转基因植物产品检测实验室一览
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2013年10月15日为止发布的转基因检测标准详细清单:转基因作物检测大体分为两种:一是检测是否含有外源蛋白,即外源基因表达产物,主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法;二是检测是否含有外源基因(DNA),主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。
一、农业部发布的转基因标准清单 (94项)(2013年10月15日更新)1转基因植物及其产品检测通用要求NY/T672-20032转基因植物及其产品检测抽样NY/T673-20033转基因植物及其产品检测DNA提取和纯化NY/T674-20034转基因植物及其产品检测大豆定性PCR方法NY/T675-20035转基因大豆环境安全检测技术规范第1部分:生存竞争能力检测NY/T719.1-20036转基因大豆环境安全检测技术规范第2部分:外源基因流散的生态风险检测NY/T719.2-20037转基因大豆环境安全检测技术规范第3部分:对生物多样性影响的检测NY/T719.3-2003 8转基因玉米环境安全检测技术规范第1部分:生存竞争能力检测NY/T720.1-20039转基因玉米环境安全检测技术规范第2部分:外源基因流散的生态风险检测NY/T720.2-200310转基因玉米环境安全检测技术规范第3部分:对生物多样性影响的检测NY/T720.3-2003 11转基因油菜环境安全检测技术规范第1部分:生存竞争能力检测NY/T721.1-200312转基因油菜环境安全检测技术规范第2部分:外源基因流散的生态风险检测NY/T721.2-200313转基因油菜环境安全检测技术规范第3部分:对生物多样性影响的检测NY/T721.3-2003 14转基因植物及其产品食用安全性评价导则NY/T 1101-200615转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素植酸、棉酚和芥酸的测定NY/T 1103.1-2006 16转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素胰蛋白酶抑制剂的测定NY/T 1103.2-2006 17转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素硫代葡萄糖苷的测定NY/T 1103.3-2006 18转基因植物及其产品食用安全检测大鼠90天喂养试验NY/T 1102-200619农业转基因生物标签的标识农业部869号公告-1-200720转基因生物及其产品食用安全检测模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法农业部869号公告-2-200721转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt11及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-3-200722转基因植物及其产品成分检测抗除草剂杂交油菜Ms1、Rf1及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-4-200723转基因植物及其产品成分检测抗除草剂杂交油菜Ms8、Rf3及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-5-200724转基因植物及其产品成分检测抗除草剂杂交油菜Ms1、Rf2及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-6-200725转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米TC1507及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-7-200726转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt176及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-8-200727转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米MON810及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-9-200728转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米MON863及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-10-200729转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜GT73及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-11-200730转基因植物及其产品成分检测耐除草剂玉米GA21及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-12-200731转基因植物及其产品成分检测耐除草剂玉米NK603及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-13-200732转基因植物及其产品成分检测耐除草剂玉米T25及其衍生品种定性PCR方法农业部869号公告-14-200733转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米Bt10及其衍生品种定性PCR方法农业部953号公告-1-200734转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米CBH351及其衍生品种定性PCR方法农业部953号公告-2-200735转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜T45及其衍生品种定性PCR方法农业部953号公告-3-200736转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜Oxy-235及其衍生品种定性PCR方法农业部953号公告-4-200737转基因动物及其产品成分检测促生长转ScGH基因鲤鱼性PCR方法农业部953号公告-5-200738转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因水稻定性PCR方法农业部953号公告-6-200739转基因植物及其产品环境安全检测育性改变油菜农业部953号公告-7-200740转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第1部分:抗虫性农业部953号公告-8.1-200741转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第2部分:生存竞争能力农业部953号公告-8.2-200742转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第3部分:外源基因漂移农业部953号公告-8.3-200743转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第4部分:生物多样性影响农业部953号公告-8.4-200744转基因植物及其产品环境安全检测抗病水稻第1部分:对靶标病害的抗性农业部953号公告-9.1-200745转基因植物及其产品环境安全检测抗病水稻第2部分:生存竞争能力农业部953号公告-9.2-200746转基因植物及其产品环境安全检测抗病水稻第3部分:外源基因漂移农业部953号公告-9.3-200747转基因植物及其产品环境安全检测抗病水稻第4部分:生物多样性影响农业部953号公告-9.4-200748转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第1部分:抗虫性农业部953号公告-10.1-200749转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第2部分:生存竞争能力农业部953号公告-10.2-200750转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第3部分:外源基因漂移农业部953号公告-10.3-200751转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第4部分:生物多样性影响农业部953号公告-10.4-200752转基因植物及其产品环境安全检测抗除草剂玉米第1部分:除草剂耐受性农业部953号公告-11.1-200753转基因植物及其产品环境安全检测抗除草剂玉米第2部分:生存竞争能力农业部953号公告-11.2-200754转基因植物及其产品环境安全检测抗除草剂玉米第3部分:外源基因漂移农业部953号公告-11.3-200755转基因植物及其产品环境安全检测抗除草剂玉米第4部分:生物多样性影响农业部953号公告-11.4-200756转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第1部分:对靶标害虫的抗虫性农业部953号公告-12.1-200757转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第2部分:生存竞争能力农业部953号公告-12.2-200758转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第3部分:基因漂移农业部953号公告-12.3-200759转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第4部分:生物多样性影响农业部953号公告-12.4-200760转基因植物及其产品成分检测抗虫水稻TT51-1及其衍生品种定性PCR方法农业部1193号公告-1-200961转基因植物及其产品成分检测耐除草剂油菜Topas19/2及其衍生品种定性PCR方法农业部1193号公告-2-200962转基因植物及其产品成分检测耐贮藏番茄D2及其衍生品种定性PCR方法农业部1193号公告-3-200963转基因植物及其产品成分检测耐除草剂棉花MON1445及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-1-201064转基因微生物及其产品成分检测猪伪狂犬TK-/gE-/gI-毒株(SA215株)及其产品定性PCR1485号公告-2-201065转基因植物及其产品成分检测耐除草剂甜菜H7-1及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-3-201066转基因植物及其产品成分检测 DNA提取和纯化1485号公告-4-201067转基因植物及其产品成分检测抗病水稻M12及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-5-201068转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆MON89788及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-6-201069转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆A2704-12及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-7-201070转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆A5547-127及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-8-201071转基因植物及其产品成分检测抗虫耐除草剂玉米59122及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-9-201072转基因植物及其产品成分检测耐除草剂棉花LLcotton25及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-10-201073转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因棉花定性PCR方法1485号公告-11-2010 74转基因植物及其产品成分检测耐除草剂棉花MON88913及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-12-201075转基因植物及其产品成分检测抗虫棉花MON15985及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-13-201076转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因棉花外源蛋白表达量检测技术规范1485号公告-14-201077转基因植物及其产品成分检测抗虫耐除草剂玉米MON88017及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-15-201078转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米MIR604及其衍生品种定性PCR方法1485号公告-16-201079转基因生物及其产品食用安全检测外源基因异源表达蛋白质等同性分析导则1485号公告-17-201080转基因生物及其产品食用安全检测外源蛋白质过敏性生物信息学分析方法1485号公告-18-201081转基因植物及其产品成分检测基体标准物质候选物鉴定方法1485号公告-19-201082转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆356043及其衍生品种定性PCR方法农业部1782号公告-1-201283转基因植物及其产品成分检测标记基因NPTII、HPT和PMI定性PCR方法农业部1782号公告-2-201284转基因植物及其产品成分检测调控元件CaMV 35S启动子、FMV 35S启动子、NOS启动子、NOS终止子和CaMV 35S终止子定性PCR方法农业部1782号公告-3-201285转基因植物及其产品成分检测高油酸大豆305423及其衍生品种定性PCR方法农业部1782号公告-4-201286转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆CV127及其衍生品种定性PCR方法农业部1782号公告-5-201287转基因植物及其产品成分检测bar或pat基因定性PCR方法农业部1782号公告-6-2012 88转基因植物及其产品成分检测CpTI基因定性PCR方法农业部1782号公告-7-201289转基因植物及其产品成分检测基体标准物质制备技术规范农业部1782号公告-8-2012 90转基因植物及其产品成分检测标准物质试用评价技术规范农业部1782号公告-9-2012 91转基因植物及其产品成分检测转植酸酶基因玉米BVLA430101构建特异性定性PCR方法农业部1782号公告-10-201292转基因植物及其产品成分检测转植酸酶基因玉米BVLA430101及其衍生品种定性PCR方法农业部1782号公告-11-201293转基因生物及其产品食用安全检测蛋白质氨基酸序列飞行时间质谱分析方法农业部1782号公告-12-201294转基因生物及其产品食用安全检测挪威棕色大鼠致敏性试验方法农业部1782号公告-13-2012二、国家质检总局发布的标准(30项)(2013年10月15日更新)1转基因产品检测通用要求和定义GB/T 19495.1-20042转基因产品检测实验室技术要求GB/T 19495.2-20043转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T 19495.3-20044转基因产品检测核酸定性PCR检测方法GB/T 19495.4-20045转基因产品检测核酸定量PCR检测方法GB/T 19495.5-20046转基因产品检测基因芯片检测方法GB/T 19495.6-20047转基因产品检测抽样和制样方法GB/T 19495.7-20048转基因产品检测蛋白质检测方法GB/T 19495.8-20049基因检验实验室技术要求SN/T1193-200310植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1194-200311大豆中转基因成分的定性PCR检测方法SN/T1195-200312玉米中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1196-200313油菜籽中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1197-200314马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1198-200315棉花中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1199-200316烟草中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1200-200317植物性饲料中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1201-200318食品中转基因植物成份定性PCR检测方法SN/T1202-200319食用油脂中转基因植物成份定性PCR检测方法SN/T1203-200320植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法SN/T1204-200321番茄中转基因成分定性PCR检测方法SN/T1816-200622小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法SN/T 1943-200723主要食用菌中转基因成分定性PCR检测方法SN/T 2074-200824 蜂蜜中转基因成分检测方法普通PCR方法和实时荧光PCR方法SN/T 2135-200825 青椒中转基因成分定性PCR检测方法SN/T 2271-200926水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法 SN/T 2584-201027转基因成分检测玉米检测方法(2013年7月1日起实施)SN/T 1196-201228转基因成分检测大豆PCR-DHPLC检测方法(2013年9月16日起实施) SN/T 3576-2013 29牛及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法(2013年9月16日起实施)SN/T 3495-201330转基因成分检测番茄检测方法SN/T 1816-2013。
转基因植物及其产品检测通用要求前言本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。
本标准起草单位:中国农业科学院植物保护研究所、中国农业科学院生物技术所、农业部科技发展中心、中国农业大学。
本标准主要起草人:彭于发、王锡锋、李宁、张大兵、罗云波、黄昆仑、汪其怀、贾士荣。
本标准为首次发布。
转基因植物及其产品检测通用要求1范围本标准规定了转基因植物及其产品检测的通用要求及转基因植物PCR检测实验室的操作规范。
本标准适用于转基因植物及其产品中转基因成分的检测。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注明日期的引用文件,其最新版本适合于本标准。
GB/T15481-2000 检测和检验实验室能力的通用要求GB/T6682 分析实验用水规格和试验方法NY/T673 转基因植物及其产品检测抽样NY/T674 转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化NY/T675 转基因植物及其产品检测大豆PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1 一般术语 General terms3.1.1 转基因生物 genetically modified organism (GMO)通过基因工程技术改变基因组构成的生物。
包括转基因植物、动物和微生物。
3.1.2 转基因植物 genetically modified plant organism (GMP), transgenic plant通过基因工程技术改变基因组构成的植物,是转基因生物的一类。
3.1.3 定性检测极限 detection limit以转基因生物(如种子)提取的DNA或标准双链DNA分子作为PCR反应的模板,所能检测到的脱氧核糖核酸(DNA)的极限(需要确保阳性样品的纯度,才能达到本标准检测方法的灵敏度)。
中国食品安全检测实验室序号检测机构名称1中国检验检疫科学研究院综合检测中心4黄岛出入境检验检疫局技术中心煤炭铁矿实验室5济南出入境检验检疫局技术中心动物检验检疫实验室6国家质检总局动植物检疫实验所植物检疫鉴定室(国家转基7国家食品质量监督检验中心8国家蜂产品质量监督检验中心9农业部牧草与草坪种子质检中心(北京)10农业部农产品质量监督检验测试中心(北京)11农业部农业环境质量监督检验测试中心(北京)12国家粮油质量监督检验中心、北京市粮油食品检验所、北京13农业部蜂产品质量监督检验测试中心(北京)14北京谱尼理化分析测试中心15北京市产品质量监督检验所16北京市食品质量监督检验二站17北京市种子质量监督检验站18卫生部实验动物检测中心19中国儿童中心儿童食品检测室(国家儿童营养品质量监督检20国家轻工业海湖盐质量监督检测中心21国家轻工业食品质量监督检测天津站、天津市质量监督检验22天津雀巢(中国)有限公司地区实验室23天津市产品质量监督检验所、国家加工食品质量监督检验中24天津市动物检疫站25天津市理化分析中心26天津市实验动物质量监测站27天津市质量监督检验站第19站28天津市质量监督检验站第59站29农业部农药残留质量监督检验测试中心(石家庄)30河北省廊坊市粮食局中心试验室31北京出入境检验检疫局技术中心32国家副食品质量监督检验中心、国内贸易部食品检测科学研33北京市茶叶质量监督检验站34北京市崇文区检验检测中心35北京市动物检疫站36北京市毛麻丝织品质量监督检验站37北京市乳品质量监督检验站38北京市食品质量监督检验四站39北京市兽医实验诊断所40北京市通州区产品质量监督检验所41北京市营养源研究所分析室42天津市农药检定所43保定出入境检验检疫局综合实验室44河北省农药产品质量监督检验站(二)45国家肉类食品质量监督检验中心(中国肉类食品综合研究中46北京大学营养与保健食品评价中心47天津出入境检验检疫局动植食检验检疫分中心48农业部环境质量监督检验检测中心(天津)49河北省农业产品质量监督检验中心50河北省农业机械鉴定站51天津利金粮油股份有限公司检测中心52秦皇岛出入境检验检疫局检验检疫技术中心53河北省保定依棉集团实验室54河北省定州市农产品质量监督检测中心55河北省果桑花产品质量监督检验站56河北省粮油质量检测中心57河北省农产品质量检测中心58河北省鹏泰(秦皇岛)面粉有限公司品质管理部59河北省秦皇岛金海粮油工业有限公司化验室60河北省秦皇岛市产品质量监督检验所61河北省秦皇岛正大有限公司62河北省兽药监察所、河北省饲料检测所、河北省畜产品质量63山西省产品质量监督检验所64山西省晋城市质量技术监督检验测试所65山西杏花村汾酒集团有限责任公司科技质量中心化验室66唐山出入境检验检疫局综合实验室67河北省质量监督检验院68河北省种子质量监督检验站(石家庄)69河北省涿州市产品质量监督检验所70山西农业大学环境监测中心71山西出入境检验检疫局技术中心72山西省分析测试中心73侯马出入境检验检疫局综合实验室74山西省技术监督局饲料产品质量监督检验站75山西省技术监督局烟草质量监督检验站76山西省吕梁地区质量技术监督检验测试所77山西省食品工业研究所78北京市理化分析测试中心79中国农业科学院分析测试中心、国家饲料质量监督检验中心80中国农业科学院土壤肥料研究所测试中心81农业部乳品质量监督检验检测中心、天津市质量监督检验站82天津市农业环境保护管理监测站83天津市质量监督检验站第3站84天津市质量监督检验站第68站85河北省大城县产品质量监督检验所86河北省粮油质量监督检验站唐山分站87河北省唐山市产品质量监督检验所88河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心89秦皇岛出入境检验检疫局植物及植物产品检验检疫实验室90沧州出入境检验检疫局综合实验室91河北省邯郸市产品质量监督检验所92山西省长治市质量技术监督检验测试所93山西省晋中市质量技术监督检验测试所94山西省太原市质量技术监督检验测试所95山西省阳泉市质量技术监督检验测试所96内蒙古巴林右旗产品质量计量检测所97内蒙古巴彦淖尔盟产品质量计量检测所98内蒙古赤峰市产品质量计量检测所99内蒙古出入境检验检疫局检验检疫技术中心100河北省石家庄三鹿乳品有限公司质检中心101山西省朔州市质量技术监督检验测试所102内蒙古第十八产品质量监督检验站103二连浩特出入境检验检疫局动植物食品化矿实验室104浙江省兰溪市质量技术监督检测中心105安徽省蚌埠纤维检验所106四川省绵阳市产品质量监督检验所107北京出入境检验检疫局食品化妆品检测中心108内蒙古农牧渔业生物实验研究中心109内蒙古乌兰察布盟产品质量计量检测所110内蒙古自治区产品质量监督检验所、国家乳制品及肉类产品111内蒙古自治区通辽市产品质量检测所112内蒙古自治区种畜禽质量监督检验站113辽宁出入境检验检疫局动物检疫实验室114辽宁出入境检验检疫局食品检测中心115辽宁出入境检验检疫局植物隔离检疫中心116沈阳出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心117鞍山出入境检验检疫局检验检疫实验室118辽宁省朝阳市产品质量监督检验所119辽宁省大连市产品质量监督检验所(国家粮食质量监督检验120辽宁省大连市农产品质量监测中心、大连市售药饲料监察所121辽宁省丹东市产品质量监督检验所122辽宁省葫芦岛市产品质量监督检验所123鲅鱼圈出入境检验检疫局检验检疫技术中心农产品实验室124辽宁省锦州市兽药饲料监察所125吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督126辽宁省辽宁市产品质量监督检验所127辽宁省营口市产品质量监督检验所128山西省运城市质量技术监督检验测试所129内蒙古鄂尔多斯市产品质量计量检测所130东港出入境检验检疫局水产品检验检疫实验室131辽宁省抚顺市产品质量监督检验所132农产品及食品安全质量监督检验站(鞍山市产品质量监督检133营口出入境检验检疫巨综合实验室134吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心135吉林省白山市产商品质量监督检验所136吉林省金士百啤酒集团公司品控处化验室137吉林省兽药饲料监察所138通化出入境检验检疫局综合实验室139吉林省烟草质量监督检测站140延边出入境检验检疫局综合实验室141吉林省延边州产品质量监督检验所、国家参茸产品质量监督142黑龙江哈尔滨医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研143黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心综合实验室144浙江省苍南县产品质量监督检验所145农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心(哈尔滨)146黑河出入境检验检疫局综合技术中心147上海市产品质量监督检验所148上海市农药及种子质量监督检验站149满洲里出入境检验检疫局食品农产品实验室150内蒙古自治区纤维检验局151辽宁出入境检验检疫局农产品实验室152丹东出入境检验检疫局综合实验室153辽宁省化肥产品质量监督检验站154锦州出入境检验检疫局综合实验室155辽宁省饲料质量监督检验二站156辽宁省瓦房店市产品质量监督检验所157农业部特种经济动植物及产品质量监督检验测试中心158农业部特种经济动植物及产品质量监督检验测试中心159吉林师范大学分析测试中心160绥芬河出入境检验检疫局综合实验室161辽宁省沈阳农业大学分析测试中心162辽宁省沈阳市兽药饲料监察所163吉林省农作物种子质量监督检验站164黑龙江省哈尔滨市渔业环境监测站165黑龙江省哈尔滨市质量监督检验所、国家农林副产品质量监166黑龙江省粮油卫生检验监测站167黑龙江省食品质量监督检验一站168黑龙江省烟草质量监督检测站169上海市副食品质量监督检验站170上海市水产品质量监督检验站171上海蔬菜豆制品检测中心172辽宁省农业环境保护监测站173辽宁省盘锦市产品质量监督检验所174辽宁省沈阳化工研究院农药检验实验室175辽宁省沈阳市产品质量监督检验所、国家食品添加剂质量监176吉林省粮油卫生检验监测站177吉林省延边粮油品质卫生检验监测站178黑龙江省国家林业局野生动植物检测中心179北京出入境检验检疫局玩具检验中心180国家质检总局动植物检疫实验所植物隔离检疫圃(植物病毒181国家质检总局转基因产品检测技术研究中心182三明检验检疫局理化微生物实验室183黑龙江省牡丹江市产品质量监督检验所184黑龙江省齐齐哈尔市质量技术监督检测检验中心185黑龙江省乳制品质量监督检验站、国家乳制品质量监督检验186黑龙江省伊春市产品质量监督检验所187上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心188上海市实验动物质量监督检验站189上海市营养食品质量监督检验站、上海源本食品质量检验有190江苏出入境检验检疫局食品实验室191江苏出入境检验检疫局病虫害检疫与处理实验室192江苏南京市产品质量监督检验所193黑龙江省双鸭市产品质量监督检验所194农业部上海水产品质量监督检验测试中心(上海)195通标标准技术服务有限公司上海分公司实验室196江苏出入境检验检疫局动物检疫实验室197江苏快达农化股份有限公司技术质监部198江苏省泰兴市长寿面粉有限公司质检科199江苏省烟草产品质量监督检测站200江苏省淮安市纤维检验所201江苏省纤维检验所202江苏南通江山农药化工股份有限公司总工程师办公室质检室203江苏省产品质量监督检验中心所205江苏省常州市产品质量监督检验所206江苏省东台市产品质量监督检验所207江苏省海门市产(商)品质量监督检验所208江苏省技术监督食用油产品质量检验站209连云港出入境检验检疫局动植物实验室210江苏省连云港市产品质量监督检验所211江苏省南通市产品质量监督检验所212江苏省南通质量技术监督种子产品质量检验站213江苏省苏州市产品质量监督检验所、苏州市纤维检验所214江苏省无锡市产品质量监督检验所215国家粮食局无锡粮油食品饲料质量监督检验测试中心216莆田出入境检验检疫局理化微生物实验室217福建出入境检验检疫局鞋类检测中心218甘肃出入境检验检疫局动植物检验检疫实验室219甘肃出入境检验检疫局金属化矿实验室220甘肃出入境检验检疫局中心实验室食品安全检测实验室221江苏省淮北市质量技术监督技术所222江苏省徐州市产品质量监督检验所223江苏省扬州市产品质量监督检验所224江苏省宜兴市产品质量监督检验所225张家港出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心226镇江出入境检验检疫局综合技术中心227江苏省质量技术监督粮食产品质量监督检验站228浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心理化实验室229浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心微生物实验室230浙江省东阳市质量技术监督检测中心231杭州市乳品及饲料产品质量监督检验站232浙江省杭州市萧山区质量计量监测中心233湖州出入境检验检疫局综合实验室234安徽省滁州市质量技术监督技术所235安徽省淮北市质量技术监督技术所236潮州出入境检验检疫局陶瓷检验实验室237潮州出入境检验检疫局HIV抗体初筛实验室238东莞出入境检验检疫局综合技术中心纺织品实验室239东莞出入境检验检疫局综合技术中心高分子材料实验室240安徽省芜湖产品质量监督检验所241江苏省蚕茧检验所243江苏省昆山市产品质量监督检验所244南通出入境检验检疫局综合技术中心245江苏省泰州市产品质量监督检验所246盐城出入境检验检疫局综合检测中心247扬州出入境检验检疫局综合检测中心248浙江方圆检测股份有限公司249嘉兴出入境检验检疫局综合实验室250农业部稻米及制品质量监督检验测试中心251浙江省蚕种质量检验站252浙江省海宁市产品质量监督检验所253浙江省杭州市质量技术监督检测院254浙江省金华市质量技术监督检测中心255浙江省乐清市质量技术监督检测院256安徽华润啤酒蚌埠分公司化验室257浙江省杭州市水产科学研究所监测中心258浙江省嘉幸市粮油食品检测中心259北仑出入境检验检疫局综合测试实验室260绍兴出入境检验检疫局综合技术服务中心261浙江省台州市质量技术监督检测研究院262浙江省玉环县产品质量监督检验所263浙江省舟山市质量技术监督检测中心264安徽省兽药饲料监察所265无锡出入境检验检疫局食品化工与动植物实验室266江苏省新沂市产品质量监督检验所267江苏省张家港市产品质量监督检验所268江苏省镇江市产品质量监督检验所269无锡出入境检验检疫局生丝与纺织原料检测技术中心270农业部茶叶质量监督检验测试中心271福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心272莆田出入境检验检疫局理化微生物检验室273福建省莆田市产品质量监督检验所274泉州出入境检验检疫局综合检测中心275福建省食品质量监督检验站276山东省德州市产品质量监督检验所277浙江省温州市质量技术监督检测院278国家农业标准化与监测中心279中国科学技术大学结构成分分析中心280东莞出入境检验检疫局综合技术中心鞋检实验室281东莞出入境检验检疫局保健中心艾滋病初筛实验室282佛山出入境检验检疫局机电实验室283佛山出入境检验检疫局技术中心轻纺实验室284福建省福州市产品质量检验所285福建省厦门市渔业环境/渔业质量监测站实验室286福建省中心检验所、国家水产品及肉类产品质量监督中心(287福建省种子质量监督检验站288厦门出入境检验检疫局食品与动植物实验室289福建省福州市水产品质量检验站290济南出入境检验检疫局技术中心食品实验室291农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心292农业部农作物种子质检中心(济南)293农业部水产种质与渔业环境质量监督检验测试中心(青岛)294农业部玉米种子质量监督检验测试中心(济南)295黄岛出入境检验检疫局动植物产品及食品实验室296济宁出入境检验检疫局综合技术检测中心食品实验室297山东省临沂市卫生防疫站298福建省金钱(漳州)实业有限公司299江西省兽药饲料监察所300山东省分析测试中心301山东省青岛市菜篮子商品质量监督检测中心302山东省青岛市粮油检测站303安徽省皖西南产品质量监督检验中心(安庆市质量技术监督304福建省厦门市产品质量检验所305江西出入境检验检疫局综合技术中心306山东省广饶县产品质量监督检验所307山东省济宁市产品质量监督检验所308临沂出入境检验检疫局食品实验室309青岛出入境检验检疫局食品实验室310山东省青岛农作物种子质量监督检验站311山东省青岛市农业科学研究院中心实验室312山东省青岛市产品质量监督检验所、国家啤酒质量监督检验313日照出入境检验检疫局食品实验室314山东省日照市产品质量监督检验所315山东省兽药监察所316泰安出入境检验检疫局综合实验室317梅州出入境检验检疫局农化、工业品、纺纤实验室318汕尾出入境检验检疫局综合实验室319四川省泸州老窖股份有限公司质检中心320山东省泰安市产品质量监督检验所(泰安市农产品质量检验321山东省泰安市畜牧兽医检验中心322潍坊出入境检验检疫局食品实验室323烟台出入境检验检疫局技术中心324烟台出入境检验检疫局开发区办事处食品实验室325河南省安阳市粮油饲料产品质量监督检验所326福建省测试技术研究所、福建省分析测试中心327福建省粮油中心检验室328农业部肉及肉制品质量监督检验测试中心329江西省土壤肥料测试中心330国家水产质量监督检验中心、青岛市水产品质量监督检验站331山东省东营市产品质量监督检验所332山东省青岛市农产品质量监督检测中心333石岛出入境检验检疫局食品实验室334山东省水产品质量检验中心335佛山出入境检验检疫技术中心动植物与食品实验室336黄埔出入境检验检疫局登革热实验室337惠州港检验检疫局石油实验室338惠州港出入境检验检疫局医学检测综合实验室339山东省潍坊市产品质量监督检验所340山东省淄博市产品质量监督检验所341农业部棉花品质监督检验测试中心342河南省安阳市质量技术监督检验测试中心343河南省产品质量监督检验所、国家专用乙醇汽油质量监督检344河南省焦作市质量技术监督检验测试中心345河南省开封市质量技术监督检验测试中心(质检部分)346河南省洛阳市质量技术监督检验测试中心347漳州出入境检验检疫局农产品、食品实验室348江西省南昌市产品质量监督检验所、国家果蔬水产肉禽产品349山东省产品质量监督检验所、国家蔬菜质量监督检验测试中350山东省济南市产品质量监督检验所351山东省寿光市产品质量监督检验所352山东省烟台市产品质量监督检验所、国家葡萄酒质量监督检353安徽出入境检验检疫局金属材料实验室354洛阳出入境检验检疫局化矿农食实验室355河南省烟草质量监督检验站356湖南龙山卷烟厂实验室357山东省枣庄市产品质量监督检验所358国家轻工业食品质量监督检测郑州站359农业部农业产品质量监督检验测试中心(郑州)360河南省鹤壁市质量技术监督检验测试中心361河南省粮油饲料产品质量监督检验站362河南省漯河市质量技术监督检验测试中心363河南省南阳市质量技术监督检验测试中心364河南省三门峡市质量技术监督检验测试中心365河南省新乡市质量技术监督检验测试中心366河南省新郑市质量技术监督检验测试中心367河南省许昌市产品质量监督检验测试中心368河南省郑州市质量技术监督检验测试中心369河南省周口市农业局土壤监测中心370河南省周口市质量技术监督检验测试中心371聊城出入境检验检疫局食品实验室372山东省农药质量监督检验站373河南出入境检验检疫局技术中心动植物食品实验室374河南省驻马店市粮油质量检测中心375河南省驻马店市质量技术监督检验测试中心376农业部农作物种子质量监督检验测试中心(武汉)377农业部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心(武汉)378湖北省产品质量监督检验所、国家饮料及粮油制品质量监督379四川省饲料工作总站、四川省畜产品安全检测中心380贵州驰宇集团毕节卷烟厂质量监督检测站381贵州省产品质量监督检验所、国家酒类及饮料质量监督检验382贵州省理化测试分析研究中心383贵州省农作物种子质量监督检验站384贵州省烟草质量监督检测站385贵州省遵义市质量技术监督监测所386中国科学院地球化学研究所资源环境测试分析中心387珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心微生物检验室388珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心仪器分析室389农业部亚热带果品蔬菜质量监督检验测试中心390凭祥出入境检验检疫局检测中心391广西壮族自治区轻工产品质量监督检验站392广西壮族自治区质量技术监督局农作物种子质量监督检验站393农业部农业环境质量监督检验测试中心(重庆)394四川出入境检验检疫局丝类商品检测中心395贵州省农业科学院中心实验室396陕西省咸阳市秦都区土壤肥料化验室397农业部牧草与草坪种子质量监督检验测试中心(兰州)398宁夏粮油产品质量监督检验站399四川省产品质量监督检验所、国家白酒质量监督检验中心(400贵州出入境检验检疫局农畜食品实验室401贵州省农药产品质量监督检验站402贵州省饲料产品质量监督检验站、贵州省饲料监测所403贵州省无公害蔬菜及制品质量监督检验站404贵州师范大学分析测试中心405农业部农业环境质量监督检验测试中心(昆明)406云南省产品质量监督检验中心407云南省楚雄州质量技术监督综合检测中心408云南省德宏州质量技术监督检测中心409云南省滇西质量技术监督检测中心410云南省粮油产品质量监督检验测试中心411广西壮族自治区农药检定管理所412四川省农业环境保护监测站413贵州省食品卫生研究所414农业部玉米种子质量监督检验测试中心(兰州)、甘肃省农415北京出入境检验检疫局、国际旅行卫生保健中心实验室416北京出入境检验检疫局机电实验室417北京出入境检验检疫局金属材料实验室418瑞丽出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心419云南省土壤肥料测试中心420云南省畜禽产品安全监督检测中心、云南省兽药监察所、云421西藏出入境检验检疫局技术中心422农业部农业环境质量监督检验测试中心(西安)423陕西省兽药监察所424甘肃出入境检验检疫局中心实验室425甘肃省产品质量监督检验所426甘肃省饲料质量监督检验站。
【关键字】检验中华人民共和国出入境检验检疫行业标准植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法修订编制说明任务来源和工作情况根据国家认证认可监督管理委员会标准制(修)订计划(编号2010B207),由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、国家质检总局动植物检疫实验所、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局共同负责中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1194-2003《植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法》的修订工作。
修订该标准是国家转基因重大专项课题《转基因生物抽样和精准检测技术》(课题编号2008ZX08012-001)的研究内容之一。
本标准修订工作组引用和参照了抽样检验国家标准系列中的部分标准、数据的统计处理和解释国家标准系列中的部分标准,系统研究了国内外相关标准和文献,针对性地研究了转基因产品检测的特点,总结SN/T1194-2003标准实施7年来的经验,按GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求完成了修订工作。
修订本标准的目的和意义近年来,转基因植物培育取得突破,推出了一批新品种,在改善农作物品质、提高产量方面发挥了巨大作用。
然而,人们对转基因产品的安全性存在着很多的争论。
欧盟和一些国家相继出台了转基因产品管理法规,我国也实施《农业转基因生物安全管理条例》等管理办法。
转基因产品的检测是这些旨在保护生物和生态安全、维护消费者权益、促进贸易和经济健康发展的法规和政策的基本依据,其标准化将为制订、实施和改进这些法规和政策提供有力保证。
抽样和制样工作是检测工作的重要部分和基本前提,它的质量决定了检测结果的准确度。
如果不能得到具有代表性的样品,无论进行多么细致和精密的检测,其结果都无法表征总体的性质。
制订合理和可行的抽样和制样标准以获取具有代表性的样品,对规范转基因产品检测工作,保证检测质量和提高检测结果的可信度具有重要意义。
转基因产品的发展历史较短,许多问题都有待解决,抽样和样品制备方法也是该领域的重要问题。
转基因植物产品检测实验室一览序号仪器名称用途参考品牌型号与配置大大致预算1 高速冷冻离心机生物样品的高速分离(冷冻保持样品生活活性)。
德国eppendorf;美国Thermo;德国Sigma;德国Herolab。
50000 1200002 定性PCR扩增仪微量基因片段(DNA/RNA)的扩增德国Peqlab、美国ABI、德国eppendorf、美国Bio-rad。
50000 110000定量CR扩增仪(荧光定量PCR)扩增的同时对基因片段做定量检测。
美国ABI、德国eppendorf、美国Bio-rad。
250000 7800003 PCR专用工作台保证PCR时的无污染。
(或建设标准的PCR层流实验室)德国Peqlab。
(国产超净台也可替代。
)10000 340004 电泳槽、电泳仪基因片段扩增之后跑凝胶。
德国Peqlab、美国Bio-rad。
或北京六一。
15000 400005 凝胶成像系统对凝胶进行分子量、等定性分析法国VL,美国Bio-rad、或国产。
350000 1500006 紫外透射仪国产6000 150007 制冰机国产20000 350008 CO2培养箱美国Tehrmo。
美国shellab20000 500009 液氮罐国产。
4000 1000010 超纯水美国millipore;美国Tehrmo。
40000 76000 双蒸馏水发生器国产4000 1800011 分子生物常用耗材与试剂5000 1000012 转基因专用试剂5000 10000其他设备:细胞融合仪、核酸提取仪、紫外分光光度计、核酸蛋白检测仪磁力搅拌机杂交仪、-30℃低温冰箱、超低温冰箱、漩涡混合器、超声波细胞粉碎仪、自动恒温酶标。
7 操作步骤抽样参照NY/T672 转基因植物及其产品检测通用要求和NY/T673 转基因植物及其产品检测抽样。
制样参照NY/T672 转基因植物及其产品检测通用要求和NY/T673 转基因植物及其产品检测抽样(按照GB 5491中四分法制备样品进行送检)。
DNA模板的制备a称取200-400 mg试样,在液氮中磨碎,装入已经用液氮预冷的ml离心管中。
b加入1ml预冷至4 ℃的抽提液,剧烈摇动混匀后,在冰上静置5分钟,用13 000 r/min离心机,4 ℃离心15 min,弃去上清液。
c加入600 μl 预热到65 ℃的抽提裂解液,用玻棒搅拌上下颠倒充分混匀,在65 ℃的水浴锅中裂解40 min。
d用13 000 r/min离心机室温离心10 min,将上清液转至另一离心管中,加入5 μl RNase A (10 mg/ml),37 ℃水浴30 min。
e分别用等体积苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提一次。
f用13 000 r/min离心机室温离心10 min,将上清转至另一离心管中。
加入2/3体积异丙醇,1/10 体积3M乙酸钠(pH ),-20 ℃放置2-3 h,充分沉淀DNA。
g13 000 r/min,4 ℃离心15 min,用70%乙醇洗沉淀一次,倒出乙醇,晾干DNA。
加入50 μl TE()溶解DNA。
h把DNA溶液浓度用重蒸馏水调制为100ng/μl,储存于-20 ℃备用。
注意:I 1 g试样(如棉花种子)提取的DNA量应不小于200 μg。
II DNA的OD260/OD280的比值应在左右,且OD260的值应在曲线的最高峰。
PCR反应7.4.1 试样的PCR反应在PCR反应管中按表1依次加入反应试剂, 用手指轻弹混匀,再加约50 μL石蜡油(有热盖设备的PCR仪可以不加石蜡油)。
每个试样3次重复。
在台式离心机离心10s后,将PCR管插入PCR仪中。
95℃变性5 min;进行35次循环扩增反应(Sad1基因、nos终止子、CaMV35S启动子:94℃,30 s;56℃,30 s;72℃,30s;cry1Ac基因、cry1Ab基因、以及cry1Ac与cry1Ab融合基因:94℃,1 min;56℃, 1 min;72℃, 1 min );然后72℃恒温7 min,取出PCR反应管,对反应产物进行电泳检测或在4℃下保存。
表1 PCR反应体系试剂终浓度单样品体积ddH2O10×PCR 缓冲液1× 5 µl25 mM MgCl2mM 5 µl10 mM dNTPs mM 1 µl10 µM Primer 1 µM µl10 µM Primer 2 µM µl5 U/µl Taq 酶U/µl µl100 ng/µl DNA 模板 5 ng/µl µl总体积50 µl7.4.2 对照的PCR反应在试样PCR反应的同时,应设置阴性对照、阳性对照和空白对照。
阴性对照是指用非转基因抗虫棉花材料中提取的DNA作为PCR反应体系的模板;阳性对照是指用转基因抗虫棉花材料中提取的DNA作为PCR反应体系的模板;空白对照是指用无菌重蒸水作为PCR反应体系的模板。
上述各对照PCR反应体系中,除模板外其余组分与7.4.1相同。
PCR产物的电泳检测将适量的琼脂糖加入1×TAE缓冲液中,加热将其溶解,配制成琼脂糖浓度为2%(w/v)的溶液,然后按每100 mL 琼脂糖溶液中加入5 µL溴化乙锭溶液的比例,加入溴化乙锭溶液,混匀,稍适冷却后,将其倒入电泳板上,插上梳板,室温下凝固成凝胶后,放入1×TAE缓冲液中,轻轻垂直向上拔去梳板。
在每个泳道中加入适量的PCR产物(需和上样缓冲液混合,10 µL-20µL),其中一个泳道中加入DNA分子量标准,接通电源进行电泳,按2 V/cm 的电压电泳15-30 min。
凝胶成像分析(照相)电泳结束后,取出琼脂糖凝胶,轻轻地置于凝胶成像仪上或紫外透射仪上成像。
根据DNA分子量标准估计扩增条带的大小,将电泳结果形成电子文件存档或用照相系统拍照。
如果通过PCR结果能够明确判定试样是或不是转基因抗虫棉,则样品检测结束;如果不能明确判定,则进行以下试验,见、和。
PCR产物的回收将100 µl PCR反应液与上样缓冲液混合后,加入配制好的含2%(w/v)琼脂糖凝胶的泳道中,在其中的一个泳道中加入DNA分子量标准,接通电源进行电泳。
其余步骤按PCR产物回收试剂盒说明进行。
PCR产物的酶切鉴定CaMV35S启动子扩增产物为195 bp,可以被限制性内切酶XmnⅠ切成大小为80 bp和115 bp的两个片段。
取15 µL回收的PCR产物放入反应管中,加入1 µL的限制性内切酶XmnⅠ,再加入2 µL反应酶切反应缓冲液,加水2 µL配成20 µL反应体系,在37℃恒温水浴保温反应3小时。
将20 µL反应液与上样缓冲液混合后加入配制好的%(w/v)琼脂糖凝胶的一个泳道中,按和的步骤操作进行分析。
PCR产物的克隆和测序对PCR产物片段按PCR产物回收试剂盒说明进行琼脂糖凝胶回收,连接到T-easy载体上,进行序列测定,并对测序结果进行比对和分析。
8 结果分析与表述如果阳性对照的PCR反应中, Sad1内标准基因、CaMV35S启动子、nos终止子以及cry1Ac基因或cry1Ab基因或cry1Ac 与cry1Ab融合基因基因这四个序列都得到了扩增,且扩增片段大小与预期片段大小一致,而在阴性对照中仅扩增出Sad1基因片段,空白对照中没有任何扩增片段,表明PCR反应体系正常工作。
否则表明PCR反应体系不正常,需要查找原因重新检测。
在PCR反应体系正常工作的前提下,检测结果通常有以下几种情况:(1)在试样PCR反应中,只要Sad1内标准基因以及cry1Ac基因或cry1Ab基因或cry1Ac与cry1Ab融合基因抗虫基因都得到了扩增,且扩增片段大小与预期片段大小一致,表明该样品为阳性结果,检出cry1Ac基因或cry1Ab基因或cry1Ac 与cry1Ab融合基因。
(2)如果在试样和阴性对照的PCR反应中,仅有Sad1内标准基因片段得到扩增,表明该样品为阴性结果,未检出转基因成分。
(3)在试样PCR反应中, Sad1内标准基因得到了扩增,CaMV35S启动子、nos终止子或其中一种序列也得到了扩增,且扩增片段大小与预期片段大小一致,但cry1Ac基因、cry1Ab基因、cry1Ac与cry1Ab融合基因都没有得到扩增,表明该样品为阳性结果,检出转基因成分。
此时,要求研发者提供相应的靶基因序列以便进行进一步验证。
转基因番木瓜的抗病性及分子鉴定对T1代转番木瓜环斑病毒(PRV)复制酶(RP)突变体基因的两个番木瓜株系,进行了抗病性和分子生物学分析.结果表明,转基因番木瓜对PRV抗性达到高抗或免疫,目的基因RP遗传至转基因后代并在RNA水平表达,PCR可检测到CaMV35S 启动子序列、标记基因NPTII.作者:作者单位:叶长明,魏祥东,陈东红,蓝崇钰(中山大学基因工程教育部重点实验室,生物防治国家重点实验室,广州,510275)朱利民(香港中文大学生物系,香港沙田)国家转基因植物检测与监测中心(华东)项目实验仪器设备(二)招标公告采购内容:(共四个组包)组包一实时荧光定量PCR仪1台基因扩增仪1台高速冷冻离心机1台双向电泳仪1台紫外分光光度计1台组包二高速台式离心机1台组包三、微量移液器(单道)30支移液枪(8通道) 3支组包四、人工气候箱1台自动高压蒸汽灭菌锅1台。