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46特写Feature 对话猪支原体肺炎，作为一种慢性呼吸道疾病，因导致生长速度减缓，出肉率降低，蚕食猪场利润，受到诸多一线人员和研究者的关注。
猪支原体肺炎疫苗的研究历史悠久，早在20世纪50年代，江苏省农科院的老一批研究专家就分离出来猪肺炎支原体强毒，并经过体内外致弱试验后，分离出了具有免疫原性的弱毒株。
然而，很多养猪人对支原体肺炎的免疫并不十分重视。
本刊记者对话江苏省农科院副研究员冯志新，探讨猪支原体肺炎在致病机理、疫苗研发和检测标准等方面存在的问题及解决方案。
《今日养猪业》：目前猪支原体肺炎在众多猪病中处于何种地位？冯志新：全球猪肺炎支原体的感染率达到70%～90%。
该病在我国众多猪病中虽然不是龙头地位，但从经济效益来看危害很大。
据不完全统计，每年猪呼吸道疾病引起的直接损失达到100亿元以上，而猪支原体肺炎又是猪呼吸道疾病的原发性病原，它的主要发病机制是通过破坏呼吸道上皮细胞的纤毛，导致病原菌长驱直入，可以随意侵入呼吸道，引起呼吸道疾病。
因此，支原体肺炎作为慢性消耗性疾病引起的经济损失也是不容小觑的。
《今日养猪业》：本病从20世纪出现至今已有近80年的时间，但感染率却越来越高，这是为什么？ 国内外防治该病都有哪些措施？冯志新：这跟本病的特性有关系，首先，支原体病原的分离就很困难，造成目前可用的疫苗毒株比较少；第二，该病长期在猪群中处于隐性感染状态，可引起宿主的免疫抑制，猪群的环境一旦改变出现应激等，此病便很快显现。
目前在国内外控制本病的方法有抗生素治疗和疫苗免疫。
需要注意的是，由于支原体猪支原体肺炎的主要免疫机制是黏膜免疫，只有药物或者疫苗在呼吸道达到一定浓度才能起到保护作用。
支原体肺炎弱毒疫苗相对于灭活疫苗，肺部局部免疫力更好。
冯志新：猪支原体肺炎弱毒疫苗的局部免疫效果更好文 | 柏丽华PIGS TODAYAugust 2016病原定植于呼吸道纤毛上，并不会进入血液，而药物代谢能真正到呼吸道表面的有效浓度很低。
几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青【摘要】To achieve the intramuscular injection of the attenuated live vaccine against Mycoplasma hyopneumoniae .different adjuvants were applied to enhance the immunogenicity of the vaccine. Cellular and humoral immune response was detected after the immunization. The results showed that ISCOM-matrix.as well as the mixture of levamisole and chitosan,effectively increased the proliferation of PBMC and the level of serum IgG antibody. The mixture of levamisole and astragalus polysaccharide only enhanced the cellular immune response while the antibody level showed no change. No obvious enhancement was detected in saponin adjuvant group, These data would help the subsequent researches of the intramuscular inoculating method of this live vaccine.%为增强现有猪支原体肺炎活疫苗的免疫刺激能力以实现肌肉注射免疫,向现有活疫苗中添加几种不同佐剂,考察其经肌肉免疫后机体的免疫应答情况.结果表明,免疫刺激复合物基质佐剂和左旋咪唑+壳聚糖混合佐剂能有效激发细胞免疫应答和体液免疫应答；左旋咪唑+黄芪多糖混合佐剂能增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫无作用；皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果.本试验结果为肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗的开发奠定了数据基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)010【总页数】6页(P163-168)【关键词】佐剂;活疫苗;猪支原体肺炎【作者】熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;山西农业大学研究生学院,山西太谷030801;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S851.3猪支原体肺炎（猪气喘病）在世界范围内广泛流行，是造成现代养猪业经济损失的重要疾病之一（Barbara等，2008；Sibila等，2009；Maes等，2008）；其主要症状是咳嗽和气喘，病变特征主要为肺脏的心叶、尖叶、膈叶产生对称性的“肉样”实变。
312023年40卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学主题策划F E A T U R E猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原，由于感染后临床症状不明显，多以慢性消耗性感染为主，猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。
但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞，导致其他呼吸道病原体频繁入侵，是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）的重要诱因。
因此，猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。
1 猪肺炎支原体的感染率猪肺炎支原体只感染猪只，该病原随着养猪业的发展分布于全球各地。
如果没有特意净化，几乎全世界所有的国家和猪场都有发现，并且有超过70%以上的猪群感染。
从美国国家猪病报告系统（SDRS ）2020—2022年的统计数据来看，猪场猪肺炎支原体整体阳性率在10%～30%左右，母猪场和育肥场阳性率差异不大。
阳性率随季节变化而波动，每年的9—12月是肺炎支原体阳性率较高的季节，如图1所示。
对于母猪来说，感染率随着胎次的增加而下降，头胎次占73%，2～4产次为42%，6～7产次为50%，而8～11产次为6% 。
因此，猪场的保育猪、育肥猪和后备种猪是防控猪支原体肺炎的关键群体。
2 猪肺炎支原体疫苗是否需要免疫关于猪肺炎支原体疫苗是否需猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价张择扬 1，张 军 2（法国诗华动物保健公司，北京 100102）图1 不同日龄阶段猪群肺炎支原体阳性率变化曲线（SDRS 2020—2022）图2 不同感染压力的猪场免疫建议（D. Maes ）要免疫，一直是个有争议的话题。
赞同的观点认为猪肺炎支原体危害巨大，是其他呼吸道病原的“共犯”，要坚决堵死防疫漏洞，必须免疫。
而反对的观点则认为自己的猪场支原体的感染压力看上去不大，也不知道如何评估；另一方面认为就算投资进行猪肺炎支原体免疫，也不知道怎么去看免疫效果。
对于猪场支原体是否免疫，全球著名支原体专家Dominiek Maes 给出了他的答案，他认为这取决于猪群的感染压力。
猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价摘要试验采用已经分离得到的猪肺炎支原体，经扩大繁殖后制成油乳剂灭活疫苗，并采用ELISA抗体检测方法进行疫苗免疫学效果评价。
结果表明：自制疫苗2次采血抗体合格率100%（滴度达1∶16以上）；进口疫苗2次采血抗体合格率为100%；而国产疫苗在抗体滴度和维持时间上比较进口疫苗和自家苗差，第2次采血抗体合格率仅为20%。
自制疫苗的免疫接种效果明显优于国产疫苗，与进口疫苗相当。
AbstractUsing obtained pig mycoplasma，after the expand breeding oil emulsion inactivated vaccine was made，and performance evaluation for immunological vaccine was made by ELISA antibody detection method. Results showed that two blood antibody homemade vaccine were 100%（or above）of 1 drop degrees，Import vaccine twice for 100% qualified blood antibody，And homebred vaccine in antibody and maintain time compared with their seedlings imports of vaccine，second only to blood antibody rate was 20%.Homemade vaccine immunization vaccination was obviously superior to domestic and imported vaccine.Key wordsmycoplasmal pneumonia of swine；vaccine；preparation；immunological effect；evaluation猪支原体肺炎（Mycoplasmalpn eumoniaeof swine，MPS）又称猪地方流行性肺炎（Swineen zooticpneumoniae，SEP），我国常称之为猪喘气病或猪气喘病，是由猪肺炎支原（Myco-plasma hyopneumoniae.Mhp）引起的一种以接触性、高传染性、高发病率和低死亡率特点的慢性呼道传染病[1]。
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
猪支原体肺炎活疫苗佐剂体内外促进细胞免疫刺激能力的研究熊祺琰;董璐;冯志新;刘茂军;邵国青【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2012(028)006【摘要】为增强猪支原体肺炎活疫苗在肌肉注射免疫时的细胞免疫刺激能力,对7种猪支原体肺炎活疫苗可用佐剂的细胞免疫应答促进作用进行了体外及体内试验评价.7种佐剂中除皂角素外,其余6种对活疫苗活力皆无明显影响.用这6种佐剂体外刺激淋巴细胞,发现左旋咪唑、免疫刺激复合物基质、黄芪多糖和胞壁酰二肽可以在体外单独刺激或协同刀豆蛋白刺激小鼠脾淋巴细胞及猪外周血淋巴细胞增殖,其中免疫刺激复合物基质仅需ng/ml级别浓度即可起效,而壳聚糖和卡波姆不能在体外刺激细胞增殖.选用其中5种佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫小鼠,发现左旋咪唑、免疫刺激复合物基质、黄芪多糖、卡波姆可以显著增加机体针对猪肺炎支原体抗原的细胞免疫应答.结果表明,利用适当佐剂可以实现猪支原体肺炎活疫苗在肌肉注射条件下对机体细胞免疫应答的有效刺激.【总页数】7页(P1354-1360)【作者】熊祺琰;董璐;冯志新;刘茂军;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S852.62【相关文献】1.免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价 [J], 熊祺琰;王占伟;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青2.草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究：疫苗的稳定性及佐剂和加强... [J], 杨先乐;左文功3.几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 [J], 熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青4.猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 [J], 韦艳娜;熊祺琰;董璐;冯志新;邵国青5.猪支原体肺炎灭活疫苗佐剂筛选研究 [J], 朱巧艳;胡东波;翟路峰;张国良;孙哲;李兴国;廖永洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为探寻一种更加合理高效的猪支原体肺炎（MPS ）免疫方式，本研究使用MPS 弱毒疫苗进行基础免疫后14 d 再使用灭活疫苗进行加强免疫，通过人工感染猪肺炎支原体来评价其免疫效果。
同时将这种免疫程序在规模化猪场进行应用，通过计算一定时期内的日增重来评价其免疫效果。
结果显示：联合免疫在保证黏膜免疫效果的同时并未降低体液免疫水平；更为重要的是，联合免疫不但具备较高攻毒保护率，而且在攻毒后剖杀时其肺泡灌洗液中抗原含量远低于其他免疫方式。
以上结果表明，联合免疫可以产生较好的免疫协同作用，从而提高了机体的综合免疫保护能力。
田间试验结果发现：联合免疫组猪群从21日龄至80日龄平均增重27.31 kg ，比活疫苗免疫组猪群多增重3.02 kg ，比灭活疫苗免疫组猪群多增重3.73 kg ；其平均日增重可达0.46 kg/d 。
本研究为防治猪支原体肺炎提供了新的思路。
关键词：猪支原体肺炎活疫苗和灭活疫苗；初免-加强免疫策略；攻毒保护；日增重中图分类号：S858.28文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）04-0089-07Evaluation of the Combined Vaccination Strategy of Attenuated and InactivatedVaccines against Mycoplasma hyopneumoniae Infection收稿日期：2021-03-01基金项目：江苏省农业科技自主创新资金项目（CX(20)1006）作者简介：郝飞，男，博士，助理研究员，主要从事动物支原体感染与黏膜免疫防控技术研究；白昀，男，硕士，副研究员，主要从事动物支原体感染与黏膜免疫防控技术研究通信作者：冯志新，E-mail:***************猪支原体肺炎活疫苗与灭活疫苗联合免疫效果评价郝 飞1,2，白 昀1,2，袁 厅1,2，张 磊1,2，刘蓓蓓1,2，谢 星1,2，韦艳娜1,2，甘 源1,2，熊祺琰1,2，邵国青1,2，冯志新1,2（1. 江苏省农业科学院兽医研究所 农业农村部兽用生物制品工程重点实验室，南京210014；2. 兽用生物制品（泰州）国泰技术创新中心，泰州 225300）2023,31(4):89-95Abstract: In order to explore a more reasonable and effi cient immunoprotection method for Mycoplasmal pneumonia of swine (MPS), a combined vaccination strategy was developed in the present study. Piglets were primed with the attenuated Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp) vaccine and then boosted with the inactivated vaccine 14 days later. The vaccinated piglets were challenged with the virulent strain to evaluate the effi cacy of this combined vaccination method. At the same time, this immunization procedure was applied on the large-scale pig farms, and the effi cacy was evaluated by comparing the daily weight gain of piglets at different stages. The experiment result shows that the combined vaccination with the attenuated vaccine and inactivated vaccine did not reduce the humoral immunity level while ensuring the mucosal immunity effect. More importantly, the combined vaccination not only provided better protection but also reduced the Mhp antigen level in bronchoalveolar lavage fluid. These results indicated that the combination of Mhp attenuated vaccine with inactivated vaccine had good immune synergism and enhanced host immunoprotection. The fi eld experiment showed that the averageHAO Fei 1,2, BAI Yun 1,2, YUAN Ting 1,2, ZHANG Lei 1,2, LIU Beibei 1,2, XIE Xing 1,2, WEI Yanna 1,2,GAN Yuan 1,2, XIONG Qiyan 1,2, SHAO Guoqing 1,2, FENG Zhixin 1,2(1. Key Laboratory for Veterinary Bio-Product Engineering, Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. GuoTai (Taizhou) Center of Technology Innovation for VeterinaryBiologicals, Taizhou 225300, China)· 90 ·中国动物传染病学报2023年8月猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia of swine, MPS）又称猪气喘病或猪喘气病，是一种由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp）感染引起的以咳嗽、气喘、腹式呼吸和生长速度缓慢为主要特征的慢性呼吸道传染病。
猪接种肺炎支原体疫苗对血液γ-干扰素和生产性能的影响邓衔柏，剡海阔，叶建根，李玉谷(华南农业大学兽医学院广州中国510642)摘要：为了探讨猪肺炎支原体疫苗对猪自然感染肺炎支原体的免疫保护力，并比较其对肺脏病变及生产性能的影响，本试验选择在中国华南地区某一长期存在猪支原体肺炎的猪场进行。
试验设A、B、C三组，每组各100头猪，其中A组21日龄肌注A疫苗1头份;B组7日龄和21日龄分别肌注B疫苗1头份;C组为对照组，不进行免疫。
试验过程中分别在初生、4周龄、10周龄、16周龄和23周龄时采血，测定血清中γ-干扰素的含量，并对各组各阶段生产性能进行统计；23周龄屠宰时取肺脏进行肺炎病变计分，并取病变部位和纵隔淋巴结进行组织学检查。
结果显示，免疫组血清γ-干扰素均比对照组高，差异极显著(P≤0.01)，而免疫组中A组比B组高，差异显著(0.01≤P≤0.05)。
各组肺炎计分结果表明，A组显著低于B组(P≤0.01)，B组显著低于C组(P≤0.01)。
各组生产性能统计结果显示，免疫组各阶段日增重比对照组高，饲料转化率低，死亡率低，治疗药物成本也显著降低(P≤0.01)。
其中A组比B组的日增重高(0.01≤P≤0.05)，饲料转化率高(0.01≤P≤0.05)，治疗药物成本也有所降低(0.01≤P≤0.05)。
关键词:免疫接种，γ-干扰素，生产性能，猪由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）引起的肺炎严重影响着中国的大多数猪群，也是一个全球性的问题。
支原体肺炎以发病率高而死亡率低为特征，通常表现为一种慢性病。
有报道认为，与感染母猪接触的猪生长率降低15.9％，饲料转化率降低13.8％，估计每头猪的损失大约是2.8美元。
支原体病原的致病过程很复杂，包括病原吸附定殖、细胞毒性、竞争物质、逃避和调节宿主免疫反应【1】。
免疫接种可以同时诱导细胞免疫应答和体液免疫应答。
研究表明，包括牛和小鼠在内的不同动物体内产生的局部黏膜抗体能够提供一定程度的抗支原体肺炎的保护力。
几种佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用比较董璐;熊祺琰;刘茂军;韦艳娜;冯志新;白方方;王海燕;邵国青【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2014(036)001【摘要】为研发和评价猪支原体肺炎(MPS)灭活疫苗新型佐剂,本研究以水包油乳剂或水性高分子聚合物卡波姆佐剂为基础的MPS灭活疫苗,在其中分别添加左旋咪唑、黄芪多糖、免疫刺激复合物基质(ISCOM-matirx)或胸腺肽,得到不同的佐剂配方,同时选用3种商品化佐剂进行同步试验评价.将这些佐剂与MPS灭活疫苗合用免疫小鼠,检测淋巴细胞增殖情况及血清抗体培G水平,用以比较几种佐剂对该疫苗中的免疫增强效果.结果表明,与对照组相比,各佐剂组均有明显免疫应答反应.其中,卡波姆+ISCOM+matrix佐剂组对增强小鼠淋巴细胞增殖能力及血清中抗体水平为各组间最高,其次为卡波姆+左旋咪唑佐剂组;GEL 01 ST佐剂能够增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫作用稍差,卡波姆+胸腺肽佐剂组的血清抗体水平较高,但对淋巴细胞增殖没有明显作用.本实验结果将为后续的MPS灭活疫苗的研发提供了实验依据.【总页数】4页(P67-70)【作者】董璐;熊祺琰;刘茂军;韦艳娜;冯志新;白方方;王海燕;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.几种鸡新城疫油佐剂灭活疫苗免疫效果的比较 [J], 梁华丽;华炯钢;徐辉;顾亚仙;何永强2.不同水性及水包油型佐剂对猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫增强作用 [J], 解海东;熊祺琰;刘茂军;韦艳娜;王佳;宁官保;邵国青3.增免灵对鸭腺病毒蜂胶复合佐剂灭活疫苗的免疫增强作用 [J], 翟少钦;王天益;程安春4.几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 [J], 熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青5.几种免疫佐剂对产蛋鸡免疫增强作用的比较试验 [J], 艾武;黄兵;李峰;王莉莉;宋敏训;牟建青;王春玲;张秀美因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
佐剂对接种肺炎支原体疫苗的猪的体液和细胞免疫应答的影响
Ｂ Ｓｉｋｌóｄｉ
前言
机体介导的体液免疫和细胞免疫均能产生对猪肺炎支
原体的保护，但后者更为重要。
因此，除了诱导抗体产生意
外，能有效的诱导细胞免疫的疫苗是产生保护的关键。
不同
的佐剂可以诱导免疫系统产生Ｔｈ１（细胞介导的）或Ｔｈ ２（抗
体介导的）免疫应答，分别可以通过检测细胞介导的免疫应
答和抗体进行监测。
在此，我们通过实验运用猪肺炎支原体
疫苗接种仔猪后细胞免疫和体液免疫的测定结果证实，优化
佐剂是非常重要的。
这些疫苗分别运用未优化和优化的佐
剂。
优化在佐剂已经在商品化疫苗Ｈｙｏｇｅｎ（Ｒ）中使用。
周远成。
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较 (1)猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较 (1)目录 (2)猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较 (3)1 目的 (3)2 材料与方法 (3)2.1 材料 (3)2.2方法 (4)2.2.1动物分组说明 (4)2.2.2动物分组与试验操作概表 (5)2.2.3免疫 (6)2.2.4 疫苗免疫后临床症状观察记录 (7)2.2.5 疫苗免疫后血清抗体及分型检测 (7)2.2.6 疫苗免疫后细胞免疫指标检测 (7)2.2.7 疫苗免疫后黏膜免疫指标检测 (7)2.2.8攻毒 (7)附录1 攻毒保护率计算 (9)附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准 (10)附录3 动物分组记录表 (11)附录4 动物免疫记录表 (12)附录5免疫后异常临床症状观察记录表 (13)附录6 抗体检测记录表 (13)附录7 淋巴细胞增殖试验结果 (16)附录8 血象分析 (17)附录9 T淋巴细胞分类计数 (18)附录10 黏膜抗体检测记录表 (19)附录11攻毒记录单 (20)附录12特殊情况记录表 (21)附录13 攻毒后临床症状观察记录表 (22)附录14日增重记录 (24)附录15 攻毒后肺部剖检记录 (26)附录16攻毒后剖检记录 (28)附录17 攻毒后肺部病理损伤记录 (30)附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测 (32)猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
猪支原体肺炎活疫苗(168株)肺内免疫机制研究冯志新;刘茂军;熊祺琰;华利忠;王海燕;甘源;韦艳娜;苏国东;邵国青【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2012(046)008【摘要】为研究猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫机制,通过肺内接种免疫5 ～10日龄仔猪,并于免疫后不同时间点检测血清中IgG抗体效价、全血中淋巴细胞转化效率、呼吸道局部的IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度,于免疫后28 d剖杀采集呼吸道上皮组织,通过扫描电镜法与原位杂交检测法观察疫苗株在呼吸道的存留以及对纤毛的影响情况.结果发现,免疫后猪血液中淋巴细胞转化增强1.52～2.01倍,支气管表面IFN-γ浓度和特异性SIgA滴度持续增加,但血清抗体一直未检测到.扫描电镜与原位杂交检测结果发现疫苗株能有效地黏附在支气管纤毛上皮细胞上,但对纤毛的影响较小.由此表明,猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过肺内免疫可有效激活全身细胞免疫及呼吸道局部的黏膜免疫与细胞免疫反应,而且还可以通过黏附支气管纤毛上皮细胞产生占位效应而对上皮组织不产生损伤.【总页数】5页(P4-7,19)【作者】冯志新;刘茂军;熊祺琰;华利忠;王海燕;甘源;韦艳娜;苏国东;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;南京天邦生物科技有限公司,南京211102;江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014【正文语种】中文【中图分类】S859.797【相关文献】1.免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价 [J], 熊祺琰;王占伟;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青2.猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）的最小免疫剂量测定及活菌滴度与免疫保护率平行关系试验 [J], 沈青春;吴思杰;范学政;张广川;高和义;宁宜宝3.猪支原体肺炎弱毒活疫苗与灭活疫苗联合免疫的免疫效果评估 [J], 彭涛;马梓承;王宏宇;孟凡亮;刘照虎;肖一红;刘思当4.不同猪支原体肺炎灭活疫苗免疫效果评价及比较 [J], 肖婷;韦明宇;何颖;陈忠伟;蒋家霞;卢冰霞;覃国喜;韩定角;郭旋;段群棚;赵武5.猪支原体肺炎活疫苗（168株）肺内免疫机制研究 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪牙皂皂苷抗肝癌作用机制的研究及其微球制剂的制备目的:本课题通过国内外文献调研和药理实验研究发现我国传统中药猪牙皂具有明显的抗肿瘤作用,其主要活性成分是三萜皂苷类化合物<sup>[1-6]</sup>。
在前期研究的基础上,本课题拟采用中药化学分离、纯化和药理实验相结合的活性跟踪法制备猪牙皂皂苷,通过药理实验探讨猪牙皂皂苷（SFGS）是否具有抗肿瘤作用以及是否具有对索拉非尼的化疗增敏作用,并阐明其可能的药理作用机制。
由于猪牙皂皂苷气味辛辣,对人体黏膜有一定刺激性,为方便猪牙皂皂苷的临床应用,本课题考虑以壳聚糖为载体材料制备猪牙皂纳米微球,并进行表征测定和药效学评价。
方法:试验一猪牙皂皂苷类化合物的分离纯化及抗肝癌活性研究1.进行猪牙皂总皂苷提取方法的研究,考察各单因素（提取方法和提取溶剂）对猪牙皂总皂苷提取率的影响。
2.称取50 g猪牙皂,制备总浸膏,用大孔吸附树脂法分离纯化,通过皂苷的检识反应和体外抗肝癌药理实验,进行活性部位的筛选。
3.称取29 kg猪牙皂,按照优化后的提取工艺制备猪牙皂总浸膏,并用大孔吸附树脂法分离纯化。
根据预实验结果,选取药理活性最好的洗脱部位,用硅胶柱层析法分离纯化（洗脱剂为二氯甲烷-甲醇溶剂体系）,并对各洗脱部位进行体外抗肝癌活性筛选。
4.选取药理活性最好的硅胶柱洗脱部位,用MCI柱层析法分离纯化（洗脱剂为乙醇-水溶剂体系）,并对各洗脱部位进行体外抗肝癌活性筛选。
5.选取药理活性最好的MCI柱洗脱部位,进行质谱分析,对里面的成分进行结构鉴定,然后用紫外分光光度法测定皂苷含量。
试验二猪牙皂皂苷与索拉非尼联用抗肝癌药理作用机制的研究1.通过体外抗肝癌药理实验验证猪牙皂皂苷与索拉非尼联用是否具有协同增效作用。
用免疫印迹法（Western Blot,WB）法检测在不同给药情况下,肝癌细胞中凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、cleaved caspase-9）的表达水平。
天然表面活性剂皂树皂苷的性质及应用
周秀琴
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】1989(000)006
【总页数】2页(P28-29)
【作者】周秀琴
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】TS202
【相关文献】
1.天然表面活性剂皂树皂苷的性质及应用 [J], 周秀琴
2.一种日化用天然表面活性剂—无患子皂苷的提取分离工艺探讨 [J], 李建;孙永;张凯;龚盛昭;胡新成
3.皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价 [J], ZHANG Zhen-zhen;WEI Yan-na;WANG Jia;YU Yan-fei;FENG Zhi-xin;SHAO Guo-qing;XIONG Qi-yan
4.天然皂皮皂苷稳定高载量南极磷虾油粉的制备及其特性研究 [J], 李金玉;陈小威;杨晓泉
5.基于天然皂皮皂苷界面自组装包埋制备粉末鱼油及其特性研究 [J], 陈小威;尹文俊;李金玉;杨晓泉;马传国
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合欢皮皂苷对猪瘟活疫苗的佐剂作用的开题报告一、研究背景猪瘟是一种极具传染性的病毒性疾病，其病原体猪瘟病毒属于黄病毒科，能够引起猪的高热、出血、呼吸道症状等症状，极易造成养殖业的严重损失。
因此，为了控制猪瘟的发生和传播，广泛使用猪瘟活疫苗进行预防接种。
然而，传统猪瘟活疫苗在出现了许多弊端，比如免疫效果不甚理想、免疫剂量大、效价低、夹杂弱毒株等。
为了提高猪瘟活疫苗的免疫效果，需要寻找新的佐剂，合欢皮皂苷就是一个很好的选择。
二、研究目的本研究旨在探究合欢皮皂苷对猪瘟活疫苗的佐剂作用，以期提高疫苗的免疫效果和保护作用。
三、研究内容和方法（一）研究内容1. 合理选择猪瘟活疫苗和佐剂。
2. 分别制备不同质量浓度的疫苗和佐剂，对疫苗的抗体水平进行检测。
3. 通过小鼠免疫反应，比较猪瘟活疫苗和佐剂对小鼠产生的免疫效果，尤其是抗体反应和细胞免疫反应。
4. 通过实验室检测，查看疫苗和佐剂对小鼠的安全性和毒副反应。
5. 分别对疫苗和佐剂进行临床试验，检测其在猪身上的免疫效果和保护作用。
（二）研究方法1. 选择猪瘟活疫苗和佐剂，并进行改良和优化，制备出不同质量浓度的疫苗和佐剂。
2. 对制备的疫苗进行控制性实验，以比较佐剂和疫苗的不同浓度对猪的免疫效果，确定最佳佐剂和浓度。
3. 对小鼠进行免疫实验，对比不同组的抗体反应、细胞免疫反应等指标。
4. 进行实验室检测，对比疫苗和佐剂对小鼠的毒副反应和安全性。
5. 临床试验，以猪为试验对象，检测疫苗和佐剂在其身上的免疫效果和保护作用。
四、研究意义1. 研究将有助于提高猪瘟活疫苗的免疫效果和保护作用，减少养殖业的损失。
2. 进一步推动疫苗和佐剂的改良和优化，推动养殖业的健康发展。
3. 对于未来开发其他动物疫苗和佐剂具有参考价值和启示作用。
五、研究进度计划本研究计划分为五个阶段：1. 阶段一：文献调研和实验设计。
（一个月）2. 阶段二：疫苗和佐剂的制备。
（两个月）3. 阶段三：对制备好的疫苗和佐剂进行控制实验。
皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价ZHANG Zhen-zhen;WEI Yan-na;WANG Jia;YU Yan-fei;FENG Zhi-xin;SHAO Guo-qing;XIONG Qi-yan【摘要】为提高猪支原体肺炎活疫苗的滴鼻免疫效果,以猪支原体肺炎(168株)活疫苗为抗原,以QS21为免疫佐剂混合后滴鼻免疫小鼠,ELISA法检测免疫效果,包括血清和支气管肺泡灌洗液中抗原特异性抗体水平,并测定了Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的分泌情况.结果表明,QS21能激活黏膜和全身性的体液免疫,升高血清和支气管肺泡灌洗液中IgG,IgG1、IgG2a抗体含量,并能提高支气管肺泡灌洗液中黏膜免疫抗体sIgA的含量.QS21还能显著增加支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ和IL-17的分泌,激活Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答.以上结果表明QS21能有效激活免疫系统,提示QS21可作为猪肺炎支原体活疫苗的候选黏膜佐剂.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2018(052)012【总页数】6页(P24-29)【关键词】QS21;佐剂;滴鼻;猪支原体肺炎活疫苗【作者】ZHANG Zhen-zhen;WEI Yan-na;WANG Jia;YU Yan-fei;FENG Zhi-xin;SHAO Guo-qing;XIONG Qi-yan【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪支原体肺炎，又称作猪气喘病是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)感染引起的一种慢性呼吸道传染病，具有高传染性和高致病性，同时由于感染后造成生产性能降低，给养猪业带来巨大的损失[1]。
目前，国内外主要通过疫苗免疫来防控猪支原体肺炎[2-3]。
猪支原体肺炎(168株)活疫苗临床上通过肺内免疫具有很好的免疫保护效果。
为了进一步拓展猪支原体肺炎(168株)活疫苗的临床应用，目前主要围绕猪支原体肺炎(168株)活疫苗新的免疫途径进行开发。
前期利用猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫试验猪，具有一定的免疫保护效果，但其免疫效果仍低于肺内免疫组[4]。
因此需要配合佐剂提高猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫效果。
现代中药化学研究表明中药包含的皂苷[5]、多糖[6]等成分具有良好的免疫调节作用，可以被开发成免疫佐剂。
QS21是南美皂树(Quillaja Saponaria Molina)树皮中分离纯化到的活性皂苷成分，其主要化学成分为酰化三萜糖甙，分子量为1990 Da[7]。
以QS21作为主要成分的疫苗佐剂如AS01、AS04已批准应用于人用疫苗，能显著增强疫苗的保护效率[8]。
为了有效提高猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫效果，研究拟利用QS21佐剂联合猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫小鼠，探讨其免疫效果。
1 材料与方法1.1 主要试剂猪支原体肺炎(168株)活疫苗，批号20170518，由农业部兽用生物制品工程技术重点实验室制备提供；QS21(商品名：VSP)购自赛德奥生物科技(北京)有限公司；小鼠IL-4 ELISA 检测试剂盒、小鼠IL-17 ELISA检测试剂盒、小鼠IFN-γ EL ISA 检测试剂盒购自武汉基因美生物科技有限公司。
小鼠IgG抗体购自武汉博士德生物公司。
小鼠IgA、IgG1、IgG2a抗体购自BETHYL公司。
1.2 动物分组及免疫 BALB/c雌性小鼠，购自扬州大学医学比较中心。
随机分成3组，分别为QS21+疫苗组、疫苗组和对照组。
QS21+疫苗组滴鼻免疫QS21(6.25 μg/只)和猪支原体肺炎(168株)活疫苗(107CCU/只)；疫苗组滴鼻免疫猪支原体肺炎(168株)活疫苗(107CCU/只)；对照组仅滴鼻同体积的PBS溶液。
首免14 d后加强免疫1次，免疫剂量与首免一致。
1.3 抗体检测在末次免疫后第14天(D14)、第21天(D21)、第28天(D28)和第42天(D42)分别对小鼠进行眼框采血，每组8只，1000 g离心15 min，分离血清，检测小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。
D28和D42分别取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)，每组5只，300 g离心10 min，收集上清，检测其中IgA、IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。
1.4 细胞因子检测 D28和D42天收集小鼠血清和BALF，离心后收集上清。
根据ELISA 试剂盒说明检测血清和BALF 中IL-4、IL-17和IFN-γ的含量。
1.5 数据分析数据采用Graphpad软件进行统计学分析，结果以均数±标准差表示，组间比较采用双侧t检验(two-tailed unpaired t test)分析，P<0.05表示有显著性差异。
2 结果与分析2.1 QS21联合疫苗免疫对小鼠血清中IgG抗体及亚型的影响 QS21与猪支原体肺炎(168株)活疫苗共同滴鼻免疫小鼠，不同时间点眼眶取血并分离血清，利用ELISA法检测小鼠血清中猪支原体肺炎(168株)活疫苗特异性IgG抗体水平。
结果显示(图1)，对照组不能诱导产生活疫苗特异性IgG抗体；末次免疫14 d后，疫苗组能产生较高的活疫苗特异性IgG抗体，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)；QS21+疫苗组能够显著提高血清中活疫苗特异性IgG抗体水平(P<0.05)。
同时，检测了QS21对抗体亚型IgG1和IgG2a的影响，结果显示，末次免疫28 d后，QS21能进一步提高活疫苗诱导的IgG1和IgG2a抗体水平，提示QS21能激活全身性体液免疫。
*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图1 ELISA检测小鼠免疫后血清抗体水平Fig 1 ELISA detection of antibodies in mice serum post immunization2.2 QS21联合疫苗免疫对小鼠BALF中IgG及亚型和sIgA抗体的影响进一步检测QS21与猪支原体肺炎(168株)活疫苗共同滴鼻免疫小鼠后BALF中IgG抗体及亚型的变化，结果显示，与疫苗组相比，末次免疫28 d后，QS21+疫苗组能够显著提高血清中活疫苗特异性IgG和IgG1的抗体水平(图2)。
sIgA是黏膜免疫中重要的抗体类型，单独疫苗组仅在D42检测到sIgA抗体的升高；而与疫苗组相比，QS21+疫苗组能显著增强sIgA抗体水平(P<0.05)，表明QS21与疫苗共同滴鼻能显著性增强小鼠的黏膜免疫反应。
以上结果表明QS21诱导局部体液免疫。
2.3 QS21联合疫苗免疫对小鼠血清和BALF中细胞因子的影响 IFN-γ是Th1型细胞因子的典型代表，IL-4是Th2型细胞因子的典型代表，IL-17是Th17型细胞因子的典型代表。
通过ELISA法检测了小鼠血清和BALF中IFN-γ、IL-4、IL-17的水平。
结果显示，疫苗组的血清中IFN-γ、IL-4和IL-17含量显著高于对照组(P<0.01，P<0.05)，而QS21+疫苗组能进一步提升血清中IL-17的含量(P<0.05)，但对IFN-γ和IL-4的含量无显著影响(图3)。
*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)。
The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图2 ELISA检测小鼠免疫后BALF抗体水平Fig 2 ELISA detection of antibodies in mice BALF post immunization*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)。
The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图3 ELISA检测小鼠免疫后血清IFN-γ、IL-4和IL-17水平Fig 3 ELISA detection of IFN-γ、IL-4 and IL-17 levels in mice serum post immunization在BALF中(图4)，与对照组相比，疫苗组未能升高IFN-γ、IL-4和IL-17含量(P>0.05)，而加入QS21佐剂之后，BALF中IFN-γ、IL-4和IL-17的含量极显著升高(P<0.01)。
以上结果表明QS21可以诱导细胞免疫应答。
**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，##表示与疫苗组存在极显著差异(P<0.01)。
The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled ## was very significant compared with control group (P<0.01).图4 ELISA检测小鼠免疫后BALF中 IFN-γ、IL-4和IL-17水平Fig 4 ELISA detection of IFN-γ、IL-4 and IL-17 levels in mice BALF post immunization3 讨论与结论初始CD4+ T淋巴细胞在机体抗菌和抗病毒免疫调节过程中发挥重要作用，其分化方向及各类型细胞比例能够影响机体的抗菌和抗病毒效应。
