安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件

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安捷伦液相色谱仪讲座 ppt课件

28
Agilent 1100 系列泵的使用须知
更好地使用泵
当泵头安装有冲洗附件时，由于该附件中也有密封垫，这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10％异丙醇，并将其流速调至约20滴/分钟使这溶液流过冲洗装置。
10％异丙醇有助于降低水的表面张力，并有抑菌作用。最好不要用其它溶剂代替。
3.清洗球形单向阀
31
4.更换密封垫，活塞杆
Question?
Agilent 1100 泵的日常维护
1.如何简单判断比例阀是否内漏？ 2.何时应该更换Purge阀内的过滤白头？ 3.泵压力不正常可能由那些原因引起？
32
Question?
Agilent 1100 系列泵的日常维护
1.如何简单判断比例阀是否内漏？设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5ml/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。 2.何时应该更换Purge阀内的过滤白头？使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速5ml/min，观察系统压力，如果超过10bar，应该更换。 3.泵压力不正常可能由那些原因引起？气泡，主动阀故障，出口阀故障，密封垫或柱塞杆磨损，渗漏或堵塞，比例阀故障，传感器故障，使用比例阀混合时盐浓度太高
33
Agilent 1100 自动进样器(G1313A)
34
Agilent 1100 自动进样器工作原理
35
Agilent 1100 自动进样器工作原理
36
Agilent 1100 自动进样器结构
37
Agilent 1100 自动进样器结构
38
Agilent 1100 自动进样器结构

安捷伦液相培训-新版软件使用(Chemstation-IR)PPT课件

• These changes will then be available when new sequences are acquired.
• Alternately, a new Master Method can be created.
• Updates to the Master method can occur automatically via the Sequence Parameters dialog box.
Sequence Template
• Stored in Chem32\1\Sequence. • Used to run a sequence, but not used for reprocessing.
Result Set
• Container or folder of data files, sequence method, report templates, log files, etc.. • May be created automatically by running a sequence or through self-assembly. • Sequence reprocessing is done using the Result Set.
1
2
Intelligent Reporting is only available with OpenLab.
5
Aganda
• OpenLAB CDS 设计架构设计介绍
6
Directory Structure of ChemStation Software
Instrument folders: data files, methods, sequence files, etc. Execution files and macros

HPLC安捷伦高效液相使用维护常见问题PPT课件

启动液相色谱仪器的流程
流动相冲洗系统
水相走A、D泵，有机相走B、C泵，可防止
缓冲盐析出
流动相配制后，先使用过滤装置过滤，然后超声15min，排除气泡干扰。流速 1ml/min，使用流动相冲洗系统至少30min，待基线平稳即可进行下一步操作。
进样测定具体操作如下：点击“序列”-“序列表”-输入相关信息确定（样品瓶、样品名称、方法名称-TEST、进样次数、进样量）-“开始序列”。待进样结束后，进行下一步操作。注意：在进样前，最好用100%甲醇进行洗针，以防进样针中残留的其它样品影响实验结果。
稳定性考察：取同一份供试品溶液，分别于不同时间进样测定（如0、2、4、6、8、10、12、 24h）。
HPLC色谱柱
数据处理系统
自动进样器色谱泵
检测器
废液
第5页/共42页
一些商品化仪器
流动相
脱气装置
四元泵
样品盘柱温箱检测器
第6页/共42页
溶剂
棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。
第7页/共42页
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源
打开泵、自动进样器、检测器电源，打开计算机启动 “1260联机工作站”，待
标准加样回收---已知浓度样品中加入药品
数据要求：在规定范围内，至少用9个测定结果
进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。
第27页/共42页
分析方法的建立及验证
绝对回收率=提取回收率/（1－基质效应），HPLC中基质效应为0 1.绝对回收率=提取回收率=萃取回收率，是用药品加血浆经萃取处理后的进样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值，一般来说，该比值不可能超过100%，能做到80%就不错了。以前国家对绝对提取率还有些要求，现在随着lc-ms的应用，最低定量限已经能做到很低，也就不需要再对绝对回收率提具体要求，只要相对回收率满意就可以。--生物样品：用于筛选提取溶剂，可以低但要稳定 2.相对回收率=方法学回收率，是血浆处理后的进样峰面积代入血浆标准曲线，计算所得浓度除以真实血样浓度.该比值在100%左右.一般要求高、中浓度点在15%以内，低浓度点可适当放宽。--内标的相对回收率值与绝对回收率要求类似 (1)举例：10ng A药加入1ml空白血浆（10ng/ml），经萃取处理后用0.5ml流动相复溶，进样所得峰面积8000;配制对照溶液（浓度10ng/0.5ml=20ng/ml），进样所得峰面积假设为10000.那么萃取回收率为8000/10000=80%.

《液相色谱仪》课件

液相色谱仪的组成部分
色谱柱
泵
液相色谱仪包含不同种类的色谱柱，如气相分离柱、反相柱等，每种柱子都有其特点和应用范围。
液相色谱仪中的泵用于提供恒定的流动相压力，保证样品的流动速度和分离效果。
进样器
液相色谱仪的进样器用于将样品引入色谱柱，保证准确的进样量和分离效果。
液相色谱仪的操作步骤
正确的操作步骤对于获得准确的分析结果非常重要。
1
样品的进样
2
样品的进样过程需要注意选择适当的进样
量和进样方式，以保证分析的准确性和重
现性。
3
流动相的选用
4
合适的流动相对于分离效果和分析速度至关重要，需要根据分析目的选择最佳的流
动相组合。
样品的制备
样品的制备是液相色谱仪分析的第一步，需要根据分析需求选择合适的样品制备方法。
色谱柱的选择和配置
液相色谱仪的发展趋势
液相色谱仪的技术不断进步，发展出新的分析方法和设备。液相色谱仪的未来发展方向包括更高的分离效果、更快的分析速度、更广泛的应用范围等。
液相色谱仪的结论
液相色谱仪具有许多优点和局限性，但在现代化学分析中具有重要的地位。通过对液相色谱仪的理解和应用，可以更好地提高分析效率和准确性。希望本课件能为大家了解液相色谱仪提供帮助。
《液相色谱仪》PPT课件
液相色谱仪是一种常用的分析仪器，用于化学分析、制药以及食品安全等行业。本课件将介绍液相色谱仪的工作原理、组成部分、操作步骤、数据分析、应用案例、发展趋势以及结论。
液相色谱仪的简介
液相色谱仪是一种常用的化学分析仪器，用于分离和检测混合物中的化合物。液相色谱仪通过液相进样、色谱柱分离、检测器检测等步骤实现分析。

安捷伦液相操作培训

色谱的优点（HPLC vs GC）
分离机理
HPLC •固定相和流动相都参与
检测器
HPLC •大多数常见的紫外-可见光检测器 •宽范围的非破坏性的检测器 •三维检测器 •灵敏度达到f克（取决于检测器） GC •通常使用FID检测器，常用于有机化合物
GC •流动相只作为样品的载体
HPLC分类
• 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) • 气相色谱 Gas Chromatography (GC)
• 薄层色谱
Thin-Layer Chromatography (TLC) • 毛细管电泳 Capillary Electrophoresis(CE)
安捷伦液相色谱操作培训
---基础知识
杨毅青Biblioteka 第一部分色谱基础知识色谱的起源
色谱的定义
• 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术 • 流动相：携带样品流过整个系统的流体 • 固定相：静止不动的一相，色谱柱
色谱是一种分离技术色谱的主要目的是对混合物中的
目标物分离和定量
色谱的分类
色谱的优点（HPLC vs GC）
样品挥发性
HPLC •不需要具有挥发性 •样品必须溶解于流动相中 GC •样品必须具有挥发性
样品极性
HPLC •既能分离极性化合物也能分离非极性化合物 GC •样品是极性或非极性
色谱的优点（HPLC vs GC）
样品的热不稳定性
HPLC •必须在室温或室温以下分析 GC •样品必须能够通过高温进样口和色谱柱
色谱类型固定相流动相主要适用范围
正相色谱

液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦ppt课件

四、质谱系统的日常维护及故障排除

2.清洗电喷雾雾化室将仪器设置为standby,待离子源温度冷却后，用50%异丙醇-水溶液浸湿无尘布，擦拭弧形电极和喷雾挡盖以及周围。（切禁直接对着毛细管末端冲洗，压力会增大，造成涡轮泵负载急剧增加，容易损坏涡轮泵）
四、质谱系统的日常维护及故障排除
3.打开气镇阀必须每周逆时针拧开气镇阀到底，维持20-30min，把油气分离器内多余的泵油放回泵内，然后顺时拧紧，关闭气镇阀。关机前务必确认气镇阀处于关闭状态，否则泵油可能因此回流到质谱的真空腔内，损坏仪器
流动相
•流动相每两天至少更换
过膜处理
缓冲盐的使用
1
•LC/MS中不能使用磷酸盐、硼酸盐、硫酸盐、三氟乙酸、三乙胺，易残留，会形成强离子对，产生离子抑制，降低灵敏度
2
•溶剂的截止波长：乙腈 /190nm,甲醇/210nm, 水/190nm.一般分析时样品检测波长应至少大于所用溶剂的截止波长20nm 以上，否则背景较高。
3.子离子扫描，使用优化好的 fragmentor,选择定量离子，优化碰撞能量，优化子离子的响应
1.MS2 Scan 确定待测物的分子离子
2.MS2 SIM
优化待测物的fragmentor
3. Product Ion Scan
确定定性定量离子
THANK
YOU
SUCCESS
2019/5/6
四、故障排除
信号低质量准确度差雾化器出口是小液滴而不喷雾
1.确保雾化气压设定足够高以利液相色谱流动相气化 2.检查雾化器中针头的位置 3停止溶剂流动，卸下雾化装置，检查雾化器末端是否损坏
无液流
1.检查溶液化学性质，确定样品溶剂是合适的 2.保证用新样品，并且正确存储样品 3.检查雾化器条件 4.清洁毛细管入口 5.检查毛细管有无损坏和污染

安捷伦液相基本操作PPT课件

常见原因是流动相脏，尤其是水相。要求使用超纯水，最多两天就换
常见色谱故障----双峰
可能原因：a、柱头塌陷或柱床运动 b、柱前滤芯堵塞 c、组分共流出 d、样品量过大 f、进样器的进样流路存在分叉流路
第26页/共30页
常见色谱故障----峰扩展
可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷 b、进样体积过大 c、流动相粘度大
分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多
倍。
第4页/共30页
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。 ⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
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二.Agilent液相色谱仪基本操作
仪器方法设置
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仪器方法设置
第14页/共30页
工作站使用
单次样品：样品命名
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工作站使用
序列样品：命名与序列表设置
第16页/共30页
打开仪器1脱机
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数据分析
数据文件夹
序列样品数据单次样品数据
数据分析色谱图
样品数据色谱图编辑
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流动相瓶
排气阀
电源开关
二元泵
自动进样器
检测器
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柱温箱
进入工作站
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主界面
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仪器方法设置
编辑完整方法
方法信息仪器/采集数据分析运行时选项表
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仪器方法设置
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安捷伦液相色谱仪PPT优秀课件

3
仪器参数设定
•开始编辑完整方法 •泵参数设定自动进样器设定 •柱温箱、检测器设定
2021/6/3
4
素据分析 •双击仪器一脱机 •选择调用数据 •积分 •打印报告
2021/6/3
5
关机
•关机前，先关灯 •退出工作站，依次关其它模块电源 •关闭计算机
2021/6/3
6
关于高效液相操作的相关知识
出现无规律色谱峰可能是一些残留在柱中的物质被洗脱出来。
保留时间不重复原因可能是柱内条件变化，流动相洗脱不完全，柱温变化等。
2021/6/3
12
谢集整理而来，供大家参考，
感谢您的关注！
流动相
1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；
2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；
3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相； A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
太原市医达维科医药科技开发有限公司
高效液相使用方法
2021/6/3
1
使用方法
进样前准备
开机
仪器参数设定数据分析告打印数据报告关机
HPLC使用方法
2021/6/3
2
开机
• 打开电脑 • 打开液相各模板电源（等待仪器
自检） • 双击仪器一联机 • 脱气（旋开冲气阀----设计流速）
2021/6/3
2021/6/3
10
关于高效液相操作可能出现情况分析

安捷伦液相色谱培训教材

第32页/共81页
第33页/共81页
意味着本次对该部分内容不进行编辑，使用原方法中设置的参数。还有，仪器参数设置——四元泵的参数设置。1、停止时间：是仪器停止采集数据的时间，并不是泵停止工作的时间。本例中工作站仅采集0～10分钟的色谱图，10分钟后，不再采集数据，但泵仍然继续工作，向系统提供流动相。使用自动进样器
第46页/共81页
特别是在VWD设置中更不可选特殊设置中勾选“当关灯时可进行分析”，不然我们的实验操作就没有意义了。这是为什么，大家一想就知道啦。还有，在运行时选项表中要注意的问题是，除非有特殊要求，一般不建议选择“保存GLP数据”、“将方法和数据保存在一起”选项，GLP
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数据是最原始的数据，不允许改动。一般情况下选择这两种选项只是浪费硬盘空间而已。泵的设置方面，特别是梯度洗脱设置中建议先预览一下，看看是不是我们想要的突变或浙变效果。数据分析中重点在于图谱的处理，以及如何建立校正表。有时我们得到的色谱图并不很理想，
第12页/共81页
溶剂切换阀，则两个泵头可分别控制两种溶剂，类似四元比例阀，但并不完全一样，只能同时混合两种溶剂，不可实现四种溶剂的同时使用。
二元泵为高压泵，为后混合式，精度更高，而且由于为高压混合，产生的气泡也更少，所以价格也比四元泵贵得多。四元泵为低压泵，流速稳定性相对较差，低压混合容易产生气泡，在实验中常会遇到这样的问题，多元
第25页/共81页
这里还有一点得注意的是流通池的后压力非常重要，一定要使用适当出口连接管，出口管线要使用专用废液管为系统提供适当的后压，不得私自将废液管截短，以防气泡进入流通池。但如果压力过高，流通池的石英窗片可能破裂。
在这里我要说的是，对安捷伦1200高效液相色谱仪正确的操作方法和定期的维护保养的是很重要的。

安捷伦液相操作 PPT课件

1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口；
2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据，并保证能够在
Online Signal窗口中观测到色谱信号；
3.进样后，色谱图上出现基线时，扫描空白吸收光谱在Instrument菜单下，选择More VWD中的Blank
Scan
4.色谱图上出现色谱峰时，扫描样品吸收光谱
2019/9/12
Slide 2
第三天
上午：1 个性化报告的设定与编辑 2 工作站故障诊断功能的应用 3 结业考试
结业午餐
下午：1 化学工作站的重新安装、配置及启动(选修) 2 发结业证 3 自由练习、讨论
2019/9/12
Slide 3
第一章化学工作站各个工作界面介绍
2019/9/12
Slide 4
HPLC 1100 ChemStation 高级操作培训
2019年9月12 日
授课教师
纪学海
Update: 2005-3-21
Slide 1
HPLC 1100 Advance操作培训日程安排
第一天第二天
上午： 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍
3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置
Slide 19
标准自动进样器的程序进样
2019/9/12
Slide 20
Wellplate自动进样器参数
2019/9/12
Slide 21
柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区安装切换阀可以进行柱切换可以容纳30 cm长色谱柱安装柱识别可以自动记录进样次数

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安捷伦科技液相色谱基本维护故障诊断交流讲座
1100 HPLC Maintenance & Troubleshooting
Agilent 1100系列HPLC 工作原理日常维护故障诊断技术支持＆服务流程
安捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部
2
1100 HPLC Maintenance & Troubleshooting
13
Agilent 1100 四元泵 (G1311A)
14
Agilent 1100 四元泵工作原理
15
Agilent 1100 泵
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
16
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
Pump head screws
17
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
Agilent 1100系列密封垫冲洗－Seal Wash ( 可选)
Washer

Seal

Support seal assembly

当流动相中盐浓度>0.01M时，可以减小密封垫的磨损。对于Agilent 1100系列泵为可选件。用10%异丙醇水溶液冲洗
20
带有Seal Wash的泵头结构图
脱气机的操作：操作泵之前，用至少两个体积（标准脱气
机30ml，对微脱气机10ml）冲洗真空脱气机，特别是当泵关闭了一段时间后（例如，过夜），以及在通道中使用挥发性混合溶剂时。
标准脱气机（G1322A).
标准脱气机每个通道体积为12ml 建议排液操作：5ml/min 排液6min以上。
微脱气机（G1379A).
10
Agilent 1100 在线脱气机日常维护,故障诊断
检查溶剂过滤器－拧开脱气机出口或比例阀入口管线，并使液面高于出口30cm此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。－查看过滤器是否变色．－临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常．清洁溶剂过滤器将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。先用水冲洗残留之溶剂，然后将过滤器放在装有浓硝酸（35％）的烧杯里浸一小时。用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器。建议不使用超声波清洗机清洗。将过滤器重新装好。
1.在线脱气机 (G1322A/G1379A)
2. 四元／二元/单元泵 (G1311A/G1312A/G1310A) 3. 自动进样器 (G1313A) 4. 二极管阵列检测器 (G1315B)
5. 可变波长紫外检测器（G1314A)
3
Agilent 1100系列HPLC
4
Agilent 1100 在线脱气机-在线脱气机
(G1322A/G1379A)
5
Agilent 1100 在线脱气机-在线脱气机
(G1322A/G1379A)
工作原理
6
Agilent 1100 在线脱气机-在线脱气机
何时需要使用Agilent 1100在线脱气机
(G1322A/G1379A)
7
Agilent 1100 在线脱气机-在线脱气机 (G1322A/G1379A)
9
Agilent 1100 在线脱气机日常维护,故障诊断
防止堵塞溶剂过滤器及真空腔污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影响泵的运行。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液 (pH 4 至 7) 中尤其如此。下列建议将会延长溶剂过滤器的使用寿命并维持泵的运行。使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或盐缓冲液（建议不超过两天）。如果应用许可，在溶剂中加人0.0001－0.001 M的叠氮化钠。避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。用氩气置换流动相上层的空气。长期不用时用水清洗水溶液通道并置换为甲醇
21
Agilent 四元／二元/单元泵日常维护
如何更换溶剂出口过滤芯
22
Agilent 四元／二元/单元泵日常维护
严重污染的溶剂出口过滤芯
23
Agilent 四元／二元/单元泵日常维护
如何更换活塞杆密封圈
24
Agilent 四元／二元/单元泵日常维护
微脱每个通道体积为1ml
建议排液操作：2ml/min 排液5min。
8
Agilent 1100 在线脱气机-在线脱气机
使用Agilent 1100 在线脱气机须知溶剂
用棕色玻璃瓶装水溶液，可以避免藻类的生长。过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。
(G1322A/G1379A)
避免使用下述可腐蚀钢铁的溶剂：碱金属卤化物及其酸溶液(如：碘化锂、氯化钾等)。高浓度无机酸，如硝酸、硫酸. 可能含有过氧化物的色谱纯醚(如THF、二氧六环、二丙基乙醚)。这些在使用前必须用干燥氧化铝过滤除去过氧化物。含强络合剂的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。四氯化碳与2-异丙醇或四氢呋喃的混合液。
18
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
new style Cartridge 8
7
old style
3 2
Outlet Ball Valve
1
4
5
Purge Valve
6
Active Inlet Valve
(common to all except 1050)
19
Agilent瓶，每三个月至少清洗一次。
注意：不要使用没有安装溶剂过滤器的系统．可能会严重堵塞系统
11
Agilent 1100 在线脱气机日常维护
Question?
1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？ 2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？ 3.如何防止及解决脱气机腔体或溶剂过滤头堵塞？
12
Agilent 1100 在线脱气机日常维护
Question?
1.如何简单判断脱气机脱气是否正常？打开Purge阀，设定泵的流速2ml/min，提起当前所使用溶剂瓶内的溶剂过滤头，使之脱离液面一小段时间，此时溶剂传送管内会产生一小段气泡，放下过滤头，让此段气泡通过脱气机，如果脱气机正常，气泡应消失或缩小。 2.如何简单判断脱气机腔体或溶剂过滤头是否堵塞？关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。

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