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金黄色葡萄球菌的检验ppt课件

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金黄色葡萄球菌检验PPT

金黄色葡萄球菌检验PPT
总结词
食品中金黄色葡萄球菌的检测是常见的检验案例，旨在确保食品安全和预防食物中毒事 件。
详细描述
食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用增菌、分离培养、生化鉴定和血清学试验等步骤。 通过对食品样品进行选择性增菌，提高目标菌的浓度，然后进行分离培养，获得单菌落。
对分离到的菌落进行生化鉴定和血清学试验，以确定是否为金黄色葡萄球菌。
03
金黄色葡萄球菌检验流程
样本采集
采集部位
采集疑似感染的金黄色葡萄球菌 的样本，如皮肤、伤口、血液等。
采集方法
使用无菌棉签或注射器采集样本， 避免交叉污染。
采集量
采集足够量的样本，以满足实验需 求。
样本处理
增菌培养
将采集的样本接种在选择性培养基上， 进行增菌培养，以促进金黄色葡萄球 菌的生长。
仪器自动化检测法
总结词
仪器自动化检测法利用自动化仪器对样品进行快速、高效的检测，提高检测通量 和准确性。
详细描述
仪器自动化检测法包括全自动微生物鉴定仪、全自动免疫分析仪等。这些仪器能 够快速处理大量样品，提供准确的结果。同时，仪器自动化也减少了人为误差和 操作时间，提高了检测效率。但仪器成本较高，需要定期维护和校准。
特性
金黄色葡萄球菌具有高度的耐盐 性和耐高低温性，可在不同环境 下生存和繁殖，对多种抗生素具 有一定的耐药性。
常见感染途径
01
02
03
食品污染
金黄色葡萄球菌常常污染 食品，如肉类、乳制品、 蛋类等，通过摄入被污染 的食物导致感染。
皮肤接触
金黄色葡萄球菌也可通过 破损的皮肤或黏膜侵入人 体，引起皮肤感染和伤口 感染。
分离纯化
革兰染色
对分离纯化的菌落进行革兰染色，初 步判断是否为金黄色葡萄球菌。

第三节 金黄色葡萄球菌检验ppt课件

第三节 金黄色葡萄球菌检验ppt课件

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，
临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、 伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
葡萄球菌皮肤感染
致病性
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发 不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍， 腹痛、腹泻次之。
生物学特性—菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为 0.8-1.0 微米，镜检时呈 单个、成对、四联或不规则的簇群，如葡萄。
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到 浅黄色，色素的产生取决于生长的条件。
生物学特性—菌体形态及培养特征 大多数菌株最适温度30-37℃，最适pH为7.0-7.5； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。 一般用含10%氯化钠的大豆肉汤增菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
结果报告
检测步骤—增菌
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的氯化钠）， 用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌。
检测步骤—分离 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上 产生明显的溶血环。 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起， 圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。
检测步骤—分离 BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和 痕量矿物元素。 丙酮酸钠是一种生长促进剂。 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒 性，并使菌落产生黑色。 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环。 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作 用。
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属 （Staphylococcus），可引起多种严重感染。有“嗜肉 菌"的别称。

金黄色葡萄球菌的检验PPT课件

金黄色葡萄球菌的检验PPT课件

金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素 和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α 、β 、γ 、δ ，能损伤血小板， 破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品 种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此 外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起 的中毒事件也有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2010 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%， 加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此 类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：
√存放温度，在37℃内，温度越高，产 毒时间越短；
√存放地点，通风不良氧分压低易形成 肠毒素；
√食物种类，含蛋白质丰富，水分多， 同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。
• 7月2日，大阪府公共卫生研究所证实，从患 者饮用剩余的雪印牛奶中检查出了金黄色葡 萄球菌，这种葡萄球菌导致A型肠毒素滋生， 该毒素可造成饮用者腹泻、呕吐及全身不适。
• 牛奶被污染原因何在？

金黄色葡萄球菌检测ppt

金黄色葡萄球菌检测ppt
• 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤 中生长。
• 3、生化特性：
• 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲 基红反应阳性，VP反应弱阳性。
• 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化 明胶。
• 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感 性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
四金黄色葡萄球菌的流行病学
• 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人 和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌， 其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康 人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染 的机会很多。
• 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引 起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
二金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
• 对分型进行简单的了解 • １、血清学分型： • 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 • 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 • 多糖抗原有特异性。 • 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶
阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 • ２、噬菌体分型： • ３、根据肠毒素分型： • ４、根据血浆凝固酶分型：
•
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：
• 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、 蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引 起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
• 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：
• 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染； 食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生 了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受 到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其 他部位的污染。

项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件

项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件

阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、零 散凝固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
项目四 金黄色葡萄球菌检验 革兰氏染色
一、革兰氏染色步骤 涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
细菌涂片
乙醇(或丙酮) 脱色
草酸铵结晶紫初 染
卢哥氏碘液媒 染
番红复染 番红复染
菌体呈红色者为G
－
菌体仍呈深紫色者 为G+
二、革兰氏染色原理 G＋菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障 ，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留 结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结 构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
77阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应少量少量零散凝零散凝明显的明显的块状凝块状凝巨大巨大完全凝固完全凝固倒置不流倒置不流动动88项目四项目四金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验革兰氏染色革兰氏染色1010一革兰氏染色步骤一革兰氏染色步骤涂片涂片1111热固定热固定121213131414脱色脱色1515复染复染1616革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性1717菌体呈红色者菌体呈红色者为为gg番红复番红复番红复番红复菌体仍呈深紫菌体仍呈深紫乙醇乙醇或丙酮酮脱色脱色细菌涂细菌涂片片草酸铵结晶草酸铵结晶1818二革兰氏染色原理二革兰氏染色原理gg菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留结晶紫结晶紫碘复合物在细胞膜上

《金黄色葡萄球菌》课件

《金黄色葡萄球菌》课件

研究前景
开发新型抗生素和抗菌药物， 以应对耐药性金黄色葡萄球菌 的挑战。
加强金黄色葡萄球菌疫苗的研 发，通过免疫手段预防感染。
深入研究金黄色葡萄球菌的毒 力机制和传播途径，为防控措 施提供科学依据。
研究挑战与展望
当前金黄色葡萄球菌耐药性问题 严重，亟需加强抗生素耐药性的
监测和研究。
需要进一步探索金黄色葡萄球菌 的毒力基因和调控机制，为开发
新的治疗手段提供基础。
加强国际合作与交流，共同应对 金黄色葡萄球菌的全球威胁。
2023-2026
END
THANKS
感谢观看
KEEP VIEW
REPORTING
变异
总结词
金黄色葡萄球菌具有变异性，可产生多 种毒素和酶。
VS
详细描述
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶，如 肠毒素、表皮脱落素、毒性休克综合征毒 素-1等，这些物质可引起食物中毒、烫伤 样皮肤综合征、毒性休克综合征等多种疾 病。此外，金黄色葡萄球菌还具有一定的 耐药性，可产生多种耐药机制，如产生β内酰胺酶等。
品和表面。
合理饮食
均衡饮食，增强免疫力 ，减少感染风险。
避免接触感染源
避免接触有金黄色葡萄 球菌感染症状的人或动 物，以及其接触过的物
品。
治疗原则
01
02
03
04
早期治疗
一旦发现感染症状，应立即就 医并接受治疗。
针对性治疗
根据感染的具体病菌类型和症 状，选择合适的抗菌药物进行
治疗。
综合治疗
除了药物治疗外，还需注意改 善生活方式和饮食习惯，以提
利用自动化仪器和软件，对金黄色葡 萄球菌的耐药性进行快速、准确的检 测。
稀释法

微生物检测技术金黄色葡萄球菌检测(共35张PPT)

微生物检测技术金黄色葡萄球菌检测(共35张PPT)
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起 的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
++++金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由
金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也 非常多。
4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
❖ 丙酮酸钠
10.0 g
❖ 甘氨酸
12.0 g
❖ 氯化锂 ❖ 琼脂
5.0 g
20.0 g
❖ 蒸馏水
950 mL
❖ 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL
检测步骤---分离
❖ BP平板：
❖ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元 素
❖ 丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂
❖ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌
检验前准备工作
采集与送检 预处理
菌落总数
大肠菌群
致病菌
前增菌
分离培养
纯化 多项鉴定及检测实验
分析、报告
食品微生物检验的一般程序
检测步骤---增菌
❖ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤
蛋白胨
牛肉膏 氯化钠
蒸馏水ห้องสมุดไป่ตู้
10.0 g
5.0 g 75 g
1 000 mL
型症状为呕吐和腹泻。 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
2．以下属于金黄色葡萄球菌的特点有——————

金黄色葡萄球菌GBppt课件

金黄色葡萄球菌GBppt课件
三． 每个梯度吸取1mL,以0.3，0.3,0.4mL分别 接种3个BP平板；
四． 涂布，完全吸收样液后，倒置培养；
五 一．．注选意点取：3个平板菌落数合计20-200cfu的梯度 二．1，平用板于涂，布计平板数必典须型干燥菌；落数 六 三边．．缘2，挑浆涂去 凝布是固5个，酶涂典布实型棒验不菌。要落接（触平不板够5个全挑）做血
六．A2----第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落总数
七．B1----第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数
八．B2----第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性菌落总数
一． 金黄色葡萄球菌：属于微球菌 科，葡萄球菌属的；有“金葡 菌”等别称
二． 金葡菌是化脓性感染的常见致 病菌，能导致肺炎，心包炎， 毛囊炎，败血症，烫伤样皮肤 症等
三． 传播途径：水、食物等
四． 超级细菌：耐甲氧西林金葡（
3
金黄色葡萄球菌生物特征
一． 形态特征：革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列 。
或凝固 体积大不良于原体积的一半。
四． 的，可能导致假阴性；
五．3，不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落，
11
高盐
GB 4789.10-2010
一．第一法：定性检测
一．第二法：平板计数法
一．第三法：MPN计数 法
12
法一 ． 平 板 计 数
13
平பைடு நூலகம்计数法——平板接种
一． 步骤：
二． 10倍系列梯度稀释，并选取2-3个适宜梯 度；
9
定性检测——平板划线分离
一．菌落形态：白色或者金黄色菌 落，周围有透明溶血环（β-溶血） 。 二．主要成分：蛋白胨，牛肉粉， 脱纤维羊血
一．注意点： 二．一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌； 三．二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。

金黄色葡萄球菌检验方法ppt课件

金黄色葡萄球菌检验方法ppt课件
健康的小白鼠5522方法方法待检样品待检样品25g225ml25g225ml灭菌生理盐水灭菌生理盐水直接计数法直接计数法增菌培养方法增菌培养方法bairdbairdparkerparker琼脂平板琼脂平板75nacl75nacl肉汤培养基肉汤培养基血平板血平板血平板血平板涂片染色镜涂片染色镜溶血观察溶血观察动物接种试验动物接种试验血浆凝固试验血浆凝固试验报告报告6611样品的采集样品的采集称取25g25g火腿肠切碎搅匀用灭菌研钵研磨置于火腿肠切碎搅匀用灭菌研钵研磨置于250ml250ml锥形瓶中加入锥形瓶中加入225ml225ml灭菌生理盐水制成灭菌生理盐水制成11
.
6
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。 4、生化实验
①触酶试验 在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧 化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气 泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验 吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h 的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒 温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。 将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以 已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
.
1
简介
金黄色葡萄球菌，也称“金葡菌”，细胞壁含90%的肽聚糖 和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密， 染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴 性菌的细胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以紫 色复合物被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球 菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金 黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现 了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代 表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结 构造成的。

金黄色葡萄球菌的检测方法的ppt课件

金黄色葡萄球菌的检测方法的ppt课件

-
12
免疫学方法包括下面两个部分 （1）抗原抗体技术
（2）免疫学方法技术
-
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（1）抗原抗体技术分析：
抗原抗体技术是免疫技术中的核心部 分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免 疫筛选抗体是很困难的事情，现在目 前市场有的大多都是对金黄色葡萄球 菌毒素类进行免疫得到的抗体
-
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（2）免疫学方法技术分析：
上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层 析技术。
酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多 个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。
（酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法）
-15-源自16三 分子生物学方法
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶
金黄色葡萄球菌的检测方法
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1
简介
一·生物学特性 （1）典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径 0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄 色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革 兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高， 在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧， 最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板 上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
-
2
-
3
（2）血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有 高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、 麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反 应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐， 液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药 物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
1212金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗在免疫检测中可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特在免疫检测中可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原异抗原也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体两也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体两种方法均能判断机体的感染状况

金黄色葡萄球菌的检验(共27张PPT)

金黄色葡萄球菌的检验(共27张PPT)

金黄色葡萄球菌的定性检验
检样
增菌〔7.5％氯化钠肉汤或 10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤〕
BP平板，血平板
涂片染色
观察溶血
报告
BHI肉汤和营养琼脂 血浆凝固酶实验
金黄色葡萄球菌的检验
1、样品制备
按无菌操作取检样25 g〔mL〕， 参加225 mL灭菌生理盐水，固体样 品研磨或置均质器中制成1:10样品
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和 乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数 量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。
人摄食该菌污染的食物2～3h后 可引起中毒病症，它引起的食
物中毒病症是呕吐和腹泻。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养
要求不高，在普通培养基 上生长良好，加少量葡萄
糖或血液生长更旺盛。需 氧或兼性厌氧，最适生长 温度37℃，最适生长pH 7.4
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、 蔗糖，产酸不产气。甲基红反响阳 性，VP反响弱阳性。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类 多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭 、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也 有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2021 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
细胞；
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时， 该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体外 表或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄

项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件

项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件

磷壁酸 +
外膜
-
脂蛋白 -
脂多糖 -
革兰阴 性菌
11%22% + + +
.
19
1、G+细菌的细胞壁。厚而致密，由肽聚糖和磷壁酸组成，以金 黄色葡萄球菌为代表。
2、 G-细菌的细胞壁。分两层，外层为脂蛋白和脂多糖层，内 层为肽聚糖层，以大肠杆菌为、染色的基本原理 主要是通过细胞及细胞物质对燃料的毛细现象、渗 透、吸附等物理因素，以及各种化学反应进行的。
血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平 板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI和营 养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。吸取1： 4兔血浆0.5ml放入灭菌试管中，再加入培养后的的 BHI肉汤0.5ml，振荡均匀，放在36℃±1 ℃水浴锅， 每半小时观察一次，至少观察6小时。
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6
阴性反应
阳性反应
不凝 固
少量、 零散凝 固
明显的 块状凝 固
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巨大 块凝 固
完全凝固， 倒置不流 动
7
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8
项目四 金黄色葡萄球菌检验 革兰氏染色
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9
一、革兰氏染色步骤 涂片
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10
热固定
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11
初染
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12
媒染
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13
脱色
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14
复染
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15
革兰氏染色阴性
.
革兰氏染色阳性
16
细菌涂 片
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广东科贸职业学院
13
• 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食 品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜 等处均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金 黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症 ，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒 素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食 品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险
10
1、目的要求
• 了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒 素的检测方法
• 观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在 血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征
• 观察金黄色葡萄球菌产生血浆凝固酶现象
广东科贸职业学院
11
2、基本原理
• 金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。
• 在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色； 由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈
实验六 金黄色葡萄球菌的 检验
Contents
生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群；
2 无芽孢，不运动
3 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好
4 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
广东科贸职业学院
2
广东科贸职业学院
3
广东科贸职业学院
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直接计数法
• 形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状 ，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5－－1um。
• 培养特征：在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时 液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色， 有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。在B--P平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2 －3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带， 在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬 度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
• 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌
株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，
在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球
菌的重要指标。
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• 肠毒素形成条件：
• 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短； • 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； • 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉
的食物，肠毒素易生成。
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实验材料
• 仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试 管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、 接种环等
• 培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、 7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker培养 基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染色液
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• 7、好氧生长的细胞产生接触酶；
• 8、产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶 ，大多数菌株可水解天然的动物蛋白，例如血红 蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多肽类如明胶， 水解脂类、吐温类和磷脂蛋白质，并释放脂肪酸
• 9、所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的菌株 通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
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致病性
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的 疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心 、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食 品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适 宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。
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电镜照片
• 5、大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适温度 30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最适pH为 7.0-7.5）；
• 6、大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出 深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件 ，而且在单个菌株中可能也有变化
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色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死；
b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 ；
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c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该 酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或 凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成 的感染易局部化与此酶有关
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B—P平板
主要成分及作用： 氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长 丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长 亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄
球菌还原为碲盐呈黑色 卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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检
验
取2 5ml 样品，接种于225ml 7.5％氯化钠肉汤培养基内 ，置36℃±1℃培养24h
d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核 糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄 色葡萄球菌
e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃
肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种
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致病性
金黄色葡萄球菌是人类 化脓感染中最常见的病原 菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎 、心包炎等，甚至败血症 、脓毒症等全身感染。
• 在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使 菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带
，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。
金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
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• 在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放 于培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作 用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂 激活后，变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使 血浆中的液态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因 而成凝固状态
程
序
转种血平板和B-P 平板，置36℃±1℃培养24h ，挑取血平板上金 黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验：吸取1：4 新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养 24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温 箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒 置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。