HPLC法测定艾司唑仑血药浓度的方法验证.

艾司唑仑片【艾司唑仑片】拼音名：Aisizuolun Pian英文名：Estazolam Tablets书页号：2000年版二部－91本品含艾司唑仑(C16H11ClN4)应为标示量的90.0％～110.0 ％。

【性状】本品为白色片。

【鉴别】取本品的细粉适量（约相当于艾司唑仑10mg）加乙醇10ml，振摇使艾司唑仑溶解，滤过，滤液蒸干，残渣照艾司唑仑项下的鉴别(1)、(2)项试验，显相同的反应。

【检查】含量均匀度取本品1 片，置100ml(1mg规格)或200ml(2mg 规格)量瓶中，加盐酸溶液(9→1000) 适量，充分振摇，使艾司唑仑溶解，加盐酸溶液(9→1000) 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定含量，应符合规定（附录Ⅹ E）。

溶出度取本品，照溶出度测定法（附录Ⅹ C第三法），以盐酸溶液(9→1000)100ml （1mg规格）或200ml（2mg规格）为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照分光光度法（附录Ⅳ A），在268nm±2nm的波长处测定吸收度，按C16H11ClN4的吸收系数（E1％1cm）为352计算出每片的溶出量。

限度为标示量的80％，应符合规定。

其他应符合片剂项下有关的各项规定（附录Ⅰ A）。

【含量测定】取本品30片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于艾司唑仑10mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)60ml ，充分振摇使艾司唑仑溶解，用盐酸溶液(9→1000) 稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml ，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9→1000) 稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录Ⅳ A），在268±2nm 的波长处测定吸收度，按C16H11ClN4的吸收系数（Ｅ1％ 1cm）为352 计算，即得。

【类别】同艾司唑仑。

【规格】 (1) 1mg (2) 2mg【贮藏】遮光，密封保存。

2021年第10期广东化工第48卷总第444期·231·RP-HPLC法测定血浆中奥卡西平及其活性代谢物浓度刘东平，谢海燕(南京鼓楼医院集团安庆市石化医院药剂科，安徽安庆246001)Determination of the Concentration of Oxcarbazepine andIts Active Metabolites in Human Plasma by RP-HPLCLiu Dongping,Xie Haiyan(Pharmacy Department,Anqing Shihua Hospital of Nanjing Drum Tower Hospital Group,Anqing246001,China) Abstract:Objective:To establish a method for determining the concentration of Oxcarbazepine(OXC)and its active metabolite10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamzepine(MHD)in human plasma.Methods:We used Alprzolam as the internal standard,Plasma samples were detected by RP-HPLC after being processed by Methyl t-Butyl Ether,using a mobile phase of CH3CN-H2O(45︰55,v/v)at the flow rate of1.0mL/min.The temperature was40℃,detection wavelength was220 nm and sensitivity was0.01AUFS.Results:There was a good linear relationship in the concentration of OXC respectively in the range of0.28~4.48µg/mL and MHD respectively in the range of2.40~38.40µg/mL,the lowest limit of detection was0.35µg/mL and1.20µg/mL.The relative average recoveries of low,middle and high concentration were respectively83.23%~103.17%and87.99%~116.07%;the RSD of intra-day(n=3)and inter-day(n=5)variation were less than10%. Conclusions:The method is sensitive,accurate,easy and quick.That can be used for therapeutic drug monitoring(TDM)and pharmacokinetics studies.Keywords:OXC；MHD；therapeutic drug monitoring(TDM)；RP-HPLC奥卡西平(Oxcarbazepine,OXC)是卡马西平的10－酮基结构类似物，为前体药，在体内迅速被代谢为有药理活性的10-羟基代谢物(10-monohydroxy metaboliute，MHD)[1]，即10,11-二氢-10-羟基卡马西平(10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamazepine)。

HPLC法测定人血浆中的拉莫三嗪李琪;雷力力;张志国;汪凤山【摘要】目的:建立以艾司唑仑为内标的高效液相色谱法测定人血浆中拉莫三嗪浓度的方法.方法:色谱柱为HypersilODS2,流动相为乙腈:0.05％磷酸=36:64；流速为1.0mL·min-1,柱温为35℃,检测波长为240nm,进样量为20μL.结果:拉莫三嗪血药浓度在0.95～38μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9991)；方法回收率为99.77％～104.32％；日内、日间RSD分别为1.35％～2.07％、3.04％～6.82％.结论:本方法操作简便、快速、灵敏、重复性好、回收率及精密度高,可用于拉莫三嗪的治疗药物监测.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2011(034)006【总页数】2页(P39-40)【关键词】拉莫三嗪;反相高效液相色谱法;血药浓度【作者】李琪;雷力力;张志国;汪凤山【作者单位】佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江佳木斯154003【正文语种】中文【中图分类】R927.1拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)为苯三嗪类的新一代广谱抗癫痫药。

2005年在我国上市,拉莫三嗪(LTG)主要经过肝脏代谢,LTG血药浓度＞15mg/L时,毒性反应的几率会增加;治疗难治性癫痫时,有效浓度在3～ 14mg/L;5～ 13mg/L时,出现副反应缓慢;13～ 14mg/L时副反应发生几率剧增。

肝酶诱导剂如卡马西平、苯妥英钠可加速拉莫三嗪的代谢;肝酶抑制剂如丙戊酸钠(V PA)可减缓拉莫三嗪的代谢。

由于该药与其它抗癫痫药在药动学上存在的这种相互作用,导致了个体间的血药浓度差异较大[1],因此在临床中有必要对拉莫三嗪进行血药浓度监测[2～4],本文采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定血浆中拉莫三嗪药物浓度,以艾司唑仑为内标溶液,乙腈-磷酸缓冲液为流动相,酸性条件下用乙酸乙酯作萃取剂,测定拉莫三嗪的血药浓度,结果表明该方法简便、灵敏、准确、重现性好,可用于拉莫三嗪的血药浓度监测。

反相高效液相色谱法测定血浆中卡马西平浓度摘要】目的建立血浆中卡马西平浓度的测定方法。

方法采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，以艾司唑仑为内标，测定血浆中卡马西平浓度。

色谱柱：Shimadzu Shimpack VP-ODS 4.6mm×150mm，加保护柱，流动相为A：B=55:45（V/V，其中A相为甲醇：乙腈=1:1；B相为蒸馏水：四甲基二乙胺：冰醋酸=500:10:8），检测波长243mm；AUFS0.04；流速0.8ml/min；温度为室温。

结果卡马西平在3.46-24.22mg.L-1浓度范围内线性良好， r=0.99938（n=7）。

卡马西平高、中、低3种浓度的平均回收率分别为 100.3%，97.3%，89.5%；RSD分别为4.0%，7.2%，7.5%（n=3）。

结论该方法准确、快速、简便，可作为卡马西平血药浓度常规监测方法。

【关键词】卡马西平高效液相色谱法药代动力学血药浓度卡马西平（Carbamazepine,CBZ）是单纯及复杂部分性癫痫发作的首选药，对复杂部分性发作疗效优于其他抗癫痫药，本品口服吸收缓慢且不规律，个体差异大[1]，口服4-8小时血药浓度达峰值，血药峰浓度为8-10ug/ml，有效血药浓度为4-12ug/ml[2]。

由于本品的自我诱导作用（autoinduction），于治疗一阶段后可能需要增大剂量才能维持原来的血药浓度和发作控制水平，因此一般需要用药期间监测卡马西平血药浓度。

CBZ血药浓度监测方法主要有荧光偏振免疫(FPIA) 法、高效液相色谱(HPLC)法、紫外分光光度(UV)法、酶联免疫法(EMIT)等，这4种方法各有优缺点，如FPIA法具有高度自动化、取血量小，操作简便、快速、准确、灵敏度高的优点，但成本高且依赖于试剂盒而使测定种类受限。

UV法在样品处理时易挥发而使得结果不可靠；EMIT法则需要专业仪器和特殊药品，成本高，不常用于临床监测；而HPLC法具有干扰少、分离度好、分析周期短、操作简便等优点，适合临床监测要求。

镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC—MS／MS检测方法研究目的建立镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的GC-MS/MS检测方法。

方法样品经甲醇提取，采用全扫描一级质谱，并结合谱库检索进行定性鉴别；采用二级选择反应检测（MRM）方式进行定量分析。

结果全扫描一级质谱检测限为2 ng，艾司唑仑在1～100 μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。

结论本方法快速、灵敏、准确，可用于中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的检测方法。

标签：镇静安神；艾司唑仑；GC-MS/MS；中成药艾司唑仑为苯二氮卓类新型抗焦虑药，具有较强的镇静催眠作用，目前存在将其添加到镇静安神类中成药及保健食品中的现象，普通患者在不知情的情况下服用此类非法添加产品，易造成重复用药，过量用药，对人体健康造成危害，严重时甚至引发死亡[1-3]。

目前对于镇静安神类中成药及保健食品中非法添加艾司唑仑的检测方法主要是薄层色谱法、液相色谱法、液质联用法等[4-8]，本实验建立了以气相色谱-质谱联用仪全扫描一级质谱，并结合谱库检索进行定性分析，以二级选择反应检测（MRM）进行定量分析的检测方法，可充分发挥气相色谱-质谱联用仪强大的数据库检索功能，及选择反应检测（MRM）灵敏、准确的优势，实现筛查、验证与定量三者的统一，可为药监部门“打假”提供可靠的技术保障。

1 仪器与试药1.1 仪器Agilent 7890/7000-GC/QQQ气相色谱-质谱联用仪（美国安捷伦公司）、NIST MS Search 2.0谱库。

1.2 试药艾司唑仑对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：171219-201003）；甲醇等试剂为分析纯；标称具有镇静安神作用的保健食品为药监部门市场监管抽查样品。

2 方法与结果2.1 定性方法2.1.1 对照品储备溶液精密称取艾司唑仑对照品适量，加甲醇溶解并稀释，制成浓度为每毫升含100 μg的溶液，即得。

2.1.2 对照品溶液A 取艾司唑仑对照品储备溶液适量，加甲醇稀释，制成浓度为每毫升含50 μg的溶液，即得。

高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，可以用于测定艾司唑仑的物质。

以下是测定步骤：
1. 准备试剂：流动相（乙腈：水，50：50），艾司唑仑标准品，色谱纯有机溶剂（如甲醇或乙腈），去离子水，色谱柱（C18柱）。

2. 配置标准溶液：将艾司唑仑标准品用流动相溶解，制备成一定浓度的标准溶液。

3. 进行色谱分析：将标准溶液注入液相色谱仪，以一定流速通过色谱柱，分离出艾司唑仑。

4. 检测：使用紫外检测器（UV detector）对艾司唑仑进行检测。

检测波长通常为229nm。

5. 记录色谱图：记录艾司唑仑的色谱峰及峰面积。

6. 进行定量分析：将标准溶液的浓度与对应的峰面积绘制成标准曲线。

通过待测样品中艾司唑仑的峰面积，根据标准曲线计算其浓度。

7. 进行定性分析：根据艾司唑仑的保留时间进行定性分析。

在相同条件下，待测样品中艾司唑仑的保留时间应与标准品的保留时间一致。

需要注意的是，在实验过程中要注意实验室环境的控制，避免交叉污染。

此外，实验过程中应严格遵守实验室安全规范，确保人员和设备的安全。

Q-Orbitrap高分辨质谱检测生物样品中镇静催眠药含量镇静催眠药(sedative-hypnotic)是直接作用于中枢神经系统的抑制剂,具有抗焦虑作用,可以改善患者的紧张、焦虑、恐惧等不良情绪;小剂量时,具有镇静作用,当剂量增加到一定量时,具有催眠作用;也具有肌肉松弛、抗惊厥等药理作用,主要用于失眠治疗,有助于避免失眠损害人体健康和正常生活。

目前,常用于治疗失眠的镇静催眠药物有苯二氮卓类(BZDs),如地西泮(安定)、氯硝西泮、艾司唑仑(舒乐安定)、阿普唑仑等,非苯二氮卓类,如巴比妥、苯巴比妥、佐匹克隆等。

巴比妥类药物随剂量由小到大,相继出现镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用,10倍催眠量时则可抑制呼吸,甚至致死,即使安全性相对较高的苯二氮卓类药物过量使用也可引起中毒乃至死亡。

因此,它在有效满足失眠患者的同时,一些不法分子也利用催眠药实施犯罪活动,如麻醉强奸、麻醉抢劫、麻醉摘除器官、麻醉凶杀等,相关犯罪事件每年都有发生。

因此有必要建立准确、高效、快速的鉴别分析方法,为临床用药过量、此类药物滥用的抢救和相关犯罪的法庭刑事案件的侦破工作中,确定是否服用过该类药物以及服用的是何种药物提供科学依据。

由于镇静催眠药原体药物随着时间变化,在体内的浓度会随着代谢而含量逐渐降低,很多案件的检材在检测时,药物在血、尿等生物检材中已含量甚微,难以检出。

因此,建立简单快速、灵敏准确且高通量的检测方法用于测定生物样品中痕量镇静催眠药非常必要。

本课题采用高分辨UPLC-MS/MS方法检测生物样品中的镇静催眠药。

Orbitrap高分辨质谱(Q Excative Focus)集超高效液相色谱的分离能力和Orbitrap质谱的高分辨、高灵敏度及强大的定性功能于一体,专属性强、准确可靠、快速灵敏,成为可用于定性、定量的有力分析工具。

本研究采用了Orbitrap高分辨质谱技术建立了镇静催眠药的分析方法,测定了血浆及尿样中的地西泮、氯硝西泮、艾司唑仑、咪哒唑仑、巴比妥、苯巴比妥,为该类药物的快速定性、定量分析提供了一个高效、简便、快速、可靠的方法。

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测人血浆中11种镇静催眠药浓度*安静，董占军，魏欣，白万军，宋浩静【摘要】摘要：目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定人血浆中11种镇静催眠药的浓度。

方法血样采用二氯甲烷：正己烷：乙酸乙酯(5：4：1)进行萃取，Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)色谱柱进行分离，乙腈-0.1%氨溶液为流动相进行梯度洗脱，流速0.2 mL·min-1，通过电喷雾离子源(ESI)，多重反应监测(MRM)正离子模式进行检测。

结果11种镇静催眠药在所测质量浓度范围内呈现良好的线性关系，相关系数均>0.99，除右佐匹克隆检测限为200 pg·mL-1，其他物质检测限为10～20 pg·mL-1，11种被分析物的日内、日间RSD 均<15.0%，提取回收率范围为72.3%～108.0%，基质效应范围为0.86～1.12。

结论该方法快速、灵敏、准确，适用于人血浆中11种镇静催眠药浓度的同时检测。

【期刊名称】医药导报【年(卷),期】2016(035)009【总页数】5【关键词】镇静催眠药；色谱，超高效液相；质谱，串联；血药浓度苯二氮类镇静催眠药、唑吡坦、扎来普隆及右佐匹克隆由于较易获得，易发生误服、滥用而导致中毒[1]；另一方面，该类药物起效快，能够引起短期失忆，产生幻觉，一些不法分子也利用其实施犯罪活动。

因此有必要建立快速、灵敏的分析方法，以配合临床的抢救工作和法庭刑事案件侦破。

目前该类药物的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[2-3]、毛细管电泳法[4]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[5-7]、液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法[8-10]等。

HPLC法是应用较多的方法，但其检测灵敏度低，分析速度慢。

毛细管电泳法检测限较低。

GC-MS法具有仪器便宜、数据丰富等优点，但灵敏度低，或操作繁琐。

Rp-HPLC法测定人血浆中三唑仑的浓度摘要】目的建立以反相高效液相色谱法测定人血浆中血药浓度三唑仑的方法。

方法采用Diamonsil C18(250nm×4.6nm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇：水(60:40)，流速为1.0ml/min，检测波长为234nm，柱温为25℃，采用蛋白沉淀法处理血浆样品。

结果三唑仑血浆浓度在7.70～38.50μg(r=0.9997)范围内线形关系良好，低、中、高三种浓度的平均相对回收率分别为101.23％、103.88％，102.25％，RSD均小于3％。

结论本方法简便、快速、准确、灵敏度高，可用于三唑仑血药浓度测定和人体药动学研究。

【关键词】三唑仑反相高效液相色谱法血药浓度三唑仑(diazepam) 具有抗惊厥、抗癫痫、抗焦虑、镇静催眠、中枢性骨骼肌松弛和暂时性记忆缺失（或称遗忘）作用。

三唑仑 , 又称海乐神、酣乐欣，淡蓝色片剂，口服后可以迅速使人昏迷晕倒，可溶于水及各种饮料中,三唑仑没有任何味道，见效迅速，药效比普通安定强45-100倍。

因此监测其血药浓度对临床治疗和中毒抢救均有重要意义。

本试验拟建立简便、快速、准确的反相高效液相色谱法测定的三唑仑血药浓度，为临床治疗和中毒抢救提供理论依据。

该药物的定性定、量方法，国内外文献有不同的报道，本文结合文献资料和实验筛选建立了相应的提取方法和色谱条件，结果方法简便、快速、重现性好，适合于临床血药浓度监测和药动学研究。

1 仪器与试药1.1仪器日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪；Shimadzu LCSolution色谱工作站。

CPA225D电子分析天平；TGl6G型台式高速离心机；WH-2微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；艾科浦超纯水系统(Aquapro公司)。

1.2试药三唑仑化学对照品(中国药品生物制品检定所提供)；水为超纯水；甲醇(色谱纯)；乙酸铵(分析纯，北京化工厂)。

2 方法与结果2.1溶液的制备2.1.1 三唑仑标准贮备液精密称取于105℃干燥至恒重三唑仑对照品15.40mg置10ml棕色量瓶中，甲醇溶解后并定容至刻度，配得1.540 mg/ml标准贮备液，密封置于4℃冰箱保存。

血清镇静药物阿普唑仑和艾司唑仑临床快速检验研究目的：构建RP-HPLC法同时对血清镇静药物阿普唑仑和艾司唑仑含量进行快速检测。

方法：采用Techsphere-ODS色谱柱作为分析柱，甲醇：水（65：35）作为流动相，流速1.0mL/min，内标为硝西泮，检测波长为254nm，柱温室温。

结果：艾司唑仑和阿普唑仑血浓线性范围0.25-3.0μg/mL，其中，最小检测浓度分别为12.5μg/L、12.5μg/L。

日内、日间精密度良好，回收率较高，分别为100.49%、95.08%。

结论：该方法操作简便、结果可靠，可用于临床血清镇静药物阿普唑仑、艾司唑仑浓度测定。

标签：血清；镇静药物；阿普唑仑；艾司唑仑；RP-HPLC；快速检验Abstract：Objective To construct simultaneous rapid detection of serum sedative drugs Alprazolam and Estazolam in RP-HPLC method. Methods the Techsphere-ODS chromatographic column as the analytical column，methanol：water （65：35）as mobile phase，flow rate of 1.0ml/min，internal standard for nitrazepam，the detection wavelength was 254nm column greenhouse temperature. Results AI division of Estazolam and alprazolam blood concentration was linear in the range of 0.25-3.0 u g / ml. Among them，the minimum detectable concentration respectively was 12.5 g / L and 12.5 g / L respectively. Day and day precision，recovery rate is higher，respectively，100.49%，95.08%. Conclusion This method is simple，the result is reliable and can be used in clinical serum sedative drugs alprazolam，Estazolam concentration determination.Keywords：Serum；sedative drugs；alprazolam；Estazolam；RP-HPLC；rapid detection作為临床上常见的镇静类药物，阿普唑仑和艾司唑仑均属于BAD类药物，具有抗焦虑、镇静、催眠、松弛骨骼肌等作用。

反相高效液相色谱法测定艾司唑仑血药浓度
杨春霞;何粤红;于海燕;郭亚东
【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2009(018)023
【摘要】建立艾司唑仑血药浓度的测定方法.使用反相高效液相色谱法,采用Herpesil ODS C18柱(250mm×4.0mm,5(m);流动相为甲醇-乙腈-水(40:20:40);
流速为:1.0ml/min;检测波长240nm.艾司唑仑的线性范围为50-
1000ng/mL.r=0.9977,平均加样回收率96.41%.本法操作简单、准确,可以应用于
临床监测艾司唑仑血药浓度.
【总页数】2页(P32-33)
【作者】杨春霞;何粤红;于海燕;郭亚东
【作者单位】云南省精神病医院,云南,昆明,650224;云南省精神病医院,云南,昆
明,650224;云南省精神病医院,云南,昆明,650224;昆明医学院药学院,云南,昆
明,650031
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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4.反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平的血药浓度 [J], 荣荣;邹广杰;张启丽;邹良宏;李明泉;张美燕;于治国
5.反相高效液相色谱法同时测定茶碱和多索茶碱的血药浓度 [J], 赵瑞柯;曹俊华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RP-HPLC法同时测定血浆中艾司唑仑和阿普唑仑的浓度王淑君;熊建华
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2002(014)006
【摘要】目的建立反相HPLC法同时测定血浆中艾司唑仑(EZ)和阿普唑仑(AZ)浓度的方法.方法以Techsphere-ODS色谱柱为分析柱,甲醇-水(65∶35)为流动相,硝西泮(NZ)为内标,紫外254nm处检测.结果 EZ和AZ血浓线性范围为0.25～
3.0μg*ml-1,最低检测浓度分别为12.5ng/ml、12.5ng/ml,日内和日间精密度均小于7%,平均回收率分别为101.50%,96.14%.结论本法可用于临床血药浓度测定.【总页数】2页(P63-64)
【作者】王淑君;熊建华
【作者单位】浙江省温州市第三人民医院,温州,325000;浙江省温州市第三人民医院,温州,325000
【正文语种】中文
【中图分类】R927;R931.71
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HPLC法同时测定血清中四种常用镇静催眠药的浓度
郭炎荣;路玫
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2002(11)6
【摘要】目的:探讨用HPLC法同时测定血清中4种常用镇静催眠药(硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、地西泮)浓度的可行性.方法:以甲醇-水-磷酸为流动相,以Nova-Pak C18柱为分析柱,用HPLC法测定.结果:4种常用镇静催眠药分离良好,且浓度在0.25～2.5μg/mL范围内,与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为
88.6%～98.2%,日内和日间精密度均小于4.8%,最低检测浓度为10ng/mL.结论:用HPLC法同时测定血清中几种常用镇静催眠药既简便又可行.
【总页数】2页(P55-56)
【作者】郭炎荣;路玫
【作者单位】广西壮族自治区人民医院,广西,南宁,530021;广西壮族自治区人民医院,广西,南宁,530021
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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