生殖道标本细菌学检验标准操作规程

细菌室标本操作流程
细菌室是进行细菌培养和鉴定的重要实验室，操作流程的规范
性和严谨性对于实验结果的准确性至关重要。

下面将详细介绍细菌
室标本操作的流程。

1. 样本接收：首先，接收来自临床的标本，如血液、尿液、脑
脊液等，标本应该在规定时间内送到细菌室，并在接收时进行标记，包括标本来源、送检医生、送检时间等信息。

2. 样本处理：接收到标本后，需要进行处理，包括标本的分装、保存和处理。

不同类型的标本需要采取不同的处理方法，确保标本
的完整性和质量。

3. 样本培养：将处理好的标本进行培养，通常采用琼脂培养基，根据标本的性质选择不同的培养基。

培养条件包括温度、湿度、氧
气含量等，需要根据不同的细菌种类进行调整。

4. 细菌鉴定：培养出的细菌需要进行鉴定，包括形态学特征、
生理生化特性、抗生素敏感性等。

通常采用显微镜观察细菌形态，
进行生化试验和抗生素敏感性试验。

5. 结果记录：对鉴定结果进行记录，包括细菌种类、数量、鉴
定方法、结果等信息。

确保结果的准确性和可追溯性。

6. 报告发放：将鉴定结果整理成报告，发送给临床医生，帮助其进行治疗方案的制定。

7. 清洁消毒：操作结束后，对实验室进行清洁消毒，确保实验室的卫生和安全。

细菌室标本操作流程需要严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。

同时，操作人员需要具备专业知识和技能，保证操作的规范性和安全性。

只有这样，才能为临床诊断和治疗提供可靠的实验结果。

临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。

（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。

2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。

按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。

2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。

2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。

3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。

（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。

2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。

3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。

4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。

（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。

2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。

二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。

（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。

准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。

2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。

为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。

（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。

临床微生物学标本采取和处理的规范化要求正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键.标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果,给临床以误导，延误对患者的正确治疗。

为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。

一、血液细菌培养标本的采集和处理临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者,需做血液细菌培养以明确病原。

1．采集方法:静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后,直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固.如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中,再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。

2。

采血时间以及血培养份数:在患者发热期间越早越好,最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本,可使细菌检出率高达99％.对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前0。

5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。

特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则：（1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2~3份血液标本培养.(2)可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养,如果24小时后阴性,再采集两份血标本培养。

(3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24~36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。

因为1次血培养不足以说明问题,可能会遗漏阳性结果。

（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时;应改变血培养方法,以获得罕见或苛养的微生物。

（5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎,需马上做抗菌治疗;或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者,应立即从两臂分别取2份标本.3。

采血部位:采血部位通常为肘静脉。

疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。

疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。

生殖道标本的采集及运送6.10.1采集指征1）症状指征：①皮肤粘膜损害：原发损害可有斑疹，丘疹，结节，水疱，囊肿，糜烂，溃疡等。

继发损害由原发损害演变而来，有萎缩或斑痕等，患者可出现疼痛或瘙痒症状。

②全身症状：多数无全身症状。

偶有发热，乏力，食欲不振。

③男性生殖系统表现。

A.尿痛：指在排尿或排尿后膀胱区或尿道疼痛。

B.尿频，尿急：由尿道病变刺激所致。

C.尿液分泌物增多：性状为粘液性或脓性。

E.会阴部疼痛或阴囊疼痛。

F.性功能障碍。

G.泌尿生殖器畸形或缺损。

④女性生殖系统表现A．阴道分泌物增多及性状异常。

B．尿道口瘙痒及脓性分泌物流出。

C．下腹疼痛。

D．月经失调。

E．阴道出血。

F．外阴瘙痒。

G．外阴或阴道疼痛。

H．性功能障碍。

2）疾病指征：非特异性外阴炎，前庭大腺眼，前庭大腺囊肿，外阴阴部念珠菌病，细菌性阴道病，2.6.10.2采集方法1）尿道分泌物（1）男性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，采取从尿道口溢出的脓性分泌物或用无菌男性拭子插入尿道内2-4cm轻轻旋转后取出分泌物。

如无脓液溢出，可从阴茎的腹面向龟头方向摩擦，促使分泌物溢出。

（2）女性：清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦拭，然后从阴道内诊压迫尿道，或从尿道的后面向前摩擦，使分泌物溢出。

无肉眼可见的脓液，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内，旋转拭子，采集标本。

2）巴氏腺、尿道旁腺:清洗或局部消毒，然后压迫腺体，使分泌物溢出。

3）阴道分泌物：用窥器扩张阴道，先用拭子清除阴道表面分泌物，弃拭子，用灭菌女性拭子采取阴道口内4cm内侧壁或后穹窿处分泌物培养或涂片镜检。

如未成年幼女疑患性传播疾病时，不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。

4）宫颈分泌物：用窥器扩张阴道，先用无菌拭子清除阴道和宫颈局部分泌物，弃拭子；轻压宫颈使宫颈内分泌物流出，用女性拭子插入宫颈管1-2cm采取分泌物，转动并停留10-30s,让拭子充分吸附分泌物，或用去针头的注射器吸取分泌物，置入灭菌试管内送检。

尿细菌学检查的要求
尿细菌学检查是诊断尿路感染的重要依据，也是指导临床合理用药的关键手段。

在进行尿细菌学检查时，需要注意以下几个方面：1、清洗外生殖器：在进行尿细菌学检查前，应清洗外生殖器，以避免污染尿液。

清洗时，可以用温水或肥皂水清洗，但不要使用消毒剂，以免影响检查结果。

2、留取中段尿：在留取尿液标本时，应先排出一些尿液，以排出尿道口的细菌。

然后，留取中段尿，即取尿标本时不要使用初段尿液，尽量使用中段尿液进行检查。

这样可以避免尿道口和尿道内细菌的污染，提高检查结果的准确性。

3、避免污染：在留取尿液标本的过程中，应避免尿液被污染。

不要将尿液留在马桶或便池中，以免受到周围环境的污染。

同时，在留取尿液标本的容器中，应避免接触皮肤或使用已经被污染的容器。

4、及时送检：在留取尿液标本后，应尽快将其送往实验室进行检查。

如果尿液长时间放置在容器中，可能会导致细菌繁殖，影响检查结果的准确性。

5、特殊情况的处理：对于一些特殊情况，如使用抗菌药、尿道插管、留置尿管等，可能会影响尿细菌学检查的结果。

此时，应根据具体情况进行处理，如在使用抗菌药前留取尿液标本、尽量减少插管和留置尿管的时间等。

总之，在进行尿细菌学检查时，应严格遵守相关要求，以确保检查结果的准确性和可靠性。

同时，对于特殊情况的处理，也应根据具体情况进行适当调整。

如有疑虑或异常结果，应及时咨询医生或专业人士的建议。

单位及实验室名称项目汉源县人民医院检验科生殖系统标本的细菌学检验操作编号：LAB/SOP/HY/微-006日期：2010年5月3日版本：第一版，第0次修订第1页，共3页一、【标本采集】（1）对于男性和女性外阴部标本可直接用无菌棉拭檫拭外阴部的分泌物，溃疡面做直接涂片和分离培养。

（2）对于阴道、尿道、前列腺和子宫颈分泌物标本首先清洗外阴部和尿道外部。

对于女性患者，首先用肥皂水及1：1000高锰酸钾水溶液冲洗外阴部和尿道口后再用无菌纱布或无菌干棉球拭干；对于男性患者应翻转包皮冲洗，用2%红汞或1：1000苯扎溴铵消毒尿道口后再用无菌纱布或无菌棉球拭干，然后由医师分别以无菌的方法进行采取待检标本。

二、【检验方法】1.直接涂片检查（1）一般细菌涂片：以无菌操作方法用无菌棉拭子采取外阴部标本或阴道、尿道、前列腺和子宫颈分泌物的标本直接涂片，以火焰固定，革兰染色镜检，根据形态染色特征可做出初步报告。

（2）淋病奈瑟菌涂片：以无菌操作方法，采取生殖器官标本后涂成两张玻片，一张以革兰染色，另一张以亚甲蓝染色镜检。

如查到有革兰阴性形态典型的双球菌，可报告：“找到革兰阴性双球菌，在细胞内(细胞外)形态似淋病奈瑟菌。

”（3）梅毒螺旋体检查：以无菌方法采取初期梅毒患者的病灶组织渗出液或二期梅毒的病灶渗出液或局部淋巴结抽出液，置于载玻片上，加一滴生理盐水混合后覆以盖玻片，立即用暗视野显微镜检查，或在渗出液中加一滴墨汁混合后涂片用显微镜观察。

如见运动活泼的密螺旋体或光亮的小螺旋体有助于诊断。

（4）假丝酵母菌涂片：首先取一滴无菌生理盐水加于载玻片上，再取标本放于盐水混匀，盖上盖玻片，轻轻加压，用高倍镜检查。

如发现有光亮的芽生孢子和假菌丝，并经革兰染色镜检有阳性酵母样细胞时，可报告：“找到酵母样真菌，形似假丝菌酵母。

”；否则报告：“未找到假丝酵母菌。

”2.细菌培养（1）一般细菌培养：以无菌方法用接种环挑取标本后立即分别接种于血平板和中国蓝平板上，经35℃18-24h培养后观察结果，如有细菌生长，观察菌落形态，涂片、革兰染色镜检。

普通细菌培养鉴定操作规程1检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。

2原理人体很多部位与外界相通，存在栖息菌群，但不致病，当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义；另外机体某些部位是无菌的，如检出细菌则视为致病菌。

并排除采样及操作污染。

3标本要求(1)标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。

(2)标本采集：见标本采集手册(3)标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。

人泌尿生殖道标本如白带前列腺液等需临床标本接种于巧克力平板或特殊的运送培养基并置保温设备中送检。

(4)标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。

4容器和添加剂类型均使用灭菌器InI盛放标本5试剂(1)试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等(2)试剂生产厂家：XX生物技术有限公司6仪器设备：(1)接种针、接种环、酒精灯、(2)BACTTST黑马微生物鉴定系统。

(3)显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SWYJTF超净工作台、MCoT5A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤(1)血液、骨髓、脑脊液等标本按照培养目的增菌培养12T8小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。

(2)接种：以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35℃培养过夜，观察结果。

(3)涂片：肉眼见细菌生长，取生长物涂片做革兰氏染色；(4)纯培养：根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。

(5)鉴定：按照鉴定仪要求调配菌液浓度，细菌的鉴定见BACTTST黑马微生物鉴定系统10质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11生物参考区间血液，骨髓，脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长；其他标本如大便，痰液为正常菌群或未见致病菌。

医院细菌室标本操作流程作业指导书1、标本的接受1.1、标本接受的时间：原则上全天任何时间均可。

1.2、标本的接受：接受标本者要认真核对标本的数量、标本与检验单要求是否相符以及标本的质量等。

1.3、把接受的标本编号。

2、临床标本的接种2.1、检验目的为细菌培养+药敏试验的各临床标本的培养基选择2.1.1 标本类型培养基血血培养瓶中段尿血平板、麦康凯平板、巧克力平板脑脊液血培养瓶、血平板、巧克力平板穿刺液血培养瓶、血平板、麦康凯平板、巧克力平板胆汁血平板、巧克力平板、麦康凯平板呼吸道标本血平板、麦康凯平板、巧克力平板粪便标本SS平板、MAC平板和血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麦康凯平板2.1.2、生殖器标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板及操作：淋球菌培养接种淋球菌平板；念珠菌培养接种沙保罗培养基：支原体培养则按《支原体培养的操作规程》操作；作普通细菌培养，则接种血平板和巧克力平板；衣原体抗原检测的按《衣原体抗原检测的操作规程》进行检验。

2.2、接种的方法：中段尿标本无菌取10ul，在血平板的中间做垂直划线，然后分离划线。

其他际本做分区划线。

2.3、检验目的为找抗酸杆菌的按《找抗酸杆菌的操作规程》进行检验。

3、所接种的平板必须写上标本的编号和接种的日期，然后根据要求进行培养。

4、标本的培养条件、温度、时间平板培养条件、温度、C02浓度、时间血平板孵箱、35—37℃、18—24小时巧克力平板孵箱、35—37℃、18—24小时淋球菌平板孵箱、35—37℃、18—24小时沙保罗平板孵箱、28—31℃、24—36小时其他的平板孵箱、35—37℃、18—24小时5、根据生长在平板上的细菌菌落形态、菌落涂片、染色、镜检等来综合判断细菌形态和染色性质，按各属鉴定的作业指导书进行各菌属的常规鉴定及药敏试验。

6、结果的报告6.1、确认细菌鉴定及药敏试验结果后，进行检验验单结果报告的存盘、打印。

7、对各类细菌培养标本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求进行无害化处理。

生殖道标本细菌学检验关键词：淋病奈瑟菌念珠菌上皮细胞细胞菌种保藏中心 ATCC 北纳细胞网一、检验程序生殖道标本的细菌学检验程序见图37-1。

二、检验方法(一)标本的显微镜检查生殖道标本涂片、革兰染色或抗酸染色后镜检，应注意观察①淋病奈瑟菌：白细胞内革兰阴性肾形双球菌；②杜克嗜血杆菌：细小的、多形态的、革兰阴性杆菌或球杆菌，呈链状或鱼群样排列；③结核分枝杆菌：抗酸染色阳性、分散或聚集的杆状或点状细菌；④念珠菌：圆形或卵圆形酵母细胞及芽生的真菌孢子。

阴道分泌物涂片、革兰染色，通过显微镜观察细菌和细胞的数量和形态，根据上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌和杂菌数量多少，阴道清洁度分为Ⅰ～Ⅳ度，判定标准见表37-1。

(二)标本的培养和鉴定1．淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌对营养要求高，一般不易培养，需在培养基中加入腹水或血液。

采用巧克力色琼脂平板或GC培养基进行培养，温度35~37℃，70％湿度，含5％～10％二氧化碳环境中培养24~48小时，观察菌落形态，为灰色、半透明、光滑1～2mm菌落，革兰染色为革≥阴性双球菌，肾形(培养后形态不典型)、凹面相对，氧化酶试验阳性，发酵葡萄糖，不发酵乳糖和麦芽糖，或进行其他生化反应进行鉴定。

2．厌氧菌采用厌氧血琼脂平板，置厌氧环境，培养48小时，观察菌落菌体形态，采用数码鉴定方法，结合革兰染色性状进行鉴定。

3．念珠菌需接种沙堡弱平板，分别放22℃及35℃培养，怀疑为念珠菌接种念珠菌显色培养基，培养48小时，菌落绿色为白念珠菌、灰蓝色为热带念珠菌等，必要时可应用数码鉴定方法进行鉴定。

4．普通细菌可用巧克力色琼脂平板、血琼脂平板和中国蓝琼脂平板，35℃培养24小时，根据菌落菌体形态及生化反应结果进行鉴定。

5．结核分枝杆菌需接种罗氏培养基或结核杆菌培养用液体培养基，35℃培养6～8周。

6．解脲脲原体和人型支原体采用液体和固体培养法，培养结果如为阳性，需结合临床表现，且液体培养时菌落计数>104CFU／ml，具有临床意义。

SOP_15-12 生殖系统标本培养标准操作程序
一、生殖系统培养标本采集和运送
见本手册《病原微生物标本的采集运送和处原则》
二、标本验收
1.申请单验收：要求生殖系统培养申请单除患者的基本信息以外还应包括标本收集时间、收
集方式、是否已使用抗生素等，验收时应检查申请单是否填写完整。

2.标本验收：
（1）检查标本标识是否与申请单相符；
（2）检查送检时间是否超过规定的标本保存时间。

3.不合格标本处理：
（1）对申请单信息不全者应设法与临床医师取得联系；
（2）对标识不符、送检容器不合格，送检时间超过规定时间的标本应注明原因，退回，要求重新留取标本，并做记录。

三、实验室检查
细菌培养：
（1）普通细菌及淋球菌的培养：一般情况下，可用血平板和巧克力平板，置5-10%CO2环境35度培养。

（2）念珠菌培养：接种沙氏培养基或念珠菌显色培养基，35度培养。

四、结果观察和报告
1.结果观察和评价：阳性结果挑取菌落进行药敏试验。

2.阴性培养结果报告：无致病菌生长或无细菌生长。

3.阳性培养结果报告：有意义的阳性培养结果报告：细菌种属名称及标准抗菌药物敏感性试
验结果。

临床细菌检验标本的采集储存和交接制度（一）标本管理的安全警示1. 所有标本的采集、运送和处理应在无菌操作，以上污染原则下认真进行。

2. 已采集原始标本部应置于防漏、密封的容器中运送，含有明显区各部门文字标志。

3. 带针头的注射器运送标本到实验室，用无菌试管或防护装置套住注射针，再置于防漏塑料袋内运送。

（二）标本的选择和采集1. 避免来自寄生菌的污染，应当保证每份标本代表感染过程。

健康宿主在感染的许多部位也可出现的正常菌丛，主要来自皮肤、黏膜和呼吸道，它若过早、过度生长，掩蔽了真正的病原菌，干扰培养结果解释。

2. 选择正确的解剖部位、合适时间、合乎规程技术，采集标本。

3. 活组织或针筒抽取是厌氧菌培养首选采集标本方法，但绝不可冷冻，宁可在室温中保存。

4. 采集足够标本，材料不足可能产生假阴性结果。

5. 每份标本都应标记患者姓名、送检号码、材料来源、具体部位、日期、时间以及相关临床信息。

6. 标本应置于有特殊标记、有助疑似病原菌生存、不易泄漏及防止潜在性生物危险的容器中（三）标本运送1. 已采集标本，常规性细菌学检验，不超过 1h 送交检验室，延迟运送影响病原菌检出。

2. 常规性细菌培养标本保存在 4℃也不能超过 24h。

3. 包括厌氧菌培养的临床细菌检验标本，运送时间与原始标本的量有关，标本量少应加快运送，可在 15--30min 内送达，不能及时运送组织标本必须保存厌氧环境条件上，25℃，可以保存20-24h。

4. 如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎厌瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。

脑脊髓液、生殖道、眼睛、内耳标本绝不可冷藏。

5. 社区到实验室或转送到另一实验室，不论两者距离，严格执行有关病原微生物标本运送规定，应该标记清楚，包装完整和运输中保护装置，指定运送信使，提供运输工具，任何临床标本、包括拭子、体屑、体液或组织块，已知或可能含有被分离的致病菌，都是潜在性生物危险材料。

（四）标本交接对于所收到的标本，要认真查对病人姓名、年龄、病区、床号、材料来源、部位、日期等详细信息，作好登记。