初始污染菌检测记录

初始污染回收率测定记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号空白对照阴性对照平均菌落数（cfu/ml）初始污染菌（cfu/件）（平均菌落数÷SIP）回收率1 2 3 4 51-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-54-14-24-34-44-55-15-25-35-45-5平均回收率修正系数初始污染菌检测原始记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号阴性对照空白对照平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 51 2 3 4 5 6 7 8 91011121314151617181920平均初始污染菌各样品平均菌落——————数总和÷样品数校正后初始污染菌————（平均初始污染菌*校正因子）注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

初始污染检测记录文件编号：样品名称：生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号空白对照阳性对照培养皿编号平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 512345678910平均初始污染菌（cfu/件）校正后初始污染菌注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

产品初始污染菌1、目的检测清洗包装后的产品初始污染菌是否符合要求2、适用范围适用于需灭菌产品清洗、包装后的检验3、检验依据EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估GB14233。

2-1993医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准GB7918。

2-1987化妆品微生物标准检测方法：细菌总数测定4、仪器、设备细菌培养箱、洁净工作台、电子天平、PH计、压力蒸汽灭菌器、4。

C冰箱。

酒精灯、3000ml 的三角烧瓶，无菌棉签，无菌镊子，试管架，9mm细菌养皿，放大镜。

5、检验方法5．1普通肉汤琼脂培养基的制备5．1．1所用试剂胨10g氯化钠5g琼脂15-20g肉浸液1000ml5．1．2制备取牛肉浸膏3 g加水1000 ml，配成肉浸液。

将胨、氯化钠、琼脂加入肉浸液中，加热溶解，调节PH为7。

2，置入压力蒸汽灭菌器内，灭菌后于超净工作台内装在9 mm的细菌培养皿中（15-20ml/每个平皿），于4。

C保存备用。

5．2抽样从每个清洗批次的产品中随机抽样。

同一批次产品数<50件，抽取3件；同一批次产品数为50~100件，抽取5件；同一批次产品数>100件，抽取10件。

5．3取样于微生物实验室超净工作台内，将浸有无菌生理盐水的无菌棉签在检品的外表面依次擦拭，然后用无菌镊子将棉签上的棉球取下，放入含有1ml无菌生理盐水试管内振摇数次，静止5分钟，即获得擦拭棉球浸提液；以同样的方法擦拭检品内表面。

获取检品内表面擦拭棉球浸提液。

5．4接种将上述检品内、外表面擦拭棉球浸提液倒入普通肉汤琼脂平板，水平旋摇使之均匀布在培养皿表面，在超净止放置至培养皿表面浸液十后进入下一步操作。

5．5培养接种后的培养皿倒置于细菌培养箱中，以未接种肉汤琼脂培养基为阴性对照，以金黄色葡萄球菌（北京生物制品检定所）作阳对照，37。

C培养48暗时后观察结果。

初始污染菌实验记录实验目的：研究不同初始污染菌数量对环境中细菌生长的影响，并探究污染菌的生长规律。

实验材料和方法：1.实验材料：-不含任何微生物的琼脂平板-紫外灯-细菌培养物-显微镜和高倍镜-实验室用具：针头、培养皿、移液管等2.实验方法：1. 准备不同初始污染菌液：分别取10 ml、20 ml、30 ml、40 ml和50 ml的细菌培养物，加入含有无菌蒸馏水的试管中，并标注不同的初始菌液。

2.每个试管放置在紫外灯下辐照15分钟，以杀灭试管内的细菌。

3.分别将不同初始污染菌液均匀涂布在琼脂平板上，并用铂丝或玻璃杆扩散均匀。

4.将琼脂平板放入恒温箱中，控制温度为30°C，培养时间为24小时。

5.取出培养好的琼脂平板，观察和记录菌落的形态、颜色、大小等特征，并用显微镜观察细菌的形态和结构。

实验记录：1.实验准备：- 依次取10 ml、20 ml、30 ml、40 ml和50 ml的细菌培养物，加入含有无菌蒸馏水的试管中，并标注不同的初始菌液。

-将各试管放置在紫外灯下辐照15分钟，杀灭细菌。

-准备好不含细菌的琼脂平板。

2.实验操作：-将不同初始菌液均匀涂布在琼脂平板上，用铂丝或玻璃杆扩散均匀。

-将琼脂平板放入恒温箱中，控制温度为30°C，培养时间为24小时。

3.实验结果：实验组1（10 ml菌液）：-菌落的形态：圆形，表面平整。

-菌落的颜色：淡黄色。

- 菌落的大小：直径约为1-2 mm。

-细菌的形态和结构：短小的杆菌。

实验组2（20 ml菌液）：-菌落的形态：圆形，表面稍微凹陷。

-菌落的颜色：淡黄色。

- 菌落的大小：直径约为2-3 mm。

-细菌的形态和结构：较长的杆菌。

实验组3（30 ml菌液）：-菌落的形态：不规则形状，表面凹凸不平。

-菌落的颜色：深黄色。

- 菌落的大小：直径约为3-4 mm。

-细菌的形态和结构：较长的杆菌，呈链状排列。

实验组4（40 ml菌液）：-菌落的形态：不规则形状，表面凹凸不平。

产品初始污染菌检验规范1 目的本规范规定了产品初始污染菌的检验方法。

2 参考标准GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计》中华人民共和国药典ENISO11737:2006 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定》3 操作前准备3.1 主要仪器设备数个90mm双蝶平皿、三角烧瓶，电炉、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、蒸汽消毒器、0.9%氯化钠溶液、刻度吸管数支、超净工作台3.2 试剂0.9%氯化钠溶液、营养琼脂培养基。

3.3 试验前准备3.3.1 将Ф90mm的培养皿、试管等与试验接触的所有器具，放入棉布袋或用棉布包好，置压力蒸气灭菌器内121℃灭菌30min后备用排出蒸汽，稍微冷却，取出用具。

3.3.2 按脱水营养琼脂培养基说明书上的要求称取培养基，加纯化水加热溶解，加塞，和0.9%氯化钠溶液同置1210C灭菌30min后备用。

3.3.3 将消好的平皿、刻度吸管，放入电热干燥箱内1600C干燥2小时，当温度降低至70ºC以下时进行无菌存放。

3.3.4 打开超净工作台上的电源、照明、风机、紫外线灯30分钟开关。

3.3.5 将实验所需的物品通过传递窗紫外线灯消毒，然后进入洁净室内，开启洁净室紫外线照射30min以上灭菌。

3.3.6 洗手、更衣后，进入无菌室，用消毒液对手进行消毒。

4 试验方法4.1 供试品数量灭菌前样品至少取3个。

4.2 供试液制备和接种4.2.1 把采取的样品送入无菌净化工作台内，用无菌操作法分别在每条产品上剪样5g，取样品至少3个（一份试验、一份留样、一份复测），将5g样品剪碎，放入100 ml灭菌0.9%NaCl的三角烧瓶中振荡80次，形成1次10倍稀释液。

4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml，如样品含菌量高，还可以再稀释1:1000、1:10000等，每个稀释度应换一支移液管。

文件修订记录1.目的建立初始污染菌数检验及分析标准，对未灭菌的物料或产品的初始污染菌进行检验检测分析。

2.适用范围适用于本公司实施初始污染菌的检验。

3.职责质检员负责初始污染菌的测定。

4.工作程序4.1 参照ISO 11737-1:2006方法制订本操作规程。

4.2设备与材料：90mm平皿、天平、玻璃棒、刻度吸管、剪刀、酒精灯、营养琼脂培养基、0.9%无菌氯化钠溶液、三角烧瓶、振荡器、灭菌锅、水浴锅、超净工作台4.3 试验方法：按《抽样检验规范》抽取样品进行检验。

4.3.1 用无菌手续取约10g样品，剪碎后放入装有100ml生理盐水的三角烧瓶中，另加入经验证合格的中和剂适量，盖好瓶塞，将三角烧瓶放在振荡器上。

4.3.2 振摇30分钟后，将溶液取1ml接种于90mm平皿。

4.3.3 取出水浴锅中的约45℃营养琼脂，按无菌操作要求倾倒在平皿中。

4.3.4 待琼脂凝固后，放在30℃-35℃的培养箱培养2-5天后，进行活菌计数。

4.3.5 将每个样取5份平行样，每份样倾注2块平板培养计数，按下式计算：菌数/每克=平均菌数×稀释倍数×修正系数/重量4.3.6 到培养时间48小时，报告结果，将结果记录于《初始污染菌检测记录表》中。

4.4 修正系数的确定3.4.1 用无菌手续取约10g样品，放入装有100ml生理盐水的三角烧瓶中，另加入经验证合格的中和剂适量，盖好瓶塞，将三角烧瓶放在振荡器上。

4.4.2 振摇30分钟后，将溶液取1ml接种于90mm平皿。

4.4.3 取出水浴锅中的约45℃营养琼脂，按无菌操作要求倾倒在平皿中。

4.4.4 待琼脂凝固后，放在30℃-35℃的培养箱培养2-5天后，进行活菌计数。

4.4.5 用无菌手续取出4.3.1瓶中的样品，放入装有100ml生理盐水的三角烧瓶中，另加入经验证合格的中和剂适量，盖好瓶塞，将三角烧瓶放在振荡器上。

重复4.3.2-4.3.4的步骤共三遍。

初始污染菌检测⼀、⽬的检测产成品初始污染菌是否符合要求⼆、适⽤范围适⽤于⾮灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备⽣化培养箱、洁净⼯作台、电⼦天平、PH 计、压⼒蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三⾓烧瓶、30Ml 试管、⽆菌镊⼦、⽆菌剪⼑、试管架、90mm 玻璃培养⽫、放⼤镜。

五、检验⽅法1.普通⾁汤琼脂培养基的制备 1.1所⽤试剂胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g ⾁浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同⼀批号的三个运输包装中⾄少抽取200个最⼩销售包装样品，1/4样品⽤于检测，1/4样品⽤于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时⽤于复检。

抽样的最⼩销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下⽤⽆菌⽅法打开⽤于检测的⾄少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加⼊到225ml 灭菌⽣理盐⽔中，充分混匀，得到⼀个⽣理盐⽔样液。

液体产品⽤原液直接做样液。

如被检样品含有⼤量吸⽔树脂材料⽽导致不能吸出⾜够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出⾜够测试⽤样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

⽂件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态⽂件名称：初始污染菌检测SOP 版本号编制时间修改状态：审核时间⽣效⽇期批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测⽅法本⽅法适⽤于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采⽤滤膜过滤法，⽤供试液冲洗滤膜表⾯，并确保供试液完全覆盖滤膜表⾯。

（滤膜孔径不⼤于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌⾯朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平⾏对照，同时做⼀个空⽩对照。

倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空⽩应⽆菌⽣长，若空⽩有菌⽣长该试验则视为⽆效。

2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。