急性毒性试验设计

急 性 毒 性 试 验 方 法――改良寇氏法Kärber 法由Kärber 于1931提出，后经Finney 改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD 50及全部有关参数与正规概率单位法相近。

改良寇氏法（Käber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。

一、剂量选择及分组1、剂量选择剂量设计是否合理是急性毒性试验能否成功的关键。

探求外源化学物的急性毒性，测定其LD 50或LC 50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD 50的计算方法，然后设计剂量。

2、预试验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b ）和全部不致死的最大剂量（a ），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r ），其比值为1.2~1.5。

进行正式实验。

用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g ，小鼠18~22g ，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg ，犬10~12 kg 。

用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。

仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。

当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD 50。

通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。

按下式设计剂量组：1n abr -= 式中：r —相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5，b —最低全致死剂量量， a —最高不致死剂量， n —设计的组数。

实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。

一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。

根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。

三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。

据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。

以次类推，找出Dmin。

2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。

在确定组数后，按下列公式计算r。

1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。

剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。

简述| 药物急性毒性试验研究主要设计要点急性毒性（Acute toxicity）是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应。

拟用于人体的药物通常需要进行单次给药毒性试验。

单次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。

单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息。

实验设计注意事项01受试物受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并须有研制单位的COA。

来自于市售的辅料、溶媒等应具有相关的说明和规格。

02实验动物年龄| 试验应使用年轻健康成年的动物，如果是儿童用药，必要时采用幼年动物进行试验。

种属| 可根据药代或药效结果选择合适的动物种属，试验应采用至少两种哺乳动物，从多个方面暴露药物动物毒性，选择一种啮齿类和一种非啮齿类动物，如未采用非啮齿类动物进行动物试验，应该说明理由。

性别| 通常采用雌性和雄性动物进行试验，雌雄各半。

若采用单性别动物进行试验，应阐明其合理性。

动物数| 根据研究目的，选择合适的动物数，比如小动物每组动物10只，大动物每组动物4只。

动物数应符合试验方法及其结果分析评价的需要。

体重| 试验中的啮齿类动物初始给药时的每组平均体重差异不应超过或低于平均体重的20%。

03给药途径通常情况下给药途径应至少包括临床拟用途径，或者增加一种能使药物较为完全进入全身暴露的途径如静脉给药。

急性经口给药前啮齿类动物应禁食一段时间，但禁食时间可能会影响暴露量，受到药物代谢酶的活性和受试物肠道内吸收的影响。

04给药剂量水平常用的试验方法有最大给药量法、最大耐受量法、半数致死量法等。

根据不同的试验方法选择合适的剂量，为了充分暴露毒性，高剂量可选择出现严重毒性的给药剂量或达到最大给药量，低剂量可选择未见毒性剂量，同时设空白和/或溶媒（辅料）对照组。

试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。

选用其他动物应说明原因。

年龄一般为7-9周龄。

同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。

若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。

应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。

选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。

如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。

根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。

试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。

选用其他动物应说明原因。

年龄一般为7-9周龄。

同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。

若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。

应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。

选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。

如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。

根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。

急性、慢性和亚慢性毒性实验急性毒性试验(一)经典的急性致死性毒性试验通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50)1、实验动物常用的实验动物是小鼠或大鼠。

一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。

小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。

2、染毒剂量设计首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。

对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按几何级数)染毒，找出找出10%~90%(或0% ~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。

改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。

根据以下公式计算出剂量分组：i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0) / (n-1)式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n 为设计的剂量组数。

有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。

在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。

单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。

如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。

3、观察染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。

在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。

观察内容包括：(1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。

急性毒性试验-LD50的测定急性毒性试验是一种通过给实验动物注射、灌胃或其他途径给予高剂量试验物质来评估其致死或严重的毒性反应的试验。

LD50是一种常用的急性毒性指标，表示半数实验动物在接受单位剂量试验物质后死亡的剂量。

本文将介绍LD50的测定方法和其应用。

一、LD50的测定方法1. 实验动物的选择LD50实验通常使用小鼠、大鼠、兔子和狗等动物进行。

选用实验动物需要秉持道德原则，并考虑到动物的生物学特征、毒物代谢能力等方面的因素。

例如，小鼠和大鼠体型较小、代谢能力较低，适合于测定具有代谢性毒性的化合物的LD50；兔子和狗体型较大，代谢能力较强，适合于测定纯化、非代谢性毒性的化合物的LD50。

2. 给药途径和剂量选择通常使用口服、皮下注射、静脉注射等给药途径。

对于口服试验，需要注意试验物质的水溶性和毒性，对于毒性高的化合物，通常使用灌胃的方式。

实验的剂量需要考虑到实验动物体型、种类、代谢能力等因素，并进行逐步递增以确定LD50。

3. 实验计划设计实验计划设计需要考虑到试验物质的毒性、剂量效应关系和死亡率等因素。

一般采用正反两次递增的方法，进行急性毒性试验评估。

根据试验物质的毒性情况和实验者的安全考虑，同时采取风险预警措施。

4. 数据处理和计算完成实验后，需要统计每个剂量组的死亡率和死亡时间。

按照统计学原理，可以根据实验数据计算出LD50值。

LD50值表示使用单位剂量试验物质对半数实验动物致死的剂量。

该值越小，试验物质的毒性越高。

二、LD50的应用LD50值可以作为急性毒性评估的定量指标，用于比较不同化合物的毒性。

在化学品、药品等领域里进行LD50测定可以帮助人们更好地预测和评估一些原料与产品的安全性，以便于过程优化和产品开发，同时为相关政策制定提供科学依据。

LD50值的应用最为广泛的领域是毒性测试和安全性评估。

在毒理学和环境毒理学领域里，常用LD50为评估的标准；在某些国家的法律法规中，也要求企业对使用的化学品或产品进行毒性测试，以保证工人和消费者的安全。

急性毒性试验试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。

一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。

选用其他动物应说明原因。

年龄一般为7-9周龄。

同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。

实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。

2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。

若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。

应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。

3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。

（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。

1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。

2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。

3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。

4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。

选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。

实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。

如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。

根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。

实验一急性毒性试验（改进寇氏法）一、目的与要求1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。

2、观察马钱子的毒性反应。

二、实验原理急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。

药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。

致死量的测定也较准确。

在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。

致死量的测定常以半数致死量为标准。

半数致死量是指能够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。

由于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。

LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。

以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试验体重相差不得超过1 0克）健康大鼠作实验动物。

性别相同或雌雄各半。

（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床所采用的相同。

溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。

值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。

若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的LD50。

口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。

(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。

观察期间应逐日记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。

（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。

正式试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4～5个剂量组，每组动物数为10～20只。

急性毒性试验方案急性毒性试验是评估单次或短时间内暴露给动物或人类的某种物质引起的致死或可逆的严重生理或行为异常的试验。

该试验方法是衡量化学物质的毒性的基本方法。

本文将介绍急性毒性试验的实施流程、试验动物的选取、试验总体方案和数据分析。

一、试验动物的选取：一般采用小鼠、大鼠、兔子等常见实验动物进行急性毒性试验。

实验前可选用以体重为基础的随机方法进行面部体检和组织检查，确保被选中的动物状态正常，无明显异常。

建议使用健康、年龄相当、性别相同的同种动物。

二、试验总体方案：（一）实验前准备① 确定药物的理论毒性LD50值。

② 检查试验动物的健康状况，重量平均分布。

③ 毒物制备：根据LD50值计算出适量的毒物浓度，制备用于实验的溶液。

（二）实验操作① 实验动物按照体重分组，随机分配到实验组和对照组。

② 实验组的动物分别接受毒性物质，对照组的动物接受纯水或生理盐水等无害物质。

③ 观察动物在接受测试物后出现的任何不良反应和明显症状。

④ 测试持续时间应不超过14天，每日记录实验动物的体重和水分摄入量，并定期检查动物的状态。

（三）数据分析① 研究数据分析应该包括生理指标评价、心理行为表现、体重变化评估等多个方面。

② 分析实验组和对照组的体重变化、摄入量等数据，并比较实验组和对照组的差异。

三、急性毒性试验的实施流程：② 准备用于实验的试验动物，并确保它们健康、无明显异常。

⑦ 分析实验组和对照组的数据，并计算出药物的LD50值。

四、结论：急性毒性试验是评估化学物质毒性的基本方法。

选择健康的、年龄相当的、性别相同的同种动物作为试验对象，并制定出详细的实验方案。

在实验过程中，需要注意观察动物情况和记录关键数据。

最后，根据实验数据计算出药物的LD50值并分析毒物的毒性程度。

研究人员应该严格把握实验过程，保证实验结果的可靠性和准确性。

急性毒性实验
取健康小鼠24只，雌雄各半，禁食24h后，生药于次日灌胃给予痛风颗粒颗粒混悬液0.78ml(16.30g／kg，相当生药量86.88g／kg)，观察小鼠活动、饮食、呼吸等情况，然后连续观察15天，纪录7天内的动物死亡数及毒性反应。

结果：灌胃后，小鼠活动减少，约1小时左右逐渐缓解，7天内24只小鼠无一只死亡及明显中毒反应。

计算过程：
常温下配的痛风颗粒最高浓度为0.417g/ml(16.30g／kg，相当生药量86.88g／kg)，颗粒密度4.73g/ml。

20g小鼠胃内容积0.78ml。

按动物表面积比率换算等效剂量换算（20g小鼠：70Kg成人=381.9:1）
按最高浓度4.73g/ml（相当生药剂量22.23g/ml）及小鼠最大灌胃容量0.78ml计算：
小鼠最大给药剂量：4.73*0.78/0.02=207.87g/kg；
按动物表面积比率换算等效剂量换算，折算70Kg成人最大给药量：207.87*0.02*387.9=1612.66g/70kg，相当生药剂量7579.5g/70Kg。

成人每日口服痛风颗粒生药剂量30g/70kg，小鼠一次口服痛风颗粒为成人每日临床常用量的253倍：7579.5/30=253倍
小鼠一次口服痛风颗粒的最大耐受量为86.88g／kg，此为成人每日临床常用量的253倍，结果表明该药口服给药临床常用量使用安全。

实验一急性毒性试验(Acute Cytotoxicity Test)一、实验目的：了解生物材料急性毒性的含义，掌握急性毒性试验的基本方法。

二、实验原理：医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的，并以半数致死量（median lethal dose, LD50）来衡量药物急性毒性的大小。

所谓LD50是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量，由于LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点，而且有易测、准确和重复性好的优点，以此作为药物使用的安全指标。

但对于生物材料而言，它与药物在体内的反应机理不同，大多数生物材料不能计算LD50，所以在试验过程中，通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在24、48和72h的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标，判定某种生物材料的急性毒性作用。

三、实验对象：小鼠四、实验器材和药品：聚甲基丙烯酸羟乙酯（PHEMA），蒸馏水，生理盐水（0.9％），注射器（1ml），量筒（10ml），小烧杯（50、100ml），高压消毒器。

五、实验步骤：1．浸提液制备：按评价标准裁剪试样，选择适当浸提温度制备浸提液。

2．将10只体重在17～23g间的健康、未做过其他实验的小鼠随机分为实验组和对照组，每组5只。

3．将浸提液按每公斤小鼠体重注射50ml于实验组小鼠尾静脉（50ml/kg），用生理盐水按同样方法作空白对照。

4．记录试样表面积和使用浸提液的容量；记录注射后24h、48h、72h两组小鼠的体重，观察其各种生物学反应情况。

六、评价方法：2．结果判断标准：2．1 在72h观察期内，注射材料浸提液的动物反应不大于对照组动物，则认为该材料符合急性毒性试验要求。

2．2在72h观察期内，注射材料浸提液动物中有2只以上出现轻度毒性症状或仅1只动物出现明显毒性症状死亡，或实验组5只动物的体重均下降，即使无其他中毒症状都要进行重复试验。

2．3 重复试验的动物数量应加倍，即每组需10只小鼠。