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货号：MS2000 规格：100管/96样乙酰胆碱酯酶（AchE）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。
AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。
测定原理：AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
试剂四：粉剂×1支，4℃保存。
临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
测定操作：1.分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL试剂二、10μL试剂三和10μL 试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。
乙酰胆碱酯酶试剂盒说明书人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中CHAc含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CHAc抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CHAc抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CHAc呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板:一块(96孔)2. 标准品(冻干品): 2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 ng/ml，做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成10 ng/ml，5 ng/ml，2.5ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制5 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 10 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml。
4. 检测稀释液A:1×10ml。
5. 检测稀释液B:1×10ml。
6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。
乙酰胆碱酯酶抑制剂乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶〔AChE〕是体内Ach迅速水解而作用消除所必需的酶，1分子乙酰胆碱酯酶每分钟水解105分子的ACh。
在AChE中，由谷氨酸-组氨酸-色氨酸〔Glu-His-Ser〕构成的AChE 催化三联体负责水解底物乙酰胆碱。
首先三联体之间的氢键作用使Ser的羟基氧的亲核性增加〔图1〕，进攻乙酰胆碱的羰基氧，形成过渡态A〔图2〕。
此过渡态不稳定，分解形成胆碱和乙酰化酶B。
AChE一旦处于酰化状态，就不能再与其他乙酰胆碱分子结合，因而是非活性的。
乙酰化酶B可迅速经水解重新产生原来的活性AChE和乙酸。
这最后一步称为酶的复活，对开发抗胆碱酯酶药具有重要意义。
如果AChE被一些特殊的酰化基团酰化，如氨基甲酰化或磷酰化，生成比羧酸酯B更稳定的氨基甲酸酯或磷酸酯，不像羧酸酯那样易于水解，那么AChE将较长时间地处于非活化的酰化状态。
如果该酰化酶虽经较长时间但仍可水解使酶复活，那么为可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂。
目前临床使用的抗胆碱酯酶药多为此类型。
胆碱酯酶抑制剂假设与胆碱酯酶成为不可逆结合，将在很长时间内造成AChE的全部抑制，如有机磷毒剂，使体内乙酰胆碱浓度长时间异常增高，引起支气管收缩、惊厥甚至导致死亡等不良后果。
因此这种不可逆胆碱酯酶抑制剂对人体是非常有害的，除个别作为眼科用药局部使用外，一般用做杀虫剂和毒剂。
乙酰胆碱酶抑制剂乙酰胆碱酶抑制剂〔AChE inhabitors〕，又称为抗胆碱酯酶药，是通过抑制乙酰胆碱酯酶活性而发挥作用的药物，它与乙酰胆碱酯酶抑制剂结合后便失去了活性，使得乙酰胆碱能神经末梢释放的Ach不能被水解而大量堆积，从而延长并增强乙酰胆碱的作用。
因其不与胆碱受体直接作用，属于间接抗胆碱酯药。
可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂在临床上主要用于治疗重症肌无力和青光眼。
新近开发上市的药物主要用于抗老年性痴呆。
临床多用可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂分为：生物碱类〔如毒扁豆碱〕、季铵类〔如溴新斯的明〕、叔胺类〔如盐酸多奈哌齐〕、其他类。
5种杀虫药物对金鱼的急性毒性商宝娣;张效平【摘要】为探明甲苯咪唑、敌百虫、吡喹酮、辛硫磷和狼毒大戟5种杀虫药物对金鱼的急性毒性,为金鱼寄生虫病的防治提供参考,采用96 h静态生物测试法,进行5种杀虫药物对金鱼的急性毒性试验.结果表明:甲苯咪唑、辛硫磷、敌百虫、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物的96 h半数致死浓度(LC50)分别为0.29 mg/L、5.49 mg/L、27.55 mg/L、29.22 mg/L和13.65 mg/L,安全浓度(SC)分别为0.029 mg/L、0.549 mg/L、2.755 mg/L、2.922 mg/L和1.365 mg/L.根据化合物对鱼类毒性等级评价标准,甲苯咪唑对金鱼属于高毒药品,辛硫磷属于中毒药品,敌百虫、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物属于低毒药品.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(043)009【总页数】4页(P138-141)【关键词】金鱼;急性毒性;狼毒大戟提取物;杀虫药物【作者】商宝娣;张效平【作者单位】贵州省水产研究所,贵州贵阳550025;贵州省水产研究所,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S948金鱼(Carmsim auratus)隶属鲤科鲫属，是我国饲养的主要观赏鱼之一，其色彩绚丽鲜艳，姿态优美奇异，备受人们喜爱。
金鱼具有体型较小、生命力强、饲养简便等一系列作为实验动物的优良特点，目前已广泛应用于鱼病学[1-2]、鱼类遗传学[3-4]、亲缘关系进化[5]、环境科学[6]等领域的研究。
一般金鱼的养殖密度较高，容易产生病害，每年都会因为疾病爆发造成严重的经济损失[7-8]，成为制约其产业发展的一个重要因素。
其中，指环虫病是金鱼养殖中高发、常见的疾病之一。
据福建省金鱼协会统计，每年由指环虫病引发的病害与死亡数占金鱼总病害与死亡数的37%，已成为制约金鱼养殖业发展的瓶颈。
甲苯咪唑、敌百虫、吡喹酮和辛硫磷等都是农业部渔用药品手册中登记的驱虫药物[9]，已广泛应用于水产养殖过程中寄生虫病的防治，尤其是对单殖吸虫病的防治。
AChE名词解释AChE名词解释AChE指的是乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase）是一种重要的酶类。
它是由脊椎动物和无脊椎动物体内的神经元合成的一种酯酶，主要作用是降解神经递质乙酰胆碱 (Acetylcholine，ACh)。
乙酰胆碱酯酶是一种酶，它存在于神经传递物质的基础成分——乙酰胆碱的生成、传递和代谢过程中起着关键的作用。
其主要功能是将乙酰胆碱降解为乙酰与胆碱，然后通过胆碱再生和乙酰转化为乙酰辅酶A，进一步完成神经传递。
它的作用相当于把用过的乙酰胆碱清除掉，以确保神经传递的可靠性，同时也是正常身体机能的必需物质。
AChE能够清除乙酰胆碱，是因为它具有特定的化学功能，能够迅速水解乙酰胆碱，使其分解成乙酰和胆碱。
而且，乙酰胆碱酯酶在此过程中不仅能降解乙酰胆碱，同时还恢复神经纤维所需的胆碱，因此也表现了其与神经传递高度一致的特性。
AChE的检测和应用AChE是生物碳和硫的代表，含有亲匹配的结构域、多样性、自适应和适应性。
AChE的变化与运动功能的改变有关，同时也与人类某些重要疾病的发生有关。
来自胆碱能神经元的某些药物(如甲基肾上腺素)的缓解效果是通过激活AChE而达成的。
众所周知，AChE活性的降低或失调会引起多种疾病的发生，例如肌营养不良、癫痫、帕金森、自闭症、重度抑郁症、老年性痴呆症、肺部疾病等。
因此，AChE的检测对于这些疾病的诊断和治疗具有重要的意义。
目前，AChE主要通过酶活性分析、免疫分析和基因检测进行检测。
除作为生理调节酶之外，AChE还常常作为反应时间、行为、认知和视知觉领域等的指标，在脑机接口的应用中也有一定的应用。
AChE在农业、环境和医药领域的应用除了作为生理调节酶、认知和视知觉领域的指标之外，AChE还有许多其他的用途。
在农业领域，AChE对昆虫的毒性标准作为一种快速而可靠的方式来评估昆虫毒性，并帮助确定农药毒性。
还可以开发出AChE抑制剂作为有机磷农药拦截剂的有力候选物。
achei作用机制AChEI，即乙酰胆碱酯酶抑制剂，是目前治疗阿尔茨海默病（AD）等神经认知障碍疾病的主要药物之一。
它的作用机制相当复杂，但核心在于通过不同途径增加大脑中乙酰胆碱的浓度，从而改善认知功能。
首先，AChEI可以通过抑制乙酰胆碱酯酶的活性，减少乙酰胆碱的降解。
乙酰胆碱是一种重要的神经递质，在学习、记忆和认知过程中起着关键作用。
然而，乙酰胆碱酯酶会迅速降解乙酰胆碱，导致其在突触间隙中的浓度降低。
AChEI通过与乙酰胆碱酯酶结合，可逆性地抑制其活性，使乙酰胆碱在突触处积累，从而延长和增强乙酰胆碱的作用。
其次，AChEI还可以通过其他途径增加乙酰胆碱的浓度。
例如，一些药物可以直接作为乙酰胆碱前体，被神经元摄取后转化为乙酰胆碱，从而增加其在突触间隙中的浓度。
此外，一些药物还可以通过激活突触后胆碱能受体来增强乙酰胆碱的效应。
AChEI在神经认知障碍疾病中的应用已经得到了广泛的研究和验证。
多奈哌齐、艾斯能和加兰他敏等药物已被美国和欧洲批准用于轻中度AD的治疗。
这些药物不仅能够改善AD患者的认知功能，还可以改善轻中度帕金森病和路易小体痴呆患者的认知功能，并对痴呆患者伴发的行为和精神症状有一定的改善作用。
然而，需要注意的是，AChEI并非适用于所有神经认知障碍患者。
对于某些患者，如肝功能受损者，使用某些AChEI药物可能会增加不良反应的风险。
因此，在使用AChEI之前，医生需要对患者进行全面的评估，并根据患者的具体情况制定个体化的治疗方案。
AChEI通过抑制乙酰胆碱酯酶等机制增加大脑中乙酰胆碱的浓度，从而改善认知功能。
在神经认知障碍疾病的治疗中，AChEI已经成为了一种重要的治疗手段。
然而，在使用这些药物时，需要充分了解其作用机制和不良反应，并根据患者的具体情况进行个体化的治疗。
AChEI（乙酰胆碱酯酶抑制剂）的副作用通常与其作用机制有关，即增加突触间乙酰胆碱的浓度。
这些副作用可以大致分为毒蕈碱样副作用和烟碱样副作用。
y乙酰胆碱酯酶染色
乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）染色是一种用
于观察神经元和突触前膜上的乙酰胆碱酯酶活性的染色方法。
乙酰
胆碱酯酶是一种重要的酶，它在神经系统中起着关键的作用，主要
负责降解神经递质乙酰胆碱，从而调节神经冲动的传递。
乙酰胆碱
酯酶染色可以通过对组织切片进行特殊处理和染色来观察乙酰胆碱
酯酶的分布和活性情况。
乙酰胆碱酯酶染色的原理是利用染色试剂与乙酰胆碱酯酶反应，形成可见的颜色变化，从而标记出乙酰胆碱酯酶的分布。
这种染色
方法通常使用乙酰胆碱酯酶的底物和染色试剂，底物在乙酰胆碱酯
酶的作用下产生可染色的产物，从而形成染色反应。
这样就可以在
显微镜下观察到乙酰胆碱酯酶的分布情况。
乙酰胆碱酯酶染色在神经科学研究中具有重要意义。
通过观察
乙酰胆碱酯酶的分布和活性，可以揭示神经元和突触前膜的结构和
功能，从而帮助科学家更好地理解神经系统的工作原理和相关疾病
的发病机制。
此外，乙酰胆碱酯酶染色也被广泛应用于临床诊断，
特别是在神经系统疾病的诊断中起着重要作用。
总的来说，乙酰胆碱酯酶染色是一种重要的实验技术，通过观察乙酰胆碱酯酶的分布和活性，可以帮助科学家深入了解神经系统的结构和功能，对神经科学研究和临床诊断都具有重要意义。
乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解机制乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，简称AChE）是一种关键的酶，催化乙酰胆碱（acetylcholine，简称ACh）的水解反应。
乙酰胆碱是一种重要的神经递质，在神经传递过程中起着重要作用。
乙酰胆碱酯酶的催化乙酰胆碱水解机制是通过两个关键步骤实现的：乙酰胆碱的酯键水解和乙酰胆碱酯酶的再生。
乙酰胆碱酯酶是一种酯酶，它的活性位点包括一个酯酶活性位点和一个酰胆碱酯酶活性位点。
乙酰胆碱酯酶的酯酶活性位点主要负责催化乙酰胆碱的酯键水解反应，将乙酰胆碱水解为乙酸和胆碱。
这个过程中，乙酰胆碱的酯键被酶催化断裂，形成一个共价酯酶中间体。
乙酰胆碱酯酶的酰胆碱酯酶活性位点则负责催化酯酶中间体的再生，将酯酶中间体进一步水解为乙酸和胆碱。
乙酰胆碱酯酶的催化乙酰胆碱水解机制可以分为四个关键步骤：底物结合、酯键断裂、酯酶中间体形成和酯酶中间体再生。
在底物结合步骤中，乙酰胆碱首先与乙酰胆碱酯酶的酯酶活性位点发生非共价相互作用，形成酶底物复合物。
这个过程中，乙酰胆碱的甲基胆碱部分与酯酶活性位点的嵌入式底物结合区域相互作用，而乙酰基则与酯酶活性位点的羟基残基形成氢键。
接下来，在酯键断裂步骤中，酯酶活性位点的羟基残基作为催化剂攻击乙酰胆碱的酯键，形成一个共价酯酶中间体。
这个共价酯酶中间体具有稳定的共价键，使得乙酰胆碱紧密地与乙酰胆碱酯酶结合。
在酯酶中间体形成步骤中，共价酯酶中间体发生构象变化，使得酯酶中间体与酶的酰胆碱酯酶活性位点的结合更加稳定。
这个过程中，酯酶活性位点的羟基残基与酯酶中间体的乙酰基形成氢键，进一步增强了酯酶中间体的稳定性。
在酯酶中间体再生步骤中，酯酶中间体被另一个水分子攻击，重新断裂酯键，形成乙酸和胆碱。
这个过程中，水分子的氧原子与酯酶中间体的羟基残基形成氢键，促进酯键的断裂。
乙酰胆碱酯酶的催化乙酰胆碱水解机制是一个高度协调的过程，需要多个关键残基的配合作用。
