波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

高糖诱导人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放并促进细胞凋亡田刚;任燕;卢群;鲁敏【摘要】目的探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)内皮微粒释放和细胞凋亡的影响.方法用不同浓度的葡萄糖(5.5mmol/L、16.7mmol/L和33.3mmol/L)分别作用于培养成功的HUVEC 0、12、24、48、72h,设立正常糖浓度组(5.5mmol/L葡萄糖)和高渗对照组(27.8mmol/L甘露醇)作为对照.应用MTT比色法检测细胞的生存率;采用流式细胞仪分别检测HUVEC内皮微粒的释放水平以及细胞凋亡率.结果①MTT检测发现,33.3mmol/L葡萄糖培养12h时HUVEC的细胞数比为93%,24h 时为78%,48h时为51%,72h时为40%;与0h组相比,12h组细胞数比下降但无统计学意义(P>0.05);与12h相比,24h组、48h组和72h组细胞数比显著下降,且呈时间依赖性减低(P均<0.05).②设5.5mmol/L正常糖浓度组培养48h时的HUVEC细胞数比为100%,则高渗对照组HUVEC细胞数比为98%,与正常糖浓度对照组比较无统计学差异(P>0.05);16.7mmol/L葡萄糖组和33.3mmol/L葡萄糖组的细胞数比分别为79%和51%,均明显低于正常糖浓度组(P均<0.05),且前两组相比亦存在统计学差异(P<0.05).③33.3mmol/L葡萄糖组作用12h时的HUVEC内皮微粒生成量较正常糖浓度对照组明显增加(P<0.05),24、48、72h时增加更为显著,且呈现时间依赖性(P<0.01);与正常糖浓度对照组相比,高渗对照组12、24、48、72h时其内皮微粒释放水平无统计学差异(P>0.05);④高糖诱导的内皮微粒释放水平与细胞凋亡率呈正相关(r=0.659, P<0.05).结论高糖刺激诱导人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放,促进细胞凋亡.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(031)002【总页数】5页(P181-185)【关键词】葡萄糖;糖尿病;动脉粥样硬化;内皮微粒;内皮功能【作者】田刚;任燕;卢群;鲁敏【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院心内科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院心内科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院心内科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院心内科,陕西西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R363完整的单层内皮细胞屏障在维持血管的正常结构、功能及抗粥样硬化中起着关键作用。

doi ： 10. 3969/j. issn. 1009-6469.2019. 02. 009 ◊临床医学！血糖波动对人脐静脉血管内皮细胞腺苷酸活化蛋白激酶和过氧化物酶增殖物激活受体7共激活因子9"的影响田翰林!，常柏2，田文静3作者单位：1铜仁市碧江区中医医院，贵州铜仁554300%2国家卫生健康委员会激素与发育重点实验室、天津医科大学代谢病医院内分泌研究所，天津300070;3贵州健康职业学院，贵州铜仁554300通信作者：常柏，男，主任医师，博士生导师，研究方向为糖尿病基础及临床研究,E-mail :493162946@qq. c m基金项目：国家自然科学基金（81473622)81273914);铜仁市科技课题(2018)52号摘要：目的观察血糖波动对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC)腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK)和过氧化物酶增殖物激活受体"共激活因子l$(P G C-1$的影响以探讨血糖波动对血管内皮损伤的机制。

方法体外培养HUVEC至第3代，将细胞分为：正常组:用5 mmol/L含葡萄糖和氨基酸的培养液（Glu DMEM)(模拟正常血糖环境）；高糖组:25 mmol/L Glu DMEM培养液(模拟高糖环境）&血糖波动组:交替用25 mmol/L和5 mmol/L Glu DMEM培养液，每8 h更换一次(模拟血糖波动环境），三组均培养48 h。

使用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

蛋白质印迹法（W etern blot)、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR)检测各组AMPK和PGC-1$蛋白与mRNA表达。

结果高糖组与血糖波动组两组早/晚期细胞凋亡率高于正常组（E <0. 001 )，且血糖波动组早/晚期细胞凋亡率高于高糖组（均E <0. 05);高糖组的AMPK和PGC-1$蛋白与mRBA表达分别为(0. 232 ±0. 018)、(0. 401 ±0. 013)，血糖波动组AMPK和P G C1$蛋白与mRBA表达分别为（0. 158 ± 0. 027)、（0. 199 ±0. 010)，均比正常组的(0. 905 ±0. 032)、（0. 946 ±0. 045)降低（均E <0. 05)，且血糖波动组AMPK和PGC-1$蛋白与mRBA表达低于高糖组（均E<0. 05)。

血糖波动对血管内皮细胞功能影响的研究分析作者：赵田吕肖锋张天瀛来源：《医学信息》2016年第01期糖尿病可引起血管内皮功能紊乱和形态异常，破坏血管结构和血管内皮舒张功能，导致糖尿病血管病变。

目前认为糖尿病的血糖代谢紊乱包括三要素：空腹血糖升高、餐后血糖升高（侧重慢性持续性高血糖状态）以及血糖波动异常（侧重血糖水平的急性改变）[1]。

1 血糖波动的评估及监测技术动态血糖监测系统（CGMS）是目前评估血糖波动的主要方法，通过葡萄糖感应器监测皮下组织间液的葡萄糖浓度而间接反映血糖水平的监测技术，可以提供连续、全面、可靠的全天血糖信息，了解血糖波动的趋势[2]。

1.1日内血糖波动评估指标包括全天血糖水平的标准差（SDBG）、平均血糖波动幅度（MAGE）、最大血糖波动幅度、血糖值在设定范围的时间百分比、曲线下面积或频数分布及平均值等。

SDBG代表测定值偏离平均血糖的程度，反映血糖的离散程度，SD与其它参数有良好相关性，是证实ICU患者血糖变异性和死亡率之间关系的测量数据[3]。

MAGE是统计日内波动幅度大于设定值（一般设定为1个标准差）的血糖波动，不依赖于血糖的整体水平，但也可能会忽略某些细微的波动，正常参考值1.2日间血糖波动评估指标包括空腹血糖变异系数（FPG-CV）和日间血糖平均绝对差（MODD）。

1.3餐后血糖波动的评估参数包括餐后血糖的峰值及达峰时间、餐后血糖波动的幅度、时间及曲线下面积增值等。

严重低血糖风险包括低血糖指数、最低血糖值、低血糖发生频率与持续时间百分比等。

2 血糖波动对血管内皮细胞的影响2.1基础实验研究 Schisano等[5]研究发现相比于正常组，恒定性高糖组磷酸化组蛋白H2AX抗体（反映DNA损害）和PKCδ的表达上调，而波动性高糖组的表达更显著，提示恒定性高糖和波动性高糖均可导致代谢记忆效应，而此效应在波动性高血糖更明显。

2.2临床研究 Ceriello等通过葡萄糖钳夹对正常受试者和2型糖尿病患者给以5、10、15mmol/L，以及（5～15）mmol/L每间隔6h的血糖浓度，结果发现血糖波动组血浆硝基酪氨酸-3及24h尿前列腺素（PGF2α）（两指标均反映机体氧化应激水平）较恒定高血糖组明显增多。