甘露寡糖(MOS)检测

甘露寡糖对肉鸡生产性能和消化功能的影响高林【摘要】To study the influence of mannan oligosaccharides on production performance of broiler and index of immune organ, it took the method of contrast test to discuss the influence of mannan oligosaccharides on the indexes of slaughter weight, feed conversion, mortality rate and colibacillus. The result shows that adding mannan oligosaccharides in based diet can increase slaughter weight of broiler, and decrease feed conversion and mortality rate, meanwhile, it can positively promote the growth of digestive organ, the optimal addition quantity is 1%mannan oligosaccharides adding.%为研究甘露寡糖对肉鸡生产性能和免疫器官指数的影响，采用对比试验的方法，探讨甘露寡糖对出栏均重、料肉比、死淘率、大肠杆菌等指标的影响。

试验结果表明：基础饲粮中添加甘露寡糖可以增加肉鸡的出栏均重，降低肉料比及死淘率，并且对消化器官的发育具有积极地促进作用，以1％的甘露寡糖添加量效果最好。

【期刊名称】《农业科技与装备》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P56-59)【关键词】甘露寡糖;雏鸡;生产性能;消化功能【作者】高林【作者单位】沈阳爱地生物科技有限公司，沈阳 110167【正文语种】中文【中图分类】S831.5近年来，肉鸡生产中长期使用抗生素所导致的动物生产性能下降以及药物残留等问题已引起全社会的关注，开发抗生素替代品成为研究热点。

甘露聚糖酶活力的测定1.甘露聚糖酶活力单位定义在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为3mg/ml的甘露聚糖（Sigma G0753）溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u。

2.测定原理甘露聚糖酶能将甘露聚糖降解成寡糖和单糖。

具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。

反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中甘露聚糖酶的活力成正比。

因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中甘露聚糖酶的活力。

3.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的三级水。

3.1甘露糖溶液，c（C6H12O6）为10.0mg/ml：称取无水D-甘露糖1.000g，加水溶解，定容至100ml。

3.2乙酸溶液，c（CH3COOH）为0.1mol/L：吸取冰乙酸0.60ml。

加水溶解，定容至100ml。

3.3 乙酸钠溶液，c（CH3COONa）为0.1mol/L：称取三水乙酸钠1.36g。

加水溶解，定容至100ml。

3.4 氢氧化钠溶液，c（NaOH）为200g/L：称取氫氧化鈉20.0g。

加水溶解，定容至100ml。

3.5乙酸——乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH—CH3COONa）为0.1mol/L，pH值为5.5：称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70ml。

再加水溶解，定容至2000ml。

测定溶液的pH值。

如果pH值偏离5.5，再用乙酸溶液（3.2）或乙酸钠溶液（3.3）调节至5.5。

3.6甘露聚糖溶液：0.6%（w/v）称取甘露聚糖（Sigma G0753）0.60g，加入80ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液（3.5）。

磁力搅拌，同时缓慢加热，直至甘露聚糖完全溶解（注：在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液，但是溶液的总体积不能超过100ml。

）。

然后停止加热，继续搅拌30min，用乙酸—乙酸钠缓冲溶液（3.5）定容至100ml。

甘露寡糖甘露寡糖是一种寡聚糖,甘露寡糖是寡聚糖中最具前景的一个。

其作为一种安全有效的饲料添加剂在养殖生产上具有重要的作用。

1甘露寡糖的理化性质甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS),又称甘露低聚糖或葡甘露寡聚糖。

甘露寡糖是寡聚糖中最具前景的一个,主链的连接方式为α-1,6糖苷键,侧链主要通过α-1,2和α-1,3糖苷键连接,一般在生理pH 值和通常饲料加工条件下较为稳定,易溶于水和其他极性溶剂。

当溶液中加入有机溶剂时会使其沉淀或结晶,甜度低于蔗糖。

甘露寡糖广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内(葡萄糖甘露寡聚糖)。

目前商品用甘露寡糖主要通过酶解法进行生产。

饲料用甘露寡糖主要来源于酵母细胞壁提取物,多为二糖、三糖、四糖等结构的混合物。

甘露寡糖不为单胃动物消化道酶分解,而且由酵母细胞壁提取而来的甘露寡糖能承受饲料加工的高温处理(121 ℃,20 min)而保持其结构和功能的完整性不被破坏。

2甘露寡糖的作用机理甘露寡糖化学性质稳定,不被动物消化也不能被有害菌利用,只能被消化道有益菌群如双歧杆菌和乳酸菌利用,通过优化肠道微生物生态系对宿主起有益的保健功能。

改善肠道微生物组成、形成以双歧杆菌和乳酸杆菌为优势菌的肠道菌丛,抑制病原菌。

MOS对病原菌有识别、粘附和排除作用,同时有利于排除内毒素保持动物健康。

加速细菌从肠道排出,促进肠道正常微生物区系的平衡,增强动物非特异性免疫,提高动物抵抗力,从而提高动物日增重和饲料转化率,降低胃肠道疾病的发生率和死亡率。

马志红等[1]以甘露寡糖为饲料添加剂进行鲤鱼的对比饲喂试验,通过测定和比较对照组和试验组鲤鱼的生长性能和免疫功能指标,探讨甘露寡糖对鲤鱼生长及免疫功能的影响。

结果显示,试验组鲤鱼的饲料系数、相对增重率、白细胞吞噬率、吞噬指数、脾脏指数和血清溶血素活力较对照组均显著提高;周淑芹[2]研究了甘露寡糖对肉鸡后期(5～7周)大肠杆菌病的控制效果,结果表明饲粮中添加MOS显著降低了肉鸡感染大肠杆菌后的发病和死亡率。

甘露聚糖检测标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述甘露聚糖是一种在自然界中广泛存在的多糖分子，它在植物细胞壁的构建和生长发育中发挥着重要作用。

随着人们对甘露聚糖的研究不断深入，对其检测标准的需求也日益增加。

本文旨在探讨甘露聚糖检测标准的制定和应用，以提高检测结果的准确性和可靠性。

通过系统地概述目前的检测方法和标准的不足之处，我们希望能为未来的研究和实践提供有益的借鉴和指导。

1.2 文章结构本文主要分为三个部分：引言、正文和结论。

在引言部分中，将首先概述甘露聚糖检测的重要性，介绍文章的结构以及讨论本文的目的。

在正文部分中，将详细探讨甘露聚糖的重要性，目前广泛使用的检测方法以及甘露聚糖检测标准的必要性。

最后，在结论部分将对文章进行总结，展望未来可能的发展方向，并得出结论。

通过以上结构的安排，读者将能够全面了解甘露聚糖检测标准相关的内容，同时也能够清晰地把握文章的脉络和逻辑。

1.3 目的本文的目的是探讨甘露聚糖检测标准的重要性和必要性。

随着甘露聚糖在食品、药品和生物医学领域的广泛应用，确立统一的检测标准对于保障产品质量、维护消费者权益和推动行业发展具有重要意义。

通过对目前甘露聚糖检测方法及其存在的问题进行分析，本文旨在提出具体的检测标准建议，为相关行业的规范化发展和提升产品质量提供参考。

同时，本文也将探讨未来甘露聚糖检测标准的发展方向和展望，以期为相关研究和实践提供借鉴和指导。

2.正文2.1 甘露聚糖的重要性甘露聚糖作为一种重要的多糖类物质，在生物体内发挥着重要的功能。

它是植物细胞壁中主要的结构性多糖，不仅能够维持植物细胞的形态和稳定性，还能够增强细胞壁的强度和硬度，使植物能够抵抗外界的压力和损伤。

除此之外，甘露聚糖在生物体内还具有一系列生理功能，如参与植物的生长发育、调节植物的抗病性和适应环境的能力等。

在动物体内，甘露聚糖也被发现具有调节免疫系统、维持肠道健康、促进伤口愈合等重要功能。

因此，了解甘露聚糖的含量和结构对于研究生物体的生长发育、抗病机制、药物研发等方面具有重要意义。

甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)1.范围本标准规定了甘露寡糖的术语和定义、产品分类要求、实验方法、检测规则、标准包装、运输和贮存等。

本标准适用于从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活物性物质的生产、检验和销售。

2．规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备(GB/T602-2002,ISO63531:1982,NEQ)GB/T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB/T603-2002,ISO6353-1:1982,NEQ)GB/T5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB10648 饲料标签GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1-2005,ISO6497:2002,IDT)3. 术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)甘露寡糖又称为甘露低聚糖，是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内。

与β-葡聚糖为同一工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。

它是一种多糖，主要化学结构β-1，3葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。

3.2甘露寡糖含量甘露寡糖含量为≥15%4. 产品分子量甘露寡糖结构分子示意图5. 要求5.1 感官要求粉状低聚木糖颜色为浅黄色，具有特有的甜味、香气，无异味，无正常视力可见异常。

6. 检测方法6.1 原理甘露寡糖经酸水解后形成甘露糖，甘露糖经衍生化后注入高效液相色谱柱进行色谱分离，在245nm波长处用紫外检测器检测甘露糖的含量。

甘露寡糖检测甘露寡糖（MOS），又称甘露低聚糖，是从酵母细胞壁内提取到的一种多糖类活性物质，由甘露糖和葡萄糖通过α-1,6、α-1,2、α-1,3等糖苷键组合而成，主要分布在多种植物和微生物细胞壁中。

甘露寡糖作为一种新型的饲料添加剂，在饲料工业和畜牧生产业应用广泛。

甘露寡糖分子结构式甘露寡糖的生物学功能1. 增强免疫力：甘露寡糖可以通过调节机体的细胞免疫系统和体液免疫系统，提高IgG和IgA免疫球蛋白含量。

此外，甘露寡糖能刺激机体内有益菌大量增殖，促进抗体分泌，从而增强机体免疫力。

2. 吸附霉菌毒素：甘露寡糖可以通过物理方法或直接结合的方式吸附霉菌毒素，是一种天然的吸附剂，有报道称甘露寡糖对玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素的结合率可达到52%以上。

3. 调节肠道菌群：甘露寡糖主要是通过两个方面来调节肠道菌群：一是促进有益菌的生长繁殖，形成微生态竞争优势，抑制致病菌，从而提高动物健康水平；二是直接与病原菌的某些表面物质结合，使其无法获取生长所需营养物质而饥饿死亡。

4. 改善生产性能：甘露寡糖可以通过多条途径改善动物生产性能。

1) 甘露寡糖发酵产生的酸性化合物能促进肠道对钙的吸收，加速动物的食量和消化，从而提高生产性能；2) 甘露低聚糖促进有益菌的增殖，则有益菌的代谢物积累，为机体生长提供充足的维生素、氨基酸等营养物质。

3) 甘露低聚糖通过抑制病原菌的生长繁殖，减少有毒有害物质产生，降低动物发病率；甘露寡糖的检测原理甘露寡糖经酸水解后，生成甘露糖，甘露糖通过衍生化处理后利用高效液相色谱（HPLC）进行色谱分离，利用紫外检测器/示差折光检测器检测甘露糖含量。

本文由北京迪信泰检测平台（Biotech-Pack-Analytical）整理编辑北京迪信泰检测平台基于高效液相色谱（HPLC）配备紫外、示差折光、蒸发光散射等多种检测器，建立了甘露寡糖检测体系，可高效、准确的检测甘露寡糖含量。

此外，迪信泰还提供LC-MS、GC-MS检测服务，以满足您的不同需求。

A.1原理根据β-葡聚糖和甘露寡糖在流动相和液相色谱柱的固定相之间具有不同的分配系数，将样品注入液相色谱柱，用H2O做流动相，糖类分子流出后，经示差检测器检测，用外标法定量。

A.2试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的一级水或相当纯度的水。

试验中所用制品按GB/T 603的规定制备。

A.2.1盐酸：37%。

A.2.2乙腈：色谱纯。

A.2.3氢氧化钠：40%。

A.2.4葡萄糖和甘露糖混合标液（1000mg/L）：分别称取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用纯水定容100mL后用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。

A.3仪器A.3.1水浴锅。

A.3.2漩涡混合器。

A.3.3电炉。

A.3.4手提式压力蒸汽灭菌锅。

A.3.5高压液相色谱仪；带示差检测器。

A.4分析步骤A.4.1样品处理精确称取1.000g（准确至0.0002g）样品放入一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中，加入7.5mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖近后用漩涡混合器混合，得到均一的悬浮液。

将小瓶放入30℃水浴中处理45min，每15min用漩涡混合器震荡混合一次。

然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约70-80mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理60min。

完成后马上冷却，将溶液调pH到6-7，然后定容至200mL。

使用0.45微米孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。

A.4.2测定A．4.2.1 液相色谱参考条件A．4.2.1．1 色谱柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，长300mm，内径7.7mm，粒径8μm。

A．4.2.1．2 柱温：70℃。

A．4.2.1．3 流动相：H2O，用前过0.22μm滤膜。

A．4.2.1．4 流速：0.6 ml/min。

A．4.2.1．5 进样体积:40μl。

A.4.3标准曲线的绘制分别吸取甘露糖/葡萄糖标液12.5、25.0、37.5mL到50mL容量瓶中，用高纯水定容到刻度，得到甘露糖、葡萄糖各为250、500、750、1000mg/L的混合标样。

甘露寡糖的研究与应用贺丹艳1 罗永发21. 华南农业大学动物科学学院2. 广州博仕奥集团1 甘露寡糖的结构及理化性质甘露寡糖(MOS)又称甘露低聚糖或葡甘露寡聚糖，是寡糖的一类。

MOS是由几个甘露糖分子或甘露糖与葡萄糖通过α－1,2、α－1,3和α－1,6 糖苷键组成的寡聚糖。

一般在生理pH 和通常饲料加工条件下较为稳定，易溶于水和其他极性溶剂。

当溶液中加入有机溶剂时会使其沉淀或结晶，甜度低于蔗糖。

它的黏度随温度上升而逐渐下降，冷却后又回升。

当pH 为1.5~3时，黏度迅速上升；pH 为3~9时，黏度较为稳定。

此外，有些MOS，如：魔芋葡甘露寡糖还有独特的凝胶性能，在一定条件下可形成热可逆凝胶和热不可逆凝胶。

MOS性质稳定，能承受饲料加工制粒的高温处理，保持其结构和功能的完整性不被破坏。

2 MOS的来源和酶解法在MOS生产中的应用2.1 MOS的来源MOS主要是通过采用化学或生物方法降解MOS得到的。

MOS广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田箐胶及多种微生物的细胞壁内。

目前，商品用MOS主要通过酶解法进行生产，是从富含MOS的酵母细胞壁中通过发酵法提取出来的葡甘露聚糖蛋白复合体，饲料用MOS也可来源于酵母细胞提取物。

目前提出了60多种不同的甘露糖蛋白复合物，而作为饲料添加剂用的MOS多为二糖、三糖、四糖的混合物（赵蕾等，2007）。

2.2 酶解法在MOS生产中的应用MOS类物质是自然界中半纤维素的第2大组分，在饲料原料中分布广泛，对畜禽是1种抗营养因子。

目前实验室及生产中获得葡甘露寡糖的方法有：1）从天然原料中提取。

2）利用转移酶和水解酶催化的糖基转移反应合成。

3）天然多糖的酶水解。

4）天然多糖的酸水解。

5）人工化学合成。

工业上主要还是采用酶转移法或酶水解法来生产低聚糖。

杨文傅等（1996）从生产角度出发，探索了利用β-甘露寡聚糖酶水解一些植物胶生产甘露寡聚糖的条件，为工业酶法制取MOS提供了基础工艺参数。

中国生物工程杂志China Biotechn〇l〇gy，2〇2〇,4〇(l l):90-95DOI：10. 13523/j.cb.2007038甘露寡糖分离纯化研究进展+潘炳菊张宛怡申会涛刘婷婷李中媛罗学刚宋亚囝M(天津科技大学生物工程学院天津300457)摘要甘露寡糖具有润肠通便、降血脂、抗结肠炎症、增强免疫及调节肠道菌群等生理功能，在食品药品等领域具有广阔的应用前景。

水解法制得的甘露寡糖含有单糖、未分解聚糖、不同聚合度寡糖及盐离子等杂质，还需要进一步分离纯化。

综述了近年来国内外甘露寡糖的主要纯化方法包括柱层析法、膜分离法、乙醇沉淀法和微生物发酵法等。

总结了各种方法的原理、应用范围和应用实例，并对不同方法的优缺点进行了分析。

关键词甘露寡糖分离纯化中图分类号Q-1甘露寡糖又称甘露低聚糖，聚合度通常为2 ~ 10, 其主链由甘露糖或者甘露糖与葡萄糖通过糖苷键相连 接，有些具有半乳糖等残基构成的侧链。

研究表明甘露寡糖具有降血脂m、调节肠道菌群[2]、提高动物机体 免疫力[3]、替代抗生素[4]、润肠通便[5]、抗氧化[6]、抗结 肠炎症~等功能，在动物词料添加剂、食品、饮料和医 药等领域应用前景广阔[8]。

甘露寡糖是以甘露聚糖如魔芋粉[9]、槐豆胶[1°]、咖 啡渣[n]等为原料制备而得。

目前甘露寡糖的制备方法 有酶解法、化学法、物理法。

水解后的寡糖溶液中具有 不同聚合度的甘露寡糖、甘露糖、大分子蛋白质、未反 应完全的甘露聚糖和盐离子等杂质，在一定程度上会影响甘露寡糖功能的发挥，因此必须对产品进行纯化，此外有研究表明，分离于同一甘露寡糖溶液，不同聚合 度的甘露寡糖具有不同的生理功能[12];不同的益生菌 对不同聚合度的甘露寡糖利用率也不同[13]。

因此，为 了更好地探究不同聚合度的甘露寡糖的生理功能，发 挥最大的益生效果，对制得的甘露寡糖溶液进行分离纯化制备纯度较高的单一聚合度甘露寡糖显得尤为重 要。

甘露聚糖酶活性测定方法一．原理样品中的甘露聚糖酶对底物－半乳甘露聚糖进行水解，用DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸）分光光度法测定水解所产生的还原糖量。

二．定义一个甘露聚糖酶活性单位（MNU）被定义为：在测定条件下，1秒钟内从甘露聚糖中产生1 nmoL相应还原糖－甘露糖所需的酶量（1 MNU=1 nkat）。

三．适用范围与安全性本方法适用于来源于木霉属（Trichoderma）的甘露聚糖酶样品的测定。

当检测其它来源的酶活时，本测定方法的直线性需要校正。

本测定方法中的DNS试剂在吸入后，接触皮肤和眼睛，或被误服后，对人体有害。

四．试剂与仪器所有试剂溶液均用去离子水配制。

1. 柠檬酸缓冲液（0.05M,pH5.3）溶解10.5 g柠檬酸（C6H8O7·H2O）于800mL水中，并用1M氢氧化钠调节pH至5.3（消耗约110mL），再用水定容至1000mL。

2. 底物－0.3%称取0.6 g刺槐豆胶（Sigma G-0753），溶于约80℃的柠檬酸缓冲液中，磁力搅拌，加热至沸腾，继续搅拌冷却至室温，加盖缓慢搅拌过夜。

将不溶的沉淀物离心（1000rpm离心10min），并用柠檬酸缓冲液定容至200mL。

将此底物溶液在-20℃下冰冻保存。

临用前，将底物溶液在沸水浴中缓慢溶解至80℃左右后使用。

3. DNS试剂溶解50.0 g3,5-二硝基水杨酸（Sigma D-0550）于4000mL水中，不断磁力搅拌，缓缓加入80.0 g氢氧化钠，使之完全溶解，再继续磁力搅拌，分数次少量加入1500 g四水合酒石酸钾钠，并小心加热，溶液最高温度不超过45℃。

冷却至室温后定容至5000mL。

如果溶液不澄清，用Wheatman 1号滤纸过滤，然后室温保存于棕色瓶中。

4．仪器恒温水浴锅50℃恒温水浴锅100℃试管旋涡磁力搅拌器分光光度计五．测定条件底物半乳甘露聚糖pH 5.3温度50℃ 0.5℃保温时间5min六．样品处理用柠檬酸缓冲液稀释被检样品。

甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)1.范围本标准规定了甘露寡糖的术语和定义、产品分类要求、实验方法、检测规则、标准包装、运输和贮存等。

本标准适用于从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活物性物质的生产、检验和销售。

2．规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备(GB/T602-2002,ISO63531:1982,NEQ)GB/T603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB/T603-2002,ISO6353-1:1982,NEQ)GB/T5917.1 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB10648 饲料标签GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1-2005,ISO6497:2002,IDT)3. 术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1甘露寡糖(Mannose-oligosaccharides,MOS)甘露寡糖又称为甘露低聚糖，是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，广泛存在于魔芋粉、瓜儿豆胶、田菁胶及多种微生物细胞壁内。

与β-葡聚糖为同一工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。

它是一种多糖，主要化学结构β-1，3葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。

3.2甘露寡糖含量甘露寡糖含量为≥15%4. 产品分子量甘露寡糖结构分子示意图5. 要求5.1 感官要求粉状低聚木糖颜色为浅黄色，具有特有的甜味、香气，无异味，无正常视力可见异常。

6. 检测方法6.1 原理甘露寡糖经酸水解后形成甘露糖，甘露糖经衍生化后注入高效液相色谱柱进行色谱分离，在245nm波长处用紫外检测器检测甘露糖的含量。

甘露聚糖酶活性检验方法1 原理甘露聚糖酶水解半乳甘露聚糖，应用二硝基水杨酸分光光度计法，测定还原性甘露糖的释放量。

2 活性单位1g固体酶粉（1 ml液体酶）在50℃ PH5.0的条件下，每分钟水解底物产生1μg 甘露糖所需酶液的量定义为一个甘露聚糖活性单位。

3 仪器与设备3.1 分光光度计（应符合GB9721的有关规定）3.2 恒温水浴锅3.3 电热鼓风干燥箱3.4 分析天平（感量0.1mg）3.5 电冰箱3.6 酸度计（精度±0.01pH）3.7 定时钟或秒表4 试剂和溶液（若未特别说明均为分析纯：所用水为蒸馏水或去离子水）4.1 醋酸－醋酸钠缓冲液（PH =5.0）甲液：量去冰醋酸6ml，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸溶液。

乙液：称去8.2g醋酸钠，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸钠溶液。

应用液：取甲液三份，乙液七份混合，用PH计矫正至PH为5.0±0.05低温冷藏备用。

4.2 3，5二硝基水杨酸试剂（DNS）甲液：取酒石酸钠182g，溶于500 ml水中，再称取重蒸苯酚5 g、无水亚硫酸钠5 g溶于其中。

乙液：取氢氧化钠20.8 g溶于260 ml水中，再加入3，5二硝基水杨酸6 g。

将甲液和乙液倒入棕色试剂瓶混合，再加入240 ml水暗处放一周后使用。

4.3 0.5%（W/V）甘露聚糖溶液准确称取甘露聚糖（美国Sigma公司）0.5000g，溶于100ml PH 5.0醋酸－醋酸钠缓冲液中配制称0.5%甘露聚糖底物液置4℃的冰箱中备用。

有效期三天。

4.4 1%（W/V）甘露糖标准储备液甘露糖在80℃±2℃烘箱中烘至恒重，准确称取1.0000g溶解并定溶于100ml容量瓶中，置于4℃冰箱内备用，备用期为三天，必要时加叠氮化钠防腐。

4.4.1 甘露糖应用液分别吸取甘露糖标准储备液，0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于50ml容量瓶中，用水定溶于刻度。

生物科技股份有限公司颁发部门：品管部 技 术 标 准甘露聚糖酶 酶活力的检测方法页码：共2页 第1页1. 目的建立甘露聚糖酶酶活力的测定方法，为各部门人员测定甘露聚糖酶活力提供依据。

2. 适用范围适用于饲料添加剂的饲料酶产品，也适用于添加甘露聚糖酶的浓缩饲料和添加剂预混合饲料。

3. 方法原理β-甘露聚糖酶可以将槐豆胶中的β-甘露聚糖水解成甘露糖及其它还原性碳水化合物，这些物质可以同DNS试剂发生显色反应，可用分光光度计测定其色度，计算其酶活力。

4. 定义在55℃、PH4.8～PH5.0条件下，1min分解槐豆胶中的β-甘露聚糖产生具有还原能力相当于1μmol 甘露糖所需的酶量，规定为1个酶活单位（实为国际单位IU），以μmol /min表示。

5. 试剂和溶液5.1 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（PH4.8-5.0）称取醋酸钠16.06g，醋酸4.92g，用蒸馏水溶解定容至1000mL，配好后用PH计校正。

5.2 DNS试剂取酒石酸钾钠182g，溶于500mL蒸馏水中加热，于热溶液中依次加入3.5—二硝基水杨酸6.3g，NaOH 2lg，苯酚5g，亚硫酸钠5g，搅拌至溶，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色试剂瓶中，室温下放置15天以后使用，使用有效期一个半月。

5.3 0.5%槐豆胶溶液用PH4.8～ PH5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制, 槐豆胶为SIGMA试剂。

5.4 7 %甘露糖标准溶液精确称取经105℃烘至恒重的甘露糖1.0000 g,用蒸馏水定容至100mL容量瓶中制成1%甘露糖标准溶液。

6. 仪器与设备6.1 恒温水浴锅60±2℃ 6.2 紫外分光光度计UV1601 6.3 电子天平(0.001g) 6.4 漩涡混合器7. 测定步骤7.1 甘露糖标准曲线的绘制分别吸取1%甘露糖标准溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水制成每mL 分别含甘露糖200，400，600，800，1000，1200μg的标准液。