HRP标记链霉亲和素

Streptavidin链霉亲和素CAS：9013-20-1
链霉亲和素（Streptavidin）是从链霉菌（Streptomyces sp.）中纯化出来的一种四聚体蛋白，它与维生素生物素结合紧密，Kd约为10-14mol/l，对生物素和生物素化分子的高亲和力识别使其成为诊断和实验室试剂盒中最重要的成分之一。

中文名称：链霉亲和素
英文名称：Streptavidin
外观：白色固体
分子量：60kda
规格：ml
纯度：≥95%
溶解度：water
CAS号：9013-20-1
质量控制：95%
储存条件：4℃
保存时间：1 year
用途：荧光标记等
产地：西安
注意事项:仅用于科研，不用于人体
Streptavidin-CY5.5
Streptavidin-CY5
Streptavidin-CY3
Streptavidin-TRITC
Streptavidin-FITC
Streptavidin-thiol
Avidin-CY3
Avidin-CY5
Avidin-CY5.5
Avidin (without modification)
Avidin-Sepharose
Avidin-thiol
Avidin-FITC
Avidin-TRITC
温馨提示：西安瑞禧生物供应产品仅用于科研，不能用于人体（YQ2020.11）。

亲和素（Avidin）和链霉亲和素（Streptavidin）的特性亲合素( A/ AV)和链霉亲合素(SA)是生物素的天然特异性结合物。

（实际应用中多用链霉亲合素)二者均为大分子蛋白，目前所有用于标记的物质均可与亲合素(AV）或链酶亲合系(SA编OsineHOu2能与生物活性分子抗原、抗体结合，也能与示踪物结合。

多与酶、荧光素及胶体金偶联。

提示：SA的pI低，表面所带正电荷少，且不含糖基，非特异性结合远低于AV，目前以SA标记的酶结合物更为常用小稻草相关推荐Streptavidin(链霉亲和素)Streptavidin-thiol(巯基化链霉亲和素)链霉亲和素修饰的上转换纳米粒子（40nm）Streptavidin Polystyrene Particles, 1% w/v, 1.5-1.9um(链霉亲和素包被的聚苯乙烯微球)Streptavidin coated glass slides(链霉亲和素修饰的载玻片)SA链霉亲和素Streptavidin-QD510SA链霉亲和素Streptavidin-QD530SA链霉亲和素Streptavidin-QD550SA链霉亲和素Streptavidin-QD610DSPE-PEG-Streptavidin 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-链霉亲和素NH2-PEG-Streptavidin MW:2K 氨基-聚乙二醇2000-链霉亲和素链霉亲和素修饰四氧化三铁（100nm）ICG-Streptavidin吲哚菁绿标记的链霉亲和素链酶亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点链霉亲和素修饰金纳米簇SA链霉亲和素Streptavidin-QD630链霉亲和素修饰四氧化三铁（1μm）链霉亲和素标记PS微球（1μm）。

过氧化物酶标记亲和素使用说明
HRP-Avidin
货号：SE065
规格：0.1ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。

2-8℃可保存3-6个月。

产品说明：
HRP标记亲和素是采用进口亲和素和高活性过氧化物酶HRP，用改良过的碘酸钠氧化法制成复合物，可广泛用于免疫病理、酶联免疫测定、基因探针及其他学科的放大检测系统。

过氧化物酶标记亲和素每毫升含有 1.5-2mg的Avidin和HRP，3mgBSA。

工作效价：
ELISA法：1：500～1000
组织化学：1：30～100
免疫印迹：1：200～500。

斑点免疫：1：200～500。

具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。

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A1800抗体稀释液。

链霉亲和素Streptavidin说明书货号：S9170规格：1mg/5mg/10mg保存：-20℃干燥保存，有效期至少保持2年。

纯度：≥95%活性：≥15Units/mg，（Green改良法测定）。

产品来源：大肠杆菌发酵工程菌株。

分子大小：60kDa产品简介：链霉亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一种同型四聚体蛋白。

与生物素具有很高的亲和力，本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12-15 U/mg。

SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6小时，而AV半衰期仅为1小时。

由于SA不含糖基且等电点接近于中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。

本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备SA偶联酶制剂（如SA-HRP、SA-AP等），SA偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。

使用方法：一、微孔板包被1.用碳酸钠缓冲溶液（pH9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液。

2.用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；3.洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干4.后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。

包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。

二、SA偶联磁珠2.1NHS活化1.充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5ml离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；2.取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。

TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结1. ⼏种细胞凋亡检测⽅法中TUNEL法的优点和缺点是什么？2. TUNEL法的实验原理是什么？3. TUNEL实验中⼏个关键步骤是什么？4. 如何减弱⾮特异性染⾊？5. 细胞通透的时间如何选择？6. 内源性过氧化物酶的封闭时间和封闭液的浓度如何确定？7. TUNEL反应混合液的孵育时间可以调整吗？8. DAB的显⾊时间和条件如何把握？9. ⾸次做TUNEL实验的注意事项？10. PBS浸洗在TUNEL法中的作⽤和⽅法分别是什么？11. 脱蜡和⽔化在TUNEL法中的作⽤和⽅法分别是什么？针对问题3（TUNEL实验中⼏个关键步骤是什么？）：1. 充分脱蜡和⽔化。

脱蜡可以先60度20min，再⽤⼆甲苯两次5~10min；⽽⽔化⽤梯度⼄醇从⾼浓度到低浓度浸洗，这些以便后⾯的结合反应充分、均匀；2. 把握好细胞通透的时间。

⼀般根据切⽚的厚薄，选择蛋⽩酶k的孵育时间，常⽤10~30min，⼏um切⽚⽤短时间；⼏⼗um切⽚⽤长时间，通过摸索达到既不脱⽚，有能够使后⾯的酶和抗体进⼊胞内。

3. 适当延长TUNEL反应液的时间。

⼀般是37度1h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长⾄2h，但要结合你最终的背景着⾊。

4. DAB显⾊条件的选择。

⼀般DAB反应10分钟左右，结合镜下控制背景颜⾊，最长不超过30min；我不喜欢⽤promega公司提供的DAB液（桃红⾊），不利于辨认棕褐⾊。

5.PBS的充分清洗。

我个⼈认为，在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应⼗分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切⽚的⾮特异性着⾊。

6. 此外，内源性POD的封闭也⼗分关键。

对于肝脏、肾脏等⾎细胞含量多的组织，我的经验是适当延长封闭时间和升⾼过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染⾊。

针对问题2（ TUNEL法的实验原理是什么？）：基本原理：对不同组织切⽚先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dTUTP进⼊细胞内，在rTDT的辅助下dTUTP与核断裂的DNA 3’-OH结合，再⽤HRP标记的链霉亲和素与dTUTP上的biotin结合（每个链霉亲和素⾄少可以再结合3个biotin分⼦），最后⽤DAB、过氧化氢与SP上的辣根过氧化物酶HRP发⽣氧化、环化反应，形成苯⼄肼聚合物⽽呈现棕褐⾊，最终通过计数每张切⽚上不同视野中TUNEL阳性细胞的⽐例来判断细胞凋亡发⽣情况。

hrp标记的亲和素
HRP标记的亲和素是指将过氧化物酶（HRP）与链霉亲和素结合在一起，形成的复合物或共轭物。

其中，HRP是一种常用的酶，能够催化多种底物的氧化反应，产生可检测的荧光或发光信号；链霉亲和素是一种来自链霉菌的蛋白质，具有高度的亲和力，能够与Biotin 结合形成强大的生物素-链霉亲和素相互作用。

这种HRP标记的亲和素常被用于immunity染色、immunity印迹、immunity层析、ELISA 等实验中，其中生物素与链霉亲和素的相互作用用于特异性捕获和检测生物素标记的分子或分析物质。

免疫双标技术资料：（酶染色法——一般选择HRP和AP）1.石蜡片先脱蜡至水。

2、将切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中15分钟，PBS冲洗2分钟×3次3.根据抗原和标本需要进行适当修复。

4、加血清封闭溶液，室温孵育20分钟，孵育后甩掉多余液体即可。

5、加入一抗一般4度过夜。

6、使用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗8分钟×3次7、加入生物素化的二抗，37度孵育30分钟8、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗5分钟×3次9、加入链霉亲和素-AP（Avidin-AP），37度孵育20-30分钟10、使用含有0.05％吐温20的TBS（PH 7.2-7.4）冲洗5分钟×3次11、加配好的AP底物溶液，镜下检测孵育时间12、使用去离子水冲洗终止反应13、加双染阻断剂，室温孵育15分钟。

14、用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗2分钟×3次15、加血清封闭溶液，室温孵育20分钟，孵育后甩掉多余液体即可。

16、滴加稀释好的一抗，可以选择37度孵育2个小时。

17、用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗5分钟×3次18、加生物素化的二抗，室温孵育30分钟19、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗5分钟×3次20、加链霉亲和素-HRP（Avidin-POD），室温孵育20-30分钟21、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗7分钟×3次22、加DAB，镜下观察，控制显色时间23、显色后去离子水冲洗终止反应24、使用复染试剂染色（根据需要选择）25、脱水，透明，封片，显微镜观察结果。

大鼠心内神经节雌激素受体和免疫因子白介素6的共存[摘要] 目的：研究雌激素受体(ER)和免疫因子白介素6(IL广6)在心内神经节的表达，并证实它们共存的可能性。

方法：免疫细胞化学双重标记技术。

结果：切片上观察到3种细胞：①ER单标细胞，胞核呈棕褐色；②IL-6单标细胞，胞浆呈红色；③ER／IL-6双标细胞，胞核棕褐色，胞浆为红色。