中性红染色液(活细胞染色)使用说明

他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。

刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。

三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。

苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。

被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。

常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。

单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。

常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。

（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。

1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的配制贮存液：70%酒精溶解，浓度100 μg/ml，配好后用锡纸包起来，避光，可在4摄氏度下长期保存。

使用浓度：贮存液用1xPBS稀释1000倍，最终浓度100 ng/ml。

10x PBS的配制80 g NaCl2 g KClg无水Na2HPO42 g无水KH2PO4加水到1000ml贮存液可根据需要用蒸馏水稀释荧光封片液mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm.注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。

上：正常绍鸭成纤维细胞核，下：凋亡核Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。

Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。

中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。

Lyso-Tracker Red呈红色荧光，检测时的最大激发波长为577nm，最大发射波长为590nm。

按照1:20000的比例稀释，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。

可用于家蚕脂肪体细胞autophage监测。

见李胜文章。

细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。

2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。

二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。

暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。

暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。

相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。

相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。

0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。

三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。

四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。

常见细胞染色试剂简介1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。

是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

它跟甲基绿同染，能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。

酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。

2、刚果红（Congo red）刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。

它能作染料，也用作指示剂。

它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。

用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。

在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。

刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速3、甲基蓝（Methyl blue）甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。

甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。

它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。

它的水溶液是原生动物的活体染色剂。

甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长久保存。

4、固绿（Fast green）固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。

固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。

它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。

它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。

5．苯胺蓝（Aniline blue）是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。

此染料一般很难溶于水，也不易溶于酒精（1.5％）。

植物制片中可与番红合用，作为组织染色；也可作藻类植物染色。

因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。

6、苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）苏丹Ⅲ是弱酸性染料，不溶解于水，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。

常用70％酒精中的饱和溶液。

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芽孢染色液（试剂盒）
试剂盒组成：
染色液A：石炭酸复红染液
染色液B：碱性美蓝染色液
产品说明：
芽胞具有高度的折光性，外膜致密，渗透性低，着色和脱色均较困难。

在加热条件下进行染色时，染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料可被酒精脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染剂复染后，菌体和芽胞呈现出不同的颜色。

操作步骤：
1、制作一适当厚度的细菌涂片，自然干燥，通过火焰加热固定。

2、滴加适量染色液 A 于涂片上，在酒精灯上加热，使染液冒蒸汽但不沸腾。

必要时可续加染液以免干涸。

维持4-5 分钟。

3、待标本冷却后以95%酒精冲洗至无红色染液脱出为止，水洗。

4、滴加染色液B 复染约2-3 分钟，水洗至无染液脱出为止。

5、待干后油镜观察。

预期结果：
菌体呈蓝色，芽孢呈红色。

注意事项：
1. 供芽孢染色用的培养物应控制菌龄，要求大部分芽孢仍保留在菌体内为宜。

2. 加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破
裂，加热不够则芽孢难以着色。

3. 请穿实验服并戴一次性手套操作。

产地：国产
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提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。

储存条件：室温干燥保存，有效期 1 年。

关键词：芽孢染色液
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三、常用染料介绍（一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。

苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。

被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。

常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。

单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。

常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。

（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。

1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

他跟甲基绿同染，能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。

酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。

2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。