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医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则

病毒感染的检查方法与防治原则
第一节病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本：采取采取急性期标本、使用抗生素处理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本：双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾）细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？与细菌标本类似 ❖ 好的标本？正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检细胞培养测病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒（乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )

医学微生物学ppt课件完整版

病毒缺乏独立的代谢和能量系统，必须利用宿主细胞的酶系统、原料和能量进行复制。
形态多样结构简单寄生生活
严格细胞内寄生
病毒粒子形态各异，有球形、杆状、砖形、蝌蚪形等。
病毒必须寄生在活细胞内才能复制和增殖。
病毒的复制与变异
复制周期
包括吸附、注入、脱壳、生物合成、组装与释放等步骤。
变异机制
病毒的变异机制包括错误复制、基因重组和基因重配等。
通过接种疫苗可以预防某些由微生物引起的疾病，如麻疹、流感等。
微生物与药物的关系
微生物是药物的重要来源
许多抗生素、抗真菌药物等都来源于微生物或其代谢产物。
微生物在药物生产中的应用
利用微生物发酵技术可以生产多种药物，如青霉素、维生素等。
微生物与药物相互作用
某些药物可以影响微生物的生长和代谢，同时微生物也可以影响药物的吸收、分布和代谢。
06
实验诊断与防治原则
Chapter
实验诊断方法与技术
细菌学诊断方法
包括细菌培养、生化反应、血清学试验等，用于鉴定细菌种
类和检测细菌感染。
病毒学诊断方法
包括病毒分离、病毒抗原检测、病毒核酸检测等，用于鉴定病毒种类和检测病毒感染。
免疫学诊断方法
包括抗原抗体反应、免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验等，用于检测病原体特异性抗原或抗体。
03
人类通过培养有益微生物和消灭有害微生物来维护自身健康，
如疫苗接种、消毒灭菌等。
02
细菌学
Chapter
细菌的形态与结构
细菌的基本形态
球菌、杆菌、螺形菌
细菌的结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质
特殊结构
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢

动物免疫抗体血清学检测技术

动物疫病免疫抗体血清学检测方法的意义二、血清学检测内容和方法三、血凝和血凝抑制实验四、酶联免疫吸附实验五、虎红平板凝集实验（初筛）
一、血清学检测的意义
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动物进行有效的免疫接种后，才能产生一定的保护力，从而防止疫病的侵入和蔓延。因此在群体接种疫苗前后对抗体水平进行检测，准确了解动物疫病发生、传播和流行情况，掌握畜禽免疫抗体水平和动物疫病保护情况，从而更有效地采取综合防控措施。因此，做好动物免疫抗体检测工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
4.第二次离心结束后，同样吸出上层液体及白细胞层，再加入适量 PBS缓冲液，配平后进行第三次离心，2000r/min离心10min，进一步清洗红细胞。
5.离心结束，最后一次吸出上层清液。量取 99mlPBS缓冲液加入100ml大青瓶（或其他容器），用注射器（或其他，如吸管）吸取1ml洗净的红细胞，缓慢加入99mlPBS缓冲液中，塞紧瓶塞。
材料准备抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和腐败气味虎红平板凝集反应纸吸头，适用于滴加0.03ml 牙签或火柴杆，供搅拌用
操作方法将虎红平板纸上加相应血清 0.03ml 。在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。每次试验应设阴、阳性血清对照。
血凝素（HA）柱状
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验：
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验 (HI) 。该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。目的：检测有无病毒感染和免疫状态。

实验五禽流感血清学诊断

血凝抑制（HI）试验
1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1 孔至第11孔各加50 uL生理盐水。 3. 第1孔加被检鸡血清50 uL，吹吸混合均匀，吸50 uL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50 uL，稀释度分别为：1:2、1:4、 1:8 …… ；第12孔加禽流感阳性血清50 uL，作为血清对照。
判定标准：HI效价小于或等于3lg2判定HI试验阴性；HI效价等于4lg2为可疑，需重复试验；HI效价大于或等于5lg2为阳性

禽流感灭活疫苗免疫效果判断：HI抗体效价≥ 4log2(1:16) 为免疫合格。禽流感弱毒疫苗免疫效果判断：鸡群免疫抗体转阳率≥50%判定合格。

正常合格为从高浓度到低浓度（从前到后）红细胞沉积依次减少，如1-4孔出现不完全沉积，即凝集现象，即无抗体或抗体水平较低，不合格；反之，5-10 孔出现沉淀，则抗体水平较高，合格。
血凝（HA）试验
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 μL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 μL；第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 μL，在振荡器上振荡，室温下静臵后观察结果。
﹣
振荡1分钟，室温10分钟
以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血清效价
血凝抑制（HI）试验
6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（#），而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。

血清学反应-沉淀反应

二凝胶内沉淀实验
（一）免疫琼脂实验(Immunodiffusion test）
原理：抗原抗体在电解质存在的条件下，再合适的比例处形成白色沉淀线，并且一种抗原抗体系统形成一种沉淀线，另一种形成另一种沉淀线，互相不影响。优点：能将复合的抗原成分加以区分，根据沉淀线的数目，位置，以及相邻两条沉淀线之间的融交分支等情况即可了解该复合抗原的组成。并且可以将沉淀线用特殊染色法（蛋白质、多糖、之类的鉴定染色），生物活性(酶活性)和同位素标记法鉴定抗原的成分。实验类型：
（3）对流免疫电泳对流免疫电泳是双向扩散与电泳技术相结合的一种方法。在PH8~8.6的缓冲溶 8-21火箭免疫电泳液中，蛋白质抗原带负电，向阳极移动。抗体虽然也是蛋白质，但等电点比抗原高，所带阴离子少且分子质量大，移动缓慢，同电渗反而向阴极移动。实验时，将免疫血清置琼脂板正极孔内。通电后，在电场作用下，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在最适比例处相遇时即形成白色沉淀。由于电场作用，既限制了抗原抗体向多方向扩散，有加速了泳动速度，缩短了时间。优点：时间短，灵敏度高。缺点：特异性不如双扩散高。如图8-20 8-20对流免疫电泳
抗原
抗体
单向单扩散
2.单向双扩散用内径8mm的试管，现将含有阳性血清的琼脂加于管底，高约6mm，中间加一层同样浓度的琼脂，先凝固后加待测0.25ml抗原，37°或室温扩散数日。抗原抗体在中间琼脂层相向扩散，在平衡点上形成沉淀线。
单向双扩散
3. 双向双扩散
试验在玻璃板或平皿上进行,用1.6％~2.0％琼脂加一定浓度的等量抗体浇成凝胶板厚度为2~3mm在其上打孔直径为2mm，孔内滴加抗原液。抗原在孔内向四周辐射扩散，在与凝胶中的抗体接触形成白环。此环随扩散时间而增大。因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，即可用以测定抗原的量。此法在兽医临床已用于传染病的诊断：如马立克氏病的诊断。将马立克氏病高免血清制成血琼脂平板，拔取病鸡新换的有髓质的羽毛数根，将毛根剪下，插于血琼脂平板，阳性者毛囊中病毒向四周扩散，形成白色沉淀环。

4病毒血清学实验方法

二、方法与步骤
（一）试验材料
病毒
必须是具有感染力的病毒，先进行病毒滴度的测定。
细胞培养，将病毒10倍稀释接种敏感细胞，观察CPE，确定滴定终点以CCID50 或LD50表示。
标准病毒试验浓度：100 CCID50/单位体积或100 LD50/单位体积。
（一）试验材料
抗体
包含病毒抗体阳性和阴性血清。用细胞培养法测病毒抗体的滴度：将倍比稀释
＝（71－50）/（71－29）＝0.5
大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-3+0.5 ×lg0.1=-3.5,其反对数是10-3.5。
阳性血清组的病毒CCID50为10-3.5/0.1ml。
因抗血清组的CCID50为10-3.5，阴性血清组的病毒 CCID50为10-5.5,所以10-3.5-10-5.5=2,表明分离的病毒是与中和抗体相对应的病毒。
lgCCID50=大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-5+0.5 ×lg0.1=-5.5,其反对数是10-5.5.
阴性血清组的病毒CCID50为10-5.5/0.1ml。
用Reed-Muench计算表：阳性组血清病毒CCID50的计算
病毒稀释 CPE孔数
第六章病毒血清学实验方法
第一节、中和试验
（neutralization test)
概念：体外将病毒与特异抗体混合并发生反应，再将混合物接种至敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的方法。
– 中和抗体：凡与病毒抗原结合使病毒失去感染力的抗体。
–优点
敏感性和特异性高；中和抗体在体内存在时间长。

医院感染诊断标准ppt课件

医院感染诊断标准
演讲人
目录
01. 医院感染概述 03. 医院感染的诊断标准 05. 医院感染的预防措施
02. 医院感染的分类 04. 医院感染的监测与管理 06. 结论
医院感染概述
1
定义
感染途径：包括接触传播、空气传播、飞沫传
播等
感染症状：包括发热、咳嗽、腹泻、皮疹等
01
02
03
04
医院感染：指在医院内发生的感染，包括患者、
染
医护人员防护：医护人员应穿戴防护服、口罩、手套等防护用品，
避免感染
隔离措施与消毒灭菌方法
01
Байду номын сангаас
隔离措施：对疑似或确诊患者进行隔离，防止交叉感染
02
消毒灭菌方法：使用消毒剂、紫外线、高温等方法对环境、物品进行消毒灭菌
03
防护措施：医护人员穿戴防护服、口罩、手套等，减少感染风险
04
监测与评估：定期对患者进行感染状况监测，评估隔离措施与消毒灭菌方法的效果
染事件
加强医务人员培训，提高医院感染防控意识和
能力
加强医院感染控制设施和设备的投入，确保医疗环境安全
建立医院感染应急处置机制，确保及时有效应对感染事件
医院感染管理政策与法规
国家卫生计生委颁布的《医
院感染管理办 1
法》
各地方卫生计 4
生委颁布的医院感染管理相关法规和政策
国家卫生计生委颁布的《医
D
寄生虫感染：如蛔虫、钩虫等
C
真菌感染：如念珠菌、曲霉菌等
B
病毒感染：如流感病毒、乙型肝炎病毒等
A
细菌感染：如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等

ELISA知识简介PPT课件

27 Nhomakorabea06
总结与展望：ELISA技术发展趋势预测
2024/1/26
28
新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景干扰。
2024/1/26
29
2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患者治疗过程中肿瘤标志物的变化，评估治疗效果和预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿瘤患者康复期肿瘤标志物的水平，及时发现肿瘤复发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
30
自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
2024/1/26
03
其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早期发现和筛查。

梅毒实验检查ppt课件

一期与二期梅毒发病率：12.72/10万，增长8.4% 胎传梅毒发病率：66.55/10万活产数
2021精选ppt
11
2010年全国梅毒疫情地区分布
2021精选ppt
发病率位于前5位：浙江：97.13/10万广西：82.58/10万上海：75.93/10万福建：58.23/10万新疆：52.97/10万
2021精选ppt
13
年龄组
梅毒实验室诊断
2021精选ppt
14
溃疡渗出物 ①
血清或血浆 ②
2021精选ppt
15
2021精选ppt
16
梅毒暗视野采样
标本采集部位：
皮肤或粘膜损害
有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。
运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）
2021精选ppt
19
2021精选ppt
20
暗视野显微镜检查
结果解释—阳性
暗视野显微镜查阳性，临床上可确诊梅毒特别对一期梅毒硬下疳，肿大淋巴结，二期梅毒皮肤粘膜损害的诊断有重要价值，尤其使用于早期梅毒血清学阴性时
2021精选ppt
21
暗视野显微镜检查
结果解释—阴性阴性结果不能排除梅毒
性病研究实验室玻片试验（VDRL）血清不需加热的反应素玻片试验（USR）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）甲苯胺红血清不需加热试验（TRUST）
2021精选ppt
26
RPR/TRUST
原理:
RPR:以黑色的炭颗粒作为指示标记物 TRUST:以红色的甲苯胺红颗粒作为指示标记物

血清学鉴定实验-PPT

15
O抗原、H抗原和Vi抗原
❖ O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的耐热多糖抗原，100 ℃，2.5 h不被破坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多
糖侧链多糖的组成。
❖
H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗
原，共有63种，60 ℃加热30～60 min
及酒精作用均可破坏其抗原性，但能抵
抗甲醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏
❖血清型以数字和字母表源自.例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表.
鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12），
第Ⅰ相H抗原（i）
第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，
2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。
❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
18
❖
用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清鉴定的方法
19
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、 O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种多价H血清检查。 4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或第 2相H抗原。 5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1相 H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位相变异检查。 6. 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果，按照考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。

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lgCCID50=大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-5+0.5 ×lg0.1=-5.5,其反对数是10-5.5.
阴性血清组的病毒CCID50为10-5.5/0.1ml。
用Reed-Muench计算表：阳性组血清病毒CCID50的计算
病毒稀释 CPE孔数
用中和试验方法鉴定病毒时，将不同稀释倍数的病毒与标准的抗血清(20个抗体单位/单位体积)混合、孵育，使二者充分反应，然后将混合液接种到敏感宿主体内，观察试验结果。
–试验材料
宿主:敏感细胞和动物、鸡胚；标准抗病毒血清(20个抗体单位/0.1ml);病毒分离物。
–试验步骤
不同浓度病毒液与等量的抗病毒血清混合细胞培养液倍比稀释病毒；
的病毒抗血清液与等量的标准病毒液混合，接种敏感细胞，观察CPE。病毒抗体滴度的确定：抗血清保护细胞免受病毒感染的最高稀释倍数的倒数。即抑制CPE的最高稀释倍数的抗血清中，每单位体积含一个抗体单位。
（一）试验材料
如观察结果是1：10至1：320抗血清均能抑制病毒的CPE，也就是当抗血清稀释到320倍时， 0.1ml抗血清含有1个抗体单位，试问1：160 （2单位）及1：40（8单位）含有几个抗体单位？
取0.6ml或阴性血清混合；接种细胞,每稀释度接5孔,设5孔正常细胞对照
CO2孵箱观察CPE；中和试验病毒CCID50的计算:当抗血清组的
CCID50与阴性组之差的对数大于2,才说明中和试验阳性。
用Reed-Muench计算表：阴性血清病毒CCID50的计算
病毒稀释度
10-4
CPE孔数/接种孔数
–试验步骤
细胞培养液倍比稀释急性或恢复期血清；取不同稀释浓度血清与标准病毒混合并37度水浴 1h取混合液0.2ml接种细胞,CO2孵箱观察CPE。
–50％血清中和终点计算：50%细胞不产生细胞病变的血清稀释度。
用Reed-Muench计算表：恢复期血清中和病毒的结果
血清稀释度
1：16 1：32
–应用
鉴定病毒；分析病毒抗原的性质；测定免疫血清抗体效价及疫苗效果；测定病人血清中的抗体，用于诊断疾病。
一、基本原理
中和抗体存在使病毒不能吸附和穿入宿主细胞，使病毒失去感染力。
当病毒与抗体混合后，接种敏感宿主细胞再观察敏感宿主的情况，即观察残存的病毒对宿主的感染力。对敏感动物观察动物是否免于死亡、瘫痪等；对细胞主要观察能够抑制CPE或空斑形成；对鸡胚培养观察绒毛膜上是否有痘疮结构或血凝试验检测。
CPE孔数/接种孔数
0/4
累计数
CPE阳
CPE数无CPE数性比例
0
8
0/8
1/4
1
4
1/5
CPE阳性率（％）
0.0 20.0
1：64 3/4
4
1
4/5
80.0
1：128 4/48 Nhomakorabea0
8/8
100.0
距离比例＝（50%—小于50%的CPE阳性率）/ （大于50%的CPE阳性率－小于50%的CPE阳性率）＝（50－20）/（80－20）＝0.5
累计数
度
/接种孔 CPE数存活数
数
10-2
5/5
10
0
CPE阳性比例 CPE阳性率（％）
10/10
100.0
10-3
3/5
5
2
5/7
71.0
10-4
2/5
2
5
2/7
29.0
10-5
0/5
0
10
0/10
0
距离比例＝（大于50%的CPE阳性率—50%）/（大于50%的CPE 阳性率－小于50%的CPE阳性率）
固定病毒－稀释抗血清法
用于血清抗体滴度的测量。将100 CCID50/单位体积的病毒分别与连续倍比稀释的病人急性期或恢复期血清混合孵育1h后，把混合液接种于敏感宿主，然后观察不同稀释度的血清保护宿主感染病毒的情况。
（二）试验方法
–试验材料:
敏感宿主；标准滴定的病毒100TCID50/0.1ml;急性期或恢复期血清。
二、方法与步骤
（一）试验材料
病毒
必须是具有感染力的病毒，先进行病毒滴度的测定。
细胞培养，将病毒10倍稀释接种敏感细胞，观察CPE，确定滴定终点以CCID50 或LD50表示。
标准病毒试验浓度：100 CCID50/单位体积或100 LD50/单位体积。
（一）试验材料
抗体
包含病毒抗体阳性和阴性血清。用细胞培养法测病毒抗体的滴度：将倍比稀释
＝（71－50）/（71－29）＝0.5
大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-3+0.5 ×lg0.1=-3.5,其反对数是10-3.5。
阳性血清组的病毒CCID50为10-3.5/0.1ml。
因抗血清组的CCID50为10-3.5，阴性血清组的病毒 CCID50为10-5.5,所以10-3.5-10-5.5=2,表明分离的病毒是与中和抗体相对应的病毒。
50%血清中和终点的范围:1:32与1:64之间。
中和终点浓度=小于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg101.5+0.5 ×lg0.5=-1.65,其反对数是1/45。
即50%血清中和终点为1:45,当1:45的恢复期血清可保护50%细胞不产生细胞病变效应。
固定抗血清-稀释病毒法
中和试验的抗体浓度为20个抗体单位/0.1ml。
（一）试验材料
宿主
— 常用为细胞培养、鸡胚和动物； — 细胞培养:观察CPE和空斑（最理想和常用）； — 鸡胚：观察鸡胚的死亡（流感）、绒毛尿囊
腔上痘疮及血凝现象（天花、牛痘、HSV）； — 小白鼠:成年和幼鼠易感，如乙脑病毒、森林
脑炎病毒。
（二）试验方法
5/5
累计数 CPE数存活数
10
0
CPE阳性比例
10/10
CPE阳性率（％）
100.0
10-5
4/5
5
1
5/6
83.0
10-6
1/5
1
5 1/6
17.0
10-7
0/5
0
10 0/10
0
距离比例＝（大于50%的CPE阳性率—50%）/（大于50%的CPE阳性率－小于50%的CPE阳性率）＝（83－50）/（83－17）＝0.5
第六章病毒血清学实验方法
第一节、中和试验
（neutralization test)
概念：体外将病毒与特异抗体混合并发生反应，再将混合物接种至敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的方法。
– 中和抗体：凡与病毒抗原结合使病毒失去感染力的抗体。
–优点
敏感性和特异性高；中和抗体在体内存在时间长。