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三种常见猪肺炎支原体疫苗的免疫效果对比试验胡晓;韦学凤【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2023(50)2【摘要】为筛选出适合内江猪保种场的最佳猪肺炎支原体疫苗,本试验选用市场上常见的三种商品化疫苗进行免疫效果对比。
将60头刚出生的健康哺乳仔猪随机分成三组,于7日龄接种疫苗,A组接种A疫苗,B组接种B疫苗,C组接种C疫苗,试验猪分别于7、30、60日龄采血并分离血清,进行ELISA抗体检测。
结果显示:7日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率均为0;30日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为80%、20%、90%;60日龄时,A、B、C三组的抗体阳性率分别为90%、20%、100%。
从ELISA抗体检测结果来看,以C组免疫效果最好。
本试验同时对仔猪的体重、料肉比、呼吸道病发病率等指标进行了观察统计,结果得出:60日龄时,A、B、C三个试验组的平均体重为11.325、13.546、11.632kg;料肉比分别为2.28、1.95、2.03;呼吸道发病率分别为4.35%、2.21%、3.39%,从料肉比及呼吸道发病率来看,以B组效果最好。
【总页数】3页(P26-27)【作者】胡晓;韦学凤【作者单位】四川省内江市畜牧业发展中心;西南大学动物科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.52【相关文献】1.三种奶牛口蹄疫疫苗免疫效果对比试验2.猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验3.猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价4.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估5.猪瘟活疫苗、猪圆环病毒2型基因工程疫苗和猪肺炎支原体灭活疫苗三种疫苗联合免疫效果的评估因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
312023年40卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学主题策划F E A T U R E猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原，由于感染后临床症状不明显，多以慢性消耗性感染为主，猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。
但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞，导致其他呼吸道病原体频繁入侵，是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）的重要诱因。
因此，猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。
1 猪肺炎支原体的感染率猪肺炎支原体只感染猪只，该病原随着养猪业的发展分布于全球各地。
如果没有特意净化，几乎全世界所有的国家和猪场都有发现，并且有超过70%以上的猪群感染。
从美国国家猪病报告系统（SDRS ）2020—2022年的统计数据来看，猪场猪肺炎支原体整体阳性率在10%～30%左右，母猪场和育肥场阳性率差异不大。
阳性率随季节变化而波动，每年的9—12月是肺炎支原体阳性率较高的季节，如图1所示。
对于母猪来说，感染率随着胎次的增加而下降，头胎次占73%，2～4产次为42%，6～7产次为50%，而8～11产次为6% 。
因此，猪场的保育猪、育肥猪和后备种猪是防控猪支原体肺炎的关键群体。
2 猪肺炎支原体疫苗是否需要免疫关于猪肺炎支原体疫苗是否需猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价张择扬 1，张 军 2（法国诗华动物保健公司，北京 100102）图1 不同日龄阶段猪群肺炎支原体阳性率变化曲线（SDRS 2020—2022）图2 不同感染压力的猪场免疫建议（D. Maes ）要免疫，一直是个有争议的话题。
赞同的观点认为猪肺炎支原体危害巨大，是其他呼吸道病原的“共犯”，要坚决堵死防疫漏洞，必须免疫。
而反对的观点则认为自己的猪场支原体的感染压力看上去不大，也不知道如何评估；另一方面认为就算投资进行猪肺炎支原体免疫，也不知道怎么去看免疫效果。
对于猪场支原体是否免疫，全球著名支原体专家Dominiek Maes 给出了他的答案，他认为这取决于猪群的感染压力。
猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价摘要试验采用已经分离得到的猪肺炎支原体，经扩大繁殖后制成油乳剂灭活疫苗，并采用ELISA抗体检测方法进行疫苗免疫学效果评价。
结果表明：自制疫苗2次采血抗体合格率100%（滴度达1∶16以上）；进口疫苗2次采血抗体合格率为100%；而国产疫苗在抗体滴度和维持时间上比较进口疫苗和自家苗差，第2次采血抗体合格率仅为20%。
自制疫苗的免疫接种效果明显优于国产疫苗，与进口疫苗相当。
AbstractUsing obtained pig mycoplasma，after the expand breeding oil emulsion inactivated vaccine was made，and performance evaluation for immunological vaccine was made by ELISA antibody detection method. Results showed that two blood antibody homemade vaccine were 100%（or above）of 1 drop degrees，Import vaccine twice for 100% qualified blood antibody，And homebred vaccine in antibody and maintain time compared with their seedlings imports of vaccine，second only to blood antibody rate was 20%.Homemade vaccine immunization vaccination was obviously superior to domestic and imported vaccine.Key wordsmycoplasmal pneumonia of swine；vaccine；preparation；immunological effect；evaluation猪支原体肺炎（Mycoplasmalpn eumoniaeof swine，MPS）又称猪地方流行性肺炎（Swineen zooticpneumoniae，SEP），我国常称之为猪喘气病或猪气喘病，是由猪肺炎支原（Myco-plasma hyopneumoniae.Mhp）引起的一种以接触性、高传染性、高发病率和低死亡率特点的慢性呼道传染病[1]。
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
仔猪支原体肺炎是由支原体引起的仔猪肺炎,常见的支原体形态为球状、干状、丝状和环状。
由于仔猪肺炎支原体对于外界的抵抗力一般不强,在室内温度较低的条件下就有可能失去活性,在低温的条件下,虽然可以保存很长的一段时间,但是一般都可以通过使用的药物迅速将其杀死。
支原体能够抑制肺泡巨噬细胞的吞噬作用，抑制嗜中粒细胞的功能，造成机体的免疫功能下降。
据研究发现支原体也可以增加蓝耳病病毒的毒力，增加猪体内圆环病毒量，且会延长圆环和蓝耳病毒的存活时间，从而影响到疫苗的免疫效果。
1、临床症状仔猪支原体肺炎病以咳嗽和喘气为主要临床病症，急性病症表现为体温上升，食欲不振，呼吸加快，咳嗽喘气，严重的呼吸有喘鸣声、拉风箱声。
2、病理剖检主要病变在肺部，肺部呈肉变或胰变的病理变化。
如果细菌继发感染时，可以看到胸膜炎、肺炎等炎症性病变，严重的时候会出现胸膜粘连、肺坏死。
3、疫苗防控措施疫苗选择支原体疫苗分为直接灭活支原体疫苗和活疫苗注射两类,其中灭活疫苗主要有J株、P-5722-3株、BQ14株三种毒株；其中活疫苗主要有RM48株、Z株以及168株，3个毒株，灭活支原体疫苗肌肉注射疫苗可以直接产生体液进行免疫,使用方便，但是临床研究反映一次体液免疫注射效果不理想,活疫苗肌肉注射可以直接产生细胞占位及体液免疫,免疫的效果甚好,其中Z株、168株疫苗需要通过胸腔或者肺内进行注射,需要一定的疫苗注射技术,而其中RM48株肌肉注射可以通过喷鼻进行免疫,也可以通过胸腔或者肺内进行注射,使用较为方便。
关于支原疫苗的抗体检测效果的评估,支原体疫苗肌肉注射免疫后暂无简易快速评估的抗体检测办法,支原体疫苗感染比较高,抗体的检测不能区分出是支原体疫苗还是野生病毒产生的抗体,并且各种疫苗抗体检测的数值成活率高低与其免疫的效果相关性不大,如此,抗体的检测效果没有太大的意义,临床主要评估方法是通过成活率和料比、仔猪已经出栏的时间、肺部病变性评分等因素来进行评估。
支原体肺炎的疫苗接种策略与免疫效果支原体肺炎，又称肺炎支原体感染，是由肺炎支原体引起的呼吸道传染病。
这种疾病在全球范围内都有一定的发病率，尤其在儿童中较为常见。
为了减少支原体肺炎的发病率和减轻其对人体的危害，疫苗接种成为了重要的防控措施之一。
本文将介绍支原体肺炎的疫苗接种策略以及免疫效果。
一、支原体肺炎疫苗的种类目前，支原体肺炎疫苗主要包括灭活疫苗和亚单位疫苗两类。
1. 灭活疫苗灭活疫苗是通过将肺炎支原体培养后用灭活剂处理而制成的疫苗。
这种疫苗不具备活性，但仍能引起免疫系统产生抗体反应，从而提供免疫保护。
灭活疫苗的接种途径一般为肌肉注射。
2. 亚单位疫苗亚单位疫苗是通过从肺炎支原体中提取和纯化特定的抗原而制成的疫苗。
相比于灭活疫苗，亚单位疫苗更加纯净和安全。
接种亚单位疫苗一般采用皮下注射的方式。
二、支原体肺炎疫苗接种策略支原体肺炎疫苗接种策略的制定主要依据具体的人群特点和疫情流行程度。
以下是常见的接种策略：1. 儿童疫苗接种策略对于儿童，支原体肺炎疫苗通常在出生后2-3个月开始接种，接种剂次约为3-4次。
对于早产儿和低出生体重儿，接种剂次可能会增加。
在接种间隔期内，通常为每隔4-8周进行一次接种。
此外，儿童在接种支原体肺炎疫苗之前，应进行免疫系统相关的检查，以确保其身体状况符合接种要求。
2. 成人疫苗接种策略对于成人，支原体肺炎疫苗的接种策略一般分为两种情况。
第一种是对于未曾接种过支原体肺炎疫苗的成人，可按照快速免疫策略进行接种，即在第一剂疫苗接种后的2-4周内进行第二剂接种，从而快速建立免疫保护；第二种是对于已接种过支原体肺炎疫苗的成人，可根据免疫保护期限进行补种，一般在1-5年内进行加强免疫接种。
三、支原体肺炎疫苗的免疫效果支原体肺炎疫苗接种后，免疫系统会产生特异性的抗体，从而对肺炎支原体的感染起到阻断作用。
研究表明，接种支原体肺炎疫苗后可以显著降低支原体肺炎的发病率和死亡率。
此外，疫苗对于预防支原体肺炎所引发的并发症，如支气管炎、中耳炎等，也具有一定的保护作用。
猪肺炎支原体疫苗的一针or两针免疫、皮内or肌肉接种佚名
【期刊名称】《今日养猪业》
【年(卷),期】2012(000)001
【摘要】新闻回顾：近日，默克动物保健公司宣布其所研发的“猪肺炎支原体疫苗”已获得欧盟的上市许可证明。
这是首个皮内接种、一针免疫对抗猪肺炎支原体的疫苗。
据报道，新疫苗与目前的猪肺炎支原体疫苗的区别在于：新疫苗只需一针免疫，并配套有无针头皮内注射装置（IDAL）；新疫苗批准允许皮内注射使用，而目前已上市的疫苗均是肌肉注射接种。
【总页数】3页(P3-5)
【正文语种】中文
【中图分类】S858.286.3
【相关文献】
1.鼻内或肌肉接种流感灭活疫苗的免疫应答 [J], 余黎;周旭
2.新兵接种乙型肝炎疫苗快速免疫程序和两针免疫程序的效果比较 [J], 袁跃彬;朱结根;段新科;王仲倩
3.无针头注射+皮内免疫——猪疫苗接种的一种完美组合方法 [J], 高凌云
4.HPV疫苗接种一针或两针也可显著降低癌前病变发生 [J],
5.狂犬病疫苗皮内微量接种免疫记忆持久性及再免后免疫效果的实验研究 [J], 杨裕华;张进贵
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支原体疫苗不同免疫途径的优劣势浅析1、支原体灭活苗和弱毒活苗的选择使用探讨支原体灭活疫苗，受品牌和市场推广力影响，市场占比较大。
但它的免疫机理为体液免疫，不能有效阻断支原体野毒在机体内的移行。
支原体野毒感染机理主要为占位（呼吸道黏膜表面纤毛顶端），受非特异性母源抗体保护，仔猪9日龄以内很难被支原体野毒侵染，若发生临床感染很难再被清除体外。
灭活疫苗的免疫时间较晚及产生有效免疫作用需要时间较长，有效保护不能发生在猪只易感时间之前。
对MPS而言，灭活疫苗诱导产生的抗体水平和阻止病原的移行及疾病的发生关系不大，抗体水平不一定与保护正相关，仅为参考性指标。
支原体弱毒活苗免疫时间早，能够早期占位及激发细胞免疫和粘膜免疫，在新生仔猪被母源抗体保护未受野毒感染期，靶向完全占位，从而使野毒失去感染机会，减少或避免疾病的发生。
2、支原体弱毒活苗不同免疫途径的探讨弱毒活苗免疫机理主要为占位效应，其次细胞、黏膜免疫。
根据免疫方式分为滴(喷)鼻、肺内注射和右侧胸腔注射三种。
滴(喷)鼻虽然操作方便，但由于受到猪只的呼吸、吞咽、呛咳等因素，免疫剂量不能有效保证，从而免疫效果不能有效保证。
肺内注射免疫剂量能够保证，疫苗的效果反馈经调查也能得到市场认可，缺点在于免疫时需严格保定，猪只应激大，操作困难；同时肺内注射需刺穿胸腔壁刺入肺脏，易造成肺脏损伤，随着日龄增加，肺脏损伤面越大，在120-140斤以后易感染副猪、链球菌、放线杆菌、厌氧菌等引起二次感染呼吸道疾病，对猪只的后期健康造成影响。
右侧胸腔注射免疫优势突出，操作简单，仔猪俯卧时，右前腿肘部对应所有部位均可进针，进针范围是其他免疫方式的6倍以上，刺透胸腔壁便可注射。
若碰到肋骨，微调进针角度即可。
配有专用针头，安全可靠。
右侧胸腔注射免疫有效率无限接近100%，对猪场整体健康度来讲，优先选择。
正业生物支原体疫苗胸腔免疫操作示范视频演示更清晰3、正业支原体弱毒活苗（Z株）免疫机理通过右侧胸腔注射，在渗透压、压力、半透膜吸收三重因素作用下迅速到达呼吸道和肺泡黏膜表面的靶位点（纤毛顶端）并形成优势占位，有效阻断致病性野毒支原体对呼吸道的损害，整个过程仅需48小时；同时在免疫系统的相互作用下诱导产生粘膜免疫和体液免疫，使猪只获得完美保护。
两种灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫效果比较王全杰，刘洪斌，张智明，王彬，杨鹏欣，窦海燕，孟福强，丁国杰∗（哈药集团生物疫苗有限公司研发中心，哈尔滨１５００６９）［收稿日期］２０１４－０８－２５㊀［文献标识码］Ａ㊀［文章编号］１００２－１２８０（２０１４）１１－００１９－０５㊀［中图分类号］Ｓ８５９．７９＋７［摘㊀要］㊀为对比使用甲醛㊁二乙烯亚胺（ＢＥＩ）两种灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗对猪的呼吸道发病率㊁肺部病变记分㊁饲料转化率㊁日增重㊁以及猪血清抗体水平等指标的影响，将１２０头健康仔猪随机分成三个试验组和一个对照组，于７㊁２１日龄对试验组的仔猪进行疫苗接种，所有猪于２０㊁５０㊁８０及１４０日龄采血分离血清，检测血清中猪肺炎支原体抗体水平㊂结果显示，用ＢＥＩ灭活的疫苗在呼吸道发病率㊁肺部病变记分㊁饲料转化率㊁日增重㊁以及猪血清抗体水平等各项指标均好于甲醛灭活的疫苗（Ｐ＜０．０５），与进口疫苗无显著差异㊂试验表明，使用ＢＥＩ灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫效果好㊂［关键词］㊀灭活；二乙烯亚胺；甲醛；支原体；免疫效果作者简介：王全杰，硕士，从事动物疫苗研究通讯作者：丁国杰㊂Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｇｕｏｊｉｅ１９７４＠１２６．ｃｏｍＣｏｍｐａｒｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＩｍｍｕｎｅＥｆｆｅｃｔｓｏｆＩｎａｃｔｉｖａｔｅｄＭｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＶａｃｃｉｎｅｓｗｉｔｈＴｗｏＰｅｒｐａｒａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓＷＡＮＧＱｕａｎ－ｊｉｅ，ＬＩＵＨｏｎｇ－ｂｉｎ，ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｍｉｎｇ，ＷＡＮＧＢｉｎ，ＹＡＮＧＰｅｎｇ－ｘｉｎ，ＤＯＵＨａｉ－ｙａｎ，ＭＥＮＧＦｕ－ｑｉａｎｇ，ＤＩＮＧＧｕｏ－ｊｉｅ∗（ＨａｒｂｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＧｒｏｕｐＣｏ．，Ｌｔｄ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＶａｃｃｉｎｅ，Ｈａｒｂｉｎ１５００６９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｍｍｕｎｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｗｏｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＭｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｖａｃｃｉｎｅｓｐｒｅｐａｒｅｄｗｉｔｈｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅａｎｄｅｔｈｙｌｅｎｅｉｍｉｎｅ（ＢＥＩ）ｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅ，ｌｕｎｇｌｅｓｉｏｎｓｃｏｒｅ，ｄａｉｌｙｗｅｉｇｈｔｇａｉｎ，ｆｅｅｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｒａｔｉｏａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｓｅｒｕｍａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌｓ．１２０ｈｅａｌｔｈｙｐｉｇｌｅｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓａｎｄａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｐｉｇｌｅｔｓｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｖａｃｃｉｎａｔｅｄａｔｔｈｅａｇｅｏｆ７ａｎｄ２１ｄａｙｓ．Ａｔ２０，５０，８０ａｎｄ１４０ｄａｙｓｏｆａｇｅ，ｗｅｓｅｐａｒａｔｅｄｂｌｏｏｄｓｅｒｕｍｏｆａｌｌｐｉｇｓ，ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｌｅｖｅｌｏｆＭｙｃｏｐｌａｓｍａｐｎｅｕｍｏｎｉａｉｎｓｅｒｕｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ，ＢＥＩｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅｄｏｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈｅｆｏｒｍａｌｉｎｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅｉｎｔｈｅａｓｐｅｃｔｓｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｍｏｒｂｉｄｉｔｙ，ｌｕｎｇｌｅｓｉｏｎｓｃｏｒｅ，ｄａｉｌｙｗｅｉｇｈｔｇａｉｎ，ｆｅｅｄｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｓｅｒｕｍａｎｔｉｂｏｄｙｔｉｔｅｒ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｃｏｍｐａｒｅｄＢＥＩｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅｗｉｔｈｔｈｅｉｍｐｏｒｔｅｄｖａｃｃｉｎｅ，ｔｈｅｒｅｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｍｍｕｎｅｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＭｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｗｈｉｃｈｗａｓｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｗｉｔｈＢＥＩｗａｓｂｅｔｔｅｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎａｃｔｉｖａｔｅ；ｂｉｎａｒｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ；ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ；ｉｍｍｕｎｅｅｆｆｉｃａｃｙ㊀㊀猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｍｈｐ）引起的一种慢性接触性呼吸道疾病，俗称喘气病［１］㊂感染猪慢性㊁持续干咳，其中育肥前期猪咳嗽最严重㊂该病能造成猪的日增重和饲料转化率等生产性能指标的明显下降，严重影响经济效益，同时还容易引起其他细菌病毒的继发感染，大幅增加治疗费用［２］㊂免疫接种猪肺炎支原体疫苗是防控该病的重要手段之一，接种疫苗可减少肺部损伤，提高料肉比及缩短出栏时间［３］㊂目前，猪支原体肺炎疫苗主要有弱毒疫苗和灭活疫苗，由于弱毒疫苗需要胸腔接种，操作困难，所以不易于推广普及㊂灭活疫苗通过肌肉注射进行接种，易于操作，同时生产工艺简单㊁使用安全㊁方便㊁易于保存，并能刺激动物产生高滴度抗体和显著的免疫保护效果［４］㊂在灭活疫苗的研制中，用到最多的灭活剂是甲醛，甲醛是比较传统的灭活剂，其主要通过对蛋白和核酸的烷化作用，使病毒丧失感染性［５］㊂二乙烯亚胺（ＢＥＩ）是另一类良好的病毒灭活剂，其作用原理是破坏微生物核酸，而不影响其蛋白质成分，并保持病毒抗原性［６］㊂本实验分别用ＢＥＩ和甲醛对猪肺炎支原体进行灭活并制备成疫苗，并设立进口疫苗作为对照，通过动物试验，比较两种灭活疫苗对支原体肺炎的抵抗能力㊂１㊀材料与方法１．１㊀材料１．１．１㊀试验动物㊀１日龄健康杜长大三元杂交仔猪１２０头（支原体肺炎母源抗体为阴性），由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供㊂１．１．２㊀供试抗原及疫苗㊀猪肺炎支原体Ｐ－５７２２－３菌株抗原由哈药集团生物疫苗有限公司提供，猪支原体肺炎灭活疫苗（进口）由美国辉瑞公司生产㊂１．１．３㊀主要试剂㊀二乙烯亚胺（ＢＥＩ），购自ＦＬＵＣＡ公司；硫代硫酸钠购自Ａｌｆａ公司，甲醛，购自国药集团化学试剂有限公司；氢氧化钠，购自国药集团化学试剂有限公司；猪肺炎支原体ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒，由美国ＩＤＥＸＸ公司生产㊂１．２㊀方法１．２．１㊀灭活疫苗的制备㊀将检验合格的菌液（抗原浓度ȡ１０８ＣＣＵ／ｍＬ）分成两组㊂第一组为ＢＥＩ灭活组，向菌液中加入ＢＥＩ溶液至终浓度４ɢ，（３７ʃ２）ħ下搅拌培养至少２４ｈ㊂加入硫代硫酸盐溶液（最终浓度４ｍｍｏｌ／Ｌ），继续搅拌至少２４ｈ［７］；第二组为甲醛灭活组，向菌液中缓慢加入甲醛溶液至终浓度２ɢ，（３７ʃ２）ħ下灭活至少２４ｈ㊂半成品检验合格后，用磷酸缓冲盐水调整抗原浓度，并调ｐＨ至７．０ʃ０．２，加入佐剂后乳化㊂１．２．２㊀试验分组㊀将试验动物随机分成４组，３０头／组，Ａ组为ＢＥＩ灭活疫苗组，Ｂ组为甲醛灭活疫苗组，Ｃ组为进口疫苗组，Ｄ组为空白对照组㊂Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ组分别于７㊁２１日龄进行疫苗免疫，肌肉注射，２ｍＬ／头，Ｄ组注射同样剂量的生理盐水㊂所有试验猪按照常规饲养进行管理，仔猪于２８日龄断奶，７０日龄转入育肥舍㊂１．２．３㊀观察指标１．２．３．１㊀生产性能指标㊀注射疫苗后，分别于２８㊁７０㊁１５５㊁１８０ｄ称量猪体重，并记录饲养各个阶段饲料使用情况㊂计算并比较各组的日增重及料肉比情况㊂１．２．３．２㊀发病情况统计㊀在饲养的全程记录试验猪的发病情况，计算呼吸道发病率㊂呼吸道发病率＝呼吸异常猪的累计头数每组猪数ˑ观察天数㊂同时，在７５日龄时，每组随机抽取１０头猪进行宰杀，观察和记录每头猪的肺脏病变情况，通过５５分法［８］记分，计算肺炎减少率㊂肺炎减少率＝对照猪肺炎平均分－免疫猪肺炎平均分对照猪肺炎平均分ˑ１００％㊂１．２．３．３㊀抗体检测㊀每组随机抽取１０头试验猪，分别于２０㊁５０㊁８０㊁１４０日龄通过前腔静脉采血并分离血清，按照ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒说明书进行检测，在波长为６５０ｎｍ处测量和记录样品和对照的吸光度值㊂检测结果的判定标准［９］：Ｓ／Ｐ＜０．３为阴性，Ｓ／Ｐ＞０．４为阳性，０．３ɤＳ／Ｐɤ０．４为可疑㊂２㊀结果２．１㊀猪生长各阶段平均体重及生产性能试验结果仔猪分别于出生后７日龄和２１日龄两次免疫猪气喘病疫苗，接种后免疫仔猪均无过敏反应，没有的临床异常反应，注射部位无肿块和异常反应㊂表明两种灭活疫苗对仔猪安全性良好㊂猪生长各阶段的平均体重见表１㊂表１㊀猪生长各阶段平均体重情况表组别灭活剂头数体重／ｋｇ初生２８ｄ７０ｄ１５５ｄ１８０ｄＡＢＥＩ３０１．５４６．７７１８．７４７０．３３１０１．３３Ｂ甲醛３０１．６２６．６５１７．９６６８．２３９８．８９Ｃ进口３０１．５９６．７５１８．５０６９．８９１００．４３Ｄ－３０１．５８６．４３１６．４４６１．３５８５．４４㊀㊀根据表１中的体重情况，计算出猪生长各阶段的日增重及料肉比，结果见表２㊂由表２可以看出，在哺乳期内（０ ２８ｄ）所有猪日增重相差不大；哺乳期至出栏前，Ａ组日增重均大于Ｂ组和Ｄ组，Ａ组与Ｃ组日增重差异不大㊂Ａ组和Ｃ组饲料转化率高于Ｂ组和Ｄ组㊂从全程来看，Ａ组的平均日增重为５５４．９ｇ，Ｂ组的平均日增重为５４０．４ｇ，Ｃ组的平均日增重为５４９．１１ｇ，Ｄ组平均日增重为４６５．９ｇ，Ａ组与Ｄ组差异显著（Ｐ＜０．０５），与Ｃ组差异不显著㊂Ｄ组料肉比为３．０７，Ｃ组料肉比为２．６８，Ｂ组料肉比为２．８３，Ａ组料肉比为２．６３，Ａ组较Ｂ组降低０．２０，与Ｃ组料肉比相当，由此可见，ＢＥＩ灭活疫苗组免疫猪经济效益较甲醛灭活组免疫猪要好㊂表２㊀猪生长各阶段的生产性能检测结果组别㊀㊀㊀０ ２８ｄ㊀㊀㊀㊀㊀㊀２８ ７０ｄ㊀㊀㊀㊀㊀㊀７０ １５５ｄ㊀㊀㊀㊀㊀㊀１５５ １８０ｄ㊀㊀㊀㊀㊀㊀全期㊀㊀㊀㊀日增重／（ｇ㊃ｄ－１）料肉比日增重／（ｇ㊃ｄ－１）料肉比日增重／（ｇ㊃ｄ－１）料肉比日增重／（ｇ㊃ｄ－１）料肉比日增重／（ｇ㊃ｄ－１）料肉比Ａ１８６．７８ａ－２８５．０６ａ１．５８５ａ６０６．９０ａ２．６１１ａ１２４０ａ３．２４１ａ５５４．９ａ２．６３ａＢ１７９．６４ａ－２６９．２９ｂ１．６８２ｂ５９１．４１ａｂ２．７３７ｂ１２２６．４ａ３．５８１ｂ５４０．４ｂ２．８３ｂＣ１８４．２９ａ－２７９．７６ａ１．６０４ａ６０４．５９ａ２．６２３ａ１２２１．６ａ３．２５９ａ５４９．１１ａ２．６８ａＤ１７３．３２ａ－２３８．３３ｂ１．８３３ｂ５２８．３５ｃ３．０３３ｃ９６３．６ｂ３．８７７ｂ４６５．９ｃ３．０７ｃ㊀㊀同列数据肩标小写字母完全不同表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相同表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）２．２㊀试验猪的呼吸道发病率及免疫猪肺炎减少率７５日龄时，对照组的猪发生气喘性咳嗽，呼吸困难，并有明显的腹式呼吸，精神不振，免疫组未见上述症状，每组随机抽取１０头猪进行宰杀，观察肺部病变，结果对照猪出现典型的猪喘气病肺部病变，在肺脏心叶㊁尖叶㊁中间叶以及膈叶前１／３部位，出现大面积胰样病变，病灶部位切面多汁，猪肺炎记分平均分为１４．０；Ｃ组免疫猪肺部几乎没有病变，猪肺炎记分平均分为２．３，肺炎减少率为８３．５７％；Ｂ组免疫猪肺部病变情况明显较轻，只有小面积典型病变，猪肺炎记分平均分为６．７，肺炎减少率为５９．２８％；Ａ组免疫猪肺部仅有少量病变，猪肺炎记分平均分为２．５，肺炎减少率为８２．１４％，由此可见，Ａ组免疫效果要好于Ｂ组㊂㊀㊀试验猪约在１２０日龄时，每天观察咳嗽及喘气情况，１０ｍｉｎ／次，连续观察２１ｄ㊂结果Ａ组和Ｃ组免疫猪只有个别几头猪发生气喘性咳嗽，呼吸道发病率分别为０．９１％和１．０２％；Ｂ组免疫猪发生气喘性咳嗽的头数稍稍多些，呼吸道发病率为１．９０％；Ｄ组免疫猪发生气喘性咳嗽较多，呼吸道发病率为３．５％㊂结果见表３㊂表３㊀免疫猪肺炎减少率及呼吸道发病率检测结果组别各组猪肺炎记分几何平均分肺炎减少率／％呼吸道发病率／％Ａ２．５８２．１４０．９１Ｂ６．７５９．２８１．９０Ｃ２．３８３．５７１．０２Ｄ１４．０－３．５２．３㊀试验猪血清抗体的检测２．３．１㊀各组猪肺炎支原体抗体水平的比较㊀试验猪免疫支原体肺炎疫苗后，各组均产生不同水平的抗体，结果见表４㊂可以看出，２０日龄时，Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ三组的抗体水平差异不显著，各个免疫组与对照组的抗体水平差异不大；５０日龄时，免疫组的抗体水平均升高，Ａ组与Ｂ组抗体水平差异显著，Ａ组抗体水平高于Ｃ组，但差异不显著；８０日龄时，免疫组的抗体水平开始下降，但Ａ组抗体水平只是略有下降，均高于其他组，Ａ组与Ｂ组差异显著；１４０日龄时，免疫组抗体水平略有回升，Ａ组与Ｂ组抗体水平差异显著，Ａ组与Ｃ组抗体水平相当，各个免疫组与对照组的抗体水平差异较大㊂表４㊀试验猪肺炎支原体抗体水平检测结果组别平均ＯＤ６５０值２０日龄５０日龄８０日龄１４０日龄Ａ组０．２１２ʃ０．０１３ａ０．３８２ʃ０．０２７ａ０．３６５ʃ０．０３３ａ０．４０３ʃ０．０９３ａＢ组０．２０１ʃ０．０５７ａ０．２９１ʃ０．０６１ｂ０．２７３ʃ０．０２４ｂ０．３２９ʃ０．０３３ｂＣ组０．２０５ʃ０．０３１ａ０．３３７ʃ０．０３５ａ０．３０４ʃ０．０７８ａｂ０．３５８ʃ０．０６３ａＤ组０．１９１ʃ０．０４３ａ０．１９０ʃ０．０３５ｃ０．１７５ʃ０．０７４ｃ０．２１３ʃ０．０５２ｃ㊀㊀同列数据肩标小写字母完全不同表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相同表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）２．３．２㊀猪肺炎支原体抗体阳性率变化规律㊀由表５可以看出，７日龄免疫猪肺炎支原体疫苗后，２０日龄时，免疫猪均有猪肺炎支原体抗体产生，其中Ａ组和Ｃ组阳转率较高；５０日龄时，由于二次免疫的作用，各个免疫组的阳性率快速上升，但是相对于Ａ组和Ｃ组，Ｂ组抗体阳性率较低；８０日龄时，免疫组抗体阳性率下降，Ａ组的阳性率由８０％下降到７０％，Ｂ组的阳性率由４０％下降到３０％㊂Ａ组和Ｃ组的阳性率差异不显著；１４０日龄时，所有试验组的阳性率均上升㊂Ａ组和Ｃ组的阳性率明显高于Ｂ组和Ｄ组㊂表５㊀各组猪血清抗体阳性率统计结果组别阳性率／％２０日龄５０日龄８０日龄１４０日龄Ａ组４０ａ８０ａ７０ａ８０ａＢ组２０ｂ４０ｂ３０ｂ４０ｃＣ组４０ａ７０ａ６０ａ８０ａＤ组０ｃ０ｃ０ｃ１０ｃ㊀㊀同列数据肩标小写字母完全不同表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相同表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）３㊀讨论与小结３．１㊀生产性能比较㊀为了更好的了解不同灭活方法对猪肺炎支原体灭活的影响，本实验用ＢＥＩ和甲醛两种灭活方法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗通过动物试验进行免疫原性比较㊂结果发现，ＢＥＩ灭活组免疫猪的日增重㊁饲料转化率和肺部病变减少率均好于甲醛灭活组免疫猪，和进口疫苗组的免疫效果差异不显著㊂空白对照组在７０ｄ后，日增重逐渐减少，同时大部分猪出现气喘性咳嗽，并出现腹式呼吸㊂甲醛灭活组个别免疫猪出现同样的症状㊂但是ＢＥＩ灭活组和进口疫苗组均健康存活㊂这一结果与曹建国等［１０］研究的结果相一致㊂对所有试验组呼吸道发病症状进行观察和统计，ＢＥＩ灭活组和进口疫苗组的呼吸道发病率低于甲醛灭活组，且与空白对照组差异显著㊂通过５５分法记分比较肺部病变，结果ＢＥＩ灭活组肺炎减少率在８０％以上，远远高出甲醛灭活组的５９．２８％，由此可见，用ＢＥＩ灭活的疫苗比用甲醛灭活的疫苗对猪的保护效果要好，能很好的抵御猪肺炎支原体的侵袭㊂３．２㊀抗体水平比较㊀在猪肺炎支原体免疫保护方面主要是以细胞介导的免疫力为主［１１］，但体液免疫力和粘膜免疫力也参与其中，值得一提的是，疫苗诱导产生的抗体水平和阻止病原移行及疾病发生之间联系不大，疫苗抗体水平不一定与保护正相关，只为参考性指标［１２］㊂本研究对免疫猪生长过程中各个阶段的抗体水平和抗体阳性率等指标进行了跟踪记录，在２０日龄时，所有试验猪的抗体水平均较低，并且差异不显著，这可能表明，在７日龄时注射的疫苗在此时还未能刺激机体产生较高浓度的抗体水平，这一试验结果与Ｖｉｌｌｓｒｒｅａｌ等［１３］报道的猪在接种疫苗３周后可检测到抗体的结果相似㊂从抗体水平和阳性率的数值上来看，ＢＥＩ灭活组和进口疫苗组的抗体产生差异不显著，均高于甲醛灭活组，并且甲醛灭活组的阳性率处于很低的水平，主要原因在于甲醛作用于病毒的表面蛋白，使病毒抗原的免疫原性降低，并阻碍其对病毒内部核酸的破坏作用［１４］，而ＢＥＩ主要破坏病毒的核酸，使病毒完全丧失感染力，而不损坏病毒的蛋白质衣壳，从而保留其保护性抗原，病毒的免疫原性几乎不被破坏［１５］㊂综上所述，ＢＥＩ灭活法制备的猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效果及经济效益要好于甲醛灭活法㊂参考文献：［１］㊀于敏，王文军，李景鹏，等．猪肺炎支原体的研究近况［Ｊ］．畜牧兽医科技信息，２００３（８）：１４－１６．［２］㊀ＢａｒｂａｒａＥＳ，ＪｅｆｆｅｒｙＪＺ，ＤｏｉｄＪＴ，ｅｔａｌ．猪病学［Ｍ］．９版．赵德明，张仲秋，沈建忠，主译．北京：中国农业大学出版社，２００８：７９５－８１６．［３］㊀ＭｏｒｅａｕＩＡ，ＭｉｌｌｅｒＧＹ，ＢａｈｎｓｏｎＰＢ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＭｙｃｏｐｌａｓｍａｈｙｏ⁃ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｖａｃｃｉｎｅｏｎｐｉｇｓｎａｔｕｒａｌｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＭ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２００４，２２（１７／１８）：２３２８－２３３３．［４］㊀张秀芳．灭活疫苗有哪些优点［Ｊ］．山西农业，２００３（１１）：４５．［５］㊀徐守振，尹燕博，王新．动物疫苗中常用抗原灭活剂的研究进展［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１０，９：１６２－１６７．［６］㊀赵本进，潘铙苘，陈晓清，等．二乙烯亚胺（ＢＥＩ）灭活猪细小病毒的试验报告［Ｊ］．上海畜牧兽医通讯，２００４，６：１９．［７］㊀魏晓露，刘婧，高菁霞，等．二乙烯亚胺灭活禽流感病毒的效果观察［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００８，２１（５）：３９５－３９７．［８］㊀中国标准出版社第一编辑室．动物防疫标准汇编［Ｍ］．北京：中国标准出版社，２００４：４７３－４７８．［９］㊀陆承平．兽医微生物学［Ｍ］．中国农业出版社，２００１：１７７－１７９．［１０］曹建国，张云台，赵芳根，等． 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