ALDH基因多态性检测

乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。

二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。

三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。

当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。

ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。

除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。

通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。

四、性能指标1. 最低检出限：20ng。

2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。

2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。

五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。

ALDH2基因分型与临床应用ALDH2基因分型与临床应用引言：ALDH2（Aldehyde Dehydrogenase 2）基因是编码酶的基因，该酶主要负责醛类物质的代谢，包括乙醛的代谢。

ALDH2基因在人体中呈现多态性，根据其多态性的表现形式，可以将人群分为不同的基因型。

不同的ALDH2基因分型与临床应用相关性的研究使得我们对该基因的了解更加全面，在临床诊断和治疗中有着重要的意义。

本文将从ALDH2基因的分型与临床应用方面进行详细阐述。

1.ALDH2基因的多态性1.1 ALDH2基因的发现1.2 ALDH2基因的结构与功能1.3 ALDH2基因的遗传模式2.ALDH2基因分型的方法2.1 DNA测序分析2.2 PCR-RFLP法2.3 其他分子生物学方法3.ALDH2基因的主要分型3.1 ALDH21型（正常基因型）3.2 ALDH22型（缺陷基因型）3.3 ALDH23型（其他变异基因型）4.ALDH2基因分型与酒精代谢能力的关系4.1 酒精代谢能力的差异4.2 酒精相关疾病的发生风险4.3 酒精相关疾病的治疗和预防5.ALDH2基因分型与药物代谢的关系5.1 酮康唑（Ketoconazole）的临床应用5.2 樟脑（Camphor）的代谢过程5.3 其他药物的代谢与ALDH2基因分型的关联6.ALDH2基因分型在临床应用中的意义6.1 个体药物治疗的个性化6.2 酒精依赖症的防治6.3 其他与酒精和药物代谢相关的临床研究结语：通过对ALDH2基因分型与临床应用的综合研究，我们深入了解了ALDH2基因在人体中的作用和与相关疾病的关系。

ALDH2基因分型的检测和分析可以为临床诊断和个体化治疗提供重要依据。

未来，我们可以进一步探索ALDH2基因分型在其他领域的应用价值。

附件：本文档涉及的附件具体内容可参考所述研究论文或相关数据分析报告。

法律名词及注释：1.可选性：在合同、法律文件等文件中，指特定条款或规定不能被视为具有强制性，而仅是供各方选择使用的内容。

ALDH2基因多态性检测项目简介：ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶，是一种四联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。

目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4 四种，其中ALDH2最为重要。

在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。

ALDH2基因位于人类第12号染色体，由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1)，催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。

在亚洲的黄种人群中， ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。

临床用药医生应考虑的因素：ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现：1、ALDH2与硝酸甘油治疗：硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。

但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。

近来发现， ALDH2与硝酸甘油转化为NO密切相关。

有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。

2、ALDH2与酒精性疾病：乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。

ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。

研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。

过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖，还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)。

•综述与讲座•乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与酒精相关疾病的研究进展邱礼佳！,林贞葵！，陈慧怡！,李金花！,林梦琴!,梁少明！,刘伟"综述，郑桓！校审(1.肇庆医学高等专科学校，广东肇庆526000；2.6圳友一生物科技有限公司，广东深圳518115)摘要：酒与人类的生活密不可分，个体对酒精的敏感程度与其体内酒精代谢酶的活性有关即遗传基因有关*人体内乙醛脱氢酶2(ALDH2)的活性与人体饮酒后出现的各种不适症状之间存在关联*本文综述了乙醛脱氢酶2基因性及其相关疾病的发生机制*关键词：基因多态性；乙醛脱氢酶2(ALDH2)"疾病中图分类号:R446.1,R446.7文献标识码:A文章编号：1674-1129(2020)04-0611-04DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2020.04.002酒在中国人的宴席上有不可替代的作用,酒与人们的日常生活难解难分&适量的饮酒有助于促进人体新陈代谢，传承我国优良的酒文化&但现代人因学习压力或工作压力较大，不少人存在长期过度的酗酒或酒精依赖行，酒精有系的疾病发病率较叫等倒利用糖缺失性转铁蛋(CDT)、CDT/转铁蛋白(TRF)比助酒精性的8但人在2因性酒精的些疾病的发生。

人体饮酒，乙醇通过口腔、食道、胃肠道吸收,90%的过的吸收,过的代谢进入人体*卵的10%的乙醇则通过人体的呼吸作用、体代谢或其它方式排出身体[3]o1。

1ALDH21.1ALDH2的结构和存在部位人体内最常见的乙醛脱氢酶包括四种同工酶，即ALDH1-ALDH4,分不体上的因所编码。

ALDH2编码基因位于12号染色体(12q24.2),■有的因性叫ALDH2是一体，由基金项目:肇庆医学高等专科学校2019年度学生科技活动基金项目，编号2019XS04、2019XS05;广东省医学科研基金项目，编号A2018561作者简介:邱礼佳，男，199.年生。

硝酸甘油疗效基因检测：ALDH2基因多态性硝酸甘油是治疗心绞痛的一线药物，一般来说在舌下含服5-10分钟之内症状缓解。

但中国汉族人含服硝酸甘油无效比例高达25%以上。

这主要是由于线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）基因突变而引起，对于携带该基因有突变的个体不应该把硝酸甘油当做救命药品。

因此通过检测ALDH2的基因型，可预知硝酸甘油的疗效。

另外，饮酒脸红的人也是因为此酶活性的降低或缺失，不能将酒精充分代谢，导致乙醛在肝脏内大量累积，引起酒精中毒，并且此类人群若服用硝酸甘油的效果可能不好甚至无效。

ALDH2是体内催化硝酸甘油生物转化的主要途径，其酯酶活性可以通过将硝酸甘油脱硝形成一氧化氮扩血管。

ALDH2第12个外显子发生一个碱基替换，即G突变为A，使其编码的蛋白质第504位氨基酸残基由谷氨酸转换为赖氨酸(Glu504Lys)，导致酶活性降低或缺失，使硝酸甘油无法产生一氧化氮，难以发挥药效。

rs671G突变为A对应的基因型分别为ALDH2*1/1，ALDH2*1/2，ALDH2*2/2。

突变型酶Lys504对硝酸甘油的催化活性较野生型Glu504严重下降，ALDH2*2/2 是ALDH2*1/1活性的 6–7%，ALDH2*1/2 是ALDH2*1/1活性的 8–15%。

在亚洲人群中，30%-50%的个体都携带有ALDH2*2突变。

因此，今后医生在临床使用硝酸甘油的过程中，建议先检测病人的ALDH2基因型，减少用药无效导致的意外死亡。

图1：冠心病示意图图2：ALDH2*2服药无效率占42.4% ，ALDH2*1携带者仅仅14.9%5 温馨提示：如果您有ALDH2基因突变，硝酸甘油对您无效，您需要改服其他药物，方案如下：硝酸异山梨酯（消心痛）舌下含服，或交替使用中成药麝香保心丸、速效救心丸或复方丹滴丸舌下含化。

如为了预防心绞痛发作，还可交替选用硝酸异山梨酯缓释胶囊（长效异乐定）每次1粒（50mg），一日一次口服。

乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。

二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。

三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。

当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。

ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。

除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。

通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。

四、性能指标1. 最低检出限：20ng。

2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。

2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。

五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。

论著 基础研究高分辨熔解曲线分析技术检测A L D H２和A D H１B基因多态性∗姜树朋,童永清,赵㊀锐,李㊀艳ә(武汉大学人民医院检验科,武汉４３００６０)㊀㊀摘㊀要:目的㊀建立高分辨率熔解曲线分析体系检测乙醛脱氢酶Ｇ２(A L D H２)和乙醇脱氢酶Ｇ１B(A D H１B)基因多态性.方法㊀针对A L D H２和A D H１B基因序列设计短片段引物,在核酸扩增后,使用E v aG r e e n染料分析不同聚合酶链反应(P C R)产物,并与S a n g e r测序法相比较.结果㊀采用高分辨熔解曲线(H R M)法在同一程序下,９０m i n内即可成功检测出A L D H２r s６７１和A D H１Br s１２２９９８４各种基因型,且其结果与S a n g e r测序一致.结论㊀采用H R M法检测A L D H２和A D H１B基因多态性快速简单㊁经济有效,值得推广.关键词:高分辨熔解曲线;㊀乙醇脱氢酶Ｇ１B;㊀乙醛脱氢酶Ｇ２;㊀单核苷酸多态性D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．１３．００１中图法分类号:R７３５文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)１３Ｇ１５３７Ｇ０３文献标识码:AH i g h r e s o l u t i o nm e l t i n g a n a l y s i s f o r d e t e c t i o no fA L D H２a n dA D H１B g e n e p o l y m o r p h i s m s∗J I A N GS h u p e n g,T O N GY o n g q i n g,Z HA OR u i,L IY a nә(D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y,R e n m i nH o s p i t a l o f W u h a nU n i v e r s i t y,W u h a n,H u b e i４３００６０,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T o e s t a b l i s h t h e s y s t e mo f h i g h r e s o l u t i o nm e l t i n g f o r d e t e c t i o n o f a l d e h y d e d e h y d r oＧg e n a s e２(A L D H２)a n d a l c o h o l d e h y d r o g e n a s eＧ１B(A D H１B)g e n e p o l y m o r p h i s m s．M e t h o d s㊀T h e s h o r t p r i mＧe r sw e r e d e s i g n e d f o rA L D H２a n dA D H１B g e n e．D i f f e r e n t PC R p r o d u c t sw e r e a n a l y z e du s i n g E v aG r e e nd y e s a f t e r a m p l i f i c a t i o n,w h i c hw e r e c o n f i r m e db y S a n g e r s e q u e n c i n g．R e s u l t s㊀T h e g e n o t y p e s o fA LD H２r s６７１a n d A D H１Br s１２２９９８４w e r es u c c e s s f u l l y d e t e c t e d i nt h e s a m e p r o c e d u r eb y H R M w i t h i n９０m i n,a n d t h e r e s u l t s w e r e c o n s i s t e n tw i t hS a n g e r s e q u e n c i n g．C o n c l u s i o n㊀T h e a s s a y o fH R Mi s s i m p l e,r a p i d,c o s tＧe f f e c t i v e,a n d r eＧl i a b l e f o r t h ed e t e c t i o no fA L D H２a n dA D H１B p o l y m o r p h i s ma n d i t i sw o r t h y t ob e p o p u l a r i z e d．K e y w o r d s:h i g hＧr e s o l u t i o n m e l t i n g;㊀a l c o h o ld e h y d r o g e n a s eＧ１B;㊀a l d e h y d ed e h y d r o g e n a s e２;㊀s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m㊀㊀单核苷酸多态性(S N P)作为第三代D N A遗传标记,是指在基因组水平上由单个碱基的变异所引起的D N A序列多态性,包括单个碱基的转换或颠换和单个碱基的插入或缺失.S N P在群体中的发生频率不小于１％,占所有已知多态性的９０％以上.S N P标记可用于高危群体的发现㊁疾病相关基因的鉴定㊁药物的设计和测试等,是人类基因组计划走向应用的重要步骤.乙醇脱氢酶Ｇ１B(A D H１B)和乙醛脱氢酶Ｇ２(A L D H２)是编码酒精代谢相关酶基因中的关键基因,其主要单核苷酸多态性分别r s１２２９９８４㊁r s６７１[１],对应这变异为A D H１Bc．１５１０G＞A和A L D H２c．１４３A＞G.S N P检测方法众多,如限制性片段长度多态性Ｇ聚合酶链反应(P C RＧR F L P)㊁等位基因特异性P C R(A SＧP C R)㊁高分辨熔解曲线(H R M)分析㊁T a qＧM a n探针技术㊁S a n g e r测序等.本研究拟建立H R M 法检测A D H１B r s１２２９９８４㊁A L D H２r s６７１基因多态性.１㊀材料与方法１．１㊀材料㊀采集５８例健康人群者外周血２m L,乙二胺四乙酸二钾(E D T AＧK２)抗凝,保存于－２０ħ冰箱备用.１．２㊀仪器与试剂㊀本研究使用所用主要试剂为外周血D N A提取试剂盒(上海星耀医学公司),E v a G r e e n 试剂盒(北京天根公司);主要仪器为S m a r tL a b A s sＧi s tＧ３２核酸提取仪(上海星耀医学公司),N a n o D r o p ２０００C超微量分光光度计(美国T h e r m oF i s h e r公司),L i g h t C y c l e r４８０荧光定量P C R仪(瑞士R o c h e 公司).１．３㊀方法１．３．１㊀D N A提取㊀按照上海星耀医学公司外周血７３５１国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３∗基金项目:国家重点临床专科建设项目(财社ʌ２０１０ɔ３０５号).㊀㊀作者简介:姜树朋,男,技师,主要从事临床分子诊断技术研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:y a n l i t f１１２０＠１６３．c o m.㊀㊀本文引用格式:姜树朋,童永清,赵锐,等．高分辨熔解曲线分析技术检测A L D H２和A D H１B基因多态性[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(１３):１５３７Ｇ１５３９．D N A提取试剂盒说明书进行D N A提取,并使用N a n o D r o p２０００C超微量分光光度计测定患者样本D N A浓度和O D２６０/２８０值,确保D N A提取质量.１．３．２㊀扩增原理㊀不同D N A分子的片段长度㊁G C 含量㊁碱基分布等是不同的,任何双链D N A分子在加热变性时都会有其相对独特的熔解曲线形状和熔解温度[２].H R M技术的基本原理就是在P C R反应之前加入饱和染料,在P C R反应之后进行升温变性,随着温度的升高,D N A熔解,插入D N A双链中的染料被释放,荧光信号下降,根据熔解曲线的不同来鉴别不同标本基因型,由于较高的温度均一性(即孔间差异小于０．１ħ)和温度分辨率(即每步最小升温幅度０．０２ħ)使分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分,可有效检测单核苷酸多态性[３].１．３．３㊀引物设计㊀根据N C B IG e n B a n k收录的A LＧD H２r６７１和A D H１B r s１２２９９８４序列,采用P r i m e３．０设计短序列引物,并于在线工具P r i m e rB l a s t验证引物,由大连宝生物工程公司合成的引物,引物序列见表１.表１㊀㊀A L D H２r s６７１与A D H１Br s１２２９９８４H R M基因分型引物序列引物名称引物序列熔链温度(ħ)产物大小(b p) A L D H２r s６７１前引物５ᶄＧG G A G T T G G GC G A G T AC G GＧ３ᶄ５９．７５６２后引物５ᶄＧC A G G T CC C AC A CT C AC A G T T TＧ３ᶄ６０．１３A D H１Br s１２２９９８４前引物５ᶄＧG G G A T T A G T A G CA A A A C CC T CA A AＧ３ᶄ５８．９９１７６后引物５ᶄＧC A CC A G G T T G C CA C T A A CC A CＧ３ᶄ６１．４２１．３．４㊀检测体系㊀经条件优化本研究扩增体系确定如下:E v a G r e e n M i x１０．０μL,无核酶水７．６μL, D N A１．０μL(约３０n g),前引物和后引物均为０．７μL (１０μm o l/L).将上述体系L i g h t C y c l e r４８０荧光定量P C R仪中进行扩增,条件为９５ħ变性５m i n后进行P C R循环,P C R循环参数为９５ħ１０s,６０ħ１０s,７２ħ１０s,共４５个循环;扩增结束后进入H R M程序:９５ħ１m i n,４０ħ１m i n,６５ħ以０．０２ħ/s温度速率升至９５ħ,最后４０ħ冷却１０s.１．３．５㊀验证㊀S a n g e r测序法通常作为检测基因多态性的金标准,以本研究建立的H R M法和测序法平行检测５８例样本,比较A L D H２㊁A D H１B基因型的结果进行正确性验证.２㊀结㊀㊀果２．１㊀A L D H２和A D H１B分型结果㊀当L i g h t C y c l e r ４８０P C R仪程序运行结束后,采用L i g h t C y c l e r ４８０S c a n n i n g M o d u l e软件中的G e n e S c a n n i n g模块分析, A L D H２㊁A D H１B基因多态性分型结果的原始曲线与导数曲线见图１~４.图１㊀㊀A L D H２基因多态性分型结果的原始曲线２．２㊀A L D H２和A D H１B分型验证㊀在５８例样本中,H R M法检测出A L D H２G G型３０例,A G型２４例,A A型４例;A D H１B A A型２９例,A G型２６例,G G型３例,与D N A测序法完全符合.采用已建立H R M法重复３次测定各种型别同一浓度的模板D N A,检测结果均相同.证实本研究建立的H R M法可用于检测A L D H２㊁A D H１B基因多态性.㊀㊀注:曲线１为A L D H２杂合子A G型,曲线２为A L D H２野生纯合子G G型,曲线３为A L D H２突变纯合子A A型图２㊀㊀A L D H２基因多态性分型结果的导数曲线图３㊀㊀A D H１B基因多态性分型结果的原始曲线注:曲线１为A D H１B杂合子A G型,曲线２为A D H１B突变纯合子A A型,曲线３为A D H１B野生纯合子G G型图４㊀㊀A D H１B基因多态性分型结果的导数曲线８３５１ 国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３３㊀讨㊀㊀论㊀㊀乙醇及其代谢产物乙醛可以通过多种途径损害肝脏正常的结构与功能,引起酒精性肝炎㊁酒精性肝硬化甚至肝癌[４Ｇ５].乙醇脱氢酶(A D H)介导的氧化途径是乙醇代谢为乙醛的主要途径,在肝脏中Ⅰ型A D H活性最高,对乙醇氧化起着主要作用[６].当其βＧ亚基编码基因A D H１B发生变异,即A D H１B∗１等位基因发生c．１４３G＞A变异,形成A D H１B∗２等位基因,乙醇脱氢酶活性增高,导致乙醇代谢为乙醛的进程加快.A D H１B基因位于染色体色４q２１Ｇ２３处,第３号外显子r s１２２９９８４(c．１４３G＞A)是其最常见的遗传变异.在东亚人群中,A D H１B∗２等位基因(即A等位基因)比例特别高,在我国浙江地区A D H１B∗２等位基因频率可达９８．５％[７].乙醛脱氢酶(A L D H)是机体内源性或外源性乙醛氧化的关键酶,最常见的A L D H有４种,即A L D H１~A L D H４,其中只有A LＧD H２位于肝细胞的线粒体中,对乙醛氧化的K m值最小[８Ｇ９].A L D H２由A L D H２基因编码,当其编码基因发生变异,即A L D H２∗１等位基因发生c．１５１０G＞A 变异,形成A L D H２∗２等位基因,乙醛脱氢酶活性降低,导致乙醛代谢减慢,造成乙醛在体内堆积,从而发生亚洲人脸红综合征[９Ｇ１０].A L D H２基因位于染色体１２q２４．２处,第１２外显子r s６７１是最重要的遗传变异.在东亚人群中,A L D H２∗２等位基因(即A等位基因)可达４０％以上[８].在本研究中采用H R M法在同一程序下,９０m i n 内即可成功检测出A L D H２r s６７１和A D H１B r s１２２９９８４各种基因型,且其结果与S a n g e r测序一致.H R M能够区分D N A序列中单个碱基变化(除了第三类S N P,G/C或者A/T),采用相对廉价的饱和染料E v a G r e e n在P C R反应结束后就可以直接进行熔解曲线反应分析,全程闭管检测,与T a q M a n探针法相比节约了大量检测费用[１１],是一种经济省时高效的基因多态性检测方法.但是H R M仍有应用局限性,只有P C R产物为小片段时,H R M检测的敏感性和特异性才能达到１００％,因此对H R M引物设计要求比普通P C R相对较高.H R M检测精确性受不同D N A浓度的影响[１２],所以必须要求起始模板量一致,同时H R M分析依赖饱和染料和具有精密控温能力的仪器才能实现准确检测.当待研究D N A序列的目标S N P位点由于受到同一扩增片段中的相邻突变位点或者S N P位点的干扰时,可能会导致H R M分型的失败.因此,采用高灵敏的H R M技术检测时,必须了解待研究D N A序列的目标S N P和附近可能存在突变位点或其他S N P位点具体情况.４㊀结㊀㊀论㊀㊀本研究中采用H R M法检测A L D H２和A D H１B 基因多态性快速简单㊁经济有效,为H R M技术的临床应用及大规模筛选A L D H２和A D H１B相关疾病易感人群奠定基础.参考文献[１]L IH,B O R I N S K A Y AS,Y O S H I MU R A K,e t a l．R e f i n e d g e o g r a p h i cd i s t r i b u t i o no f t h eo r i e n t a lA L D H２∗５０４L y s(n e e４８７L y s)v a r i a n t[J]．A n n H u m G e n e,２００９,７３(３):３３５Ｇ３４５．[２]M E H R O T R A M,P A T E L K P．H i g hＧr e s o l u t i o n m e l t c u r v e a n a l y s i s i n c a n c e rm u t a t i o n s c r e e n[J]．M e t h M o l eB i o,２０１６,１３９２(１):６３Ｇ６９．[３]V O S S E N R H,A T E N E,R O O SA,e t a l．H i g hＧr e s o l u t i o n m e l t i n g a n a l y s i s(H R MA):m o r e t h a n j u s t s e q u e n c ev a r iＧa n t s c r e e n i n g[J]．H u m M u t a,２００９,３０(６):８６０Ｇ８６６．[４]S O R E N S E N TI,O R H O L M M,B E N T S E N K D,e ta l．P r o s p e c t i v e e v a l u a t i o no f a l c o h o l a b u s e a n d a l c o h o l i c l i v e r i n j u r y i n m e na s p r e d i c t o r so fd e v e l o p m e n to fc i r r h o s i s．[J]．L a n c e t,１９８４,２(８３９７):２４１Ｇ２４４．[５]C HA N GIC,HU A N GSF,C H E NPJ,e t a l．T h e h e p a t iＧt i s v i r a l s t a t u s i n p a t i e n t sw i t hh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a:a s t u d y o f３８４３p a t i e n t s f r o m T a i w a n l i v e r c a n c e rn e t w o r k [J]．M e d i c i n e,２０１６,９５(１５):３２８４．[６]G R O P P IA,B E G U E R E TJ,I R O N A．I m p r o v e d m e t h o d s f o r g e n o t y p e d e t e r m i n a t i o no f h u m a n a l c o h o l d e h y d r o g e nＧa s e(A D H)a tA D H２a n dA D H３l o c i b y u s i n gp o l y m e rＧa s ec h a i nr e a c t i o nＧd i r e c t e d m u t a g e n e s i s[J]．C l i n C h e m,１９９０,３６(１０):１７６５Ｇ１７６８．[７]Y IP,H O N GS,Q IX,e t a l．T h eA D H１BA r g４７H i s p o l yＧm o r p h i s mi ne a s tA s i a n p o p u l a t i o n s a n de x p a n s i o no f r i c e d o m e s t i c a t i o n i nh i s t o r y[J]．B M CB i o,２０１０,１０(１):１Ｇ８．[８]C R A B B D W,E D E N B E R G H J,B O S R O N W F,e ta l．G e n o t y p e s f o r a l d e h y d ed e h y d r o g e n a s ed e f i c i e n c y a n da lＧc o h o l s e n s i t i v i t y．T h e i n a c t i v eA L D H２(２)a l l e l e i sd o m iＧn a n t[J]．JC l i n I n v e s t,１９８９,８３(１):３１４Ｇ３１６．[９]P E N G GS,C H E N Y C,WA N G M F,e t a l．A L D H２∗２b u t n o tA D H１B∗２i sac a u s a t i v ev a r i a n t g e n ea l l e l e f o rA s i a na l c o h o l f l u s h i n g a f t e r a l o wＧd o s e c h a l l e n g e:c o r r e l aＧt i o no ft h e p h a r m a c o k i n e t i ca n d p h a r m a c o d y n a m i cf i n dＧi n g s[J]．P h a r m G e n o,２０１４,２４(１２):６０７Ｇ６１７．[１０]Z HA O Y,WA N G C．G l u５０４L y ss i n g l en u c l e o t i d e p o l yＧm o r p h i s mo f a l d e h y d e d e h y d r o g e n a s e２g e n e a n d t h e r i s k o f h u m a nd i s e a s e s[J]．B i o M e dR e s I n t e r,２０１５,２０(１５):１７４０５０．[１１]Z HA N GL,C U IG,L IZ,e t a l．C o m p a r i s o no fh i g hＧr e s oＧl u t i o nm e l t i n g a n a l y s i s,T a q M a nA l l e l i c d i s c r i m i n a t i o n a sＧs a y,a n ds a n g e r s e q u e n c i n g f o rC l o p i d o g r e l e f f i c a c yg e n oＧt y p i n g i nr o u t i n em o l e c u l a rd i a g n o s t i c s[J]．J M o l eD i a g,２０１３,１５(５):６００Ｇ６０６．[１２]E B I L IH,I L Y A S M．H i g hr e s o l u t i o nm e l t a n a l y s i s,D N A t e m p l a t e q u a n t i t y d i s p a r i t i e s a n d r e s u l t r e l i a b i l i t y[J]．C l i n L a b o r,２０１５,６１(１/２):１５５Ｇ１５９．(收稿日期:２０１７Ｇ１１Ｇ２５㊀修回日期:２０１８Ｇ０２Ｇ２１)９３５１国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３。

药物代谢酶和药物作用靶点基因检测项目列举1. 药物代谢酶与转运体基因多态性检测1.1 ALDH2*2多态性检测线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）同时具有乙醛脱氢酶和酯酶活性，参与乙醇、硝酸甘油等药物的代谢。

ALDH2代谢活化硝酸甘油成其活性代谢产物一氧化氮。

ALDH2*2（Glu504Lys，rs671）多态导致所编码蛋白质504位谷氨酸被赖氨酸所取代，携带突变等位基因（ALDH2*2）的个体ALDH2酶活性下降，杂合子个体酶活性仅为野生型个体的10％，突变纯合子个体酶活性缺失。

因此，携带ALDH2*2等位基因的个体酒精代谢能力下降，少量饮酒即出现脸红、心跳加速等不适；代谢硝酸甘油的能力下降，硝酸甘油抗心肌缺血的效应减弱。

亚洲人群中ALDH2*2等位基因的携带率为30~50％。

携带ALDH2*2等位基因的心绞痛患者应尽可能改用其他急救药物，避免硝酸甘油含服无效。

1.2 CYP2C9*3多态性检测CYP2C9是细胞色素P450酶（CYP）第二亚家族中的重要成员，占肝微粒体P450蛋白总量的20％。

CYP2C9参与抗凝血药、抗惊厥药、降糖药、非甾体类解热镇痛抗炎药、抗高血压药以及利尿药等多种药物的羟化代谢，其中华法林、甲苯磺丁脲和苯妥因均为治疗指数较窄的药物。

CYP2C9活性变化可导致这些药物体内浓度出现较大变化，甚至导致严重药物不良反应的发生。

CYPC2C9*2（rs1799853，C430T，Arg144Cys）和CYP2C9*3（rs1057910，A1075C，Ile359Leu）均导致CYP2C9酶活性降低，CYP2C9*3纯合子个体酶活性仅为该位点野生型纯合子基因型个体（携带CYP2C9*1或Arg144/Ile359等位基因）的4~6％。

中国人群中CYPC2C9*2的频率为0％，CYPC2C9*3的频率为3％。

CYP2C9遗传多态性导致其酶活性变化，从而导致药物代谢种族和个体差异现象。

华法林是临床上常用的抗凝药物，是深静脉血栓、心房纤颤、心脏瓣膜置换术和肺栓塞等疾病的一线用药，其临床疗效和不良反应存在很大的个体差异，血药浓度过高或敏感性增加可导致严重出血事件。