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热原检查法第一篇：热原检查法【关键词】热原检查法细菌内毒素检查法热原热原是微生物的代谢产物，系能引起恒温动物和人体体温异常升高的至热性物质。
当注入人体含有热原的量达0.01微克/千克以上的输液时，即可产生热原反应。
《中华人民共和国药典》同时收载了热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法(鲎试剂法）对输液进行热原检查。
我们对我院临床使用的哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的10个批次0.9%氯化钠注射液液，进行了两种方法联合应用的尝试，收到了良好效果。
1资料与方法1.1研究对象哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的规格为500 ml0.9%氯化钠注射液，批号为:50307A、50411C、50513A、50716A、50910A、50910C、51008A、51116A、51128C、51215C。
1.2试验材料细菌内毒素国家标准品：批号为20056（100EU/支）,厂家为中国药品生物制品鉴定所。
鲎试剂：批号为0507250（0.25EU/ml），厂家为湛江安度斯生物公司。
健康合格家兔（雌兔无孕），1 ml刻度吸管，5 ml试管，20 ml玻璃注射器，肛温计，250 ℃电热恒温烤箱，漩涡混合器、电热恒温水浴箱。
(见表1) 表10.9%氯化钠注射液检查结果（略）1.3方法与结果将上述10批次哈尔滨三精艾富西药业有限公司的0.9%氯化钠注射液，分别按照《中华人民共和国药典》（2000版）附录规定的热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法（鲎试剂法）的标准进行检查，结果见表1。
2讨论从以上检查结果不难看出，两种方法对同批次的产品进行检查，结果出现了偏差，通过临床跟踪调查，上述批次产品用于临床均未发生热原反应。
内毒素检查法（鲎试剂法）检查热原可靠性强，且操作简便，成本低，省时，省力，是热原检查的发展方向。
相比之下相对古老的热原检查法（家兔法）就显得操作繁琐，成本高，即费时又费力，家兔容易受周围环境、温度、噪声等干扰而影响检查结果。
热原检查法中国鲎成为了国家二级保护动物，鲎试剂成为了紧俏资源。
作为一个注射剂制药企业的QC，不得不考虑以后怎么来应对，除了采用减少鲎试剂的用量外，可选择重组鲎试剂或采用重组C因子法，但结果的等效性研究这个拦路虎很难打到。
百无聊赖就翻开了《中国药典检测分析指南》2017年版的热原检查法，开卷有益，该版指南对人员检查的基本原理等进行了全面的阐述，现将学习内容进行总结。
1、热原相关的定义及来源1.1 相关定义热原是注射进入人体或动物体内后，能导致其体温升高的一类物质的总称。
可以直接导致体温升高的物质称为外源性热原，由外源性热原引起体内产生的致热物质称为内源性热原。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LPS）。
当细菌死亡或自溶后便会释放内毒素。
LPS是高分子量的脂多糖。
思考：以上定义解释了注射剂为什么要进行热原检查或细菌内毒素检查。
1.2 热原的致热原理外源性物质进入人体，作用到单核细胞系统，刺激其分泌内源性致热原[主要有白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1（IL-1）干扰素（INF）及肿瘤坏死因子（TNF）等]；内源性致热原作用于下丘脑提问调节中枢，使体温调定点上调，造成产热增加、散热减少，导致人体发热。
思考：干扰素、抗肿瘤药物等是否会影响热原的检查？1.3 外源性热原的来源1.3.1 外源性热原中微生物来源的包括：a) 革兰氏阳性菌细菌成分（脂阿拉伯甘露聚糖、蛋白、热休克蛋白A、脂磷壁酸等）；b) 革兰氏阴性菌细菌成分（脂质A、外膜蛋白、膜孔蛋白、陪伴蛋白等）；c) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞壁成分（细胞表面蛋白、菌毛、脂肽、脂蛋白、肽聚糖、胞壁酰二肽等）；d) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞外成分（毒素、超抗原等）；e) 非细胞性微生物（活病毒、真菌、酵母、疟原虫等）。
微生物产生的致热物质中，革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素致热性最强，其次是革兰氏阳性杆菌，革兰氏阳性球菌致热作用较弱，真菌、病毒致热作用更弱，因此，细菌内毒素被认为是自然界最强致热原。
热原的检查方法热原检查方法是在工业生产过程中常用的一种方法，用于确定设备或系统中存在的热源。
热源是指能够产生热量的物体或系统，常见的热源包括燃烧炉、锅炉、发动机等。
热源检查的目的是为了确保设备或系统的正常运行，以及预防潜在的安全隐患。
一、热源检查的步骤热源检查通常需要遵循以下几个步骤：1. 确定热源：首先需要确定热源的位置和类型。
可以通过查看设备的技术参数或者进行实地勘察来确定热源的具体情况。
2. 检查外观：对于可见的热源，可以通过外观检查来判断其是否存在异常。
例如，观察燃烧炉的火焰是否正常，是否存在漏气的情况。
3. 检测温度：使用温度计等工具对热源进行温度检测。
温度过高或过低都可能是热源存在问题的表现。
4. 检查燃料供应：对于燃烧炉等需要燃料的热源，需要检查燃料供应是否正常，例如燃料是否充足、燃料是否完全燃烧等。
5. 检测排放物：对于烟囱、尾气等排放物进行检测，判断是否存在超标排放的情况。
6. 检查设备运行状态：观察设备的运行状态，包括噪音、振动、漏水等方面，判断设备是否正常工作。
7. 检查安全设施：检查热源周围的安全设施是否完善，例如防护罩、防火墙等。
二、热源检查方法的应用热源检查方法广泛应用于各个行业和领域。
以下是一些常见的应用场景：1. 工业生产：在工业生产过程中，热源是不可或缺的一部分。
通过对热源进行定期检查，可以保证设备的正常运行，提高生产效率。
2. 建筑工程：在建筑工程中，热源检查可以用于检测供暖设备的工作状态，确保居民的生活质量。
3. 能源行业：对于能源行业来说，热源是一种重要的能源形式。
通过对热源进行检查，可以确保能源的有效利用，降低能源浪费。
4. 环境保护：热源排放物的监测和控制是环境保护的重要内容之一。
通过热源检查方法，可以及时发现和解决热源排放问题，减少对环境的污染。
三、热源检查的意义热源检查对于保障设备和系统的正常运行具有重要意义。
以下是热源检查的几个重要意义：1. 安全保障：通过热源检查，可以及时发现和解决存在的安全隐患，保障工作人员和设备的安全。
1.目的：建立产品中热原检查的标准操作规程。
2.范围：产品的热原检查。
3.责任：质量监督部。
4.内容：本法适用于《中国药典（1995年版）》附录中“热原检查法—兔法”。
4.1实验材料及用具：4.1.1天平：精度0.01或0.1mg 供试品称量用精度0.1或1mg 试剂称量用精度10g 家兔称重用4.1.2电热干燥箱：（50-300±1）℃。
4.1.3恒温水浴：（37-100±0.5）℃。
4.1.4热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。
4.1.5家兔固定盒：盒的两侧有通气孔。
4.1.6实验用具：注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、金属制密封器（均需去热原）、时钟、直镊、脱脂棉或细软卫生纸。
4.1.7试剂：75％乙醇、凡士林或50％甘油、新蒸馏水（4小时内蒸馏）、灭菌注射用水（经热原检查，3只家兔中体温升高0.4℃的最多只有1只，且3只家兔体温升高总数低于1℃，或经细菌内毒素检查，含细菌内毒素低于0.5EU／m1）、无热原氯化钠（经250℃ 30分钟或200℃ 1小时或180℃ 2小时加热除热原）。
4.2溶液配制：供试品溶液。
4.2.1原料药：4.2.1.1精密称取适量，置烧怀、三角瓶或称量瓶中。
4.2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，搅拌使溶解。
4.2.2注射液：4.2.2.1用75％乙醇棉球消毒安瓶颈部，割开安瓶。
4.2.2.2精密量取一定量药液。
4.2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，混匀。
4.2.3注射用生理盐水：4.2.3.1称取无热原的氯化钠适量至烧杯或三角瓶中。
4.2.3.2加入供试品“注射用水”适量，配成0.9％的等渗溶液。
4.3实验动物：4.3.1健康无伤、体重1.7-3.0kg、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无孕，一兔一笼，标兔号。
4.3.2新兔预选：4.3.2.1新兔经饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。
YBB60232012热原检查法Reyuan JianchafaTests for Pyrogen本法系将供试液经静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
供试用家兔应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中供试用家兔的要求。
试验前的准备应符合热原检查法（中国药典2010年版二部附录ⅪD）中试验前的准备要求。
供试品溶液的制备制备过程应按无菌操作法进行。
将供试品用纯化水冲洗干净后，用滤纸吸干，切成约0.5cm×3cm条状，置浸提容器内。
除另有规定外，供试品置高压蒸汽灭菌器内，在115℃保持30分钟，再按表1规定加入浸提液，使浸提液浸没供试品，按表2条件浸提，即得。
供试液应在制备后2小时内使用。
表1 供试品表面积或重量与浸提液的比例供试品厚度（mm）表面积或重量与浸提液体积的比例≤0.5 6cm2/ml＞0.5~1.0 3cm2/ml＞1.0 1.25cm2/ml不规则形状0.2g/ml表2 浸提条件浸提温度（℃）浸提时间（小时）37±1 24±237±1 72±250±2 72±270±2 24±2检查法取适用的家兔3只，测定其正常体温符合要求后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入温热至约38℃的供试品溶液，注射剂量为10ml/kg，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。
如3只家兔中有1只温度升高0.6℃或高于0.6℃，或3只家兔体温升高的总和达1.3℃或高于1.3℃，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
结果判断在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或低于3.5℃，均判定供试品的热原检查符合规定。
