珠磨法提取酵母基因组

酵母的dna提取实验报告
（最新版）
目录
一、实验目的
二、实验材料
三、实验步骤
四、实验结果
五、实验讨论
六、实验结论
正文
一、实验目的
本实验旨在通过提取酵母的 DNA，研究酵母的基因组成，并为后续的基因工程实验提供 DNA 样本。

二、实验材料
1.酵母菌种
2.蒸馏水
3.乙醇
4.氯化钠
5.滤纸
6.蒸馏器
7.离心机
三、实验步骤
1.酵母菌种的准备：选用新鲜的酵母菌种，将其放入蒸馏水中，保持适当的浓度。

2.提取 DNA：将酵母菌种放入离心机中，离心一定时间后，取出上清液。

向上清液中加入适量的氯化钠，使 DNA 逐渐析出。

3.滤过：将析出的 DNA 溶液倒入装有滤纸的漏斗中，通过滤纸将杂质滤除。

4.洗涤：将滤纸放入蒸馏水中，反复洗涤，直至滤纸上的 DNA 纯净。

5.乙醇沉淀：将洗涤后的滤纸放入乙醇中，静置一段时间，DNA 会逐渐沉淀。

6.收集 DNA：将沉淀后的 DNA 收集起来，即为提取的酵母 DNA。

四、实验结果
通过实验，成功提取到了酵母的 DNA，实验结果符合预期。

五、实验讨论
在实验过程中，我们发现在加入氯化钠后，DNA 的析出速度较快，说明氯化钠对 DNA 的析出有一定的促进作用。

此外，通过多次洗涤和乙醇沉淀，我们成功地提取到了纯净的酵母 DNA。

六、实验结论
通过本实验，我们成功地提取了酵母的 DNA，为后续的基因工程实验提供了必要的材料。

酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min 将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。

2、加入200μL 5mol/L KAc，冰浴8min；3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；5、200μL TE 溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；6、加入200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、温柔地取上清150μL ，加入20μL 3 mol/L NaAc及375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集DNA；8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：蜗牛酶法1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16 h。

2. 3500 rpm离心5min沉淀细胞，用1ml 的无菌水洗涤一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重悬。

3. 转移细胞至1.5 ml 的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min, 以获得原生质体。

4. 最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保温30min。

5. 加入200μl 5M 醋酸钾，放于冰上30 min。

4种酵母基因组提取方法的比较赵宏宇;李珺;赵玥;王馨;蔡禄【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)009【摘要】为获得简便高效的提取酵母基因组DNA的方法,分别采用溶菌酶法、蜗牛酶过夜处理法、蜗牛酶反复冻融法和珠磨法处理酵母细胞,在荧光倒置显微镜下观察、比较细胞的破壁情况,提取基因组后利用紫外分光光度计测定样品中DNA 的浓度和纯度以及琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测基因组DNA的质量.结果表明,除溶菌酶法外,其他3种方法均能提取出高质量的酵母基因组DNA.珠磨法提取酵母基因组具有质量高、成本低、时间短且操作简单的优点.【总页数】4页(P170-173)【作者】赵宏宇;李珺;赵玥;王馨;蔡禄【作者单位】内蒙古科技大学数理与生物工程学院,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学生物工程与技术研究所,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学数理与生物工程学院,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学生物工程与技术研究所,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学数理与生物工程学院,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学数理与生物工程学院,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学数理与生物工程学院,内蒙古,包头,014010;内蒙古科技大学生物工程与技术研究所,内蒙古,包头,014010【正文语种】中文【中图分类】O781【相关文献】1.一种简便高效的酵母基因组提取方法 [J], 唐巧玲;付鹏飞;王旭静;王志兴2.高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较 [J], 唐天乐;高炳淼;长孙东亭;罗素兰3.酵母基因组及其线粒体基因组提取方法的比较 [J], 钱卫东;赵德志;宁肖肖;周颖欣4.肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸提取方法比较与改进 [J], 杨焕蝶;杨金玉;陈相艳;王易芬;郑琳琳;陈蕾蕾5.6种食用香辛料基因组DNA提取方法比较 [J], 周梦月;邢冉冉;王楠;葛毅强;陈颖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酵母细胞质粒提取步骤和酵母细胞破壁方法酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。

酵母细胞质粒提取步骤1. 接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mL YNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。

2.第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下.3.取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml的1倍TE悬浮.4.将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体.5.取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体.6.然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min.7.将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1), 混匀,12000g,离心10min.8. 将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3M KAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入-20℃冰箱中9.1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离心10min.10.弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的100mg/ml 浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可.11.跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了.酵母破壁方法我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用。

酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min 将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。

2、加入200μL 5mol/L KAc，冰浴8min；3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；5、200μL TE 溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；6、加入200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、温柔地取上清150μL ，加入20μL 3 mol/L NaAc及375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集DNA；8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：蜗牛酶法1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16 h。

2. 3500 rpm离心5min沉淀细胞，用1ml 的无菌水洗涤一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重悬。

3. 转移细胞至1.5 ml 的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min, 以获得原生质体。

4. 最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保温30min。

5. 加入200μl 5M 醋酸钾，放于冰上30 min。

酵母基因组DNA 快速提取试剂盒目录号：DN20适用范围：适用于快速提取各种酵母基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存50次 平衡液 室温 5 ml 缓冲液YB 室温20 ml 结合液CB 室温11 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml Lytic Enzyme -20℃2.5 ml 蛋白酶K 粉（可选）20mg/ml -20℃20mg 吸附柱AC 室温50个 收集管（2ml ） 室温 50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:目录编号包装单位 DN200150次 DN2031 50次（带蛋白酶K ，带Lytic Enzyme ）1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状（20mg），收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解配制成20mg/ml溶液，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。

3.Lytic Enzyme为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，－20℃保存。

蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。

适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。

4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。

约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。

纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

酵母细胞经lytic Enzyme处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

不同破壁方法提取酵母菌总RNA 的比较易 弋1，容元平1，程谦伟1，黎 娅1，王晓林2(1.广西工学院生物与化学工程系，广西 柳州 545006；2. 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室，北京 100071)摘 要：选择液氮碾磨、反复冻融、超声波、加玻璃珠漩涡振荡和蜗牛酶酶解5种方法破碎酵母菌细胞壁，再使用Trizol 法提取酵母菌总RNA ，通过对总RNA 进行质量浓度和纯度分析，比较不同破壁方法对酵母菌总RNA 提取的影响。

结果表明：在使用Trizol 法提取酵母菌总RNA 的实验中，反复冻融和液氮碾磨是较为有效且简便的酵母菌细胞壁破碎方法。

关键词：Tr iz ol 试剂；R NA 提取；酵母菌；破壁Comparison of Different Cell Wall Disruption Methods for Yeast Total RNA ExtractionYI Yi 1，RONG Yuan-ping 1，CHENG Qian-wei 1，LI Ya 1，WANG Xiao-lin 2(1. Department of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Technology, Liuzhou 545006, China ；2. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Sciences of thePLA, Beijing 100071, China)Abstract ：Five methods such as liquid nitrogen grinding, repeated freeze-thawing, ultrasonic treatment, vortex shaking with glass beads and snailase hydrolysis were used to break the cell wall of yeast for the extraction of total RNA by the Trizol method.Based on total RNA concentration and purity, these methods were compared for their effects on total RNA extraction from yeast. The results showed liquid nitrogen grinding and repeated freeze-thawing were the most effective and convenient methods for total RNA extraction from yeast by Trizol.Key words ：Trizol ；RNA extraction ；yeast ；cell wall disruption中图分类号：Q936 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)11-0161-04收稿日期：2010-09-03基金项目：广西壮族自治区青年科学基金项目(桂科青0991010)；广西壮族自治区教育厅科研项目(200707MS069)作者简介：易弋(1979—)，男，副教授，博士，主要从事生物工程研究。

磁珠法酵母
磁珠法是一种测定酵母群落结构和多样性的分子生物学方法。

该方法的基本原理是利用特定的引物与酵母DNA中的保守序列结合，通过聚合酶链反应扩增目标DNA片段。

然后，将这些扩增产物连接到磁性珠子上，通过磁力分离的方式将目标DNA分离出来。

最后，通过对分离得到的DNA进行测序分析，可以快速、准确地鉴定酵母群落中存在的不同菌种的数量和种类。

磁珠法在酵母研究中广泛应用，可以提供详细的酵母种群结构和多样性信息，为深入了解酵母的功能与相互作用提供重要的依据。