细菌的染色检查法

细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。

在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。

以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。

它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。

在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。

革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。

2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。

它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。

3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。

在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。

4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。

与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。

除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。

细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。

希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。

简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。

属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。

此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。

简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。

(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。

5ml，精氨酸0。

5ml， 0。

01%升汞液2。

5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。

(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。

5ml，精氨酸0。

5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。

(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。

5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。

(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。

(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。

(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。

(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。

(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。

0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。

(4)观察并记录细菌生长情况。

第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。

(5)取出试管，观察染色的结果。

如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。

①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。

②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。

细菌的革兰氏染色实验操作步骤流程革兰氏染色是一种常用的细菌分类方法，通过染色技术可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这种染色方法简单快捷，对细菌的形态特征有着重要的观察作用。

本文将介绍细菌的革兰氏染色实验的详细操作步骤流程。

实验所需材料1.革兰氏染色试剂盒：–革兰碘液–革兰染色液–醇解液–洗涤液–脱水液2.细菌培养液3.玻璃载玻片4.导览盖玻片5.消毒棉球6.显微镜实验步骤1.预处理玻片和试管–用肥皂水洗净手并彻底冲洗干净。

–取一块干净的抹布或纸巾，将玻璃载玻片擦拭干净。

–取一块干净的纸巾蘸取少量醇解液擦拭玻璃载玻片表面，以去除可能存在的杂质。

–将试管清洗干净，用蒸馏水冲洗干净，并放置在烘箱中晾干。

2.制备细菌涂片–打开培养液管，将一滴细菌培养液滴在玻璃载玻片上，可略带颜色。

–将玻璃载玻片侧倾45度，用细胞棉棒轻轻均匀地将细菌培养液涂抹在玻璃载玻片上，尽量避免涂片过厚。

–将涂片晾干。

3.固定细菌涂片–将制备好的细菌涂片放入烘箱中，用50摄氏度温度固定5分钟。

–取出固定的细菌涂片，待冷却后准备进行染色处理。

4.革兰氏染色处理–取一滴革兰碘液，滴在细菌涂片上，静置1分钟。

–洗涤液冲洗：将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒，然后将涂片提起，用自来水轻轻冲洗10秒。

–脱水液处理：将细菌涂片放入脱水液中，静置20秒。

–将细菌涂片提起并用洗涤液清洗3次，每次间隔10秒。

–将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒。

–用细胞棉棒从上到下蘸取革兰染色液，均匀地在细菌涂片上涂抹。

–将细菌涂片放入革兰染色液中，静置1分钟。

–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。

–将细菌涂片放入醇解液中，静置1分钟。

–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。

5.干燥和观察–用吹风机或自然风将细菌涂片吹干。

–涂片完全干燥后，将其放置在显微镜载片夹上。

–用显微镜在低倍镜下观察涂片，然后转换到高倍镜下观察。

观察细菌在镜片上的染色结果和细菌形态。

一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。

又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。

也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压—压力可达150~300Kg/cm2。

色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。

高速—流速为0.1~10.0 ml/min。

高效—可达5000塔板每米。

在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。

同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高—可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。

下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。

一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。

这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。

步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。

2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。

3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。

4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。

5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。

6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。

7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。

二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。

这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。

步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。

2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。

3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。

4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。

三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。

步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。

2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。

3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。

4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。

5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。

革兰氏染色法详细步骤革兰氏染色法革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法，用于鉴别细菌的类型，也是临床和实验室细菌学检查的重要手段。

以下是革兰氏染色法的详细步骤：1. 涂片：取一张洁净的载玻片，用移液器或毛细管将菌液滴在载玻片上，涂布均匀。

涂片时，应先滴少量菌液，涂布均匀后再滴加剩余菌液。

涂片时需注意不要将菌液涂成条状或块状，以免影响染色效果。

2. 固定：涂片完成后，将载玻片置于酒精灯火焰上方，用镊子夹住，用外焰固定约30秒至1分钟。

固定时需注意不要将玻片烧焦，以免影响染色效果。

3. 初染：用移液器或毛细管取少量结晶紫溶液，滴加在涂片菌膜上，染色3分钟至5分钟。

结晶紫是一种碱性染料，能够与细菌中的核糖核酸结合，使其呈现紫色。

4. 媒染：用移液器或毛细管取少量沙黄溶液，滴加在初染后的菌膜上，染色1分钟至2分钟。

沙黄是一种酸性染料，能够使革兰氏阳性菌被染成红色，革兰氏阴性菌被染成绿色。

5. 脱色：用移液器或毛细管取少量95%乙醇溶液，滴加在媒染后的菌膜上，轻轻摇动玻片，使菌膜上的染料脱色。

脱色时需注意不要将菌膜洗脱或出现折痕。

6. 复染：用移液器或毛细管取少量番红溶液，滴加在脱色后的菌膜上，染色3分钟至5分钟。

番红是一种碱性染料，能够使革兰氏阳性菌被染成红色，革兰氏阴性菌被染成蓝色。

7. 镜检：染色完成后，用吸水纸吸干菌膜上的染料，盖上盖玻片，显微镜下观察细菌的革兰氏染色结果。

革兰氏阳性菌呈现红色或紫色，革兰氏阴性菌呈现蓝色或绿色。

以上是革兰氏染色法的详细步骤。

操作时需注意安全，避免酒精灯等高温物品烫伤。

同时需注意每一步操作的准确性和一致性，以保证染色结果的准确性和可比性。

实验二细菌染色标本检查法第一节实验目的与实验材料一、实验目的1. 熟悉革兰染色法，掌握其意义。

2. 熟悉抗酸染色法，掌握其意义。

3. 了解革兰染色法、抗酸染色法的原理。

二、实验材料1. 菌种葡萄球菌、大肠埃希菌18～24小时培养物；痰液或卡介苗。

2. 器料仪器：普通光学显微镜；材料：革兰染色液（结晶紫染液、卢戈碘液、95﹪乙醇、稀释复红）、抗酸染色液（石碳酸复红、3﹪盐酸酒精、美蓝液）、蒸馏水、水槽、载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、镜头纸、吸水纸、火柴等。

第二节实验项目与方法一、革兰染色法1. 标本片的制作取洁净载玻片一张，用接种环取生理盐水各一环于载玻片两端，以无菌操作，用接种环分别挑取葡萄球菌和大肠埃希菌菌落少许涂于载玻片两端的生理盐水中，并研成均匀混浊的菌液(如系液体标本，则不需加生理盐水，可直接涂于载玻片上)。

置室温中自然干燥，必要时，可将标本面向上，在火焰上方不烤手的高度略加烘烤，但切不可将涂膜烤焦。

干燥后将载玻片的背面，以钟摆速度通过酒精灯火焰温度最高处3次，将细菌固定在载玻片上。

2. 染色步骤包括初染、媒染、脱色及复染（实验图3-1）。

（1）初染：将结晶紫染液滴加在已固定的标本片上，染色1分钟，水洗。

（2）媒染：滴加卢戈碘液媒染1分钟，水洗。

（3）脱色：滴加95%乙醇脱色，摇动标本片至无紫色脱下为止，约20秒，水洗。

（4）复染：滴加稀释复红复染30秒，水洗，用滤纸吸干，油镜观察。

3. 流程涂片、干燥、固定+结晶紫染液（1分钟）水洗卢戈氏碘液（1分钟）水洗 95％酒精脱色（约0.5～1分钟）水洗稀释复红染液（1分钟）水洗吸干后镜检4. 结果葡萄球菌染成紫色，为革兰阳性(G+)菌；大肠埃希菌染成红色,为革兰阴性(G-)菌。

实验图3-1 革兰染色法操作示意图a. 初染b. 媒染c. 脱色d. 复染5．油镜使用注意事项包括：①使用油镜时，不能使用倾斜关节，以免香柏油流下，污染载物台。

各种细菌的显微镜检查方法
常用的细菌的显微镜检查方法有以下几种：
1. 直接涂片法（直接镜检法）：将待检样品直接涂于玻片上，用染色剂染色后在显微镜下观察。

2. 阳性抽滤法：将待检样品与细菌特异性抗体结合，再通过滤膜抽出细菌，并用抗体标记荧光染料显色，然后在荧光显微镜下观察。

3. 厚滴片法：将待检样品与染色剂混合滴于玻片上，使细菌沉积在玻片上，然后用染色剂染色并在显微镜下观察。

4. 葡萄糖酸盐液滴片法：将待检样品滴入含有葡萄糖酸盐液的滴片中，使细菌生长并产生气泡，然后在显微镜下观察气泡内的细菌。

5. 培养法：将待检样品接种于适宜培养基上，通过细菌的生长和形态特点来进行检查和鉴定，如革兰氏染色、肌红蛋白酶试验、糖发酵试验等。

这些方法都可以通过显微镜观察细菌的形态、大小、结构以及染色反应等特征来进行细菌的检查和鉴定。

细菌的检查方法范文细菌检查是一种具有重要意义的实验室检查方法，它是通过检验样本中是否含有细菌来帮助医生判断疾病的病因和选择合适的治疗方案。

本文将介绍几种常见的细菌检查方法。

一、细菌培养细菌培养是一种最基本的细菌检查方法。

它通过将病原体样本（如血液、尿液等）接种于特定的培养基上，并提供适宜的环境条件（如温度、湿度等），使细菌能够繁殖生长。

在培养基上形成的细菌菌落能够用于鉴定细菌种类和进行药敏试验，从而帮助医生确定合适的抗生素治疗方案。

二、细菌染色细菌染色是一种常见的细菌检查方法，它通过使用染色剂将细菌染色，从而使其在显微镜下能够被观察到。

常用的细菌染色方法包括革兰氏染色和抗酸染色。

革兰氏染色用于区分革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌，而抗酸染色则用于检测酸性染料抗拒的细菌（如结核菌）。

三、细菌抗生素敏感性试验细菌抗生素敏感性试验是一种用于评估细菌对抗生素的敏感性的方法。

它常用于指导临床医生选择合适的抗生素治疗方案。

目前常用的细菌抗生素敏感性试验方法有药敏试验和聚合酶链反应法（PCR）等。

药敏试验通过将培养好的细菌与不同的抗生素接触，并观察细菌的生长情况，从而判断其对该抗生素的敏感性。

PCR则是一种利用特定引物扩增标靶序列的分子生物学技术，能够快速、准确地检测细菌是否对其中一种抗生素具有耐药性。

四、免疫学检测免疫学检测是一种通过检测体液或细胞中特定抗体或抗原的方法，可用于检测细菌感染。

常用的细菌免疫学检测方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、流式细胞术等。

这些方法能够检测到体液中与细菌感染相关的特定抗体或抗原，从而提供对细菌感染的诊断和判断。

五、细菌核酸检测细菌核酸检测是近年来广泛应用的一种细菌检测方法。

它通过从样本中提取细菌核酸，利用特定引物和核酸扩增技术（如PCR）进行扩增，从而检测和鉴定细菌的存在。

这种方法具有高度的敏感性和特异性，能够快速、准确地检测细菌感染。

细菌检查方法的选择通常由临床需要和实验室设备等因素决定。

简述革兰染色法的步骤结果及临床意义
革兰染色法是一种常用的细菌学检查方法，用于鉴别细菌的阴性和阳性性质。

其步骤包括初染、媒染、脱色和复染等四个步骤。

具体实验流程如下:
1. 取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用 marker 笔画一个小圈 (用来大致确定菌液滴的位置)。

涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2. 涂片：液体培养基:左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近 5cm 左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径 2mm 左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

3. 晾干：让涂片在空气中自然干燥。

4. 固定：让菌膜朝上，通过火焰 2-3 次固定 (以不烫手为宜)。

5. 染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。

6. 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

简单染色结束可观察细胞形态。

7. 媒染：滴加 1 滴碘液，染 1min，水洗。

8. 脱色：吸去残留水，连续滴加 95% 乙醇脱色 20-30s 至流出液无紫色，立即水洗。

9. 复染：滴加蕃红复染 3-5min，水洗。

至此，革兰氏染色结束。

结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

革兰染色法的临床意义在于:1. 鉴别细菌;2. 选择药物;3. 与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素是细菌感染性休克的一个重要因素。

革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。

该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。

革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。

本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。

一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。

1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。

待菌落完全干燥后，即可开始染色。

二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。

将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。

此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。

2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。

革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。

2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

这一步是为了去除多余的碘液。

2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。

乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。

2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

这一步是为了去除多余的乙醇。

2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。

碱性紫的作用是染色细菌细胞。

2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。

确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。

三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。

革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。

通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。

需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。

革兰氏染色试验步骤所需试剂和设备：1.菲尔水2.结晶紫3. Lugol液4.酒精5.活菌片6.显微镜7.显微制片玻片8.火焰消毒器实验步骤：1.取一枚无菌的显微制片玻片，并用菲尔水清洗干净，以保证玻片无污染。

2.取一滴无菌的水滴在玻片上，将一枚均匀悬浮的细菌样品加入水滴中。

细菌样品可以是培养物中的细菌液体培养物，也可以是细菌单克隆的菌落。

3.用火焰消毒器将显微镜取出并消毒。

将显微镜调整为100倍放大倍数，并将显微镜使用菲尔水沾湿。

4.用火焰消毒器将显微镜片摆放在火焰上加热，待其冷却后再用纸巾擦拭干净。

确保显微镜片无污染。

5.用取有活菌片的设备，在细菌悬液上取片，使细菌均匀分布于显微片的表面上。

待片上的细菌液体干燥后，将片置于火焰中加热数秒，以固定细菌在片上。

6.将固定后的细菌片依次按如下顺序进行染色:用菲尔水冲洗干净玻片上的细菌，倒入1-2滴的结晶紫液，静置1分钟。

7.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下结晶紫。

8. 倒入1-2滴的Lugol液，静置1分钟。

9. 用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下Lugol液。

10.迅速地将细菌片倒入酒精中，进行脱色。

脱色的时间应控制在10-20秒之间，直到从细菌片上冲洗下少量酒精。

11.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下酒精。

12.将细菌片放在火焰上加热数秒，使其干燥。

13.将细菌片挂在显微镜上，通过100倍的放大倍数观察细菌的形态和染色性质。

在革兰氏染色中，革兰氏阳性细菌呈紫色或紫黑色，而革兰氏阴性细菌呈红色或粉红色。

观察细菌形态和染色性质可以帮助确定细菌的分类。

一、显微镜
细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须借助显微镜放大后才能看到。

显微镜包括普通光学显微镜、电子显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和共聚焦显微镜等，适用于观察不同情况下的细菌形态或结构。

二、染色法
细菌体小半透明，经染色后才能观察较清楚。

染色法有多种，最常用的分类鉴别染色法是革兰染色法。

革兰染色法：
1.方法是固定的细菌标本先用碱性染料结晶紫初染，再加碘液媒染，使之生成结晶紫-碘复合物；此时不同细菌均被染成深紫色。

然后用95%乙醇处理，最后用稀释复红或沙黄复染。

2.结果判断可将细菌分为两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为革兰阳性菌，被乙醇脱色后复染成红色者为革兰阴性菌。

3.医学意义：①鉴别细菌：通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细菌，缩小范围，有助于进一步鉴定。

②选择药物参考：G+菌与G-菌对一些抗生素表现出不同的敏感性。

③与致病性有关：大多G+菌的致病物质是外毒素，而G-菌大多能产生内毒素，两种致病作用不同。

临床诊断学细菌染色标本的检查细菌染色标本在普通光学显微镜下可以观察细菌的形态、大小、排列、染色性、特殊结构（芽胞、荚膜、鞭毛）、异染颗粒等。

因为在接近中性的环境中细菌都带有负电荷，易与带正电荷的碱性染料结合，故常用碱性苯胺染料如美蓝、结晶紫、碱性复红等染色细菌。

细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的鉴定中应用最广，具有非常重要的作用。

细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→染色（媒染）→（脱色）→（复染）。

（一）常用染料用于细菌染色的染料，多为人工合成的含苯环的有机化合物，在其苯环上带有色基与助色基。

带有色基的苯环化合物一色原，虽然本身带色，但与被染物无亲和力而不能使之着色，助色基并不显色，但它本身能解离，解离后的染料可以与被染物结合生成盐类，使之着色。

根据助色基解离后的带电情况，可将染料分为碱性和酸性两大类。

此外，还有复合染料。

1.碱性染料：电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。

由于细菌的等电点在pH2～5之间，在碱性、中性、弱酸性的环境中细菌均带负电荷，易与带正电荷的染料结合而着色。

常用的染料有碱性复红、结晶紫、美蓝等。

2.酸性染料：电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。

一般情况下细菌都带有负电荷故不易着色。

如果降低菌液的pH使细菌带正电荷，则可被染色。

酸性染料通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。

常用的酸性染料有伊红、刚果红等。

3.复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。

这些染色常用于某些特殊的染色技术中。

（二）常用的染色方法在细菌感染标本的检查中，临床上常用的染色方法有革兰染色、抗酸染色和荧光染色。

1.单染色法：用一种染料将细菌和周围物体染成同一种颜色，称为单染色法。