实用文库汇编之单克隆抗体和多克隆抗体的区别

单克隆免疫球蛋白检测方法1.引言1.1 概述概述单克隆免疫球蛋白检测方法是一种重要的实验技术，用于检测和定量测量免疫球蛋白的存在和水平。

免疫球蛋白是由免疫系统产生的一类抗体分子，可以识别并结合到体内外的抗原上，从而参与免疫应答。

单克隆免疫球蛋白检测方法通过利用单克隆抗体，可以高度特异性地检测目标免疫球蛋白的存在，并实现对其数量的定量测量。

单克隆免疫球蛋白检测方法广泛应用于医学和生命科学研究领域，例如临床诊断、药物研发和治疗监测等。

在临床诊断中，通过检测患者体内特定免疫球蛋白的水平，可以帮助医生确定疾病的类型、判断疾病的进展程度以及监测治疗效果。

在药物研发中，单克隆免疫球蛋白检测方法可以用于评估药物的效力和稳定性。

此外，该方法还可用于其他生物学研究，如免疫学、细胞生物学和遗传学等领域。

本文将介绍单克隆免疫球蛋白检测方法的原理和技术流程，并探讨该方法相对于其他免疫球蛋白检测方法的优点和应用前景。

通过阅读本文，读者将了解到单克隆免疫球蛋白检测方法在科研和临床应用中的重要性和价值，以及其在未来的发展方向和潜力。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：本文分为引言、正文和结论三部分。

引言部分主要介绍单克隆免疫球蛋白检测方法的背景和意义。

首先简要概述单克隆免疫球蛋白检测方法的定义和基本原理。

随后，详细介绍文章的结构和各个部分的内容安排。

正文部分包括两个主要部分：单克隆免疫球蛋白检测方法介绍和单克隆免疫球蛋白检测方法的优点。

在单克隆免疫球蛋白检测方法介绍部分，将详细介绍该检测方法的操作步骤、技术原理及其在临床及科研领域的应用情况。

其中包括从样本采集到检测结果的整个流程，以及相关的实验操作、仪器设备等方面的介绍。

在单克隆免疫球蛋白检测方法的优点部分，将重点突出该方法相对于传统检测方法的优越性。

例如，该方法具有高准确度、高灵敏度、高特异性等特点，能够准确、快速地检测出单克隆免疫球蛋白的存在并量化分析。

单克隆抗体和多克隆抗体的区别一、单克隆抗体（一）单克隆抗体单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。

通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B 细胞杂交瘤。

1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。

将这种杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。

利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。

这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。

（二）优势和局限性1．单克隆抗体的优点(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。

(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。

(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。

(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。

2．单克隆抗体的局限性(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。

由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。

(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。

(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。

（三）应用1．检验医学诊断试剂作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。

多克隆抗体特点1.引言1.1 概述概述多克隆抗体是一种由多个不同B细胞克隆产生的抗体，与单克隆抗体相比，它具有更高的抗原特异性和更广泛的抗原识别能力。

多克隆抗体的制备方法相对简单，能够同时识别抗原上的多个表位，因此在科学研究和医学应用中具有重要的价值。

本文将首先介绍多克隆抗体的定义和原理，包括多克隆抗体的组成、产生过程以及克隆筛选的方法。

接着，将详细探讨多克隆抗体的制备方法，包括抗原免疫、脾细胞融合、杂交瘤筛选等步骤。

同时，还将介绍如何利用多克隆抗体对特定抗原进行鉴定和检测，以及多克隆抗体在各种实验和临床应用中的优势和局限性。

最后，本文将总结多克隆抗体的优点，包括更好的抗原识别能力、更高的敏感性和更广泛的应用范围。

同时，也将展望多克隆抗体在生物医学领域的应用前景，包括药物研发、病毒检测、免疫治疗等方面。

通过深入了解多克隆抗体的特点和应用前景，我们可以更好地理解这一技术的潜力，为生物医学研究和临床诊断提供更多的选择和可能性。

1.2 文章结构文章结构部分的内容主要是对整篇文章的结构进行介绍和概述。

在本文中，文章的结构分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分（1. 引言）用于引出本文的研究背景和意义，对多克隆抗体的特点进行概述，说明本文将要探讨的问题和目的，即本文要对多克隆抗体的特点进行详细的介绍和分析。

正文部分（2. 正文）是文章的核心部分，主要包括两个小节：多克隆抗体的定义和原理（2.1）和多克隆抗体的制备方法（2.2）。

在多克隆抗体的定义和原理中，将从理论角度对多克隆抗体的概念进行解释，并介绍多克隆抗体的产生原理。

而在多克隆抗体的制备方法一节里，则会详细介绍多克隆抗体的制备过程和方法。

结论部分（3. 结论）对文章进行总结和归纳，列举多克隆抗体的优点，并探讨了多克隆抗体在未来的应用前景。

通过本文对多克隆抗体特点的介绍和分析，可以更好地认识和理解多克隆抗体，为其在临床和科研领域的应用提供参考和指导。

综上所述，本文主要从引言、正文和结论三个部分介绍了多克隆抗体特点。

多克隆抗体与单克隆抗体的区别多克隆抗体特点：1.识别任一抗原上的多个表位。

所得血清为异质性抗体混合物，其亲和力各有不同。

2.多克隆抗体主要由 IgG 亚类组成。

3.通常使用多肽免疫原制备以独有表位为靶标的多克隆抗体，尤其是针对高同源性的蛋白家族。

抗体制备：制备成本低廉且制备速度较快。

制备过程比单克隆抗体简单。

优点：多克隆抗体可识别任一抗原上的多个表位，因此具有以下优点:a.高亲和性：由于靶蛋白上的多个表位能够结合不止一个抗体分子，多克隆抗体可放大低表达水平靶蛋白的信号。

但是，这会影响定量实验（如流式细胞术实验）结果的准确性。

b.可识别多个表位，有利于免疫沉淀 (IP) 和染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验获得更好的结果。

c.与单克隆抗体相比，对微小抗原变化（例如多态性、糖基化异质性或者轻微变性）的包容性更强。

d.可识别与免疫原蛋白质具有高度同源性的蛋白质，还可用于筛查非免疫原物种的靶蛋白。

通常是检测变性蛋白质的首选。

f.多表位通常可提升检测的稳定性。

缺点：a.易产生批次间差异。

b.产生大量非特异性抗体，可能会在某些应用中产生背景信号。

c.由于具有多个表位，检测免疫原序列的交叉反应性非常重要。

d.不适用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常会识别多个结构域。

单克隆抗体​特点：1.不易产生批次间差异。

2.仅由一种抗体亚型组成（例如 IgG1、IgG2、IgG3）。

如需使用二抗进行检测，应针对正确的亚类选择抗体。

抗体制备：技术要求较高。

应用技术之前需接受专门培训。

需要花费较长时间制备杂交瘤细胞。

优点：a.制得的杂交瘤细胞为持续且可再生产的单克隆抗体来源，而且所有批次均相同，有助于提升实验过程和实验结果的一致性和标准化水平。

b.单克隆抗体只检测每个抗原上的一个表位，因此具有以下优点:切片和细胞染色产生的背景信号更少。

特异性地检测一个靶表位，不易与其它蛋白质发生交叉反应。

由于具有高特异性，单克隆抗体非常适于用作实验中的一抗，其产生的背景染色信号通常显著低于多克隆抗体。

抗体相关基本知识抗体相关基本知识抗体(antibody)是⽣物体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产⽣的、可与相应抗原发⽣特异性结合反应的免疫球蛋⽩(Ig)。

按抗体的来源，可将其分为天然抗体和⼈⼯制备的抗体，是通过对特定⽣物体免疫接种特定抗原物质后⽽获得。

⼈⼯免疫动物制备的抗体应⽤甚为⼴泛，既可以⽤于科学研究，也可以⽤于疾病的预防、诊断和治疗。

体⼀、抗体的基本结构的基本结构经x线晶体衍射结构分析发现，抗体Ig由四条多肽链组成，各肽链之间由数量不等的链间⼆硫键连接。

Ig可形成“Y”字型结构，称为I g 单体，是构成抗体的基本单位。

（⼀）重链和轻链天然Ig分⼦含有四条异源性多肽链，其中，分⼦量较⼤的两条链称为重链(heavy chain,H)，⽽分⼦量较⼩的两条链称为轻链(Light chain,L)。

同⼀Ig分⼦中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。

1.重链分⼦量为50000～75000，由450～550个氨基酸残基组成。

重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，其抗原性也不同。

据此，可将抗体Ig分为5类(class)，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相应的重链分别为µ链、δ链、γ链、α链和ε链，商品化的抗体绝⼤部分都是IgG。

不同类的Ig具有不同的特征，如链内和链间⼆硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。

即使是同⼀类的Ig，其铰链区氨基酸组成和重链⼆硫键的数量、位置也不同，据此⼜可将同类Ig分为不同的亚类(subclass)。

IgG的亚类利⽤不同种属动物制备的IgG存在不同的亚类，常见的不同种属IgG亚类如下：兔:IgG（⽆亚类）⼩⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgG3⼤⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgM⼭⽺:IgG1,IgG2在进⾏某些抗体相关实验(如IF和FCM)的时候，我们常常需要仔细看⼀下所订购商品化抗体的IgG亚类，以⽅便我们选择同型对照(isotype control)IgG(即与⽬的蛋⽩抗体相同来源种属的相同类型正常IgG)作为抗体的阴性对照进⾏平⾏实验，以排除可能的⾮特异性染⾊结果。

【高中生物】高中生物知识点：单克隆抗体单克隆抗体：1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。

从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。

（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取3、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。

(2)用于治疗疾病和运载药物。

血清抗体与单克隆抗体的比较：名称产生特点血清抗体由B淋巴一般从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强，灵敏度高，能大量制备知识点拨：1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。

2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。

3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。

4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。

5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。

用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。

知识拓展：制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。

筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。

因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。

相关高中生物知识点：植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术：1、植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。

单克隆抗体制备
七、抗体纯化
• 硫酸铵沉淀法：简易价廉、浓度高，但纯度不高 • 辛酸沉淀法：纯化IgG类抗体，价廉，但纯度不高 • DEAE柱层析法：起始抗体PH只高于抗体等电点，抗体与 DEAE结合，用离子强度逐渐增强的缓冲液洗脱。 • 蛋白A、蛋白G柱纯化抗体免疫亲和层析：从多克隆血清 中纯化特异性抗体方法
• 免疫亲和层析法：
（1）用抗原免疫亲和柱纯化：对多克隆血清，纯化特异性
抗体唯一方法 （2）用抗Ig免疫亲和柱纯化抗体：分离大鼠单克隆抗体
八、抗体的保存
• 血清、组织或培养上清、腹水保存：0.02%NaN3;分装保 存
• 纯化抗体保存：PH值调整，PBS或其他等渗溶液，浓度 不宜过低，如果不用于标记可在低浓度抗体中加1%BSA 以提高蛋白浓度，加NaN3;分装冻存。
抗体制备
多克隆抗体制备 一、免疫动物
• 动物选择：种类多。哺乳类或禽类。选择适龄、健壮的动
物
• 原则：需要血清量、抗原从何种种属动物分离获得，需要 单抗时，有多少抗原可使用。 • 常用种类：兔、小鼠、大鼠、豚鼠、中国仓鼠 • 商品用动物：猪、马、牛、羊 • 多抗制备常用兔（得到500ml血清！）
动物选择
• 小鼠：首次50-100ug/次；大鼠：100ug-1mg/次，兔0.51mg/次 • 加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5 • 高度特异性抗血清：策略为低剂量抗原短程免疫法 • 高效价的抗血清：策略为大剂量抗原长程免疫法。
三、佐剂的应用
• 颗粒性抗原或全细胞抗原不需要佐剂 • 可溶性抗原须用佐剂，以增强抗原的免疫原性或改变免疫 反应的类型，刺激机体产生较强的免疫应答 • 佐剂种类：弗氏（Freund’s）佐剂、脂质体佐剂、氢氧化 铝佐剂，SAF-1和RAS • IFA：羊毛脂1份，石蜡油5份，每毫升IFA中加入1-20mg 卡介苗即为CFA。

以上，否则组织中心固定不良影响效果。 组织固定后应充分水洗，去除固定液，以减少固定液
造成的人为假象。
3、固定方法：
浸入法(Immersion method)： 将组织浸泡在固定液内， 必要时可在低温
(4℃)环境下进行，固定时间可根据抗原的稳定 性以及固定液性质而定， 一般在2~12h之间。
灌注法(Irrigation method)： 此法适用于动物实验研究。灌注法固定可
培养细胞标本的取材:
可根据培养的细胞特性分别采取不同的方法。某些 细胞有贴壁生长的特性，只需将载玻片或盖玻片插 入培养液内即可收集到理想的细胞标本。某些细胞 只能在培养液中生长，可用上述体液沉淀离心涂片 法处理。
2、组织标本的取材：
组织标本主要取之于活组织检查标本、手术切 除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。前三 者均为新鲜组织，后者是机体死亡 2h以上的组织， 可能有不同程度的自溶， 其抗原可能有变性消失， 严重弥散现象，因此， 尸检组织应尽快固定处理， 以免影响免疫组化标记效果。
2、单克隆抗体：
单克隆抗体是应用细胞融合杂交瘤技术通过免 疫动物（大多数为小鼠）而制备的。它是针对一种 抗原决定簇的一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体。
㈢ 抗原与抗体的关系：
没有抗原的刺激，机体不能产生抗体；没有抗 原物质，也无法检测抗体的存在，利用抗体可以检 测抗原物质。
二、细胞和组织标本的取材和固定
1、石蜡切片脱蜡到水： 2、预处理：需要时可选用3%过氧化氢溶液阻
断过氧化物酶。
3、抗原修复处理：根据需要选用
4、染色：

PBS液洗涤：5分钟×2次；

正常山羊血清封闭：室温或37℃20分钟；

滴加一抗：37 ℃1-2小时或4 ℃过夜；

二、概述Байду номын сангаас二、概述
• 抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构 ，叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不 同的抗原决定簇，因而使机体产生好几种不同的 抗体，最终产生出抗体是浆细胞。只针对一个抗 原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系，纯系 的英文为Clone，音译就是克隆。由一种克隆产生 的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目 标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就象导 弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一 个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来 产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为 多克隆抗体。 • 多克隆抗体又简称多抗。与之相对应的叫单克隆 抗体，简称单抗。
（一）抗原制备 • Ig 是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良 好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗 Ig 血清， • 经适当提取后，产生抗 Ig 抗体，又叫第二 抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中， 均需制备 • 抗 Ig 抗体。
（二）材料与试剂
1．提取的动物 Ig 2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂 3．青霉素和链霉素 4．实验动物 兔 5．其它材料及试剂
（2）皮下多点注射法：
A、家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗 原 0.10ml（IgG 含量5mg/ml） ； B、7～10 天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰 椎各两点、共 6 点）皮下注射含不完全佐 剂5的抗原，每点 0.50ml； C、7～10 天后，脊柱两侧重复注射一次； D、7～10 天后试血。不合格者重复步骤D。
（二）抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质 的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就 强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉 反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原 和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结 合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式 计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为 pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无 穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉 反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。

单抗与多抗的区别
点击次数：7543 发布时间：2013/7/24
抗体（Antibody）是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。

抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链（H链）；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链（L链）。

链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。

具体如下图所示：
由于一个大蛋白分子表面具有多种抗原决定簇，因此免疫动物后，这些不同的决定簇分别诱导动物产生不同的抗体，每种抗体的特异性不同。

单抗（单克隆抗体）是有单个细胞起源的细胞克隆分泌的，所以只针对蛋白抗原的单一抗原决定簇，而多抗（多克隆抗体）是有多个不同克隆的B细胞产生的，是多种细胞的混合物，但其中的每一种抗体也只是针对一种决定簇。

单抗与多抗的制备区别
首先要从抗体的产生来探讨。

把某一抗原免疫某种动物而得到单抗或多抗。

如果用经免疫过的动物的脾细胞获得杂交瘤细胞，则得到单克隆抗体（简称“单抗”），如果用动物的血清，则得到多克隆抗体（简称“多抗”）。

单抗与多抗的应用区别
单抗：识别单个抗原表位，所以特异性高。

但如果所识别的抗原表位被破坏，则会影响实验结果，这也是单抗的缺点之一。

（未必出结果，但是出了结果就很有说服力）
多抗：虽然存在交叉反应的问题，但由于识别多个抗原表位，所以即使有
少数几个抗原表位被破坏，仍然不会影响实验结果，这是多抗的优点之一。

（容易出结果，对未必是真实的结果）。

细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。

有时泛指所有的体外培养。

器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。

无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。

完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。

接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。

无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。

注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。

但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。

不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。

原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。

原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。

培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。

传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。

2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3）体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化（脱分化）②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放2、平衡盐溶液（BBS）：（1）成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。

单抗药物治疗前景单克隆抗体（monoclonal antibodies，简称单抗）是一类通过单一的B细胞克隆生成的抗体，具有特定的靶向性和高度的纯度。

自20世纪70年代首次建立以来，单抗药物已迅速发展成为现代生物治疗的重要组成部分，尤其在肿瘤学、免疫学和感染等领域展现出显著的临床效用。

随着科学技术的进步与研究的不断深入，单抗药物的发展前景广阔。

单抗药物的基本概念单抗药物是通过一种名为“融合细胞”技术生产的。

这种技术将能产生特定抗体的B细胞与可无限增殖的肿瘤细胞融合，从而获得同时具有增殖能力和特异性抗体产生能力的细胞。

通过这一过程产生的抗体具有以下几种主要特点：特异性：能够明确识别并结合其靶标分子，不同于多克隆抗体，后者可能对多个靶标产生反应。

一致性：每种单抗在结构和功能上都是一致的，可以在不同批次中保持稳定性。

高效性：针对特定靶标进行精准打击，降低对正常细胞的损伤，从而减少副作用。

由于这些优势，单抗药物在多种疾病治疗中表现尤为突出，特别是在肿瘤、风湿免疫性疾病和过敏反应等领域。

单抗药物在肿瘤学中的应用靶向治疗单抗作为靶向治疗的重要组成部分，通过特异性结合癌细胞表面的抗原，可以有效诱导癌细胞凋亡，激活免疫反应。

例如，曲妥珠单抗（Herceptin）通过靶向HER2阳性乳腺癌细胞，显著提高了患者生存率；阿瓦斯汀（Avastin）作为VEGF抑制剂，能够抑制肿瘤血管生成，从而阻止肿瘤生长。

联合疗法近年来，越来越多的研究表明，将单抗与化疗或放疗联合应用，可以改善疗效并提高患者生存率。

例如，在非小细胞肺癌患者中，恩杂鲁胺与化疗联用显示出比单独化疗更优越的效果。

此外，在癌症免疫治疗中，检查点抑制剂如纳武利尤单抗（Opdivo）的成功应用，也为未来单抗与其他治疗方式的联合提供了灵感。

个性化治疗单抗药物使得个性化治疗成为可能。

通过基因测序等技术筛查患者肿瘤表面特征，可选择最适合患者的单抗进行治疗，从而提高治疗效果并减少不必要的副作用。

生物技术制药之单克隆抗体【摘要】杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究，建立了治疗性抗体的第一个里程碑。

随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明，应用ＤＮＡ重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造，先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体，它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足，使抗体制备技术进入了一个全新的时代。

【关键词】单克隆抗体、分类、制备、纯化、应用【前言】 1975年Koehler和Milstein创立了体外杂交瘤技术(Koehler等,1975)，得到了鼠源性单克隆抗体，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。

与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。

鼠源性单抗应用于人类有较强的免疫原性，但主要缺陷是诱发人抗鼠抗体（human anti－mouse antibody，HAMA）反应，其次是鼠单抗不能有效地激活人体的生物效应功能，因此限制了其临床应用(Dhar等，2004)。

减少或避免HAMA反应并提高疗效的主要途径是鼠源性单抗人源化，随着对各类抗体结构和氨基酸序列及其变异的种属和功能之间关系的深入了解，而能够利用抗体工程技术对抗体结构进行改造。

抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最终到制备全人源单抗的转基因小鼠和噬菌体展示文库等不同的阶段。

1、单克隆抗体定义抗体主要是由B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。

当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞，被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。

如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂制增殖而形成细胞群，即单克隆。

多克隆抗体传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经不同途径免疫动物，由于抗原性物质具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇的抗体，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，所以称这种免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体（polyclonal antibody ，PcAb）。

多克隆抗体的亲和力较一般单克隆抗体高。

多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为制备高效价和高特异性的多克隆抗体，必须要有理想的免疫原、适宜的动物及切实可行的免疫方法。

本章主要介绍多克隆抗体的制备及相关技术。

第一节动物选择实验动物是生物医学中的重要组成部分。

目前常用于生物医学科学研究的实验动物种类很多，主要包括有两栖纲的青蛙、蟾蜍，鸟纲的鸡、鸭、鸽等，哺乳纲啮齿目的小鼠、大鼠、豚鼠等，兔形目的家兔，食肉目的猫、狗，有蹄目的羊、猪和灵长目的恒河猴、猩猩、绒猴等。

其中最常用和用量最大的是哺乳纲啮齿目动物，其次是兔形目和食肉目等。

一、实验动物的生物学特性实验动物选择得当与否是实验研究成败关键之一。

掌握实验动物的生物学特性，则能以最佳的设计选择实验动物，进行科学实验，从而获得预期的实验结果。

1. 小鼠小鼠是啮齿目中体型较小的动物。

新生小鼠 1.5g 左右，21 天断乳时12～15g，至 2 月龄体重达20g 以上，可供实验使用。

成年雌小鼠体重18~35g，成年雄鼠体重20~40g。

小鼠性情温顺，易于捕捉，对外来刺激敏感，喜群居于阴暗环境。

2 ．兔草食性动物，性情温顺，胆小易惊，喜居安静、清洁、干燥、凉爽、空气新鲜的环境，耐冷不耐热，耐于不耐湿。

兔耳大，表面分布有清晰的血管。

有特殊的血清型和唾液型，血清型分为α ' 、β ' 、α'β'和O型四种。

α ' 、α' β'型易产生人A型抗体，β ' 、O型易产生人B型抗体。

唾液型分两种：排出型与非排出型。

单抗和多抗在ifa应用中的差异单抗（单克隆抗体）和多抗（多克隆抗体）是在免疫荧光染色技术（IFA）应用中常用的两种抗体类型。

它们在结构、制备、特异性和应用范围等方面存在一些差异。

首先，单抗是由单个抗体分子组成的，制备过程中只使用一个单克隆细胞系。

单抗具有高度特异性，能够识别和结合到特定的抗原表位上，因此在IFA应用中具有较高的灵敏性和准确性。

而多抗是由多个不同抗体分子组成的，制备过程中使用多个多克隆细胞系。

多抗具有多样性，能够识别和结合多个抗原表位，因此在IFA应用中具有较宽的特异性和适用范围。

其次，单抗制备过程相对复杂，主要由以下几个步骤组成：免疫原制备、免疫小鼠、细胞融合、克隆和纯化。

而多抗制备相对简单，通常只需免疫小鼠，然后采集血清进行纯化。

单抗生产过程中的纯化步骤较多，使得单抗相对更纯。

再次，由于单抗制备过程中只使用一个单克隆细胞系，因此单抗的特异性和一致性较高，每个单抗批次的性能和结果较为稳定。

而多抗由于使用多个克隆细胞系，可以产生大量不同的抗体，因此多抗的特异性和一致性较低。

每个多抗批次的性能和结果可能有一定的差异，需要进行筛选和验证以确保其适用性。

最后，单抗在IFA应用中常用于检测单个特定的抗原，例如检测某个细胞表面标志物的表达或病原体的抗原。

而多抗在IFA应用中常用于广谱筛选和某种系列抗原的快速检测，例如检测细菌、病毒或其他病原体的存在。

单抗的灵敏性和准确性更高，适用于一些需要高度特异性检测的情况，而多抗的特异性相对较低，适用于一些需要快速筛选的情况。

综上所述，单抗和多抗在IFA应用中存在一些差异。

单抗具有高度特异性和一致性，制备过程较为复杂，适用于需要高度特异性检测的情况。

而多抗具有多样性和适用范围较宽，制备过程相对简单，适用于需要广谱筛选的情况。

当选择抗体用于IFA时，需要根据特定的实验需求来选择单抗还是多抗。

单抗与多抗的区别单抗与多抗的区别较多，不同的抗体优缺点不一样，那个单抗与多抗有什么样的优缺点呢？医学教育网整理了单抗与多抗的区别，希望供临床医学检验主管技师参考学习。

多抗和单抗优缺点比较多克隆抗体能识别任一抗原上的多个表位，而单克隆抗体仅检测任一抗原上的一个表位。

但是它们两者有着属于各自的优点和缺点。

多克隆抗体的优点多克隆抗体可有助于放大低表达水平的靶蛋白信号，因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子。

但是这会给定量实验造成不利影响，因为结果将变得不准确。

由于能识别多个表位，多克隆抗体可在IP/ChIP中得到更好的结果。

比单克隆抗体更能容许抗原中的微小变化。

它们会识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，有时会使用多克隆抗体。

医'学教育网搜集整理这也使得检测免疫原序列以确定是否有任何交叉反应性非常重要。

多克隆抗体通常是检测变性蛋白质的首选。

多表位通常可提供更为有力的检测。

多克隆抗体不适用于探测抗原的特定结构域，因为抗血清通常可识别多个结构域。

不足之处易于产生批次间差异。

产生大量非特异性抗体，有时可能在某些应用中产生背景信号。

多表位使得检测免疫原序列以确定是否有任何交叉反应性非常重要。

客观事实识别任一抗原上的多个表位。

获得的血清将包含不同亲和力抗体的异质复合体混合物。

多克隆抗体主要由IgG亚类组成。

肽免疫原通常用于产生靶向唯一表位的多克隆抗体，特别适合高同源性的蛋白家族。

抗体制备制备所需技术和技能不高。

制备时间短。

多克隆抗体不适用于探测抗原的特定结构域，因为多克隆抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体的优点杂交瘤制得后，就成为了恒定的再生源，所有批次都将相同–对确保实验步骤和结果的一致性和标准化非常有帮助。

单克隆抗体通常在切片和细胞染色造成的背景较低。

因为它们以更强特异性检测一个靶表位，所以不太可能与其它蛋白质发生交叉反应。

高中生物单克隆抗体知识点单克隆抗体是高中生物选修教材中动物细胞工程教学内容的重点和难点，有哪些知识点要记住?下面店铺给大家带来高中生物单克隆抗体知识点，希望对你有帮助。

高中生物单克隆抗体基础知识点一、区别单克隆抗体和多克隆抗体多克隆抗体：抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

当病原体入侵人体，能够刺激机体免疫系统产生大量的多种抗体，那么这一堆抗体就是多克隆的。

单克隆抗体(MAb)：是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术，起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。

主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。

此类抗体是专一的，或者说是同一种蛋白质，因此是单克隆的。

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤(1)抗原制备;(2)免疫动物;(3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;(4)细胞融合;(5)杂交瘤细胞的选择培养;(6)杂交瘤细胞的筛选;(7)杂交瘤细胞的克隆化;(8)单克隆抗体的检定;(9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;(10)单克隆抗体的大量制备。

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的具体过程1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。

一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。

抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。

将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。

在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。