体实验(即体内实验)中,对雌雄大鼠的CYP1A2酶均无影响,对雌雄大鼠的CYP3A4酶均有显著抑制作用;而在体外试验中,911组对雄性大鼠和男性人肝微粒体咖啡因均有明显的抑制作用(即可能对CYP1A2有潜在的抑制作用),对大鼠和人的肝微粒体酶CYP3A4㊃0501㊃Herald of Medicine Vol.28No.8August 2009均无影响㊂3个途径的试验结果表明,911对CYP2E1酶均无影响,911对酶CYP1A2和CYP3A4的影响呈现出体内外结果不一致的现象,考虑主要与药物本身的结构在内外环境中的稳定性㊁对酶的稳定性以及酶本身的活性等方面的差异有关㊂3　用Cocktail法研究中药提取物对CYP450的影响　见表2㊂3.1　同一种Cocktail法对几种中药提取物分别进行代谢研究　MATTHIAS[10]对6种中药的提取物分别进行了实验㊂用LC/ LC/MS法在体外同时检测中药提取物对6种主要的CYP450酶的抑制作用㊂用杆状病毒感染的昆虫细胞进行试验,CYP1A2㊁CYP2C8㊁CYP2C9㊁CYP2C19㊁CYP2D6和CYP3A4酶的底物经混合,孵化,最终代谢产物用LC/LC/MS定量㊂Cocktail探针药物包括他克林(CYP1A2)㊁紫杉醇(CYP2C8)㊁甲苯磺丁脲(CYP2C9)㊁米帕明(CYP2C19)㊁右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑(CYP3A4),并对此方法进行了验证㊂结果钩果草提取物对CYP1A2和CYP2D6的抑制活性相对较低(IC50>900μg㊃mL⁃1),对CYP2C8/9/19和CYP3A4的抑制范围是IC50100~350μg㊃mL⁃1㊂钩果草提取物在Cocktail中对CYP2D6有抑制作用的IC50值范围是(1038±44)μg㊃mL⁃1,与用单个探针药物考查的结果一致[用单个探针药物时对CYP2D6抑制作用的IC50值范围是(1044±80)μg㊃mL⁃1]㊂龙牙草提取物的IC50值在低于100μg㊃mL⁃1时对CYP1A2/2C9有较强的抑制活性,100~200μg㊃mL⁃1时对CYP2C8/19/3A4有较强抑制活性㊂胡柚汁在体内外对CYP450酶的抑制活性已有较多报道㊂选择正常浓度的胡柚汁,并根据其活性选择试验所用的中药提取物㊂有趣的是,胡柚汁在体外对CYP450的抑制活性相对于体内较弱(IC50>400μg㊃mL⁃1),因为体内摄入的剂量(200g)比中药提取物的治疗剂量(100~1000mg)高㊂红三叶草提取物IC50值在100~500μg㊃mL⁃1时可降低各种CYP450酶的活性㊂胡椒属薄荷油在500μg㊃mL⁃1时会使各种CYP450酶(CYP3A4除外)的活性降低到20%㊂桉油对CYP450的抑制活性比薄荷油低, IC50值范围是大于100μg㊃mL⁃1,对CYP3A4的抑制活性相对较强㊂卡法根(即麻醉椒)提取物抑制所有CYP450的活性,IC50值在20~100μg㊃mL⁃1时抑制CYP1A2/2C9/2C19的活性,在100 ~500μg㊃mL⁃1时抑制CYP2C8/2D6/3A4的活性㊂3.2　姜黄　姜黄具有破血㊁行气㊁通经㊁镇痛等功效,含姜黄素类化合物㊁倍半萜类化合物㊁酸性多糖和挥发油等有效成分㊂扈金萍等[8]采用Cocktail探针药物法,通过对大鼠进行体内㊁体外实验来评价姜黄提取液对CYP450的影响,Cocktail探针药物包括咖啡因(CYP1A2)㊁氨苯砜(CYP3A4)㊁氯唑沙宗(CYP2E1),通过高效液相色谱法检测3种探针药物的代谢变化来评价姜黄提取液对CYP450各亚酶的影响,结果显示姜黄提取液对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,但对大鼠CYP3A4的影响不显著㊂3.3　连翘　连翘具有清热㊁解毒㊁散结㊁消肿等功效,可用于治疗温热㊁丹毒㊁斑疹㊁痈疡肿毒㊁瘰疬㊁小便淋闭等症状㊂连翘果实中含连翘酚㊁甾醇化合物㊁皂苷及黄酮醇苷类㊁马苔树脂醇苷等㊂果皮含齐墩果酸㊂闫淑莲等[9]用Cocktail法考查了连翘提取液对CYP450酶的影响,Cocktail探针药物包括咖啡因㊁氨苯砜㊁氯唑沙宗,分别检测CYP1A2㊁CYP3A4㊁CYP2E1的活性㊂通过高效液相色谱法检测探针药物的代谢率来评价连翘提取液对CYP450各亚型的影响㊂结果显示连翘提取液对大鼠CYP1A2有抑制作用,对大鼠CYP3A4有诱导作用,但对大鼠CYP2E1的影响不显著㊂3.4　贯叶连翘　贯叶连翘(Hypericum perforatum)属藤黄科植物,其主要活性成分为苯并二蒽酮类衍生物金丝桃素和假金丝桃素,能透过血脑屏障进入大脑,通过系列反应达到缓解精神紧张和稳定情绪的效果㊂贯叶连翘也是一种受欢迎的OTC食品添加剂和草药治疗剂,与几个CYP450同工酶底物会产生药物相互作用㊂WANG等[10]用Cocktail法检测了贯叶连翘提取物体内对CYP450活性的影响,Cocktail探针药物包括甲苯磺丁脲(CYP2C9)㊁咖啡因(CYP1A2)㊁右美沙芬(CYP2D6)㊁口服咪达唑仑(肠道壁和肝脏CYP3A)和静脉注射咪达唑仑(肝CYP3A)㊂结果显示,短期内给予贯叶连翘提取物并没有影响CYP450的活性,长期摄入贯叶连翘提取物会对肠道壁CYP3A 有显著选择性诱导作用,贯叶连翘提取物并不会改变CYP2C9㊁CYP1A2㊁和CYP2D6的活性㊂因此在长期摄入贯叶连翘提取物表2　Cocktail法研究中药提取物对CYP450的影响　中药有效成分Cocktail法中CYP探针药物对CYP各亚型的影响1A22C82C92C192D63A41A22C82C92C192D63A4钩果草提取物他克林紫杉醇甲苯磺丁脲米帕明右美沙芬咪达唑仑　-*1　-　-　-　-　-龙牙草提取物　-　-　-　-　-　-胡柚汁　-　-　-　-　-　-红三叶草提取物　-　-　-　-　-　-胡椒属薄荷油　-　-　-　-　-　-桉油　-　-　-　-　-　-卡法根提取物　-　-　-　-　-　-姜黄提取液1A22E13A41A22E13A4咖啡因氯唑沙宗氨苯砜--0*2连翘提取液1A22E13A41A22E13A4咖啡因氯唑沙宗氨苯砜-0+*3贯叶连翘提取物2C91A22D63A(肠壁/肝)3A(肝)1A22D62C93A(肠壁)甲苯磺丁脲咖啡因右美沙芬咪达唑仑咪达唑仑000+(长期)　(口服)　(静注)㊃1501㊃医药导报2009年8月第28卷第8期*1药物对CYP 亚型有抑制作用,*2药物对CYP 亚型无影响,*3药物对CYP 亚型有诱导作用时,应考虑对CYP3A 调控的药物代谢的影响所致的疗效降低㊂4　Cocktail 法的应用展望　目前欧美各国己经把CYP 450及其同工酶的测定用于新药的筛选及代谢研究,并将其列为新药申报必须进行的一项试验㊂我国在该领域的研究还处于探索阶段,但该研究的重要性和意义已逐渐被认识,在我国‘新药审批办法“和‘药品注册管理办法“中,已经要求新药研发必须进行药物代谢酶的研究㊂另外,国家在‘化学药物非临床药代动力学研究指导原则“中指出,对于创新药物,应观察药物对药物代谢酶,特别是细胞色素P450同工酶的诱导或抑制作用㊂因此,简便快速的 鸡尾酒法”将成为一个创新药物临床前药物代谢研究重要的和常用的手段㊂Cocktail 探针药物法在国外应用的较多,主要用于西药的研究㊂用Cocktail 法研究中药的代谢,国内外报道均比较少,是一个比较新的研究领域,目前的报道尚仅限于中药单一有效成分或单一中药提取物,对于复方中药的研究尚属于空白㊂由于Cocktail 法在研究药物代谢方面的优势,若广泛用于中药的代谢研究,必将促进中药基础理论的研究和中药的现代化研究,同时,对于中药在临床上的合理应用,提高联合用药的安全性和有效性具有重要的实际意义㊂[DOI ]　10.3870/yydb.2009.08.028[参考文献][1]　樊慧蓉,和　凡,刘昌孝.Cocktail 探针药物法用于评价细胞色素P 450同工酶影响的研究进展[J].中国药学杂志,2006,41(14):1045-1048.[2]　刘高峰,郭兴蕾.中药对细胞色素P 450调控作用的研究进展[J].中草药,2008,39(1):139-143.[3]　刘　颖,焦建杰,娄建石. Cocktail”探针药物法的研究进展[J].中国临床药理学与治疗学,2006,11(11):1225-1229.[4]　SARA A,DOAA E,TRINH N,et al .Artemisinin antimalarials mo⁃derately affect cytochrome P 450enzyme activity in healthy subjects [J].Fundam Clin Pharmacol ,2007,21(3):307-316.[5]　YAO Y M,CAO W,CAO Y J,et al .Effect of sinomenine on humancytochrome P 450activity[J].Clin Chim Acta ,2007,379(1-2):113-118.[6]　CHOW H H,HAKIM I A,VINING D R,et al .Effects of repeatedgreen tea catechin administration on human cytochrome P 450activity[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev ,2006,15(12):2473-2476.[7]　MATTHIAS U,ANDREAS F.Simultaneous determination of the inhi⁃bitory potency of herbal extracts on the activity of six major cytochromeP 450enzymesusingliquidchromatography /massspectrometry and automated online extraction [J ].Rapid Commun Mass Spectrom ,2004,18(19):2273-2281.[8]　扈金萍,闫淑莲,唐静成,等.Cocktail 探针药物评价姜黄对肝细胞色素P 450酶的影响[J].首都医科大学学报,2004,25(4):427-430.[9]　闫淑莲,扈金萍,徐艳霞,等.Cocktail 探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P 450的影响[J].中国药学杂志,2003,38(10):761-763.[10]　WANG Z,GORSKI JC,HAMMAN M A,et al .The effects of St John's wort (Hypericum perforatum )on human cytochrome P 450activity[J].Clin Pharmacol Ther ,2001,70(4):317-326.难溶性药物增溶研究进展*马世堂,刘培勋,徐　阳,禹　洁,龙　伟,洪　阁(中国医学科学院㊁北京协和医学院放射医学研究所,天津　300192)[摘　要]　如何增加难溶性药物的溶解度,改善其生物利用度,一直是药剂学研究的重要内容㊂该文就近年来应用广泛的纳米混悬剂㊁渗透泵㊁自微乳化技术㊁固体分散体㊁固体脂质纳米粒㊁液固压缩技术等一些新方法新技术在增加难溶性药物溶解度及改善生物利用度方面的应用进行综述㊂[关键词]　难溶性药物;溶解度;生物利用度;纳米混悬剂;固体分散;液固压缩[中图分类号]　R944;TQ450.1 [文献标识码]　A [文章编号]　1004⁃0781(2009)08⁃1052⁃03 多数通过高通量筛选(HTS)或从中药材中分离得到的有效成分,在经过先导物优化㊁结构改造与修饰之后,所得到的新化学实体往往存在生物溶解度小㊁生物利用度低的问题,这在一定程度上限制了其开发成为新药的可能性,故当前药剂工业[收稿日期]　2008⁃10⁃06[基金编号]　*中国医学科学院放射医学研究所基金资助(基金编号:ST0844)[作者简介]　马世堂(1981-),男,重庆人,助教,硕士,主要从事计算机辅助药物设计与中药化学相关研究㊂电话:022-********,E⁃mail:nothingchina@㊂[通讯作者]　刘培勋,男,研究员,主要从事计算机辅助药物设计和中药化学相关研究㊂电话*************,E⁃mail:pharm8888@yahoo.㊂面临的主要挑战之一就是找出适合的方法来提高难溶性药物的溶解度,改善生物利用度㊂据文献报道,在‘美国药典“中有三分之一以上的药物为难溶性药物㊂最近的研究也表明,在新药开发中,有41%的工作量是为了提高难溶性药物的溶解度,以及改善生物利用度㊂据文献报道,经HTS 筛选出的活性化合物大多存在分子量大㊁疏水性强等问题,很多药理活性显著的药物是难溶性药物㊂由于一些药物体内消除速度较快,血药浓度容易出现峰谷现象,口服制剂生物利用度低,难以实现剂型的多样化㊂据统计,目前至少有40%的药物因溶解度问题而使其使用受到限制[1]㊂因此,提高难溶性药物的溶解度和生物利用度一直是药剂学研究的主要工作内容之一㊂有文献报道,使用混合溶剂或加㊃2501㊃Herald of Medicine Vol.28No.8August 2009。

谈小剂量辣椒素对大鼠内脏机械及化学刺激敏感性的影响近年来,功能性胃肠病(functional gastrointestinaldisorders, FGIDs) 的发病率正逐年上升, 但其发病机制仍不清楚, 大量研究显示内脏高敏感在FGIDs 发病机制中有着关键作用。

随着辣椒素(capsaicin, Cap) 缓解疼痛的作用被逐渐认识,Cap 对FGIDs 内脏高敏感的研究越来越多。

一些学者研究发现初次或短期使用Cap, 并不能立刻发挥镇痛作用, 相反, 还会引发或加重疼痛。

随着使用时间的延长, Cap 才能逐渐展示其镇痛效果[1]。

Cap通过刺激初级传入神经元末梢和细胞膜上的特殊受体而产生作用, 此受体称为辣椒素受体(TRPV1)。

Cap 可通过激活消化道内TRPV1 的表达而影响内脏的高敏感性, 但Cap、TRPV1 和内脏高敏感的相互作用目前还不完全清楚。

因此本研究通过喂食大鼠Cap 饲料, 研究连续摄入小剂量Cap 在不同时间点对不同性别大鼠内脏化学和机械刺激敏感性的影响。

材料与方法实验动物清洁级SD 大鼠160 只, 雌雄各80 只,体重180 ~ 200 g, 饲养2 周以适应环境。

药品与试剂Cap (99%浓度, 美国Sigma 公司);10FR 导尿管; 动物用新斯的明注射液; 兔抗大鼠TRPV1 多克隆抗体; 二步法免疫组化检测试剂(PV- 6001); DAB 显色试剂盒等。

Cap 饲料的配制每日新鲜配制, 99% Cap 1 mg,加入到普通饲料粉100 g, 充分混匀成形, 即得到Cap 浓度为10 mgkg-1 的Cap 饲料。

实验分组及分期SD 大鼠160 只, 随机分为对照组与观察组, 每组80 只, 雌雄各半。

对照组摄入普通饲料; 观察组摄入Cap 饲料, 剂量为Cap1 mgkg-1d-1。

每组再随机均分为5 小组, 分别观察给予Cap 后1 d、3 d、1 周、2 周和4 周的改变, 对应观察时间, 每小组大鼠16 只, 雌雄各半。

基于HPLC-MS与Cocktail探针药物法研究五味子提取物对大鼠CYP450酶的影响李莉;童黄锦;汪丽君;苏联麟;陆兔林;李昱【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2022(37)3【摘要】目的研究五味子提取物对大鼠肝脏中细胞色素P450酶(CYP450酶)的影响。

方法采用高效液相色谱串联质谱(high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,HPLC-MS)分析技术建立稳定的探针底物色谱分析法,结合Cocktail分析单次给予五味子提取物对大鼠体内CYP2D6、CYP2C19、CYP2C8、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C196种CYP450亚型酶活性的影响。

结果五味子提取物对大鼠肝脏中CYP2D6、CYP2C19和CYP2C8的活性具有显著的抑制作用,而对CYP2A6、CYP2B6和CYP2C19的活性具有显著的诱导作用(P<0.05)。

结论用HPLC-MS结合Cocktail探针药物法研究五味子提取物对大鼠CYP450酶影响的准确性及可靠性较强,五味子对CYP450酶多个亚型的不同调控作用可能是其发挥降酶保肝作用的重要机制。

【总页数】10页(P61-70)【作者】李莉;童黄锦;汪丽君;苏联麟;陆兔林;李昱【作者单位】亳州市食品药品检验中心;南京中医药大学附属中西医结合医院;南京中医药大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1."Cocktail"探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠CYP450酶活性的影响2.Cocktail探针药物法评价生、醋莪术对CYP450酶亚型的影响3.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响4.Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响5.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Cocktail探针药物法评价糖尿病大鼠体内细胞色素P450不同亚型的活性汪云;马莎莎;崔桅;焦建杰;娄建石【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2017(029)005【摘要】目的:探讨链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型大鼠体内细胞色素P450酶(CYPs)6种亚型活性及蛋白含量的变化,为临床合理用药提供参考.方法:将大鼠随机分为空白对照组、糖尿病1周组、4周组和8周组.应用"Cocktail"探针药物法评价各组大鼠血浆中各探针药物的浓度,比较空白对照组和3组糖尿病模型组各探针药物的药动学参数,评价糖尿病大鼠体内细胞色素P450酶亚型1A2、2D6、2C19、2C9、2E1和3A4活性的变化;选择酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测糖尿病大鼠肝脏中此6种CYPs亚型酶蛋白相对表达量的变化.结果:相比于空白组,糖尿病4周和8周组大鼠体内咖啡因AUC分别降低了62.78%和79.31%(P<0.01),校正后的清除率(CL Z)分别升高了5.12和52.35倍(P<0.05,P<0.01);糖尿病模型组大鼠体内美托洛尔AUC、t 1/2z和CL Z均无显著变化;糖尿病8周大鼠体内氯唑沙宗AUC 降低了60.58%(P<0.01),CL Z升高了1.2倍(P<0.01);糖尿病4周和8周组大鼠体内奥美拉唑AUC降低了55.60%和81.42%(P<0.05,P<0.01),CL Z升高了27.50和41.25倍(P<0.01);8周大鼠甲苯磺丁脲AUC降低了45.39%(P<0.05)、CL Z升高了83.33%(P<0.01);糖尿病1周和8周组大鼠体内咪达唑仑AUC降低了43.23%和53.87%(P<0.05,P<0.01),CL Z升高了1.33和2.04倍(P<0.05).相比于空白组,糖尿病1周和4周组大鼠肝脏中CYP1A2蛋白相对表达量升高了24.60%和26.41%(P<0.05),糖尿病1周组大鼠CYP3A4蛋白相对表达量降低了24.62%(P<0.05),CYP2D6、2E1、2C19和2C9蛋白相对表达量无变化.结论:与空白组相比,糖尿病模型组大鼠体内CYP1A2、2E1、2C19、2C9和3A4活性均被诱导,而CYP2D6活性未发生变化;与空白组相比,糖尿病1周、4周组的大鼠肝脏中CYP1A2蛋白相对表达量明显升高,糖尿病1周组大鼠肝脏中CYP3A4蛋白相对表达量明显降低,CYP2D6、2E1、2C9和2C19亚型酶蛋白相对表达量均未发生显著变化.【总页数】8页(P1-8)【作者】汪云;马莎莎;崔桅;焦建杰;娄建石【作者单位】天津市人民医院,天津 300121;天津市人民医院,天津 300121;天津市人民医院,天津 300121;天津医科大学基础医学院,天津 300070;天津医科大学基础医学院,天津 300070【正文语种】中文【中图分类】R969【相关文献】1."Cocktail"探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠CYP450酶活性的影响 [J], 洪小凤;林晶;杨强丽2.“cocktail”探针药物法评价五种肝细胞色素P450酶活性的应用 [J], 娄建石;刘颖;焦建杰;张才丽3.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青4.Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响 [J], 冯星月;余辉;蒋志涛;张咏梅5.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青;;;;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Cocktail探针法测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP450亚酶活性的影响朱冠秀;高月;王宇光;李飞;马增春;梁乾德;肖成荣;谭洪玲;汤响林;张伯礼【期刊名称】《中国药物警戒》【年(卷),期】2013(010)005【摘要】Objective To determine the influence of Radix Adenophorae coadministrated with Veratrum nigrum L. on cytochrome P450 isoforms CYP1A2,CYP3A4, CYP2C9 and CYP2C19 by Cocktail probe drugs in rats, thus explore the in vivo evidence of the imcompatibility of them from the perspective of drug-drug interactions. Methods 24 male wistar rats were randomly divided into Radix Adenophorae group, trum nigrum L. group, combined group and blank control group, which were given Radix Adenophorae decoction(1 3.5g·kg-1) Vera·trkgum nigrum L. decoctionrn(0.81g·kg-1), co-decoction(14.31g·kg-1) and normal saline for 7 days, then injected the mixture of 4 probes through vena caudalis on the 8th day, and soon after the blood samples were obtained through extirpating the eyeballs at a series of time-points. HPLC method was used to determine the concentrations of probe drugs in rat plasma, and pharma -cokinetic parameters were estimated by WinNolin5.2. The effects of test drugs on the activities of cytochrome P450 isoforms were judged indirectly by comparing the pharmacokinetic parameters of treated groups with those of control group. Results Compared with the blank control group,Veratrum nigrum L. was decreased AUC(0 ~ t) of tolbutamide and increased its Vz; Radix Adenophorae were decreased AUC(0 ~ ∞) of caffeine, significantly decreased AUC(0~t), AUC(0 ~ ∞) of tolbutamide, and was increased Vz, CL of tolbutamide, no significant difference of dapsone and omeprazole. Compared with the Veratrum nigrum L. group, combination could increase MRT(0 ~ t) of dapsone, decrease AUC(0 ~ t), AUC(0 ~ ∞) of omeprazoleand, increase CL of it; Compared with the Radix Adenophorae group, combination could increase AUC(0 ~t) of omeprazole. Conclusion Compared with the blank control group, Veratrum nigruni . can induce CYP2C19 activities; Radix Adenophorae can induce CYP1A2 and CYP2C9 activities significantly with no effect on the activities of CYP3A4 and CYP2C19. Compared with the Veratrum nigrum L. group, CYP3A4 activities were inhibited in combined groups, and CYP2C19 activities were induced with no effects on the activities of CYP1A2 and CYP2C9. Compared with the Radix Adenophorae group, combination can inhibit the activities of CYP2C19.%目的利用Cocktail探针法,测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP1A2、CYP3A4 、CYP2C9和CYP2C19酶活性的影响,从药物相互作用角度探寻二者配伍增毒相反的体内证据.方法将24只雄性Wistar大鼠随机分组,南沙参组、藜芦组、合用组分别灌胃南沙参煎液(13.5g·kg-1)、藜芦煎液(0.81g·kg-1)、合煎液(14.31g·kg-1),空白组灌胃生理盐水,连续给药7天,于第8天尾静脉注射混合探针药物后于不同时间点采集血样;血样经处理后利用HPLC同时测定不同时间点各探针药物的血药浓度,通过WinNolin5.2软件计算各探针药物的药动学参数,并进行组间比较,进而反映亚酶活性在各组之间的差异.结果与空白对照相比,藜芦组可降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t),增加其Vz;南沙参组可降低咖啡因的AUC(0～∞),显著降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t)、AUC(0～∞)并使其Vz,CL显著增加,对氨苯砜、奥美拉唑的各药动学参数无明显影响;与藜芦组相比,合用可增加氨苯砜的MRT(0～t),降低奥美拉唑的AUC(0～t),AUC(0～∞)并增加其CL;与南沙参组相比,合用可增加甲苯磺丁脲的AUC(0～t),降低其Vz,CL.结论与空白组相比,藜芦组对大鼠CYP2C9具有诱导作用,南沙参组对大鼠CYP1A2酶具有诱导作用,对CYP2C9酶具有显著诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19无明显影响;与藜芦组相比,合用组对大鼠CYP3A4酶具有抑制作用,对CYP2C19酶具有诱导作用;与南沙参组相比,合用组对大鼠CYP2C19酶具有抑制作用.【总页数】7页(P257-262,268)【作者】朱冠秀;高月;王宇光;李飞;马增春;梁乾德;肖成荣;谭洪玲;汤响林;张伯礼【作者单位】中南大学药学院,湖南,长沙,410013;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;中南大学药学院,湖南,长沙,410013;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射与辐射医学研究所,北京,100850;天津中医药大学,天津,300193【正文语种】中文【中图分类】R285;R963【相关文献】1."Cocktail"探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠CYP450酶活性的影响 [J], 洪小凤;林晶;杨强丽2.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青3.Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响 [J], 冯星月;余辉;蒋志涛;张咏梅4.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青;;;;5.Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对人CYP450酶活性的影响 [J], 魏文增;赵宁宁;林颖烽;王瑾;王宫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

“Cocktail”探针药物法的研究进展
刘颖;焦建杰;娄建石
【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》
【年(卷),期】2006(11)11
【摘要】“Cocktail”(鸡尾酒)探针药物法是一次给予两种或多种的探针药物的方法。

本文主要介绍“Cocktail”探针药物法在测定药物代谢酶活性以评价药物间相互作用、研究药物代谢酶活性与疾病之间关系、研究遗传或非遗传因素对代谢酶活性影响的应用。

简要介绍了“Cocktail”探针药物法在临床研究中的应用,并且对体内药物代谢酶活性测定的“Cocktail”探针等方面进行较全面的综述。

【总页数】5页(P1225-1229)
【关键词】“鸡尾酒”探针药物法;细胞色素P450;应用
【作者】刘颖;焦建杰;娄建石
【作者单位】天津医科大学药理学研究室
【正文语种】中文
【中图分类】R969
【相关文献】
1.Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响 [J], 徐玉秀;张思佳;篓筱琳;曾常青
2.Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响 [J], 冯星月;余辉;蒋志涛;张咏梅
3.基于Cocktail探针药物法分析辛伐他汀对肝脏药物代谢酶的影响 [J], 李松;陈君
4.Cocktail探针药物法研究化合物PT-46的CYP酶系抑制作用 [J], 王丽丽;程飞;张娜娜;郑雪梅;张吉泉;陈瑞
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