脐血Hb 分析在α- 地中海贫血筛查中的应用

脐带血红细胞MCV和MCH筛查新生儿地中海贫血的可行性研究近年来，地中海贫血在全球范围内成为了一种较为常见的遗传性疾病。

地中海贫血是一组与红细胞内血红蛋白合成异常有关的遗传性疾病，主要表现为红细胞数量减少、生长发育受限以及慢性贫血等，给患者的身体健康和生活质量带来了很大的影响。

因此，对于地中海贫血的早期诊断和筛查具有重要的意义。

地中海贫血的诊断方法中，利用脐带血红细胞MCV（Mean Corpuscular Volume，红细胞平均体积）和MCH（Mean Corpuscular Hemoglobin，红细胞平均血红蛋白含量）进行筛查是一种简单且可行的方法。

脐带血作为胎儿在母体中获取营养和氧气的重要渠道，它可以提供有关胎儿健康状况的重要信息，包括血红细胞的平均体积和平均血红蛋白含量。

脐带血红细胞MCV和MCH的筛查可以通过检测脐带血标本中的相关指标来确定。

研究表明，地中海贫血患者的脐带血红细胞MCV和MCH通常较低，这是由于地中海贫血患者体内缺乏正常的血红蛋白基因造成的。

因此，检测脐带血红细胞MCV和MCH值可以作为地中海贫血的筛查指标，有助于早期发现患者。

在实际应用中，脐带血红细胞MCV和MCH的筛查方法相对简单易行。

首先，收集新生儿出生后的脐带血样本，并提取其中的红细胞。

然后，利用自动血细胞分析仪等设备，可以直接测量到脐带血红细胞MCV和MCH的数值。

根据标准参考范围，如果脐带血红细胞MCV和MCH值低于正常范围，那么有可能存在地中海贫血的风险。

进一步的诊断可以通过基因检测等方法来确认。

脐带血红细胞MCV和MCH筛查新生儿地中海贫血的可行性得到了多项研究的支持。

一项对300名新生儿进行的研究发现，通过脐带血红细胞MCV和MCH的筛查方法，成功地发现了地中海贫血患者，并及早采取了相应的治疗措施，有效地避免了严重的后果。

这项研究结果表明，脐带血红细胞MCV和MCH筛查在新生儿中具有较高的敏感性和特异性，可以作为地中海贫血的筛查工具。

地中海贫血基因检测研究进展施建刚广西壮族自治区贵港市人民医院检验科，广西贵港 537100[摘要] 地中海贫血在临床上也称为“海洋性贫血”，是一组遗传性溶血性贫血疾病。

根据流行病学的相关调查数据显示，地中海贫血的高发区域为东南亚，在我国多分布于两广、四川等地。

目前，地中海贫血基因检测是预防地中海贫血胎儿活产的主要检测方法，也是诊断出地中海贫血疾病的重要手段。

而随着各类检测技术的快速发展，地中海贫血基因检测技术质量也在不断提高，逐渐应用于临床诊断中。

[关键词] 地中海贫血；基因；检测；进展[中图分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2020）23-50-04Research progress of thalassemia gene detectionSHI Jian'gangDepartment of Clinical Laboratory, Guigang City People's Hospital, Guangxi, Guigang 537100, China[Abstract] Thalassemia, also known as 'marine anemia', is a group of hereditary hemolytic anemia diseases. According to epidemiological survey data, the high incidence area of thalassemia is Southeast Asia, and it is mostly distributed in Guangdong, Guangxi and Sichuan, etc. of China. At present, thalassemia gene detection is the main detection method to prevent live birth of thalassemia fetus, and it is also an important method to diagnose thalassemia disease. With the rapid development of various detection technologies, the quality of thalassemia gene detection technology is also constantly improving and gradually applied to clinical diagnosis.[Key words] Thalassemia; Gene; Detection; Progress[基金项目] 广西壮族自治区卫生健康委员会科研课题（Z20190320）。

收稿日期:2020-09-16文章编号:1004-4337(2021)02-0228-03 中图分类号:R 551.3 文献标识码:A㊃统计分析㊃干血片毛细血管电泳技术在新生儿α-地贫筛查中的应用姚 靖 刘恩赐 李肖妹 张炜羡 黄晓凌(广东省阳江市妇幼保健院 阳江529500)摘 要: 目的:评价干血片毛细血管电泳技术对新生儿α-地中海贫血筛查的临床价值㊂方法:选取2018年1月~2019年12月阳江市妇幼保健院及阳江市各助产机构送检的新生儿滤纸干血片标本23769例,采用毛细血管电泳技术检测标本中H bB a r t 's 水平,分析α-地贫筛查阳性率㊁基因符合率,并探究α-地贫临床表现类型与H bB a r t 's 水平的关系㊂结果:23769例滤纸干血片标本中检出H bB a r t 's 阳性2825例,阳性率为11.89%;召回初筛阳性1068例,确诊阳性998例,确诊符合率为93.45%,其中静止型338例,标准型635例,中间型25例,重型0例,以基因型-S E A /αα最为常见㊂不同临床表型患儿H bB a r t 's 水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);其中中间型患儿H bB a r t 's 水平高于标准型和静止型,且标准型患儿H bB a r t 's 水平高于静止型(P <0.05)㊂结论:利用干血片毛细血管电泳技术定量分析H bB a r t 's 水平,对新生儿α-地中海贫血的筛查准确性高㊂关键词: 毛细血管电泳; α-地中海贫血; 干血片; H bB a r t 'sd o i :10.3969/j .i s s n .1004-4337.2021.02.032地中海贫血(以下简称地贫)是一种常见的遗传性溶血性贫血,根据编码α和β肽链的基因缺失或突变情况,可分为α-地贫和β-地贫[1]㊂我国是α-地贫的高发地区,其中广东省α-地贫的发病率高居全国第二[2]㊂因此,早期筛查本地区新生儿α-地贫发病意义重大㊂对于静止型的阳性患儿,可建立终身可查的电子健康档案,进行有效的遗传咨询和健康教育,避免其孕育中间型地贫下一代;对轻㊁中型地贫患儿来说,早期筛查发现并定期进行追踪和发育评估,可提高儿童智力和生长发育水平,避免重型患儿的出生㊂近年来,有学者提出可将滤纸干血片全自动毛细管血红蛋白电泳分析技术应用到新生儿地贫的筛查[3]㊂本研究通过收集阳江市新生儿滤纸干血片标本,探究滤纸干血片毛细管电泳技术检测的应用效果,为本地区新生儿α-地贫的预防㊁临床诊断㊁遗传咨询提供参考资料㊂1 资料与方法1.1 研究对象选取2018年1月~2019年12月阳江市妇幼保健院及阳江市各助产机构送检的新生儿滤纸干血片标本23769例,其中男12687例,女11082例㊂1.2 滤纸干血片制备方法于新生儿出生2~7d 后从足跟内或外侧采血,滴于专用采血滤纸上,要求血斑直径>8mm ,且从正面渗透至背面,每例采集血斑3个,将血斑滤纸置于通风处自然晾干,再密封于塑料袋,2ħ~8ħ下保存,5d 内以快递形式送至阳江市新生儿筛查中心检测㊂1.3 检测方法钳取直径为3.8mm 的血斑,置于加有蒸馏水的样品杯孔中,再放入湿盒于4ħ下洗脱2~72h ;采用c a p i l l a r ys 2n e o n a t f a s t 全自动干血片毛细管电泳仪及其配套电泳试剂盒(法国S e b i a 公司),对样品进行血红蛋白电泳检测,测定正常血红蛋白和主要变异体的含量㊂同时,对筛查阳性新生儿及时召回做地贫基因检测㊂1.4 筛查结果判读及基因诊断[4]α-地贫筛查阳性判断标准:H bB a r t 's ȡ0.1%判定为α地中海贫血筛查阳性㊂采用P C R +倒流杂交法,分析α-地贫筛查阳性新生儿α-地贫基因常见的缺失突变,包括-α3.7㊁-α4.2㊁--S E A ㊁H bC S ㊁H bQ S 和H bW S㊂基因诊断标准:缺失或突变1个α基因为静止型,缺失或突变2个α基因为标准型,缺失或突变3个α基因为中间型,缺失或突变4个α基因为重型㊂1.5 统计学分析采用S P S S 17.0进行数据分析,数据以(x ʃs )表示,多组均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用S N K -q 法㊂以P <0.05为差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 α-地贫的筛查结果23769例滤纸干血片标本中检出H bB a r t 's 阳性2825例,阳性率为11.89%,共召回1068例进行P C R 地贫基因诊断㊂2.2 α-地贫的基因诊断结果召回初筛阳性1068例,确诊阳性998例,确诊符合率为93.45%,具体基因类型分布情况见表1㊂基因诊断结果显示,静止型338例,标准型635例,中间型25例,重型0例,标准型中以基因型--S E A /αα常见㊂2.3 初筛H bB a r t 's 含量与临床表型的关系不同临床表型患儿H bB a r t 's 水平比较,差异具有统计学意义(P <0.05);其中中间型患儿H bB a r t 's 水平高于标准型和静止型(q =69.086㊁82.829,P <0.001),且标准型患儿H b B a r t 's 水平高于静止型(q =45.759,P <0.001),见表2㊂3 讨论地中海贫血是全世界许多国家都关注的重要遗传性疾病,由于地中海贫血基因携带者婚配可使下一代有1/4的机会患中㊁重型地中海贫血,故可严重影响高发区的人口质量㊂在我国,该病主要在长江以南大部分省区,特别是广西㊁广东和海南等省区流行㊂α-地贫严重情况下具有较高的致残㊁致死㊃822㊃J o u r n a l o fM a t h e m a t i c a lM e d i c i n eV o l .34 N o .2 2021表1 新生儿α-地贫基因诊断结果基因类型例数构成比/%初筛H bB a r t 's 水平/%0~11~55~1515~40>40静止型-α3.7/αα19117.891883000-α4.2/αα686.37680000αC S α/αα403.752812000αQ S α/αα272.53270000αW S α/αα121.13120000标准型-α3.7/-α3.730.2803000-α3.7/-α4.220.1902000-α4.2/-α4.210.0901000-α3.7/αQ S α10.0901000-α3.7/αC S α10.0901000-α3.7/αW S α10.0910000-α4.2/αW S α10.091000--S E A /αα62558.5225600000中间型--S E A /-α3.7181.69001620--S E A /-α4.230.2800210--S E A /αW S α30.2802100--S E A /αC S α10.0900010未检出常见α-地贫基因706.5500000合计1068100350625194表2 临床表型和H bB a r t 's 水平关系临床类型例数H bB a r t 's /%F P 静止型3380.37ʃ0.35标准型6352.31ʃ0.79中间型2511.18ʃ3.831923.321<0.001性,而携带地贫基因的轻型患者,容易在新生儿和儿童时期出现溶血性黄疸㊁贫血等症状,影响儿童生长发育[5]㊂通过产前筛查技术可以预防重型患儿的出生,因此,早期筛查在地贫的预防及后期诊疗中有重要临床意义㊂目前,新生儿地中海贫血筛查最为简便㊁有效的方法是毛细胞血红蛋白电泳技术,很多医院采用脐带血进行早期筛查,但脐血标本容易混进母体血,可能无法准确反应新生儿的血红蛋白情况,而且脐血的保存㊁运送要求较高,无法满足分散于本市其他助产机构的集中送检㊂同时,脐血筛查地贫存在漏筛静止型α-地贫的可能性[6]㊂另外成人的产前地贫筛查与地贫基因符合率低[7],究其原因是H b B a r t 's 只特异性地存在于新生儿期,3个月后自然消失,成人地贫筛查未能有效筛查出静止型α-地贫,静止型α-地贫基因携带者与同型地贫基因携带者婚配生育,每次生育有1/4的概率怀上中间型地贫胎儿㊂近年来,滤纸干血片全自动毛细管血红蛋白电泳分析技术逐渐应用于新生儿地贫的早期筛查,该技术是利用高电压,使得新生儿滤纸干血片中的微量血红蛋白组分分离,从而准确测定各种血红蛋白组分的含量[8]㊂与脐带血比较,滤纸干血片具有更易长期保存,运输方便,对新生儿创伤小,且可与传统的新生儿筛查项目同时检测等特点㊂本研究利用毛细管电泳技术检测23769例滤纸干血片标本,检出H bB a r t 's 阳性2825例,阳性率为11.89%,高于文献报道广东省中山市新生儿α-地贫初筛携带率5.31%[9],考虑差异因素有:(1)不同地区α-地贫携带率具有特异性;(2)文献选用检测样本为脐带血,可能出现假阴性㊂根据初筛结果,召回1068例新生儿作进一步基因型检测,确诊阳性998例,确诊符合率为93.45%,与文献报道基本相符[10]㊂提示干血片毛细血管电泳技术对于新生儿α-地贫筛查具有较高的应用价值,完全可满足筛查需求[11~13]㊂另外,分析患儿H bB a r t 's 水平与临床表型的关系发现,中间型患儿H bB a r t 's 水平高于标准型和静止型,且标准型患儿H bB a r t 's 水平高于静止型,进一步说明临床可根据H bB a r t 's 水平初步划分α-地贫患儿临床表型,对后期基因确诊有一定指导意义㊂综上所述,利用干血片毛细血管电泳技术定量分析H bB a r t 's 水平,对新生儿α-地中海贫血的筛查准确性高,且干血片标本的运输㊁保存也更为便捷,对于新生儿疾病筛查的广泛开展有积极意义㊂参 考 文 献1 刘宁毅.广西钦州地区3756例α-地中海贫血基因分型检测结果分析[J ].中国全科医学,2019,22(S 1):35~38.2 杨阳,张杰.中国南方地区地中海贫血研究进展[J ].中国实验血液学杂志,2017,25(1):276~280.3 涂志华,林尧,周知,等.以新生儿足跟血滤纸干血斑为标本的地中海贫血群体筛查研究[J ].中华检验医学杂志,2018,41(2):132~135.4 黎青,李少英,孔舒,等.α-地中海贫血的产前基因诊断[J ].实用医㊃922㊃数理医药学杂志2021年第34卷第2期学杂志,2006,22(12):47~48.5周斌,熊乾,蔡文倩,等.武汉地区新生儿α-地中海贫血筛查及影响因素分析[J].实用医学杂志,2019,35(11):1820~1823.6 L i a oC,Z h o u JY,X i eX M,e t a l.N e w b o r nS c r e e n i n g f o rH b HD i s e a s e b y D e t e r m i n a t i o n o fH bB a r t'sU s i n g t h e S e b i aC a p i l l a r y E-l e c t r o p h o r e s i sS y s t e mi nS o u t h e r nC h i n a[J].H e m o g l o b i n,2014,38 (1):73~75.7钟泽艳,陈剑虹,贺海林,等.广东省惠州地区基于医院水平的地中海贫血基因突变谱分析[J].中国计划生育学杂志,2015,23(6): 371~375.8杨金玲,蔡稔,陈大宇,等.足月新生儿β地中海贫血基因携带者筛查指标及c u t-o f f值的研究[J].中国当代儿科杂志,2018,20(12): 990~993.9姚英姿,方小武,万志丹,等.广东省中山市新生儿α-地中海贫血筛查回顾性分析[J].中国优生与遗传杂志,2013,21(6):82~83; 140.10叶立新,袁晃堆,甘文彬,等.干血斑毛细管电泳技术在新生儿α-地中海贫血筛查中的应用[J].中国妇幼保健,2015,30(8):1205~ 1207.11Z h o uJ Y.S c r e e n i n g f o rC o mm o n N o n d e l e t i o n a lL-t h a l a s s e m i a s i n C h i n e s eN e w b o r n s b y D e t e r m i n a t i o no fH bB a r t''sU s i n g t h eS e b i a C a p i l l a r y s2E l e c t r o p h o r e s i s S y s t e m[J].N u c l e a r E n c e I E E ET r a n s-a c t i o n s o n,2012,20(3):253~256.12黄金芬,毛锦芳,郭静.新生儿脐血H b B a r t's定量分析在α-地中海贫血筛查中的应用[J].中国优生与遗传杂志,2016,24(5):93~ 94.13张应联,蔡小芳.多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的应用价值[J].医疗装备,2019,32(24):53~54.A p p l i c a t i o no fD r yB l o o dC a p i l l a r y E l e c t r o p h o r e s i s i nS c r e e n i n go fN e o n a t a lα-P o v e r t yY a o J i n g,L i uE n c i,L iX i a o m e i,Z h a n g W e i x i a n,H u a n g X i a o l i n g(Y a n g j i a n g M a t e r n a l a n dC h i l d H e a l t h H o s p i t a l,G u a n g d o n g P r o v i n c e,Y a n g j i a n g529500)A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o e v a l u a t e t h e c l i n i c a l v a l u eo f d r y b l o o dc a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s i ns c r e e n i n g o f n e o n a t a lα-t h a l a s s e m i a.M e t h o d s:23769c a s e so fn e o n a t a l f i l t e r p a p e rd r y b l o o ds a m p l e s i nah o s p i t a l f r o m J a n u a r y2018t oD e c e m b e r2019w e r e s e l e c t e d,t h e l e v e l o fH bB a r t's i n t h e s a m p l e sw a s d e t e c t e db y c a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s,t h e p o s i t i v e r a t e a n d g e n e c o i n c i d e n c e r a t e o fα-t h a l a s s e m i a s c r e e n i n g w e r e a n a l y z e d,a n d t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n c l i n i c a lm a n i f e s t a t i o n s o fα-t h a l a s s e m i a a n dH bB a r t's l e v e lw a s e x p l o r e d.R e s u l t s:2825 c a s e so fH bB a r t's p o s i t i v ew e r e d e t e c t e d i n23769c a s e s o f f i l t e r p a p e r d r y b l o o d s a m p l e s,a n d t h e p o s i t i v e r a t e w a s11.89%;1068c a s e sw e r e p o s i t i v e i nr e c a l l p r i m a r y s c r e e n i n g,998c a s e sw e r e c o n f i r m e d p o s i t i v e,a n d t h e d i a g n o s i s c o i n c i d e n c e r a t ew a s93.45%.A m o n g t h e m,338c a s e sw e r e s t a t i c t y p e,635c a s e sw e r e s t a n d-a r d t y p e,25c a s e sw e r e i n t e r m e d i a t e t y p e,0c a s ew a s s e v e r e t y p e,a n d t h e g e n o t y p e s-S E A/ααw a s t h em o s t c o mm o n.T h e d i f f e r e n c eo fH bB a r tᶄs l e v e l so f c h i l d r e n w i t hd i f f e r e n t c l i n i c a l p h e n o t y p e sw a ss t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P<0.05).T h e l e v e l o fH bB a r t's i n i n t e r m e d i a t e t y p ew a s h i g h e r t h a n t h a t i n s t a n d a r d t y p e a n d s t a t i c t y p e,a n d t h e l e v e l o fH bB a r t's i n s t a n d a r d t y p ew a s h i g h e r t h a n t h a t i n s t a t i c t y p e(P<0.05).C o n-c l u s i o n:D r y b l o o d c a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s c a n b e u s e d t o q u a n t i t a t i v e l y a n a l y z e t h e l e v e l o fH bB a r t's,w h i c h h a s h i g ha c c u r a c y i n s c r e e n i n g n e o n a t a lα-t h a l a s s e m i a.K e y w o r d s c a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s;α-t h a l a s s e m i a;d r y b l o o d t a b l e t s;H bB a r t's㊃032㊃J o u r n a l o fM a t h e m a t i c a lM e d i c i n e V o l.34N o.22021。

α-地中海贫血基因携带者血常规参数测定及分析目的对α-地中海贫血基因携带者的相关血常规检测数据进行研究分析。

方法选择2006年4月~2011年4月来本院就诊的患有地中海贫血和普通贫血症的临床确诊患者各60例，将其分别定义为A、B两组；再抽取同期在本院进行健康体检者60例，将其定义为C组。

对三组患者的相关血常规指标进行检测，并比较分析其检测结果。

结果A组患者的RBC、Hb、MCV、MPV 4项指标的检测结果明显低于B、C两组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；该组患者的R/H、RDW、PDW 3項指标的检测结果明显高于B、C两组，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。

结论对患有α-地中海贫血的患者的相关血常规指标的变化特点进行彻底地分析，可以使临床对该类患者诊断时更加准确快速，以便为进一步的临床治疗争取更多的时间，有效避免误诊和漏诊现象的发生。

地中海贫血（THAL）症状是在我国南方地区比较多见的一种遗传性、溶血性贫血疾病。

患有α-地中海贫血的临床患者除有轻度贫血或易疲劳的表现外, 一般不会出现明显的症状,而且在夫妇双方均为基因携带者的情况下，会出现由于基因缺失而导致的妊娠晚期死胎或新生儿死亡[1]。

笔者选择在本院就诊的患有地中海贫血和普通贫血症的临床确诊患者及同期在本院进行体检的健康者各60例，对三组患者的相关血常规指标进行检测，并比较分析其检测结果。

现将分析结果报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料采用随机抽样法，选择2006年4月~2011年4月来本院就诊的患有地中海贫血和普通贫血症的临床确诊患者各60例，再选择同期在本院进行健康体检者60例，将抽样中的180例患者分别定义为A、B、C三组，其中男46例，女134例，年龄最大76岁，最小3岁，平均31.1岁；抽样患者所有自然资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法患者在早7点左右起，确认其处于空腹的状态后，用专用的仪器对患者血常规指标进行检测，并对检测的结果进行比较分析[2]。

孕妇七项血液指标诊断东南亚型α-地中海贫血的价值谭冬梅;许芳梅;叶志权;吴普昭;邬瑞霞【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)005【摘要】目的：评价测定血红蛋白A2(HbA2)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、红细胞计数与血红蛋白比值(RBC/Hb)、红细胞计数平均红细胞体积比值(RBC/MCV)七项指标诊断东南亚型α-地中海贫血孕妇的价值。

方法回顾性分析2010年6月23日至2014年11月10日期间于广州市番禺区中心医院进行α-地中海贫血基因检测且年龄段在18至30岁的女性资料共172例，所有受检者根据检测结果分为健康孕妇组(n=47)、--SEA/αα孕妇组(n=55)、--SEA/αα非孕妇组(n=34)及其他贫血孕妇组(n=36)四组，各组均数间的比较采用独立样本的t检验，并采用ROC曲线对七项指标的准确性进行评价。

结果(1)--SEA/αα孕妇组与健康孕妇组的七项指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)；(2) MCV、RBC/Hb两项指标在--SEA/αα孕妇组与--SEA/αα非孕妇组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)；(3)--SEA/αα孕妇组RBC、Hb、MCV、RBC/Hb、RBC/MCV五项指标与其他贫血孕妇组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)；(4) HbA2、RBC、MCV、Hb、RDW-CV、RBC/Hb、RBC/MCV七项指标的曲线下面积(AUC)分别为0.795、0.880、1.000、0.910、0.925、1.000、0.991；灵敏度分别为0.579、0.855、1.000、0.872、0.982、1.000、0.945；特异度分别为0.852、0.745、1.000、0.800、0.892、1.000、0.957；阳性预测值分别为0.741、0.796、1.000、0.880、0.915、1.000、0.981；阴性预测值分别为0.733、0.813、1.000、0.788、0.916、0.959、0.938。