如何用PCR法检测基因的多态性

等位基因特异性PCR在ACE基因多态性检测中的应用目的：采用等位基因特异性PCR法对ACE基因多态性进行检测，并对脑血管疾病（CVD）与ACE基因多态性的相关性进行探讨。

方法：将2010年2月-2013年2月云南景颇族和傣族共73例CVD患者（CVD组）和43例健康人员（对照组）进行ACE基因多态性检测，并对结果进行分析。

结果：116例受检人员均获得扩增产物，CVD组患者73例扩增产物中，DD型14例（19.2%），II型30例，ID型29例；对照组43例扩增产物中，DD型5例（11.6%），II型19例，ID型19例，对照组中DD型基因频率低于CVD组，差异无统计学意义（P>0.05）。

结论：等位基因特异性PCR检测技术可对ACE基因多态性进行有效检测，对于CVD的防治具有重要的参考意义。

标签：等位基因特异性PCR；脑血管疾病；ACE基因多态性脑血管疾病（cerebrovascular disease，CVD）由脑血管病变所引起，主要高发于65岁以上人群，患者发病后易残留后遗症，导致劳动和生活能力丧失，也是人类死亡的重要原因之一。

CVD主要分为缺血性脑血管病和出血性脑血管病，其中以缺血性为多见。

CVD的产生由遗传因素和环境因素共同作用所引起，高血压、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病是CVD发生的首要高危因素[1]，而血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与高血压等心血管疾病的发生有关[2]。

笔者选择等位基因特异性PCR技术对云南景颇族和傣族73例CVD患者的ACE基因多态性进行检测，以期为ACE基因多态性与CVD的相关性提供临床依据，现将结果报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2010年2月-2013年2月云南景颇族和傣族46例健康人员（对照组）和73例CVD患者（CVD组），取早晨空腹静脉血10 ml，肝素抗凝后离心分离血浆，采用酚抽提法抽提患者外周血白细胞DNA模板，所有受检人员无血缘关系。

基因多态性的检测方法一、直接方法1.目标基因测序：通过对目标基因进行测序，可以直接得到其等位基因的序列信息。

目前，高通量测序技术的发展使得测序成为一种常用的基因多态性检测方法。

2.杂交技术：杂交技术可以用于检测单核苷酸多态性（SNP）和小片段插入/缺失等变异。

常用的方法包括限制性片段长度多态性（RFLP）和串联重复片段多态性（VNTR）等。

3.聚合酶链反应（PCR）：PCR可以通过扩增目标片段的方法，检测基因多态性。

例如，引物在目标序列上的配对使得PCR扩增产物的长度与目标基因的等位基因有关。

通过测定扩增产物的长度变化，可以确定基因多态性。

4.克隆测序：克隆测序是一种将目标基因克隆到载体中，并对克隆的DNA进行测序的方法。

这种技术可以用于检测较大的插入/缺失变异以及基因拷贝数变异等。

二、间接方法1.单核苷酸多态性（SNP）芯片：SNP芯片是一种高通量并行检测SNP 的技术。

它通过固定在芯片上的特异性探针与待测样品中的SNP位点进行杂交，然后使用荧光信号检测方法来确定不同等位基因的存在情况。

2.DNA芯片：DNA芯片可以广泛用于基因多态性的检测。

它可以同时测定数百甚至数千个基因，快速、准确地检测多个等位基因的存在情况。

3.高分辨率融解曲线分析：高分辨率融解曲线分析可以用来区分等位基因之间的序列差异。

该方法通过双链DNA在升温过程中解旋变性的温度差异，来分析目标序列中的等位基因。

4. 二代测序技术：二代测序技术（如Illumina和Ion Torrent）基于多组重叠的小片段测序，可以用于高通量的基因多态性检测。

它可以同时测定数百万个SNP位点，识别多个等位基因的存在情况。

综上所述，基因多态性的检测方法涵盖了直接方法和间接方法。

这些方法可以用于检测单核苷酸多态性、插入/缺失变异、基因拷贝数变异等不同类型的基因多态性。

随着技术的不断发展，基因多态性的检测方法将变得更加高效、准确和经济。

如何用PCR法检测基因的多态性PCR法（聚合酶链反应法）是一种广泛应用于分子生物学领域的基因检测技术。

它能够在短时间内扩增特定序列的DNA片段，从而实现对基因多态性的检测。

以下是使用PCR法检测基因多态性的步骤：1.设计引物首先，需要根据目标基因的序列设计引物（寡核苷酸序列）。

引物一般包括一对前、后引物，它们各自与目标序列的两侧互补配对。

引物的设计应考虑到目标基因区域的多态性，以确保引物与所有可能的变体都能配对。

2.提取DNA从目标生物体的组织样本（如血液或组织）中提取DNA。

DNA提取方法可以选择物理法或化学法，如离心法和盐析法等。

3.PCR反应将提取到的DNA作为PCR反应的模板，加入引物、四个核苷酸和聚合酶等反应物，进行PCR反应。

PCR反应由多个循环组成，每个循环包括DNA的变性、引物的结合和DNA的扩增。

4.凝胶电泳分析将PCR反应产生的扩增产物进行凝胶电泳分析。

凝胶电泳是一种将DNA分子根据大小分离的方法。

将PCR产物加载到琼脂糖凝胶槽中，然后通过电场进行电泳。

根据其大小，DNA片段将在凝胶中移动到不同的位置。

通过与大小已知的DNA分子比较，可以确定PCR产物的大小。

5.基因型分析通过比较PCR产物的大小，可以检测到基因的多态性。

在不同基因型的个体中，PCR产物的大小可能会有所不同。

可以将PCR产物分成不同的等级，以进行基因型分析。

6.数据分析最后，对PCR结果进行数据分析和解释。

根据PCR产物的大小和基因型等信息，可以确定个体的基因型。

如果一些基因型与一种特定的表型相关联，那么可以推测该基因是多态的，并且可能与该表型相关。

除了上述步骤，还可以通过引入序列特异性的限制酶切位点、单特异性引物扩增等方法，进一步确定基因多态性。

此外，PCR法还可以与其他技术如测序、SNP分析等相结合，以获得更详细的多态性信息。

总之，PCR法是一种快速、敏感且广泛应用的检测基因多态性的方法。

通过合理的引物设计、PCR反应、凝胶电泳和数据分析等步骤，可以确定基因的多态性及其与表型相关性，为遗传研究和疾病诊断等领域提供重要信息。

检测目的基因的方法现代基因检测技术逐渐成为生命科学领域重要的工具之一。

在检测目的基因时，科学家可以运用多种方法。

下面将介绍几种常见的目的基因检测方法。

1. 聚合酶链反应（PCR）PCR是一种常用的基因检测方法，通过扩增DNA片段来检测目的基因。

PCR 包括三个步骤：变性、退火和延伸。

变性过程中，高温将DNA双链分离；退火过程中，引物与目的DNA序列互补结合；延伸过程中，酶聚合物延伸引物，并复制目的DNA。

PCR可以在短时间内扩增特定DNA片段，为后续分析提供足够的样本。

PCR技术在医学、生物学和犯罪学等领域广泛应用。

2. 基因测序基因测序是确定DNA序列的方法，可用于检测目的基因是否存在突变或多态性。

测序技术包括传统的电泳测序和新兴的高通量测序。

传统电泳测序通过测量DNA链延伸过程中释放的辅助标记物（如荧光标记的二聚脱氧核苷酸）来确定序列。

高通量测序同时测定数百万个DNA片段，大大提高了测序速度和效率。

基因测序技术广泛应用于疾病诊断、遗传研究和基因组学研究。

3. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫学方法，通过检测目的基因的蛋白质水平来间接确定基因的表达情况。

ELISA主要分为直接ELISA和间接ELISA两种类型。

直接ELISA 将特异性抗体直接与目的基因相关的蛋白质结合，通过检测酶标记来定量检测目的基因的蛋白质水平。

间接ELISA则需要两个不同的抗体，一个与目的基因相关的抗体，另一个与第一个抗体结合的酶标记抗体。

通过间接ELISA，可以更加灵敏地检测目的基因的表达水平。

4. 基因芯片技术（Microarray）基因芯片是用于高通量基因检测的一种技术。

它可以同时检测数千个基因的表达水平，有助于揭示多基因与疾病发生和发展之间的关联。

基因芯片通常包括一系列具有不同基因特异性探针的微型孔洞，这些探针可以与待检测样本中的特定基因序列杂交。

然后，通过对信号的检测和分析，可以确定各个基因的表达水平。

PCR分析方法一、引言PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种广泛应用于生物学和医学领域的核酸分析技术。

PCR方法通过体外放大DNA片段，以便于后续的分析和研究。

PCR方法的引入，在遗传学、病原微生物检测、基因工程等领域都发挥了重要作用。

本文将介绍PCR方法的原理、步骤和应用。

二、PCR原理PCR方法是在体外复制DNA片段的技术，其原理基于DNA的双链不稳定性。

PCR 反应主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。

首先，将待扩增的DNA样本加热至95℃，使其两个互补链解离，得到两条单链DNA模板。

然后，将PCR反应液温度降至较低的温度（50-60℃），引入引物（PCR的序列特异性引导）。

引物结合到DNA模板链的3’末端，形成DNA-引物复合物。

最后，在适宜的温度下（50-75℃），通过热稳定的DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）的活性来合成新的DNA链。

Taq DNA聚合酶能够从引物末端向3’端延伸合成互补链。

通过反复的循环，PCR反应能够将目标DNA片段扩增为数以亿计的复制品。

这样，仅有微量的出发DNA，也能被PCR反应扩增至足够的数量，以便于后续分析。

三、PCR步骤PCR方法通常包括三个主要步骤：前处理、PCR反应和分析。

前处理步骤用于提取DNA样本并准备PCR反应所需的DNA模板。

通常使用化学或机械方法从细胞或组织中提取DNA。

提取的DNA样本经过纯化和浓缩之后，可以进入下一步的PCR反应。

2. PCR反应在PCR反应过程中，需要准备PCR反应液和合适的PCR条件。

PCR反应液需要包含DNA模板、引物、dNTPs（脱氧核苷三磷酸盐）、缓冲液和DNA聚合酶等成分。

根据不同的PCR应用，反应条件如温度、时间和循环次数等也会有所变化。

3. 分析PCR反应结束后，扩增产物可以通过多种方式进行分析。

常用的分析方法包括琼脂糖凝胶电泳、聚合酶链反应实时定量分析（qPCR）、变性高效液相色谱法（DHPLC）等。

收稿日期:2019-03-06 通讯作者:唐少华作者简介:白微(1987-),浙江温州人,本科㊂研究方向:临床检验诊断㊂ *温州市中医院文章编号:1004-4337(2019)06-0868-03 中图分类号:R 34 文献标识码:A㊃统计分析㊃P C R -荧光探针法检测MT H F RC 677T 基因多态性及其与复发性流产的相关性白 微* 唐少华(温州医科大学 温州325000)摘 要: 目的:探讨温州地区复发性流产与5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(M T H F R )C 677T 多态性的相关性㊂方法:回顾性分析2015年6月~2016年6月某院中医妇科保胎住院患者188例,根据自然流产病史分为对照组和R S A 组㊂无自然流产史及无其他不良妊娠史且生育过健孩为对照组,连续自然流产2次及以上为R S A 组,利用P C R -荧光探针法检测MT H F RC 677T 基因型,分析该方法的性能,比较R S A 组和对照组基因型㊁等位基因的分布频率,分析MT H F R677T 与R S A 的关系㊂结果:MT H F RC 677T 三种基因型及等位基因在对照组中的分布频率分别为C C (41.4%)㊁C T (46.5%)㊁T T (12.1%)和C (65.7%)㊁T (32.3%);在R S A 组中的分布频率分别为C C (37.5%)㊁C T (38.9%)㊁T T (23.6%)和C (56.9%)㊁T (43.1%),两组中的分布差异无统计学意义㊂结论:尚不能认为温州地区M T H F RC 677T 基因多态性与复发性流产具有相关性㊂关键词: 复发性流产; 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶; P C R -荧光探针法d o i :10.3969/j .i s s n .1004-4337.2019.06.035复发性流产(r e c u r r e n t s po n t a n e o u s a b o r t i o n ,R S A ),是指自然流产连续2次或2次以上,在全世界范围内其发生率为1%~2%,在中国其发生率高达5%㊂复发性流产的病因复杂,包括遗产因素㊁生殖道解剖异常㊁免疫因素㊁内分泌因素㊁感染因素等,还有部分原因不明㊂5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(m e t h y l e n e t e t r ah y d r o f o l a t e r e d u c t a ,M T H F R )是叶酸代谢中的一个重要的酶,可将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸㊂5-甲基四氢叶酸通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程,间接为D N A 甲基化和蛋白质甲基化提供甲基,并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平㊂M T H F R 的突变会引起一系列的病理变化,现已证实与神经管畸形㊁唇腭裂㊁先天性心脏病㊁妊娠期高血压等密切相关㊂国内外皆有M T H F RC 677T 与复发性流产的相关性报道,但两者的相关性存在较大的争议㊂目前M T H F R 基因多态性的检测方法主要有聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(P C R -R F L P )㊁高分辨溶解曲线突变检测(H R M )和二代测序等,P C R -荧光探针法具有灵敏度高㊁结果准确的优点,检测M T H F R 具有优越性㊂本文旨在简要评价P C R -荧光检测M T H F R 的性能,探讨温州地区复发性流产与M T H F R 的相关性㊂1 资料与方法1.1 资料来源收集2015年6月~2016年6月我院中医妇科保胎住院患者188例,排除染色体异常㊁内分泌疾病㊁解剖结构异常㊁人工受精等㊂根据自然流产病史,连续自然流产2次及以上为实验组即R S A 组,无自然流产史及无其他不良妊娠史且生育过健孩为对照组㊂R S A 组年龄(31.46ʃ4.64)岁,对照组年龄(31.33ʃ4.46)岁,两组年龄差异无统计学意义(F =0.027,P=0.869)㊂所有患者均签署知情同意书,本研究获得温州市医科大学伦理委员会批准㊂1.2 研究方法1.2.1 P C R -荧光探针法检测M T H F RC 677T 基因多态性采集E D T A 抗凝的外周静脉血2m l,提取全血的全基因D N A ,借助P C R -荧光探针技术,利用探针可与D N A 模板特异性结合的特点,通过报告荧光的不同来分辨出样本的基因型㊂试剂盒购自深圳奥萨医疗有限公司㊂1.2.2 测序法检测M T H F RC 677T 基因多态性选取20例不同基因型的样本,送第三方机构进行全基因测序㊂1.2.3 统计方法采用S P S S 22.0软件进行统计分析,两种方法一致性分析用K a p p a 检验,对基因型进行H a r d y -W e i n b e r g 平衡检验㊂计量资料用(x ʃs)表示,比较采用方差分析;计数资料用百分数表示,比较采用χ2检验㊂以P <0.05表示有统计学意义㊂2 结果2.1 P C R -荧光探针法的性能评价2.1.1 最低检测限最低检测限为200p g/u l ,有文献报道[1]最低检测限5.0n g /u l 可作为临床应用,本试剂盒最低检测限适应临床需求㊂2.1.2 准确性以测序法作为金标准,检测结果见表1㊂经K a p pa 检验,K a p pa 值=1.0,说明两种方法具有完全一致性㊂表1 两种检测方法检测结果基因型C C C T T T C C800C T 0100T T022.2 H -W 平衡检验㊃868㊃J o u r n a l o fM a t h e m a t i c a lM e d i c i n eV o l .32 N o .6 2019M T H F R有三种基因型:C C基因型㊁C T基因型㊁T T基因型㊂经过H a r d-W e i n b e r g平衡分析,对照组(χ2=0.005,P= 0.997)和R S A组(χ2=1.624,P=0.444)两组人群处于均处于H-W平衡状态,样本具有本区域群体代表性㊂2.3 M T H F RC677T基因型及等位基因频率分布三种基因型及等位基因在对照组中的分布频率分别为C C(41.4%)㊁C T(46.5%)㊁T T(12.1%)和C(65.7%)㊁T(32.3%);在R S A组中的分布频率分别为C C(37.5%)㊁C T (38.9%)㊁T T(23.6%)和C(56.9%)㊁T(43.1%)㊂两组中的分布差异无统计学意义,见表2㊂表2基因型及等位基因分布频率[n(%)]基因型等位基因C C C T T T C T 对照组48(41.4)54(46.5)14(12.1)15(65.7)82(32.3) R S A组27(37.5)28(38.9)17(23.6)82(56.9)62(43.1)χ2/P4.355/0.1132.236/0.1353讨论M T H F R是位于第一号染色体1p36.3位置㊂M T H F R 全长20.374k b,共有外显子12个,m R N A全长7,150b p㊂目前该基因中研究较为透彻的多态性位点是第五外显子677位的C/T多态㊂目前M T H F R基因多态性的检测方法主要有聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(P C R-R F L P)㊁高分辨溶解曲线突变检测(H R M)和二代测序等,P C R-荧光探针法特异性高,方法灵敏,封闭管分析可有效避免污染㊂本研究使用P C R-荧光探针法和测序法同时检测了20例样本,C C型的符合率100%,C T型的符合率100%,T T型的符合率100%,K a p p a值=1,两种方法表现出了完全的一致性,说明P C R-荧光探针法具有高准确度㊂该位点的突变引起酶活性的下降或缺失,使血浆中同型半胱氨酸浓度升高,从而导致高同型半胱氨酸血症,造成血管内皮损伤及血栓形成,而血液高凝状态是胎盘动脉栓塞形成的内在原因,同时高同型半胱氨酸对胚胎有毒性作用,可能与复发性流产有关[2]㊂国内有学者[3]对相关文献进行M e t a分析显示,基因型为C T或T T的女性发生R S A的风险较C C者分别高出93%和22%㊂王贤军等人[4]研究了杭州地区R S A 的情况,分析得出,携带T T基因型的女性发生R S A的风险是正常女性的2.344倍㊂国外学者M a n j u[5]和A h m a d[6]等人分别对北印度和伊朗R S A妇女研究发现,M T H F RC677T基因多态性在病例组和对照组中的分布无差异㊂B a u m a n n等[7]以高加索人为研究对象,认为M T H T F R C677T多态性可能是R S A的病理生理机制㊂本研究未发现M T H F RC677T基因多态性与R S A存在相关性㊂T T基因型和T等位基因在R S A组的分布频率较对照组增高,但其差异无统计学意义㊂本研究的结果与上述王贤军等人的研究结果不一致,与M a n j u和A h m a d等人的结果相一致㊂究其原因,M T H F R的分布受人种㊁地域影响,例如中国人群中T T基因型频率约为20%,而在非洲撒哈拉地区黑人种未发现有T T纯合突变[8];R S A的影响因素包括环境因素,生活习惯因素等;另外,研究的样本大小㊁研究方法的不同亦造成研究结果的差异㊂复发性流产在妊娠妇女中的发生率日益增高,虽本次研究显示其与M T H F RC677T基因多态性的相关性较小,但两者之间的相关性从其他角度,如R S A妇女再妊娠的妊娠结局㊁早产儿㊁低体重胎儿等的关系值得深入研究㊂参考文献1金速速,余坚,陈向南,等.P C R-金磁微粒层析法检测M T H F R C677T基因多态性及初步临床应用.中国卫生检验,2017,27(22): 3196~3199.2 S z t e n c S.H p e r h o m o c y s t e i n e m i aa n d P r e g n a n c y C o m p l i c a t i o n s.G i n e k o l P o l,2004,75:317~325.3刘宇岩,杨博逸,李永芳,等.5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶C677T 基因多态性与原因不明复发性流产关联的M e t a分析.中国全科医学,2013,31:2992~2997.4王贤军,罗丽,王莉,等.不明原因复发性流产与M T H F RC677T突变的关系.中华检验医学杂志,2015,38(4):243~246.5 M a n j uP u r i,L o v e j e e tK a u r,G a g a n d e e p K a u rW a l i a,e t a l.M T H F R C677TP o l y m o r p h i s m,F o l a t e,V i t a m i nB12a n d H o m o c y s t e i n ei n R e c u r r e n t P r e g n a n c y L o s s e s:A C a s eC o n t r o l S t u d y A m o n g N o r t h I n d i a n W o m e n.J o u r n a l o fP e r i n a t a lM e d i c i n e,2013,41(5):549~ 552.6 P o u r s a d e g hZ o n o u z iA,C h a p a r z a d e h N,A s g h a r iE s t i a r M,e ta l. M e t h y l e n e t e t r a h y d r o f o l a t eR e d u c t a s e C677T a n d A1298C M u t a-t i o n si n W o m e n w i t h R e c u r r e n t S p o n t a n e o u s A b o r t i o n si n t h e N o r t h w e s t o f I r a n.I S R N O b s t e t r i c s a n dG y n e c o l o g y,2012,1~6.7 B a u m a n nK,B e u t e rW i n k l e rP,H a c k e t h a lA,e t a l.M a t e r n a l f a c t o r VL e i d e na n dP r o t h r o m i n M u t a t i o nd on o tS e e m d oC o n t r i b u t e t o t h eO c c u r r e n c e o f t w oo rM o r e t h a n t w oC o n s e c u t i v eM i s c a r r i a g e s i nC a u c a s i a nP a t i e n t s.A mJR e p r o d I mm u n o l,2013,70(6):518~ 521.8S c h n e i d e r J A,R e e sD C,L i uY T,e t a l.W o r l dW i d eD i s t r i b u t i o n o f a C o mm o nM e t h y l e n e t r a h y d r o f o l a t eR e d u c t a s eM u t a t i o n.A mJH u m G e n e t,1998,65(5):1258~1260.R e l a t i o n s h i p b e t w e e n M T H F RC677TG e n eP o l y m o r p h i s ma n dR e c u r r e n t S p o n t a n e o u sA b o r t i o nD e t e c t e db y P C R-f l u o r e s c e n c eP r o b eM e t h o dB a iW e i,e t a l(W e n z h o u M e d i c a lU n i v e r s i t y,W e n z h o u325000)A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e nr e c u r r e n t s p o n t a n e o u s a b o r t i o na n d5,10-m e t h y l e n e t e t r a h y d r o f o l a t e r e d u c t a s e(MT H F R)C677T p o l y m o r p h i s mi n W e n z h o ua r e a.M e t h o d s:Ar e t r o-㊃968㊃数理医药学杂志2019年第32卷第6期收稿日期:2019-02-14通讯作者:李昌崇作者简介:韩红卫(1985-),浙江温州人,女,本科,主治医师㊂研究方向:儿童感染肝病疾病㊂ *温州医科大学附属第二医院㊁췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍育英儿童医院儿童呼吸科s p e c t i v e a n a l y s i s o f 188c a s e s h o s p i t a l i z e d i n a h o s p i t a l f r o mJ u n e 2015t o J u n e 2016w a s c o n d u c t e d .A c c o r d -i n g t o t h eh i s t o r y o fs p o n t a n e o u sa b o r t i o n ,t h e p a t i e n t sw e r ed i v i d e di n t oc o n t r o l g r o u p a n d R S A g r o u p .T h e r ew a sn oh i s t o r y o f s p o n t a n e o u s a b o r t i o na n dn oh i s t o r y o f o t h e r a d v e r s e p r e g n a n c y wi t ho n eo rm o r e c h i l d r e na s c o n t r o l g r o u p ,c o n t i n u o u s s p o n t a n e o u s a b o r t i o n 2t i m e s a n d a b o v e a s t h eR S A g r o u p.T o v a l i d a t e f l u o r e s c e n c eP C Ra s s a y a n dd e t e c t e MT H F R C 677T g e n o t y p e .T h e f r e q u e n c i e so f g e n o t y pe sa n da l l e l e s i n R S A g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p w e r e c o m p a r e d ,a n d t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e nMT H F R677Ta n dR S A w a s a n -a l y z e d .R e s u l t s :T h e d i s t r i b u t i o nf r e q u e n c y o fMT H F RC 677Tg e n o t y pe s a n d a l l e l e sw e r eC C (41.4%),C T (46.5%),T T (12.1%)a n dC (65.7%)a n dT (32.3%)i n t h e c o n t r o l g r o u p r e s p e c t i v e l y.T h e d i s t r i b u t i o n f r e q u e n c y i n t h eR S A g r o u p wa sC C (37.5%),C T (38.9%),T T (23.6%)a n dC (56.9%)a n dT (43.1%)r e s p e c t i v e l y .T h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i nd i s t r ib u t i o nb e t w e e nt h e t w o g r o u ps .C o n c l u s i o n :T h e MT H F RC 677T g e n e p o l y m o r p h i s mi nW e n z h o u c a n n o t b e c o n s i d e r e d t o b e c o r r e l a t e dw i t h r e c u r r e n t s p o n t a -n e o u s a b o r t i o n .K e y w o r d s r e c u r r e n ts p o n t a n e o u sa b o r t i o n ;5,10-m e t h y l e n e t e t r a h y d r o f o l a t er e d u c t a s e ;P C R -f l u o r e s -c e n c e p r o b em e t h o d 文章编号:1004-4337(2019)06-0870-03 中图分类号:R 725.1 文献标识码:A㊃统计分析㊃E V 71感染型手足口病患儿特征及高危因素分析韩红卫 李昌崇*(温州医科大学 温州325000)摘 要: 目的:研究分析E V 71感染型手足口病患儿特征及高危因素㊂方法:选取2010年1月~2017年12月某院儿科收治的80例E V 71感染型手足口病患儿作为研究对象,并采取同期确诊的75例普通手足口病患儿进行对照,比较E V 71感染型手足口病患儿与普通手足口病患儿的临床特征以及高危因素㊂结果:比较患儿的年龄㊁患儿首次确诊㊁患儿嗜睡萎靡㊁患儿肢体震颤以及各实验室检查结果共17项指标,差异具有统计学意义(P <0.05)㊂根据L o g i s t i c 回归分析E V 71感染型手足口病患儿特征或高危因素有:非典型皮疹㊁嗜睡萎靡㊁肢体震颤㊁影像学表现以及血压升高㊂结论:3岁及其以下E V 71感染型患儿出现非典型皮疹㊁胸片㊁血压以及血糖异常提示患儿病情出现恶化㊂关键词: E V 71感染型; 手足口病; 特征; 高危因素d o i :10.3969/j .i s s n .1004-4337.2019.06.036手足口病是肠道病毒引起的传染病之一,常发于5岁及其以下的儿童,临床表现多为口痛㊁厌食㊁低热,且手㊁足以及口腔等部位出现小疱疹,部分患儿一周左右会自愈,少数手足口病患儿会引起心肌炎等并发症[1~3]㊂故本次研究选取E V 71感染型手足口病患儿的临床资料进行回顾性研究分析,目的在于研究分析E V 71感染型手足口病患儿特征及高危因素㊂1 一般资料与方法1.1 一般资料选取2010年1月~2017年12月我院儿科收治的80例E V 71感染型手足口病患儿作为观察组,并采取同期确诊的75例普通手足口病患儿作为对照组,所有患儿均符合‘手足口病诊疗指南“[4]中对手足口病的诊断标准,且患儿的监护人知情并签署知情同意书,排除合并其他严重疾病的患儿㊂1.2 方法收集记录并分析两组患儿的临床病例,调查表格包括患儿年龄㊁性别㊁城乡分布㊁初步诊断㊁皮疹性质㊁发热情况㊁神志以及中枢神经系统表现㊁影像学检查等临床症状㊂1.3 统计学方法所有数据资料均采用S P S S 20.0软件对数据进行统计分析,计数资料采用例数(%)的方式表示,计数资料组间比较采用χ2检验;对E V 71感染型手足口病患儿的高危因素选用L o -gi s t i c 回归模型前进法进行比较分析㊂以P <0.05表示差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 比较两组患儿高危因素本次调查研究中,比较患儿的年龄㊁患儿首次确诊㊁患儿嗜睡萎靡㊁患儿肢体震颤㊁患儿伴随呕吐㊁患儿眼球活动异常㊁㊃078㊃J o u r n a l o fM a t h e m a t i c a lM e d i c i n eV o l .32 N o .6 2019。