高中生物学考选考微专题复习PCR技术

高三生物pcr知识点PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，被广泛应用于基因检测、疾病诊断、DNA指纹分析等领域。

高三生物学生需要掌握PCR的相关知识点，下面将详细介绍PCR的原理、步骤和应用。

一、PCR原理PCR是一种体外的DNA复制技术，通过在一定温度条件下，利用酶的催化作用使DNA的复制反应反复进行。

PCR主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。

1. 变性PCR反应开始时，将反应体系升温至94-96℃，使DNA双链解链成单链。

这一步骤中，DNA双链断裂，并且其中的氢键被破坏，使得DNA单链解开，形成两个模板链。

2. 退火在变性步骤完成后，将温度降至50-65℃，引入引物（寡核苷酸引物，即引导DNA复制的短链DNA）来与特定DNA序列互补结合。

引物结合于DNA模板的3'端，以提供起始点供DNA合成酶进行反应。

3. 延伸将温度调节至72℃，引入高温下活性较好的DNA合成酶（如Taq聚合酶），使DNA在引物的引导下进行延伸。

在这个步骤中，DNA合成酶从引物的3'端开始向5'端进行合成，合成一个新的DNA链。

通过不断重复这三个步骤，即可获得大量特定DNA片段的复制产物。

二、PCR步骤PCR通常需要以下步骤：1. 反应体系的制备将引物、DNA模板、dNTPs（四个脱氧核苷酸）、聚合酶、缓冲液等混合制备反应体系。

2. 变性升温至94-96℃，使DNA双链解链成单链。

3. 退火降温至50-65℃，引入引物与模板DNA互补结合。

4. 延伸升温至72℃，引入聚合酶使DNA链延伸。

5. 反应周期重复2-4步骤多次，通常需要进行25-35个循环，以获得足够的产物。

6. 终止和保存制备PCR产物后，通常会升温至70-80℃，使聚合酶停止合成反应，并保存PCR产物。

三、PCR应用PCR技术在生物学研究和医学诊断中具有广泛的应用。

1. 基因检测PCR可以被用于检测和分析DNA样本中的特定基因，以了解其表达和突变情况。

考点2PCR技术的基本操作和应用1．PCR原理2．PCR反应的过程及结果(1)PCR反应过程①变性：当温度上升到90_℃以上时，双链DNA解聚为单链，(如下图)。

②复性：系统温度下降至50_℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，(如下图)。

③延伸：当系统温度上升至72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，(如下图)。

(2)结果①PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。

②两引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。

特别提醒1.DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从5′端开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。

2．DNA分子复制的人工控制解开螺旋：在80～100 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。

恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。

复制条件：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶和两种引物。

反应场所：PCR仪。

PCR技术中的引物：①含义：引物是一小段单链DNA或RNA分子。

②作用：为DNA聚合酶提供合成的3′端起点。

③种类：扩增一个DNA分子需要2种引物。

④数目：引物数目等于新合成的DNA子链数目。

⑤与DNA母链的关系：两种引物分别与DNA母链的3′端通过碱基互补配对结合。

PCR技术过程的考查(2013·江苏，22改编)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。

下列相关叙述正确的是()。

①设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列②用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列③PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶④一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞A．①②B．①③C．②③D．②④解析本题考查基因工程中基因表达载体的构建、受体细胞的选择以及PCR技术等内容，意在考查考生的综合运用能力。

高中生物pcr技术知识点
PCR高中生物中，PCR技术是一种重要的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。

下面是关于PCR技术的一些基本知识点：PCR是一种体外扩增DNA的技术，通过模拟细胞内的DNA复制过程，在试管中加入模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶和缓冲液等成分，通过多次循环加热和退火，将模板DNA扩增数百万倍。

PCR反应需要遵循一定的条件，如合适的温度、时间、离子浓度等，其中最重要的是退火温度，它决定了PCR的特异性和产量。

PCR反应中使用的引物是短小的寡核苷酸序列，与模板DNA的特定序列互补，用于引导DNA聚合酶合成新的DNA链。

PCR反应中使用的DNA聚合酶具有耐热性，可以在高温下存活并继续合成新的DNA链。

PCR反应中使用的缓冲液是特制的，可以提供适宜的pH值和离子强度，保证反应的稳定进行。

PCR技术可以用于许多生物学研究，如基因克隆、测序、表达分析等。

PCR技术需要严格控制污染，因为任何外来DNA的污染都可能导致PCR的假阳性结果。

PCR技术需要遵循伦理原则，如保护人类基因组和生物多样性等。

。
图2中4次PCR对引物的使用不完全相同，如PCR1选择引物
A和B，PCR2选引物C和D，请问PCR3和PCR4应分别如何
选择引物： 不使用引物、
引物A和D 。
（2）该技术生产出来的蛋白A应属于 蛋白质 工程。
图1
图2
引物
扩增 特异性
扩增 高效性
发夹结构
二聚体
关于Taq酶（热稳定DNA聚合酶）
（1）从水生栖热菌（生存环境温度可高达80℃)中分离出 来具有热稳定的DNA聚合酶。 （2）作用原理：将脱氧核苷酸连接到引物的3’端，形成 磷酸二酯键。 （3）真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活， 因此PCR反应缓冲液中一般要加Mg2+。
关于PCR引物设计原则
PCR的首要任务就是引物设计。引物设 计的好坏，直接影响了PCR的结果。成 功的PCR反应既要高效，又要特异性扩 ①增引产物物长。度要适宜，通常为20-30个核苷酸
②引物GC含量要适宜，一般为45-55% ③退火温度要适宜 ④引物自身及引物之间不应存在互补序列
⑤引物5'端可以修饰，3'端不可修饰
3-5：不同循环次数的 PCR产物
6：清水
缺点：只能作定性分析，不能准确定量。易造成污染出现假阳性， 使其应用受到限制。
例题：利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，下列有关“DNA片段 的扩增及电泳鉴定”实验的相关叙述，错误的是 A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高
B. 设计引物时需考虑引物的长度、碱基序列和GC含量
√C. Taq酶的浓度过低会引起非特异性扩增产物量的增多
D. 目标DNA的获得取决于引物在模板DNA上的结合位置

标记PCR病毒分子杂交胚胎发育电泳穆利斯( K.B.Mullis ) 1944～？由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR 技术的真正诞生。

到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。

1973 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

不同细胞的细胞周期不同生物细胞需要的时间PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

PCR的反应体系DNA模板原料∶ dNTP（dATP、dGTP、dCTP、TTP）;酶∶ Taq聚合酶（嗜热细菌中分离得到）引物∶（单链DNA片段）Mg2+（维持酶活性所必需）PCR缓冲液∶维持pH，保护Taq酶其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量（或浓度）可根据实验调整，以上表格只提供大致参考值。

PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

pcr扩增技术知识点生物高考PCR扩增技术是生物学中一种非常重要的方法，广泛应用于基因工程、基因检测以及疾病诊断等领域。

它具有高灵敏度、高特异性和高效性等优点，被认为是现代生命科学研究的重要工具之一。

PCR扩增技术是通过体外合成DNA的方法，可以在几小时内从少量DNA样品中扩增大量特定DNA序列。

其原理基于DNA的复制过程，即在一系列循环反应中，通过DNA聚合酶酶的催化作用，将DNA模板分离成两条单链，然后每一条单链作为模板再次合成新的DNA链。

这个过程重复多次，从而扩增出大量目标DNA序列。

PCR扩增技术的成功离不开三个基本核心元素：DNA模板、引物和酶。

DNA模板是待扩增的目标DNA序列，可以是生物体中的基因序列，也可以是已知的DNA片段。

引物是专门设计的短寡核苷酸序列，与目标DNA序列的两端互补，通过引物与目标DNA的特异性杂交，作为DNA 聚合酶的起始位置。

DNA聚合酶则是PCR反应中最关键的酶，通过催化链式扩增反应。

PCR扩增技术分为三个步骤：变性、退火和延伸。

变性步骤是将PCR反应体系中的DNA模板加热到95℃左右的高温，使其两条链分离为两条单链。

退火步骤是将反应体系温度降至较低的退火温度，使引物与目标DNA靶序列杂交。

延伸步骤是将反应体系温度升高，使DNA聚合酶在引物的引导下延伸DNA链。

PCR扩增技术的应用广泛，其中最重要的应用之一是基因检测。

通过PCR扩增技术，可以在极短的时间内从微量样品中扩增出疾病相关基因的片段，从而对疾病进行准确、快速的诊断。

例如，PCR技术被广泛应用于新冠病毒检测，通过扩增病毒基因片段来实现病毒的早期诊断。

此外，PCR扩增技术还可以应用于基因工程领域。

在基因工程中，科学家经常需要将某一外源基因导入到目标生物体中，以研究基因的功能或改善生物体的性状。

而PCR扩增技术可以快速扩增出外源基因的DNA片段，然后将其插入到质粒等载体上，再转入到目标生物体中，实现基因的导入。

pcr技术高考知识点PCR(聚合酶链反应)技术是一种在生物学领域广泛应用的技术，其重要性不言而喻。

下面将从基本原理、步骤、应用领域和发展前景等方面总结PCR技术的高考知识点。

一、基本原理PCR技术利用DNA聚合酶酶和少量的DNA模板，在适宜的温度条件下进行连续的DNA链反应，从而在短时间内扩增目标DNA序列。

其基本原理包括三个步骤：变性、退火和延伸。

1. 变性：将待扩增的DNA样本加热至高温，使其双链DNA解链成两条单链，得到模板DNA。

2. 退火：降温使引物与模板DNA序列互补结合，形成引物-模板复合物。

3. 延伸：在适宜的温度下加入DNA聚合酶和四种核苷酸，使DNA聚合酶沿引物分别向3'端延伸，合成新的DNA链。

二、PCR步骤标准PCR反应通常包括三个步骤：预变性、循环反应和最终延伸。

1. 预变性：在PCR反应开始之前，将反应体系加热到95°C，使所有DNA双链变性。

2. 循环反应：PCR反应周期通常为30~40个循环，每个循环包括三个步骤：变性、退火和延伸。

这些循环依次进行，逐渐扩增目标DNA 序列。

3. 最终延伸：在最后一个循环的最后，将反应体系保持在延伸温度下一段时间，以确保所有未完成的DNA链都得到完全延伸。

三、PCR应用领域PCR技术在生物学和医学研究中有着广泛的应用。

以下是几个常见的应用领域：1. 基因检测：PCR技术可用于检测特定基因的突变、拷贝数变异和染色体重排等。

例如，PCR可以用于检测遗传病、癌症和传染病等。

2. DNA克隆：PCR技术可用于快速扩增DNA片段，为DNA克隆提供模板。

通过PCR技术，科学家可以扩增特定的基因片段，从而进行进一步的研究。

3. DNA测序：PCR技术可用于扩增需要测序的DNA片段，从而提供足够的DNA模板。

这样，科学家可以对该DNA片段进行测序，以研究其碱基序列。

4. DNA指纹：PCR技术可用于DNA指纹分析，用于刑事侦查、亲子鉴定和个体识别等。

pcr技术高中生物知识点PCR技术是一项利用DNA聚合酶(chain reaction)的技术，它可以将少量的DNA复制成足够多的份，使其可以被研究和分析。

以下是PCR技术的高中生物知识点：1. PCR的意义：PCR技术是分子生物学重要的技术，它可以用来进行基因克隆、基因重组、突变分析、DNA测序、生物物种鉴定等研究。

2. PCR的原理：PCR技术是一种利用DNA聚合酶进行的指数级扩增的技术，它包括三个步骤：变性、退火和扩增。

在变性步骤中，将DNA双链分离为两条单链。

在退火步骤中，引物结合到模板上面，产生凝固复合物。

在扩增步骤中，DNA聚合酶按照引物造成的模板片段进行扩增。

3. PCR的应用：PCR技术已广泛应用于分子生物学和生物技术领域，如生物医学、植物育种和基础研究。

4. PCR的基本流程：PCR技术的基本流程包括DNA提取，PCR反应，PCR产物测定和PCR产物分析。

其中，DNA提取是将目的DNA从样品中提取出来；PCR反应是PCR扩增的主要过程；PCR产物测定是利用电泳技术等方法对PCR 扩增产物进行检测；PCR产物分析则是对PCR扩增产物进行测序和分析。

5. PCR反应中的引物设计：PCR的引物设计包括引物的长度、引物的序列、引物的熔点和引物的特异性等方面，是PCR反应成功的关键之一。

6. PCR扩增产物的检测与分析：PCR扩增产物的检测和分析主要包括电泳和测序两种方法，电泳是将PCR扩增产物分离并检测，而测序则可以确定PCR扩增产物的序列。

7. PCR的优缺点：PCR技术具有灵敏度高、分辨率高、快速、简便等优点，但同时也存在一些缺点，如易产生假阳性结果，易出现偏差等。

以上就是PCR技术的高中生物知识点，希望能对你有所帮助。

高考生物pcr技术知识点PCR技术在生物学领域中扮演着重要的角色，其在高考生物考试中常常作为一个重点考察内容。

本文将从PCR技术的原理、应用和前景三个方面探讨PCR技术的知识点。

PCR（聚合酶链式反应，Polymerase Chain Reaction）技术是一种体外的DNA扩增方法，通过模拟体内DNA的复制过程，能在非细胞状态下扩增特定DNA片段，从而大大提高了目标序列的浓度。

PCR技术主要包括三个步骤：变性、回温和延伸。

首先是变性步骤。

PCR反应的第一步是将DNA模板变性，这通常通过加热样本到94-98摄氏度来实现。

高温可以使DNA中的双链断裂成两股单链，并释放出目标序列。

这个步骤通常在PCR反应的开始阶段进行。

接下来是回温步骤。

在此步骤中，反应温度降至50-65摄氏度。

在这一温度下，引物（primers）会与目标DNA序列互补配对，从而确定了扩增的起始点。

引物是PCR反应中的两个短链DNA片段，通过设计引物的序列，可以选择性地扩增目标DNA。

最后是延伸步骤。

在此步骤中，温度升高至72摄氏度，此时热稳定DNA聚合酶（例如Taq DNA polymerase）开始复制DNA。

DNA聚合酶能够在酵素活性范围内无限制复制目标DNA序列，因此PCR技术扩增效果显著。

此外，引物在延伸过程中会继续结合到目标DNA的互补链上，形成新的DNA双链。

延伸步骤是PCR反应中最常出现的步骤，也是最主要的扩增过程。

PCR技术的应用非常广泛。

首先是基因检测和诊断方面。

PCR技术可以检测病原体、突变基因等，并用于疾病的早期诊断和预测。

其次是基因克隆。

PCR技术可以扩增特定的DNA片段，作为基因克隆的起始材料。

此外，PCR技术还常用于DNA测序、DNA指纹鉴定以及转基因作物的检测等领域。

PCR技术的前景也非常广阔。

随着生物技术和基因工程的发展，PCR技术将更加普及和成熟。

基于PCR技术的新方法和新应用将不断涌现。

比如，近年来流行的数字PCR（Digital PCR）技术，它在PCR技术的基础上实现了目标DNA的精准计数，有望在液体活检、胚胎基因组学和癌症诊断等领域有重要的应用。

高二生物pcr技术知识点PCR（聚合酶链反应）是一种在生物学领域广泛应用的技术，它能够通过体外扩增DNA特定片段，为研究者提供了强大的工具。

本文将介绍高二生物学中关于PCR技术的知识点，帮助学生更好地理解和掌握该技术的原理和应用。

第一部分：PCR技术的原理PCR技术基于DNA的复制过程，通过在体外模拟DNA的自然复制过程来扩增目标DNA片段。

其原理可以分为三个重要步骤：变性、退火和延伸。

1. 变性：PCR反应开始时，将待扩增的DNA目标加热至95摄氏度，使其双链DNA解旋成两条单链。

这一步骤被称为变性。

2. 退火：降温时，引入两条单链DNA上的引物（寡核苷酸序列），并使其与目标序列的两端互补结合。

引物的设计需要确保与目标序列的两端完全互补。

这一步骤被称为退火。

3. 延伸：在退火的条件下，酶DNA聚合酶（Taq聚合酶）将通过添加缺失的碱基，将引物延伸至DNA目标序列的3'端。

这个过程重复多次，从而扩增目标序列。

这一步骤被称为延伸。

第二部分：PCR技术的应用PCR技术作为分子生物学中一项重要的工具，被广泛应用于各个领域，如疾病诊断、基因表达分析和DNA指纹鉴定等。

1. 疾病诊断：PCR技术可以在病人的体液（如血液或尿液）中扩增潜在病原体的DNA，并通过特定的引物检测其存在，从而帮助医生进行疾病的早期诊断。

2. 基因表达分析：PCR技术可以用于分析目标基因在不同组织、不同发育阶段或不同环境条件下的表达水平。

通过比较PCR扩增产物的数量和大小，可以了解基因表达是否受到调控，并进一步研究其生物学功能。

3. DNA指纹鉴定：PCR技术在法医学和亲子鉴定中发挥着重要的作用。

通过扩增特定位点的DNA片段，可以从不同个体中鉴定出独特的DNA指纹，以确定个体的身份或亲子关系。

第三部分：PCR技术的优点和注意事项PCR技术相比传统的DNA扩增方法有许多优点，但也需要注意一些细节，以确保结果的准确性。

1. 优点：- 高度敏感和特异性：PCR技术可以扩增极少数量的DNA分子，并能够区分不同的DNA序列。

生物高考知识点pcrPCR（聚合酶链反应）是一种重要的生物技术手段，广泛应用于生物学、医学等领域。

本文将从PCR的原理、步骤、应用以及未来发展等方面进行论述。

一、PCR的原理PCR是一种体外的DNA扩增技术，通过合成DNA引物和DNA聚合酶的作用，使得目标DNA在体外进行连续的复制，从而快速产生大量目标DNA。

二、PCR的步骤1. 反应体系的配制：PCR反应需要DNA模板、引物、核苷酸、缓冲液和DNA聚合酶等组成的反应体系。

2. Denaturation（变性）：将反应体系加热至90-95摄氏度，使DNA双链解开成为两条单链。

3. Annealing（退火）：将反应体系温度降低至50-65摄氏度，使引物与目标DNA序列互相结合。

4. Extension（延伸）：将反应体系温度回升至72摄氏度，DNA聚合酶沿着引物开始复制目标DNA序列。

5. 循环反应：通过循环反复进行变性、退火和延伸，每一轮循环都会产生两倍数量的目标DNA。

三、PCR的应用1. 分子诊断：PCR可以检测病原体的存在，如检测病毒、细菌等致病微生物，对疾病的早期诊断具有重要意义。

2. DNA指纹鉴定：PCR可以扩增DNA片段，通过比较不同个体的DNA带型，进行个体识别、亲子鉴定等方面的应用。

3. 基因工程：PCR可以扩增目标基因，从而进行基因克隆、基因表达、基因敲除等研究。

4. 古生物学研究：PCR可以从古生物化石中提取DNA，对古代生物进行鉴定和研究，揭示生物进化和地球历史。

四、PCR的发展趋势1. 实时定量PCR：利用荧光标记的探针实时监测PCR反应过程，可以实现定量检测和动态分析。

2. 微流控PCR：利用微流控芯片技术，将PCR反应在微型通道中进行，实现PCR的自动化、高通量和快速检测。

3. 数字PCR：通过稀释DNA模板，使每个液滴只包含一个DNA 分子，实现PCR反应的数目计数和精确定量。

4. 多重PCR：同时扩增多个目标序列，提高实验效率和节省样本。

高中生物有关pcr技术的题目PCR技术在现代生物学和医学领域中扮演着至关重要的角色。

PCR （聚合酶链反应）是一种体外扩增DNA的方法，通过在细胞外模拟DNA 复制的过程，在短时间内大量制备特定 DNA 片段。

因此，PCR 技术已成为研究基因表达、遗传疾病和法医学中常用的一种手段。

本文将详细介绍PCR技术的原理、步骤以及应用。

一、PCR技术的原理PCR技术的原理是模拟细胞内DNA复制的过程，通过不断复制来产生大量的DNA。

PCR主要由三个步骤组成：变性、退火和延伸。

首先，DNA双链在高温下被变性，使其分离成两条单链。

然后，在低温下，引物（primer）与模板DNA相互结合，作为PCR扩增的起始。

最后，在适当的温度下，DNA聚合酶会合成新的DNA链，其中DNA聚合酶是从热泛滥菌（Thermus aquaticus）中获得的热稳定酶。

二、PCR技术的步骤1. 变性使用高温（通常为95℃）使DNA的双链断裂，使其变为两条单链。

同时，热稳定的DNA聚合酶保持活性。

2. 引物结合在降温到适宜的温度（通常为50-65℃）后，引物与模板DNA的特定序列互相结合。

引物通常是由DNA合成的短链，其主要作用是为DNA聚合酶提供一个起始点。

3. DNA链合成温度升高到适宜的温度（通常为72℃），DNA聚合酶开始合成新的DNA链。

DNA聚合酶会在引物的基础上合成新的DNA链，从而得到与模板DNA相同的序列。

以上步骤反复循环多次，每个循环都会使DNA的量增加一倍。

因此，经过若干个循环，可以得到大量的目标DNA序列。

三、PCR技术的应用PCR技术的应用非常广泛，包括以下几个方面：1. 基因分型PCR技术可以根据个体的基因序列差异来进行基因分型。

通过PCR扩增特定的基因片段，然后通过分析扩增产物的大小、序列差异等，可以准确地分辨个体之间的遗传差异。

2. DNA指纹PCR技术可以应用于法医学中的DNA指纹检测。

通过扩增特定的微卫星位点或STR位点，可以分析个体之间的DNA序列差异，从而进行身份确认和亲子关系鉴定等。

某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水 蛭素基因中的特定位点引入特定突变， 使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为 AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为 AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝 血活性。原理见图。 2.中引物2或引物3设计的要求是 .
将两个基因的未端序列设计在同一引
物中（或引物2和引物3中必须具有互
补配对的片段）
(3)重叠延伸PCR技术可用于基因的定点突变。基因定点突变是根据目的基因(如图2 蛋白A基因)的序列，设计4条单链寡核苷酸片段为引物(图2中的引物A→D)，原理是 取引物A、B进行PCR1反应，以及引物C、D进行PCR2反应，然后将需要的两个片
段混合、延伸并大量扩增。图2引物B和引物C中的“◠”代表 突变的碱基 ，引物 B和引物C碱基序列间存在的关系是______互___补_。
两种引物的碱基序列没有相关性
例2.(3)在检测过程中，随着PCR的进行，反应产物不断积累，荧光信号 的强度也随之增加。根据荧光强度的变化监测产物量的变化，得到一条 荧光扩增曲线(如图2)。
①出现“平台期”最可能的原因是__试__剂__盒__中__的___原__料__、__引__物__和__探_。针数量 一定，超出一定的循环数后，荧光分子不再增加
PCR定点突变技术—重叠延伸PCR
该技术要使用四条引物。其中引物2和 3的突起处代表与模板链不能互补的突 变位点，而这两条引物有部分碱基（包 括突变位点）是可以互补的。因此，分 别利用引物1和2，引物3和4进行PCR 后，得到的DNA片段可以通过引物2和 3互补的碱基杂交在一起，再在DNA聚 合酶的作用下延伸，就能成为一条完整 的DNA片段。最后，用引物1和4进行 扩增得到含有突变位点的DNA片段。 通过测序可以检验定点突变是否成功。

生物高考知识点pcr技术PCR技术的应用和意义PCR（聚合酶链反应）是一种常用的生物技术，可以在短时间内对DNA进行大规模复制和扩增。

它在生物学领域有着广泛的应用，尤其在基因分析、疾病诊断和遗传学研究等方面发挥着重要的作用。

一、PCR技术的原理和步骤PCR技术通过不断循环的三步反应过程，可以快速产生大量的DNA复制品。

其原理主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。

首先，在变性步骤中，DNA双链会被高温（通常为94-98摄氏度）分离成两条单链。

随后，在退火步骤中，引物（起始DNA序列）会与被扩增的DNA靶序列特异性结合，即使温度降低也能保持稳定。

最后，在延伸步骤中，DNA聚合酶通过在引物的3'端一直合成新的DNA链，以完成DNA的复制。

PCR技术将上述三个步骤循环反复进行，每一个PCR循环，DNA的数量都会指数级地增加，从而使得目标DNA序列得以扩增。

二、PCR技术在基因分析中的应用1. 基因克隆：PCR技术可以扩增目标基因序列，为基因克隆提供充足的DNA模板。

2. 基因定位和定序：PCR可以扩增特定DNA区域，在基因定位和定序方面起到重要的作用。

3. 基因检测和诊断：PCR技术可以用于检测致病基因、遗传突变和基因多态性等，为疾病诊断提供可靠的依据。

三、PCR技术在遗传学研究中的应用1. DNA指纹分析：PCR技术可以扩增特定的基因座位，用于DNA指纹分析、个体识别和犯罪侦破等。

2. 进化研究：PCR技术可用于研究进化中的基因突变和种群遗传结构。

3. 基因表达研究：PCR技术可以通过扩增RNA转录产物，用于研究基因的表达和调控机制。

四、PCR技术的发展和前景PCR技术自从20世纪80年代问世以来，得到了快速发展和广泛应用。

随着PCR技术的不断改进和创新，新的PCR变体和改良方法被不断引入，如逆转录PCR、实时定量PCR、数字PCR等，使其应用领域更为广泛。

未来，PCR技术在基因组学、医学诊断、新药研发等领域具有巨大的潜力。