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文件制修订记录无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
2、范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
3、责任者：质管部、化验室主任、QC检验员4、检验标准4.1标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H。
4.2环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
4.3方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4.4人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
4.5检验数量及检验量：4.5.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
4.5.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤500ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
4.6细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
4.7仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、HTY智能全封闭集菌仪、一次性使用集菌培养器。
5、操作规程5.1消毒剂配制：5.1.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
5.1.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)起草人(Composer)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：批准人(Approved by)：日期(Date)：目录1. 验证目的2. 验证人员3. 验证依据及参考文件4. 仪器与设备5. 验证过程5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备5.3 方法验证试验6. 验证总结1. 验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3. 验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4. 仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5. 验证过程：5.1 培养基及稀释液5.1.1 培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1 培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：结论：5.1.2.2 培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
注射用阿莫西林钠舒巴坦钠含量测定
秦莉
【期刊名称】《广东药学院学报》
【年(卷),期】2001(017)003
【摘要】采用HPLC法同时测定注射用阿莫西林钠和舒巴坦钠的含量,色谱条件为:Hp hypersil ODS柱,V(0.015 mol/L乙酸钠,pH4.0)∶V(甲醇)=90∶10为流动相,检测波长235 nm,阿莫西林在100～500 μg/mL,舒巴坦在50～250 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r分别为0.9994和0.9991),平均回收率分别为99.96%和99.87%,RSD分别为0.426%和0.646%.
【总页数】2页(P188-189)
【作者】秦莉
【作者单位】广州威尔曼药业有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R978.11
【相关文献】
1.注射用阿莫西林钠舒巴坦钠（2：1）有关物质方法学研究及溶液稳定性研究 [J], 段明华;马淑飞;潘艳;陈彦瑶;王颖;陈立成;李超英;
2.注射用阿莫西林钠/舒巴坦钠(2∶1)有关物质的测定 [J], 罗嫄;陈霞
3.注射用阿莫西林钠/舒巴坦钠含量的测定 [J], 叶海鸿;谭胜连;傅红燕;文青;蔡国伟
4.注射用阿莫西林钠舒巴坦钠细菌内毒素检查法研究 [J], 王宗尉;肖佳音;李庆忠
5.注射用阿莫西林钠舒巴坦钠近红外通用型模型的建立 [J], 于畅游;刘云飞;张肖宁
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2种注射液的无菌检查法的建立与验证摘要】目的：建立2种注射液的无菌检查法。
方法：按《中华人民共和国药典》2015年版四部要求，采用薄膜过滤法，确定2种注射液是否存在抑菌性，确定阳性对照菌，选择合适的无菌试验方法确保药品的质量要求。
结果：2种注射用均存在抑菌性，不能直接进行薄膜过滤法检查，需要采用稀释剂冲洗的方法消除两种注射液的抑菌性。
结论：2种注射液均可采用薄膜过滤法进行无菌检查，以金黄色葡萄球菌为阳性对照茵，需用100ml/膜稀释液冲洗，以消除其抑菌活性。
【关键词】注射液；无菌检查法；方法学验证【中图分类号】R927.33 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）11-0184-03注射液的无菌检查是保证药品使用安全的一个重要方面，选择合适的试验方法，才能保证药品的质量要求。
呋塞米注射液为利尿剂，异烟肼注射液是抗结核药，同作为本单位第二季度的基本药物品种，由于生产企业未提供无菌检验适用性试验的方法，为保证无菌检验结果的准确可靠，确认采用的方法适合于各供试品的无菌检查[2]，笔者对2种注射液的无菌检查法分别进行了方法适用性验证，以保证所采用的方法适合于该2种注射液的无菌检查。
1.仪器与试药1.1 试验仪器GJ-204A型洁净工作台（江苏无锡市威达净化空调电气设备厂）、一次性全封闭集菌培养器、Htysteritest601型智能集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）、SPX-250型生化培养箱（上海跃进医疗器械有限公司）、SPX-150型生化培养箱（惠科电子有限公司）。
1.2 试验样品呋塞米注射液（遂成药业股份有限公司：批号：1702172；上海禾丰制药有限公司：批号：34161102）；异烟肼注射液（西南药业股份有限公司：批号：170411，170413）。
1.3 试验试剂胰酪大豆胨液体培养基（批号 20150914）、沙氏葡萄糖液体培养基（批号20150722）、硫乙醇酸盐硫体培养基（批号 20150104）、pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（批号 20160715），以上培养基均由青岛高科园海博生物制品购买。
注射用阿莫西林钠克拉维酸钾无菌检查方法的验证www?zgys?org研究报告2.6稳定性试验精密吸取本品供试品溶液2Ol,分别于0,2,4,8,12h测定峰面积,其均值为293740,RSD=1.9%,实验表明,12h内样品较稳定.2.7精密度试验精密吸取"2.3.1"项下原儿茶酸对照品溶液2Ol,按本文所述色谱条件检测,连续进样5次,测得峰面积均值为232392,RSD=2.3%(n=5).2.8重复性试验取批号030201样品,精密吸取5rnl,共取5份,按"2.3.2"项下方法操作,测定,计算样品中原儿茶酸含量均值为0.03mg?ml～,RSD=2.1%(n=5).2.9回收率试验采用加样回收法,即精密量取已知含量的祛斑合剂样品3.0ml(含量为0.026mg?ml),共6份,分别置5Ornl量瓶中,精密加入浓度为0.063mg?ml的原儿茶酸对照品1.0rnl,用5O%甲醇定容至刻度,按"2.3.2"项下方法操作,测定,平均回收率为101.5%,RSD为1.4%.2.1O样品含量测定取祛斑合剂样品5批,照"2.3.2"项下方法制备成供试品溶液.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2Ol,注入液相色谱仪,按外标峰面积法计算含量,结果见表1.裹1样品含量测定结果(n=3)样品批号原儿茶酸含量(mg?ml-1)0302010302020302030303010303020.030,030.020.020.033讨论3.1丹参为祛斑合剂中的君药,虽然中国药典对丹参的质量控制为其主要成分丹参酮的含量测定,但研究表明J,原儿茶酸等是丹参中的水溶性有效成分,该类成分具有抗菌,抗氧化等作用,因此我们选用了该成分为指标对祛斑合剂的含量测定方法进行了研究.3.2提取方法的选择:加入适量盐酸可将样品溶液调成酸性…,可使原儿茶酸的提取更为完全.3.3流动相的选择:实验对甲醇一水一乙酸不同比例的流动相进行了试验,结果当甲醇一2.5%冰醋酸溶液为2.7:97.3时,峰形较好,与临近峰的分离度最佳,故确定为本实验的流动相.同时在色谱分析过程中,14min后增大甲醇比例至100%,以冲出有关的杂质峰,27min后恢复至起始比例,可缩短进样时间间隔,同时有助于保持重现性.3.4本实验含量测定方法快速,灵敏可靠,重现性好,能较好地控制产品的质量.参考文献1李英,刘柏年,陈忠,等.RP-HPLC测四季青片中原儿茶酸的含量[J].中成药,2002,24(5):395-3962中国药典[S].2005版.一部.523黄双盛,吴勇杰.丹参的抗氧化与抗炎作用研究进展[J].中国中医药信息杂志,2002,9(1):86-874游勇基,程广强,陈铬辉,等丹参注射剂中丹参素,原儿茶酸,原儿茶醛和丹酚酸B的同时测定[J].药物分析杂志,2004,24(1):46-495张志斌,吴佩颖,祁庆.等.HPLC法测定四季青片中原儿茶酸,原儿茶醛的含量[J].中成药,2004,26(9):719(2006-04-20收稿)注射用阿莫西林钠克拉维酸钾无菌检查方法的验证朱世真(青岛市药品检验所山东青岛266071)摘要目的:选择注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的最佳无茵检查方法,保证检验结果的准确和可靠性.方法:采用《中国药典}2005年版二部附录无茵检查法项下薄膜过滤法.结果:确定了注射用阿莫西林钠克拉维酸钾无茵检查法的最佳冲洗条件及操作方法.结论:为注射用阿莫西林钠克拉维酸钾无茵检查提供了依据.验证了《中国药典》方法为最佳无茵检查法.关键词阿莫西林钠克拉维酸钾;无茵检查;薄膜过滤法中图分类号:R927.11文献标识码:A文章编号:1008-049X(2006)08-0732-03V alidatedMethodfortheSterileTestofAmoxicilinSodiumandClavulanatePotassiumforIn jectionZhuShizhen(Qingdaoinstituteofdrugcontrol,Qingdao266071,P.R.China) ABSTRACTObjective:ToexplorethebestmethodwasdeterminedforthesteriletestofAmo xicilinsodiumandClavulanatepotassi.amforinjection.Method:CP2005V olumeII,AppendixXI,Membranefiltrationmethodwas used.Result:Thebestwashingcondition andoperationmethodforthesteriletestofAmoxicilinsodiumandClavulanatepotassiumfori njectionweredetermined.Condusion: Themethodhasusefulvaluetothemanufacturerandidentifierofdrugs,validatedCp2005VO lII,Membranefiltrationmethodisthe作者简介:朱世真,女,主管药师,主要从事药品食品微生物检验.E—mail:************************.cn7中国药师2006年第9卷第8期chinaPha珊acist2006,V o1.9No.8 beststeriletest. KEYWORDSAmoxicilinsodiumandClavulanatepotassiumforinjection;Steriletest;Me mbranefiltration无菌检查时必须选择适宜的方法消除其抗菌作用,才能保证检验结果的准确和可靠性.为此我们按照《中国药典》2005年版二部附录无菌检查法项下薄膜过滤法的要求对阿莫西林克拉维酸钾原料进行了实验.确定了最佳的实验条件并对其无菌检查方法进行了验证.1试验材料1.1仪器和滤器HTY一2000A智能集菌仪;全封闭集菌培养器KDGB330(批号20050729),由杭州泰林生物技术设备有限公司提供.1.2菌种①金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003];②枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501];③铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104];④生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64941];⑤白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001];⑥黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003].1.3培养基硫乙醇酸盐流体培养基,真菌培养基,营养肉汤,营养琼脂均由中国药品生物制品检定所提供.1.4样品阿莫西林钠克拉维酸钾批号:CLMX5100105CLMX5100106CLMX5100107CLMX5100108SandozIndustrialProductsS.A.西班牙.1.5B一内酰胺酶2ml大于300I3/支(批号:031058)由中国药品生物制品检定所提供.1.6冲洗液0.1%蛋白胨水溶液.2试验方法】2.1茵液制备将上述菌种按《中国药典)20o5年版附录菌液制备方法制成所需浓度的菌悬液及孢子悬液,备用.2.2试验方法2.2.1方法1:薄膜过滤法按《中国药典))20o5年版规定, 取供试品4.5g,分别用0.1%蛋白胨水溶解,加至500ml 0.1%蛋白胨水中.用三联滤器过滤(先润湿滤膜),冲洗,每次每筒冲洗量为100ml,分别冲洗200,400,500ml,在最后一次的冲洗液中加入少于100cfu的试验用菌.将100ml 培养基直接加入滤筒内.2.2.2方法2:薄膜过滤法+青霉素酶法按《中国药典》2005年版规定,取供试品4.5g,分别用0.1%蛋白胨水溶解, 加至500ml0.1%蛋白胨水中.用三联滤器过滤(先润湿滤膜),冲洗,每次每筒冲洗量为100ml,分别冲洗200,400,500 ml,在最后一次的冲洗液中加入少于100cfu的试验用菌. 每100ml培养基中分别加入0.7,1ml3-内酰胺酶.将含B. 内酰胺酶的培养基加入滤筒内.2.2.3方法3:真菌的检查法按《中国药典》2005年版规定,取供试品4.5g,分别用0.1%蛋白胨水溶解,加至500ml 0.1%蛋白胨水中.用三联滤器过滤(先润湿滤膜),直接加入少于100cfu的白色念珠球菌及黑曲霉菌菌液.将100ml 改良马丁培养基直接加入滤筒内.2.3阳性对照另取一装有同体积培养基的容器,加入等量实验菌,作为对照.2.4阴性对照两个滤器桶内各过滤0.9%氯化钠溶液200ml,然后分别加入硫乙醇酸盐培养基和真菌培养基各100ml,不加对照菌液,分别于(3O一35)℃及(23～28)℃培养.2.5培养硫乙醇酸盐流体培养基桶(30—35)℃培养;真菌培养基桶(23～28)℃培养.观察结果.3结果3,1薄膜过滤法冲洗量的选择试验结果见表1.3.2薄膜过滤法+青霉素酶法的试验结果见表2.3.3真菌无菌检查的验证见表3.表1薄膜过滤冲洗量实验结果表2薄膜过滤法加青霉素酶法实验结果阳性阴性对照对照菌种加入菌数——塑阳(性48对h照)篙4讨论4.1从以上结果可以看出,注射用阿莫西林钠克拉维酸钾对生孢梭菌较为敏感,在不加入B-内酰胺酶的情况下,至少7一一一融黼帅㈤削w?zgys?org研究报告盐酸伪麻黄碱缓释制剂的研制及其体外释放度测定周松陈腾(武警广东总队医院药剂科广州510507)摘要目的:研制盐酸伪麻黄碱缓释片,并测定其体外释放度.方法:采用骨架片和膜包衣法,研究不同的辅料和包衣液对盐酸伪麻黄碱缓释片的影响.结果:由体外释放度可知,在不同的辅料以及包衣液的条件下,盐酸伪麻黄碱片体外都具有缓释作用.结论:盐酸伪麻黄碱缓释片剂可作为盐酸伪麻黄碱的新制剂开发.关键词盐酸伪麻黄碱;缓释制荆;体外释放度中图分类号:R944,9文献标识码:A文章编号:1008-049X(2006)08-0734-03 StudyofPseudoephedrineHydrochlorideSustained-releasePreparationsandItsReleasein vitroZhouSong,ChenTeng(Departmentofpharmacy,GuangdongProvincialGeneralHospital, ChinesePeopleArmedPoliceForces,Guangzhou510507,P,R.China)ABSTRACTObjective:Topreparesustained—releasetabletofpseudoephedrinehydrochlorideanddetermineitsreleaseinvitro. Method:matrixtabletanddifferentliquidofwrapperwereused.Result:Pseudoephedrinehy drochloridecouldbereleasedcontinuous? lyunderdifferentaccessoialmaterialandtheliquidofwrapperthroughthedissolutionresults ofpseudoephedrinehydrochloride.Con?clusion:Thesustained?releasetabletcanbedevelopedasnewpreparationforpseudcephedri nehydrochloride,KEYW0RDSPseudoephedrinehydrochloride;Sustained—releasepreparations;ReleUSeinvitro盐酸伪麻黄碱是麻黄碱的差向异构体,为右旋盐酸麻黄碱.可选择性收缩上呼吸血管,消除组织水肿和充血,使呼吸道畅通,而对全身血管和血压的影响较弱.与氯苯那敏配伍,可取代麻黄碱治疗感冒,过敏性鼻炎等症,其减少充血效果明显,不易反跳.为使体内血药浓度平稳,延长药效,减少服用次数,降低毒副作用,故将其制成盐酸伪麻黄碱缓释片剂,并对其体外释放度进行了测定.1仪器与设备1.1仪器ZRS智能溶出仪(天津大学无线电厂);UV一2401PC紫外光光度计(日本岛津);ZP一19旋转式压片机(上海天马制药机械厂).1,2试药盐酸伪麻黄碱(大同制药厂,批号20040806);盐酸伪麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:1237-9201);羟丙甲纤维素(HPMC,上海卡乐康包衣技术公司);乙基纤维素(EC,广州市医药公司化玻批发部);EudragitL100.55(德国Rohm公司);EudragitRSPO(德国Rohm公司);聚乙二醇6000(PEG6000,广州市医药公司化玻批发部进121分装);邻苯二甲酸二丁酯(DBP,广东汕头市天原精细化工有限公司);硬脂酸镁(温州市化学用料厂);其余试剂为分析纯.2实验方法与结果2.1盐酸伪麻黄碱缓释片体外释放度的测定2.1.1测定波长的选择将盐酸伪麻黄碱和辅料分别配制作者简介:周松,男,药师,学士,主要从事医院药学工作.Tel:(020)81180001E?mail:****************写写写写写写写;纷;要冲洗500ml冲洗液,才能正常生长.因此我们在进行注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的无菌检查时,如采用薄摸过滤法,每张滤膜至少应冲洗500ml冲洗液,才能消除注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的抗菌作用.4.2青霉素酶法是青霉素无菌检查的传统方法,但操作繁琐,易污染,而薄膜过滤法虽然操作简单,但大规格的粉针剂其残留量不易冲洗,造成冲洗量较大,试验过程较长,不仅影响实验结果的准确,使截留在膜上的细菌滤过而且还能使污染的细菌受到损伤,从而降低阳性检出率影响实验结果.综合两种方法的优点.可采用青霉素酶法与薄膜过滤法相结合的方法,试验中我们采用此方法对注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的进行了无菌检查并进行验证,结果每张膜只需用200ml冲洗液冲洗后加入0.7ml青霉素酶即可保证试验的可靠性.4.3注射用阿莫西林钠克拉维酸钾对真菌无抗菌作用.不需要加入青霉素酶中和其抗菌作用,也不需要冲洗液冲洗. 综上所述,注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的无菌检查方法可采用青霉素酶法与薄膜过滤法相结合的方法进行需气菌及厌气菌的检查,真菌的检查只需通过滤膜即可,这种方法既节省青霉素酶又可减少冲洗量,试验操作简单,快速,又可准确检出结果.参考文献1中国药典[S].2005年版二部附录:892中国药品检验标;隹操作规范[S].2005年版:313(2006-01-12收稿)。
无菌检查法药品无菌检查规程一、目的：阐述无菌检查规程。
二、适用范围：适用于无菌检查规程。
三、责任者：品控部。
四、正文：1 概述无菌检查是检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于中国兽药典要求无菌检查的其它品种是否染有活菌的一种方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作。
该检查法根据供试品有无抑菌作用而采用薄膜过滤法或直接接种法两种方式。
2 仪器、设备和用具2.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(25±2)℃及除湿装置。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。
2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。
在每次操作完毕，同样上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。
2.1.2 无菌室的无菌程度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm双碟，在接种室内点燃乙醇灯，在乙醇灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求:3个平板上生长的菌落数平均不得超过1个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个/升；空气流量应控制在0.75～1.0m3/S；细菌菌落数平均＜1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2.3 恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。
2.4 离心机、显微镜、蒸汽灭菌器、标准PH比色器(0.02%酚磺酞指示液和溴钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。
2.5 玻璃器皿试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(2、5、10ml)、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
注射用阿莫西林钠Zhusheyong AmxilinnaAmoxicillin Sodium for Injection本品为阿莫西林钠的无菌粉末。
按无水物计算，含阿莫西林（C16H19N3O5S）不得少于80.0%；按平均装量计算，含阿莫西林（C16H19N3O5S）应为标示量的90.0%~110.0%。
【性状】本品为白色或类白色结晶或粉末。
【鉴别】（1）在含量测定下记录色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（2）本品显钠盐的火焰反应（附录20页）。
【检查】碱度取本品适量，加水制成每1mL中含0.1g的溶液，依法测定（附录51页），pH值应为8.0~10.0.溶液的澄清度与颜色取本品5瓶，按标示量分别加水制成每1mL中含0.1g的溶液，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录83页）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色8号标准比色液（附录79页）比较，均不得更深。
有关物质取本品适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释制成每1mL中含2mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿米西林对照品适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释制成每1mL中约含20µg的溶液，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（附录32页）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L的磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.0）-乙腈（99∶1）；流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈（80∶20）；流速为每分钟1.0mL；检测波长为254nm。
先以流动相A-流动相B（92∶8）等度洗脱。
待阿莫西林峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱。
理论板数按阿莫西林峰计算不低于2 000。
取对照溶液20µL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约满量程的20%~25%。
再精密量取供试品溶液和对照溶液各20µL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍（3.0%），各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰峰面积的9倍（9.0%）（供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计）。
注射用阿莫西林钠舒巴坦钠无菌检查方法
摘要：本文对各规格注射用阿莫西林钠舒巴坦钠的无菌检查方法进行了论述，介绍其试验过程及注意事项。
关键词：无菌检查法、注射剂、阿莫西林钠舒巴坦钠
中图分类号：r613
（1）供试品溶液制备：
取供试品20支，每支分别加0.9%无菌氯化钠溶液6ml使溶解，再分别吸出3ml转移（1/2量转移）至500ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，摇匀，制成约60mg/ml的供试溶液；
（2）薄膜过滤：
将上述制备好的供试品溶液置3个滤筒中同时过滤，每筒过滤供试液约170ml；以加入青霉素酶的0.9%无菌氯化钠溶液为冲洗液，总冲洗量500 ml（预先加入青霉素酶1支，2 ml/支，酶活力不低于300万单位/ ml），平行冲洗3个滤筒，即单筒冲洗量约170ml，加酶不低于200万单位/筒；以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（《中国药典》2010年版二部附录xi h），应符合规定。
验证用具：
1供试品：注射用阿莫西林钠舒巴坦钠3.0g（批号c101200106、c101200206、c101200306）
2培养基：由北京陆桥技术有限责任公司及奥博星生物技术有限责任公司提供
2.1硫乙醇酸盐流体培养基批号：100129
2.2改良马丁培养基批号：100611
2.3营养肉汤培养基批号：091010
2.4玫瑰红钠琼脂培养基批号：20100405
2.5营养琼脂培养基批号：20100306
3验证试验用菌种名称及其编号：由中检所提供
3.1金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）[cmcc（b） 26003]；
3.2枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）[cmcc（b） 63501]；
3.3大肠埃希菌（escherichia coli） [cmcc（b） 44102]；3.4生孢梭菌（clostridium sporogenes）[cmcc（b） 64941]；
3.5白色念珠菌（candida albicans）[cmcc（f） 98001]；
3.6黑曲霉（aspergillus niger）[cmcc（f） 98003]。
4 青霉素酶（2ml/支，酶活力不低于300万单位/ml）
验证步骤：
1菌液的制备
1.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，于30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24～48小时；分别取上述培养物1ml，加至9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-7、10-7 、10-5、10-6，10-5，制成每1ml含菌数小于100cfu/ml的菌悬液，混匀备用。
1.1.2取经23～28℃培养5-7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养
物，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，然后，用管底部有一圆孔并带有薄的无菌棉花的无菌试管滤出孢子悬液至无菌空试管中，再用上述0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu孢子悬液，混匀备用。
1.2菌液计数：分别取上述细菌菌液和真菌菌液1m加入培养皿，每种菌液做平行2皿，注入相应琼脂培养基15～20ml。
细菌30～35℃培养48小时；真菌 23～28℃培养72小时。
1.3判断标准：每1ml菌液中含菌数小于100cfu。
1.4计数结果：见无菌检查法验证试验记录表1。
2产品验证
2.1供试品溶液制备：
2.1.1供试品溶液制备：取供试品20支，每支分别加0.9%无菌氯化钠溶液6ml使溶解，再分别吸出3ml转移（1/2量转移）至500ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，制成约60mg/ml的供试溶液，摇匀备用。
2.2方法验证：
2.2.1试验组：取一全封闭集菌培养器（三筒），将上述其中1份供试液按薄膜过滤法置3个滤筒中同时过滤，每筒过滤供试液约170ml。
供试液过滤后，用总量为500 ml的0.9%无菌氯化钠溶液（冲洗前加入1支青霉素酶，2 ml/支，酶活力不低于300万单位/ ml）平行冲洗3个滤筒，第一次冲洗100 ml，第二次冲洗约70 ml，单筒冲洗约170 ml，每次过滤前应充分振摇。
其中1筒冲洗后不加菌液，先注入硫乙醇酸盐流体培养基100ml，作为本次试验的供试品
对照，供试品对照应无菌生长；其他两筒，一筒弃掉不用，另一筒在过滤最后一次冲洗液时，向冲洗液中加入上述1.1中制备好的金黄色葡萄球菌试验菌液1 ml，完毕后也注入硫乙醇酸盐流体培养基100ml；同法共做6组，各试验菌及相应培养基逐一进行验证，置规定条件下培养观察。
2.2.2对照组：另取一全封闭集菌培养器，不过滤供试品和冲洗液，直接注入硫乙醇酸盐流体培养基100ml，并加入上述1.1中制备好的金黄色葡萄球菌试验菌液1 ml，作为对照，同法共做6组，各试验菌及相应培养基逐一进行验证，置规定条件下培养观察。
2.2.3阴性对照组：另取一全封闭集菌培养器（三筒），夹住其中1筒，另两筒各过滤冲洗用0.9%无菌氯化钠溶液170ml后（500 ml 冲洗液加酶2ml），再分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，置规定条件下培养观察。
2.3培养：硫乙醇酸盐流体培养基筒30-35℃培养3天；改良马丁培养基筒23-28℃培养5天，每天观察并记录结果。
2.4试验结果：见无菌检查法验证试验记录表2。
3结果判断
该品种按上述方法进行验证试验，各对照管培养48～72小时均生长良好；与对照管比较，含供试品各容器中的试验菌均生长良好；供试品对照管及阴性对照管培养5天，均无菌生长。
试验结果表明：该供试品在此检验量和检验条件下抑菌作用可忽略不计，故可照此方法进行该品种的无菌检查，根据中国药典2010年版附录xih的
相关规定及各试验菌生长情况，阳性对照菌为金黄色葡萄球菌。
4结论：
注射用阿莫西林钠舒巴坦钠（3.0g）无菌检查法：采用薄膜过滤法，供试品用量20支，每支加0.9%无菌氯化钠溶液6 ml溶解后，再分别吸出3ml转移（转移1/2量）至500ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，制成约60mg/ml的供试液，置3个滤筒中同时过滤，每筒过滤供试液约170ml；以加入青霉素酶的0.9%无菌氯化钠溶液为冲洗液，总冲洗量500 ml（预先加入青霉素酶1支，2 ml/支，酶活力不低于300万单位/ ml）平行冲洗3个滤筒，即单筒冲洗量约170ml；阳性对照菌为金黄色葡萄球菌；其他操作依据中国药典2010年版。
5建议：
该品种其他规格的无菌检查法可参照此方法：供试品用量20支，每支加0.9%无菌氯化钠溶液适量溶解后，全部转移至500ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，均制成不超过60mg/ml的供试液；将上述供试液置3个滤筒中同时过滤，每筒过滤供试液约170ml，以加入青霉素酶的0.9%无菌氯化钠溶液为冲洗液，总冲洗量500 ml（预先加入青霉素酶1支，2 ml/支，酶活力不低于300万单位/ ml）平行冲洗3个滤筒，即单筒冲洗量约170ml，加酶不低于200万单位/筒；阳性对照菌为金黄色葡萄球菌；其他操作依据中国药典2010
年版。
