3.2.4共价键合法
使生物活性分子通过共价键与不溶性载体结合而固定的方法。
载体包括无机载体和有机载体。 酶与载体共价键合方式:
与载体直接反应连接
通过同源双功能试剂与载体连接 通过异源双功能试剂与载体连接后再与载体反应连接
选择那种方法,要了解酶的氨基酸残基的反应性(reactivity)、 出现频率(frequency of occurrence)和可接近性(accessibility)。
三维空间结构的作用。
在酶的共价固定中,尤其是要保护活性中心.有两种方法:1)
共价反应前用酶的底物或是底物的类似物等将活性中心保护起来。 2)利用共价反应的化学选择性和生物特异性异源双功能试剂。 酶与载体之间的共价结合方式,主要有重氮法、肽键法、烷 化法等。如图所示:
O OH
CH3
N+ N
+酶
O OH
间,然后用透析法或凝胶过滤除去未结合的戊二醛即可得到酶结
合物。
在正常情况下,蛋白质只与一个戊二醛分子的一个醛基反应, 而第二个醛基不能与同一个或其他酶反应,即不发生聚合,故可 将戊二醛先与蛋白质反应,透析除去未反应的戊二醛,再加入抗
体,这样就不会产生聚合现象,此为二部交联法。
(2-aminoethy1)ferrocene
of 0.05M KH2PO4–NaOH buffer
solution (pH 7.5) with stirring. Then, 0.15 g of modified MPS was added to 30 ml of the stock solution with stirring at 4C for 3 h. The MPS-cytc solids were collected by filtration and dried under vacuum.