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庆大霉素的作用与功效与副作用
庆大霉素是一种广谱抗生素，主要通过抑制细菌蛋白质合成来起效。
它对多种革兰氏阳性杆菌和一些革兰阴性杆菌都有较强的杀菌作用。
庆大霉素的主要作用和功效包括：
1. 治疗呼吸道感染：庆大霉素可以用于治疗肺炎、支气管炎等上呼吸道感染。
它能够杀灭引起这些感染的细菌，减轻病情，并且可以预防并发症的发生。
2. 治疗皮肤感染：庆大霉素也适用于治疗皮肤感染，如蜂窝织炎、脓疱疮等。
它能够抑制伤口上的细菌生长，并且能迅速减轻症状和炎症。
3. 治疗泌尿道感染：庆大霉素可以用于治疗尿路感染、前列腺炎等泌尿系统感染。
它能够杀灭引起感染的细菌，缓解尿频、尿急、尿痛等症状。
4. 治疗其他感染：庆大霉素还可用于治疗其他部位的感染，如骨髓炎、中耳炎等。
它能够对引起感染的细菌进行有效的杀菌。
然而，使用庆大霉素也可能出现一些副作用，包括但不限于：
1. 胃肠道反应：可能出现恶心、呕吐、腹泻等症状。
2. 过敏反应：个别人可能会出现过敏反应，如荨麻疹、皮疹、血管神经性水肿等。
严重过敏反应可能导致呼吸困难、血压下降等严重症状。
3. 肝功能损害：少数人使用庆大霉素后可能出现肝功能异常，表现为肝酶升高等。
4. 肾功能损害：长期大剂量使用可能对肾脏造成损害，导致肾功能不全。
这些副作用在使用庆大霉素时可能会出现，但并不一定会发生。
如果出现任何不适或疑似副作用，请及时咨询医生。
同时，切勿滥用和过度依赖庆大霉素，以免产生耐药性和其他不良反应。
庆大霉素副作用
庆大霉素是一种广谱抗生素，用于治疗多种感染疾病。
虽然它具有很强的治疗效果，但也存在一些副作用，需要患者和医生注意。
以下是一些可能的庆大霉素副作用：
1. 胃肠道反应：庆大霉素可引起胃肠道不适，如恶心、呕吐、腹泻和腹痛等。
这些症状通常在药物停用后自行消失，但如果症状严重或持续时间长，应及时咨询医生。
2. 过敏反应：少数患者可能对庆大霉素产生过敏反应，如皮疹、荨麻疹、瘙痒、水肿和呼吸困难等。
如果出现这些症状，应立即停药并就医。
3. 肝功能损害：庆大霉素可能对肝脏造成一定程度的损害，导致肝功能异常。
患者在用药期间应定期检查肝功能，如发现异常应及时处理。
4. 肾功能损害：庆大霉素可导致肾功能异常，尤其是在长时间和高剂量使用时。
患者在用药期间应多喝水，避免过度劳累，遵循医生的剂量和疗程建议。
5. 耳毒性：长期或高剂量使用庆大霉素可能对耳蜗产生损害，导致听力减退或听力丧失。
因此，患者在用药期间应定期进行听力检查。
总之，庆大霉素虽然是一种有效的抗生素，但也不可避免地存
在一些副作用。
患者在使用时应遵循医生的指导，及时报告任何不适症状，并定期进行相关检查。
・７４・庆大霉素的不良反应及合理用药陈守平李岩梁帅【关键词】庆大霉素；不良反应；合理用药庆大霉素属氨基糖甙类抗生素，临床主要用于革兰阴性菌和耐药金葡菌所致的严重感染的治疗。
许多年来，随着临床广泛使用，不良反应和耐药菌株都有所增加，引起了人们对庆大霉素合理用药的重视。
１庆大霉素的药动学庆大霉素从胃肠吸收很少，口服吸收率约为Ｏ．２％。
通常肌内或静脉注射给药。
从肌肉部位吸收迅速，注射后约ｌｈ达高峰浓度，肾功能正常者血浆Ｔ１／２约为２ｈ，血浆蛋白结合率低，约为３０％，药物可分布到胎儿和其他组织，但胆汁和脑脊液中的浓度较低。
庆大霉素对金葡菌的最低抑菌浓度为Ｏ．２５¨ｇ／ｌＩＩｌ，对各种革兰阴性菌和绿浓杆菌的最低抑菌浓度为１—８“ｇ／ＩＩｌｌ，治疗浓度峰值为５—１０“ｇ／１１１ｌ，各值达４灿∥ＩＩ】ｌ可引起耳毒性，治疗值达２斗∥ＩＩｌｌ有增加肾毒性的危险。
庆大霉素只要经肾小球过滤排泄，８０％以原型出现在尿中，尿中浓度可达２０～２００斗∥ＩＩｌｌ。
２不良反应庆大霉素的不良反应与其他氨基糖甙类抗生素相似，主要损害第八对脑神经，对肾脏损害较轻，但也可引起急性肾功能衰竭。
２．１对第八对脑神经的损害耳毒性的发生率约为２．３％，耳毒性的发生与血清庆大霉素浓度直接有关。
当血清浓度＞１０—１２峙／ｌｌｌｌ时耳毒性危险明显增加，损害前庭功能的多见，主要表现有眩晕、耳鸣及体位改变时的恶心、呕吐等。
耳鸣一般不伴以听力减退，有时可有眼球震颤，严重的中毒可导致各种频率听力损失的完全性耳聋。
中毒的原因，可能是由于内耳对氨基糖甙类抗生素有特异的亲和力，药物在内耳淋巴液蓄积形成高浓度，引起感觉毛细胞和血管变性所致。
２．２对肾脏的损害肾毒性的发生率约为２％一１０％，损害常为可逆的。
庆大霉素能选择浓集于肾皮质而导致近曲小管功能与结构的损害。
治疗量对肾脏损害一般较轻，大剂量时则可发生急性肾小管坏死而致肾功能衰竭，患者有因急性肾功能衰竭而致死。
硫酸庆大霉素不良反应有哪些表现？硫酸庆大霉素（Gentamicin Sulfate）是一种广谱抗生素，常用于治疗各种感染疾病，如呼吸道感染、泌尿道感染、骨骼感染等。
然而，使用硫酸庆大霉素也有可能引发一些不良反应。
在本文中，我们将详细探讨硫酸庆大霉素的不良反应表现。
1. 耳毒性：使用硫酸庆大霉素可能会导致耳毒性反应，主要表现为听力下降或听力损害。
这种反应可以是暂时的，也可以是永久的。
患者可能会遇到听力模糊、嗡嗡声、听力减退等问题。
2. 肾毒性：长期或过量使用硫酸庆大霉素可能会引发肾毒性反应。
这种反应可以导致肾功能损害，如肾小球肾炎和肾小管功能障碍。
患者可能会出现尿量减少、蛋白尿、血尿等症状。
肾毒性反应也可能导致肾衰竭，严重影响患者的生活质量。
3. 神经毒性：硫酸庆大霉素的使用可能会对神经系统产生毒性影响。
患者可能会出现头晕、头痛、颅压增高、意识障碍等神经系统症状。
在一些严重的情况下，患者可能会出现癫痫发作、昏迷等症状。
4. 肌肉麻痹：硫酸庆大霉素的使用也可能引发肌肉麻痹。
这主要表现为肢体无力、肌肉松弛等症状。
这种反应通常是可逆的，当停用硫酸庆大霉素后，患者的肌肉功能通常会逐渐恢复。
5. 过敏反应：个别患者对硫酸庆大霉素可能存在过敏反应。
过敏反应可能表现为皮肤瘙痒、荨麻疹、青光眼等症状。
在一些严重的情况下，患者可能会出现过敏性休克，这是一种严重的过敏反应，可能导致气道阻塞、心跳骤停等危险情况。
6. 消化系统反应：患者在使用硫酸庆大霉素期间，可能会出现消化系统反应。
这包括恶心、呕吐、腹泻、食欲不振等。
消化系统不适可能会导致患者的营养摄入和生活质量下降。
总结起来，硫酸庆大霉素的不良反应主要包括耳毒性、肾毒性、神经毒性、肌肉麻痹、过敏反应和消化系统反应等。
虽然这些不良反应相对较为罕见，但患者在使用硫酸庆大霉素期间需要密切观察自身症状变化，如出现不良反应应及时告知医生，并根据医生的指导进行调整或停止治疗。
此外，医生在开方硫酸庆大霉素时需要考虑患者的基本情况和用药史，避免与其他药物产生相互作用，减少不良反应的发生。
庆大霉素用法用量副作用庆大霉素用法、用量和副作用庆大霉素，又称青霉素 V，是一种广泛应用于临床医学的抗生素药物。
它常用于治疗多种感染性疾病，具有良好的疗效和耐受性。
本文将具体介绍庆大霉素的用法、用量以及可能的副作用。
一、庆大霉素的用法庆大霉素主要用于治疗敏感菌引起的感染性疾病，包括皮肤软组织感染、呼吸道感染、尿路感染等。
该药物可通过肌肉注射或口服给药的方式使用，具体用法如下：1. 肌肉注射：庆大霉素常以冻干粉剂的形式提供，需配制成注射液后使用。
医生会根据患者的具体情况和感染部位，确定合适的剂量和给药时间间隔。
一般而言，成人每次注射庆大霉素的剂量范围为0.5-1克，每日1-2次；儿童的剂量则根据体重和年龄而定。
2. 口服给药：庆大霉素也可以以片剂或颗粒剂的形式口服。
用药剂量会根据患者的病情、年龄和体重而定，通常为每次0.5-1克，每日3-4次。
必须按照医生的指示进行用药，并严格控制用药时间间隔，以确保疗效。
二、庆大霉素的用量庆大霉素的用量是根据患者的具体病情而定，需在医生的指导下合理使用。
一般而言，用量取决于以下几个因素：1. 感染类型：庆大霉素可以治疗多种不同类型的感染，如轻度感染、中度感染和重度感染。
用量会根据感染的程度和部位而有所不同，通常是根据体重和年龄来计算。
2. 患者体重和年龄：庆大霉素的用量容易受到患者的体重和年龄影响。
对于儿童患者，医生通常会根据其体重和年龄计算合适的用量，以确保疗效和安全性。
3. 肝肾功能：有肝肾功能损害的患者，需要进行剂量的调整。
庆大霉素在体内主要通过肾脏进行排泄，因此肾功能受损的患者可能需要减少用量或增加给药时间间隔。
三、庆大霉素的副作用庆大霉素通常在临床上具有较好的安全性和耐受性，但仍可能出现一些副作用。
常见的副作用包括：1. 胃肠道反应：包括恶心、呕吐、腹泻等。
这些症状通常较轻，患者可通过口服庆大霉素时与食物一同服用来减轻胃肠刺激。
2. 过敏反应：包括皮疹、荨麻疹、过敏性休克等。
一、实验目的1. 探究庆大霉素对不同细菌的抑菌效果。
2. 了解庆大霉素的抑菌机理。
3. 分析庆大霉素在实际应用中的优势与局限性。
二、实验原理庆大霉素是一种广谱抗生素，属于氨基糖苷类。
其作用机理是通过抑制细菌蛋白质的合成，导致细菌死亡。
本实验采用琼脂扩散法，通过观察细菌在庆大霉素溶液中的生长情况，来评估其抑菌效果。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌。
2. 实验试剂：庆大霉素、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、蒸馏水。
3. 实验器材：培养皿、移液器、滴管、锥形瓶、显微镜等。
四、实验方法1. 制备菌悬液：将各菌株分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。
2. 准备琼脂平板：将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50℃时，加入2%琼脂，混匀后倒入培养皿中，待凝固。
3. 制备含庆大霉素的琼脂平板：将庆大霉素溶解于无菌蒸馏水中，制成一定浓度的庆大霉素溶液。
将庆大霉素溶液加入已制备的琼脂平板中，混匀后倒入培养皿中，待凝固。
4. 接种：将菌悬液分别接种于各琼脂平板中央，用无菌镊子轻轻按压，使菌悬液均匀分布。
5. 观察结果：37℃培养24小时，观察并记录细菌生长情况。
五、实验结果1. 金黄色葡萄球菌：在庆大霉素琼脂平板上，金黄色葡萄球菌生长受到抑制，抑菌圈直径约为20mm。
2. 大肠杆菌：在庆大霉素琼脂平板上，大肠杆菌生长受到抑制，抑菌圈直径约为18mm。
3. 肺炎克雷伯菌：在庆大霉素琼脂平板上，肺炎克雷伯菌生长受到抑制，抑菌圈直径约为15mm。
4. 铜绿假单胞菌：在庆大霉素琼脂平板上，铜绿假单胞菌生长受到抑制，抑菌圈直径约为10mm。
六、实验分析1. 实验结果表明，庆大霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌均具有明显的抑菌效果，且抑菌圈直径随菌种不同而有所差异。
2. 庆大霉素的抑菌效果与抗生素浓度、菌种、培养条件等因素有关。
庆大霉素的毒副作用及其残留检测作者：李桂平张海棠王自良来源：《湖北农业科学》2008年第06期(1．新疆农业大学动物科学学院，乌鲁木齐830052； 2．河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003)摘要：就庆大霉素(GM)的作用机理､体内代谢､毒副作用､在动物体内的残留及其检测方法等进行了详尽阐述｡关键词：庆大霉素(GM)；毒副作用；残留；检测中图分类号：S859．79+6；S859．84 文献标识码：A 文章编号：0439－8114(2008)06－0723－03Detection Methods of Residue of g entamicin and Its Toxicity and Side－effectLI g ui－ping1，ZHANG Hai－tang2，WANG Zi－liang2(1． College of Animal Science， Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830052，China；2． College of Animal Science， Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang 453003， Henan， China)Abstract： The function mechanism， internal metabolism， toxicity and side effect，residues in animal body， detection methods of residues of g entamicin were reviewed in the paper．Key words： g entamicin(GM)； toxicity and side effect； residue； detection庆大霉素(Gentamicin，GM)属于氨基糖甙类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其抗菌谱广､疗效佳且价格低廉而广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂｡但GM的血清有效浓度与毒性浓度很相近，安全范围较小，在其应用过程中易产生毒副作用，尤其大剂量不规范使用，易导致动物性食品中GM残留超标，对人体健康构成危害，造成肾毒性和耳毒性[1]｡许多国家在动物生产中严禁使用GM或规定有严格的最高残留限量(MRL)，我国农业部235号公告规定，动物性食品中GM的MRL为100 ng·mL－1｡尽管我国对GM残留给予了高度重视，但目前尚未建立国家检测标准，GM在动物生产中的滥用现象仍十分严重｡1 gM的毒性作用机理肾毒性和耳毒性是GM的两个主要毒副作用｡目前研究表明，GM在正常生理pH值时，含有带正电荷的自由氨基基团因与肾小管上皮细胞或毛细胞表面的特异性受体结合后进入细胞内形成囊泡，后者与初级溶酶体结合形成次级溶酶体，由于溶酶体膜的通透性增加，大量的溶酶体酶释放，作用于线粒体，特异性地抑制线粒体呼吸酶的合成，细胞能量代谢障碍，细胞结构破坏｡此外，GM还可直接破坏血管纹，造成内､外淋巴循环障碍，引起药物积蓄，加重其对毛细胞的毒性作用｡在GM的两个毒性作用中，一般肾功能损害会明显早于听功能的损害，而在肾小管上皮细胞出现明显坏死之前，先有溶酶体和线粒体的损害[2－4]｡2gM的体内代谢及毒副作用2．1体内代谢GM内服难以吸收，肠内浓度较高｡肌注后吸收快而完全，约0．5～1 h血药浓度达到峰值｡吸收后主要分布于细胞外液，可渗入胸腹腔､心包､胆汁及滑膜液中，亦可进入淋巴结及肌肉组织｡有效血药浓度可维持6～8 h｡被吸收的GM约70%～80%以原形药通过肾小球滤过从尿中排出｡新生仔畜排泄显著减慢，肾功能障碍时半衰期亦明显延长｡2．2毒副作用2．2．1耳毒性前庭功能失调，表现为眩晕等，耳蜗神经损害表现为听力减退，甚至耳聋｡与强效利尿药合用可加强耳毒性｡2．2．2尿毒性主要损害肾近曲小管，可出现蛋白尿､血尿，严重可致肾衰竭，肾毒性与药物在肾中的浓度成正相关｡2．2．3神经肌肉阻滞本类药物有类似于箭毒的作用，大剂量使用可引起骨骼肌收缩､呼吸困难等｡2．2．4变态反应可引起皮疹､药热等，也可引起过敏性休克，但发生率低于青霉素｡3动物性食品中GM残留的检测方法3．1理化分析法GM在动物性食品中残留分析方法，主要以免疫学法进行筛选，以气相色谱法(GC)､高效毛细管电泳法(HPCE)､高效液相色谱法(HPLC)进行定量，以液相色谱/质谱联用分析法(LC/MS)进行确证｡3．1．1 g CMayhew和Gorbach等[5]于1978年建立了GC法，用电子捕获检测器测定血清中的GM，将血清样品净化提取后，用三甲基硅咪唑和七氟丁酰咪唑分两步进行衍生化处理，之后上机检测，由于这种方法较为烦琐费时，现已很少使用｡3．1．2HPCEHPCE法是由Jorgenson[6]于1981年提出的，可分为毛细管区带电泳(CZE)､毛细管胶束电动色谱(MEKC)､毛细管凝胶电泳(CGE)､毛细管等电聚焦(CIEF)､毛细管等速电泳(CITP)和毛细管电色谱(CEC)等6种模式｡尽管毛细管电泳的模式不同，其作用原理和特点各不相同，但其有着共同的基本原理，以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的迁移速度的差异而实现分离的一类液相分离技术，不同组分的迁移速度是指电渗和淌度两个速度的矢量和｡由于各组分迁移速度不同，因而经过一定时间后各组分按其速度的大小顺序，依次到达检测器被检出，得到按时间分布的电泳谱图，根据谱峰的迁移时间和峰面积或峰高即可进行定性和定量分析｡Kaale等[7]研究表明，用邻苯二甲醛和巯基乙酸衍生化，检测器为UV，检测波长为330 nm，电解质包括30 mmol·L－1硼砂，7．5 mmol·L－1β－环糊精和12．5%(v/v)甲醇(pH=10)，此方法在美国药典和欧洲药典上已被规定｡3．1．3HPLC①电化学HPLC：由于GM中有电活性分子，Europe Pharma－copoeia 4．5版采用脉冲电化学检测器(PED)，使GM在外加电压的作用下，在检测池内产生电解反应，即在工作电极表面进行氧化还原反应，产生不同的电流，从而检测器能检测GM的各组分｡齐雪琴等[8]采用电化学检测器液相色谱测定GM组分及杂质，无需采用衍生化反应，可以直接进样，且检测灵敏度高､分离效果好｡该方法在所测定的范围内具有良好的线性(r>0．99)，重复测定及耐用性的相对标准偏差组分均小于2%，杂质均小于10%，C2a组分的最小检测浓度为2 μg·mL－1｡结果表明该方法测定GM组分及杂质是一种简便､准确的分析方法｡②反相HPLC：由于GM化合物的主要特征是缺少紫外荧光发色基团和亲水性强，因此用反相HPLC－UVD/FLD分析时，为改善其可检性和分离效果，常在柱前或柱后对GM进行衍生化，使极性降低，以改善其在色谱柱的分配特性｡最常用的衍生化试剂是邻苯二醛和1－氟－2，4二硝基苯(FDNB)｡Abdulsalam和Brian等[9]使用C18和C8分离柱，流动相一般由醋酸缓冲液和甲醇和乙氰组成｡GM具有极性和离子特征，它们通常在反相色谱柱上不易分离，但通过在流动相中加入醋酸缓冲液，可以改善它们在C18柱上的分配性能，醋酸离子起平衡离子的作用，与GM形成离子对｡3．1．4LC/MSCherlet等[10]于2000年将内标物GM和托普霉素的色谱分离，用10 mM戊氟代丙酸和已睛作为流动相，用LS/MS方法测定出了GM的4种主要组成成分C1a､C2､C2a 和C1，LC/MS方法灵敏准确，其检测限可达到0．5 ng·mL－1｡Horie[11]等于2001年用C18柱分离样品，以0．18 mL·min－1流速5 mmol·L－1七氟丁酸酐－已睛(88∶12)作为流动相，其最后在猪和牛肌肉中的GM回收率达73．2%～82．6%，检测限达到2 ng·mL－1｡LC/MS作为一种确证方法，不需要衍生化处理，操作简便，灵敏度高，检测限低，有很强的检测和确证能力，目前作为理想的残留确证方法已进入实际应用阶段｡3．2免疫分析方法免疫分析方法(IA)是以抗原抗体特异性､敏感性､可逆性反应为基本原理，以不同的抗原抗体反应载体为技术建立起来的分析方法，包括放射免疫测定法(RIA)､酶联免疫吸附测定法(ELISA)､底物标记荧光免疫测定法(SLFIA)､固相免疫传感器法(SIS)和胶体金免疫层析法(GICA)｡3．2．1RIA其基本原理是样品中待测的GM(Ag)和放射性标记已知量的GM(Ag*)与相应已知量的GM Ab竞争反应，最终形成的Ag*Ab与Ag的含量呈负相关｡当Ag浓度高时，大部分GM Ab与之结合成抗原抗体复合物AgAb，而Ag*大多被分离，检测到的放射性强度较低；反之，当Ag浓度低时，大部分GM Ab与Ag*结合成抗原抗体复合物Ag*Ab，Ag*不被分离，检测到的放射性强度也较高｡通过GM标准品与放射性强度关系绘制标准曲线，可建立GM的RIA检测方法｡常用的标记物是同位素3H､14C､125I等｡Broughton等[12]早在1976年用125I标记的酰化剂3－(4－羟苯基)丙酸N－羟基琥珀酰亚胺酯使GM产生了碘化的偶合，碘化GM的放射免疫测定法检出灵敏度是80 pg·mL－1｡RIA的优点在于灵敏､特异､简便，但标记物易衰变，影响了其准确性｡3．2．2ELISA其基本原理是抗原抗体的特异性､可逆性反应，ELISA采用的是非均相竞争模式，又包括直接竞争模式和间接竞争模式｡直接竞争模式可表示为：Ag+Ag*+mAb=AgmAb+Ag*mAb+Ag+Ag*+mAb，间接竞争模式可表示为：Ag+Ag**+mAb=AgmAb+Ag*mAb+Ag+Ag*+mAb｡其中Ag为待测游离GM，Ag*为酶标记GM，Ag**为包被抗原，mAb为GM单克隆抗体，AgmAb为游离GM与GM单克隆抗体复合物，Ag*mAb为酶标记GM与GM单克隆抗体复合物，Ag**mAb为包被抗原与GM单克隆抗体复合物｡Ag与Ag*共同竞争mAb上的有限位点，反应达到平衡后洗脱多余的Ag与Ag*，用HRP及其底物显色系统显示AgmAb､Ag*mAb的结合情况，进而定量检测GM在样本中的含量｡Standefer 等[13]最先通过与放射免疫方法的比较，建立了用ELISA对GM的测定，但由于对ELISA法反应条件把握不准和对GM半抗原设计不够合理，其最终检测限为0．4 mg·L－1｡但ELISA用于小分子药物残留检测目前已成为成熟技术，不仅避免了RIA存在的稳定性问题，而且更加简便､灵敏，许多ELISA试剂盒的检测限达到pg级，同时可检测多数样品，是十分理想的快速筛选手段，缺点在于出现假阳性的概率较大，易引起误判｡3．2．3SLFIA其基本原理是用4－甲基伞形酮－β－D－半乳糖苷(4－MUG)标记药物(Ag MUG)与待测药物(Ag)竞争结合限量特异性抗体(Ab)，待测抗原(Ag)越多，形成Ag MUG－Ab 越少，剩余Ag MUG越多｡由于大分子的空间位阻效应，酶对Ag MUG－Ab复合物种的底物失去催化作用，加入β半乳糖苷酶(β－Gal)后，酶催化分解Ag MUG上的4－MUG产生4－MU(4－甲基伞形酮)越多，激发后发出的荧光越强，即待测抗原浓度与荧光强度成正比｡即：Ag MUG(定量)+Ag(待测)+Ab(限量)=Ag MUG－Ab+Ag－Ab+Ag MUG｡Hospes等[14]于1982年用SLFIA检测血浆中的GM含量，得到了较好的检测结果｡Place等[15]研究表明，当底物荧光标记GM的单克隆抗体时，其灵敏度为2 μg·mL－1，且具有较高的重复性｡此法由于操作烦琐，且检测限较高，目前在残留检测中已很少使用｡3．2．4SIS其基本原理是将免疫测定法与传感技术相结合而构建的一类新型生物传感器，利用抗原抗体特异性吸附反应的性质，将抗原或抗体固定在传感器基体上，通过传感技术使抗原抗体反应时产生的物理､化学､电学或光学上的变化转变成可检测的信号来测定待测分子的浓度，可分为非标记型和标记型两类免疫传感器，其关键步骤是抗原､抗体的制备和抗原或抗体的固定｡Valerie等[16]用ELISA和生物传感器方法检测了牛奶中的GM残留量，与ELISA 试剂盒比较，样品预处理简单，不仅检测结果准确，还可消除假阳性结果，防止漏检｡因此，免疫传感器是一种稳定､灵敏､准确､重复性好的检测筛选方法，但目前实际应用较少｡3．2．5 g ICA其基本原理是HAuCl4在还原剂作用下聚合成金颗粒，由于金颗粒之间的静电作用和布朗运动，使其保持水溶胶状态，胶体金富含电子和强大的给电子能力，在胶体溶液pH8．2条件下，以非共价键与GM单克隆抗体结合形成金标抗体(Ab－Au)，将金标抗体干燥在玻璃纤维棉上，一端与固定有GM完全抗原(检测线)和二抗兔抗鼠IgG(质控线)的硝酸纤维素膜(NC膜)相连，另一端与样品垫相连，加入待测样品后，金标抗体重新水化并与样品相互反应，在毛细管的扩散作用下沿着吸水纸方向移动，至检测线时，若样品中不含GM，金标抗体就会与完全抗原反应而被部分截获，金颗粒富集而出现明显直观的红色条带，至质控线时，金标抗体与兔抗鼠IgG反应同样会出现红色条带；若样品中含有GM，GM已与金标抗体反应而占据了金标抗体上的有限位点，不再与完全抗原反应而越过检测线，不出现红色条带，仅在质控线与兔抗鼠IgG反应，金颗粒富集而出现红色条带｡GICA法特异､敏感､快速､简便､直观，但其缺陷是不易定量｡GM免疫学检测方法具有灵敏､快速､特异､简便等优点，近年来倍受国内外学者的关注，是今后GM残留快速检测的发展方向，国外如德国Dade Behring公司等已开发出用于GM残留检测的相关产品，我国有关研究起步较晚，目前国内尚属空白｡参考文献：[1]WALKER E M， FAZEKAS M A，BOWEN W R． Nephrotoxic and ototoxicagents[J]． Clin Lab Med，1990，10(2)：323－54．[2]YAMADA T． Studies on the mechanisms of renal damages induced by nephrotoxic compounds[J]． Nihon Hoigaku Zasshi， 1995， 49(6)：447－457．[3]DU X H，YANG C L． Mechanism of g entamicin nephrotoxicity in rats and the protective effect of zinc－induced metallothionein synthesis[J]． Nephrol Dial Transplant，1994，14：135－140．[4]WU W J， SHA S H， SCHACHT J． 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庆大霉素的毒副作用及其残留检测摘要：就庆大霉素(GM)的作用机理､体内代谢､毒副作用､在动物体内的残留及其检测方法等进行了详尽阐述｡关键词：庆大霉素(GM)；毒副作用；残留；检测Detection Methods of Residue of gentamicin and Its Toxicity and Side－effectAbstract：The function mechanism，internal metabolism，toxicity and side effect，residues in animal body，detection methods of residues of gentamicin were reviewed in the paper．Key words：gentamicin(GM)；toxicity and side effect；residue；detection庆大霉素(Gentamicin，GM)属于氨基糖甙类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其抗菌谱广､疗效佳且价格低廉而广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂｡但GM的血清有效浓度与毒性浓度很相近，安全范围较小，在其应用过程中易产生毒副作用，尤其大剂量不规范使用，易导致动物性食品中GM残留超标，对人体健康构成危害，造成肾毒性和耳毒性[1]｡许多国家在动物生产中严禁使用GM或规定有严格的最高残留限量(MRL)，我国农业部235号公告规定，动物性食品中GM的MRL为100 ng·mL－1｡尽管我国对GM残留给予了高度重视，但目前尚未建立国家检测标准，GM在动物生产中的滥用现象仍十分严重｡1 gM的毒性作用机理肾毒性和耳毒性是GM的两个主要毒副作用｡目前研究表明，GM在正常生理pH值时，含有带正电荷的自由氨基基团因与肾小管上皮细胞或毛细胞表面的特异性受体结合后进入细胞内形成囊泡，后者与初级溶酶体结合形成次级溶酶体，由于溶酶体膜的通透性增加，大量的溶酶体酶释放，作用于线粒体，特异性地抑制线粒体呼吸酶的合成，细胞能量代谢障碍，细胞结构破坏｡此外，GM还可直接破坏血管纹，造成内､外淋巴循环障碍，引起药物积蓄，加重其对毛细胞的毒性作用｡在GM的两个毒性作用中，一般肾功能损害会明显早于听功能的损害，而在肾小管上皮细胞出现明显坏死之前，先有溶酶体和线粒体的损害[2－4]｡2gM的体内代谢及毒副作用2．1体内代谢GM内服难以吸收，肠内浓度较高｡肌注后吸收快而完全，约0．5～1 h血药浓度达到峰值｡吸收后主要分布于细胞外液，可渗入胸腹腔､心包､胆汁及滑膜液中，亦可进入淋巴结及肌肉组织｡有效血药浓度可维持6～8 h｡被吸收的GM约70%～80%以原形药通过肾小球滤过从尿中排出｡新生仔畜排泄显著减慢，肾功能障碍时半衰期亦明显延长｡2．2毒副作用2．2．1耳毒性前庭功能失调，表现为眩晕等，耳蜗神经损害表现为听力减退，甚至耳聋｡与强效利尿药合用可加强耳毒性｡2．2．2尿毒性主要损害肾近曲小管，可出现蛋白尿､血尿，严重可致肾衰竭，肾毒性与药物在肾中的浓度成正相关｡2．2．3神经肌肉阻滞本类药物有类似于箭毒的作用，大剂量使用可引起骨骼肌收缩､呼吸困难等｡2．2．4变态反应可引起皮疹､药热等，也可引起过敏性休克，但发生率低于青霉素｡3动物性食品中GM残留的检测方法3．1理化分析法GM在动物性食品中残留分析方法，主要以免疫学法进行筛选，以气相色谱法(GC)､高效毛细管电泳法(HPCE)､高效液相色谱法(HPLC)进行定量，以液相色谱/质谱联用分析法(LC/MS)进行确证｡3．1．1 gCmayhew和Gorbach等[5]于1978年建立了GC法，用电子捕获检测器测定血清中的GM，将血清样品净化提取后，用三甲基硅咪唑和七氟丁酰咪唑分两步进行衍生化处理，之后上机检测，由于这种方法较为烦琐费时，现已很少使用｡3．1．2HPCEHPCE法是由Jorgenson[6]于1981年提出的，可分为毛细管区带电泳(CZE)､毛细管胶束电动色谱(MEKC)､毛细管凝胶电泳(CGE)､毛细管等电聚焦(CIEF)､毛细管等速电泳(CITP)和毛细管电色谱(CEC)等6种模式｡尽管毛细管电泳的模式不同，其作用原理和特点各不相同，但其有着共同的基本原理，以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的迁移速度的差异而实现分离的一类液相分离技术，不同组分的迁移速度是指电渗和淌度两个速度的矢量和｡由于各组分迁移速度不同，因而经过一定时间后各组分按其速度的大小顺序，依次到达检测器被检出，得到按时间分布的电泳谱图，根据谱峰的迁移时间和峰面积或峰高即可进行定性和定量分析｡Kaale等[7]研究表明，用邻苯二甲醛和巯基乙酸衍生化，检测器为UV，检测波长为330 nm，电解质包括30 mmol·L－1硼砂，7．5 mmol·L－1 β－环糊精和12．5%(v/v)甲醇(pH=10)，此方法在美国药典和欧洲药典上已被规定｡3．1．3HPLC①电化学HPLC：由于GM中有电活性分子，Europe Pharma －copoeia 4．5版采用脉冲电化学检测器(PED)，使GM在外加电压的作用下，在检测池内产生电解反应，即在工作电极表面进行氧化还原反应，产生不同的电流，从而检测器能检测GM的各组分｡齐雪琴等[8]采用电化学检测器液相色谱测定GM组分及杂质，无需采用衍生化反应，可以直接进样，且检测灵敏度高､分离效果好｡该方法在所测定的范围内具有良好的线性(r>0．99)，重复测定及耐用性的相对标准偏差组分均小于2%，杂质均小于10%，C2a组分的最小检测浓度为2 μg·mL－1｡结果表明该方法测定GM组分及杂质是一种简便､准确的分析方法｡②反相HPLC：由于GM化合物的主要特征是缺少紫外荧光发色基团和亲水性强，因此用反相HPLC－UVD/FLD分析时，为改善其可检性和分离效果，常在柱前或柱后对GM进行衍生化，使极性降低，以改善其在色谱柱的分配特性｡最常用的衍生化试剂是邻苯二醛和1－氟－2，4二硝基苯(FDNB)｡Abdulsalam和Brian等[9]使用C18和C8分离柱，流动相一般由醋酸缓冲液和甲醇和乙氰组成｡GM 具有极性和离子特征，它们通常在反相色谱柱上不易分离，但通过在流动相中加入醋酸缓冲液，可以改善它们在C18柱上的分配性能，醋酸离子起平衡离子的作用，与GM形成离子对｡3．1．4LC/MSCherlet等[10]于2000年将内标物GM和托普霉素的色谱分离，用10 mM戊氟代丙酸和已睛作为流动相，用LS/MS方法测定出了GM的4种主要组成成分C1a､C2､C2a和C1，LC/MS方法灵敏准确，其检测限可达到0．5 ng·mL－1｡Horie[11]等于2001年用C18柱分离样品，以0．18 mL·min－1流速5 mmol·L－1七氟丁酸酐－已睛(88∶12)作为流动相，其最后在猪和牛肌肉中的GM回收率达73．2%～82．6%，检测限达到 2 ng·mL－1｡LC/MS作为一种确证方法，不需要衍生化处理，操作简便，灵敏度高，检测限低，有很强的检测和确证能力，目前作为理想的残留确证方法已进入实际应用阶段｡3．2免疫分析方法免疫分析方法(IA)是以抗原抗体特异性､敏感性､可逆性反应为基本原理，以不同的抗原抗体反应载体为技术建立起来的分析方法，包括放射免疫测定法(RIA)､酶联免疫吸附测定法(ELISA)､底物标记荧光免疫测定法(SLFIA)､固相免疫传感器法(SIS)和胶体金免疫层析法(GICA)｡3．2．1RIA其基本原理是样品中待测的GM(Ag)和放射性标记已知量的GM(Ag*)与相应已知量的GM Ab竞争反应，最终形成的Ag*Ab与Ag的含量呈负相关｡当Ag浓度高时，大部分GM Ab与之结合成抗原抗体复合物AgAb，而Ag*大多被分离，检测到的放射性强度较低；反之，当Ag浓度低时，大部分GM Ab与Ag*结合成抗原抗体复合物Ag*Ab，Ag*不被分离，检测到的放射性强度也较高｡通过GM标准品与放射性强度关系绘制标准曲线，可建立GM的RIA检测方法｡常用的标记物是同位素3H､14C､125I等｡Broughton等[12]早在1976年用125I 标记的酰化剂3－(4－羟苯基)丙酸N－羟基琥珀酰亚胺酯使GM产生了碘化的偶合，碘化GM的放射免疫测定法检出灵敏度是80 pg·mL－1｡RIA的优点在于灵敏､特异､简便，但标记物易衰变，影响了其准确性｡3．2．2ELISA其基本原理是抗原抗体的特异性､可逆性反应，ELISA 采用的是非均相竞争模式，又包括直接竞争模式和间接竞争模式｡直接竞争模式可表示为：Ag+Ag*+mAb=AgmAb+Ag*mAb+Ag+Ag*+mAb，间接竞争模式可表示为：Ag+Ag**+mAb=AgmAb+Ag*mAb+Ag+Ag*+mAb｡其中Ag 为待测游离GM，Ag*为酶标记GM，Ag**为包被抗原，mAb为GM单克隆抗体，AgmAb为游离GM与GM单克隆抗体复合物，Ag*mAb为酶标记GM与GM单克隆抗体复合物，Ag**mAb为包被抗原与GM单克隆抗体复合物｡Ag 与Ag*共同竞争mAb上的有限位点，反应达到平衡后洗脱多余的Ag与Ag*，用HRP及其底物显色系统显示AgmAb､Ag*mAb的结合情况，进而定量检测GM在样本中的含量｡Standefer 等[13]最先通过与放射免疫方法的比较，建立了用ELISA对GM的测定，但由于对ELISA法反应条件把握不准和对GM半抗原设计不够合理，其最终检测限为0．4 mg·L－1｡但ELISA 用于小分子药物残留检测目前已成为成熟技术，不仅避免了RIA存在的稳定性问题，而且更加简便､灵敏，许多ELISA试剂盒的检测限达到pg级，同时可检测多数样品，是十分理想的快速筛选手段，缺点在于出现假阳性的概率较大，易引起误判｡3．2．3SLFIA其基本原理是用4－甲基伞形酮－β－D－半乳糖苷(4－MUG)标记药物(AgMUG)与待测药物(Ag)竞争结合限量特异性抗体(Ab)，待测抗原(Ag)越多，形成AgMUG－Ab越少，剩余AgMUG越多｡由于大分子的空间位阻效应，酶对AgMUG－Ab复合物种的底物失去催化作用，加入β半乳糖苷酶(β－Gal)后，酶催化分解AgMUG上的4－MUG产生4－MU(4－甲基伞形酮)越多，激发后发出的荧光越强，即待测抗原浓度与荧光强度成正比｡即：AgMUG(定量)+Ag(待测)+Ab(限量)=AgMUG－Ab+Ag－Ab+AgMUG｡Hospes等[14]于1982年用SLFIA检测血浆中的GM含量，得到了较好的检测结果｡Place等[15]研究表明，当底物荧光标记GM的单克隆抗体时，其灵敏度为2 μg·mL－1，且具有较高的重复性｡此法由于操作烦琐，且检测限较高，目前在残留检测中已很少使用｡3．2．4SIS其基本原理是将免疫测定法与传感技术相结合而构建的一类新型生物传感器，利用抗原抗体特异性吸附反应的性质，将抗原或抗体固定在传感器基体上，通过传感技术使抗原抗体反应时产生的物理､化学､电学或光学上的变化转变成可检测的信号来测定待测分子的浓度，可分为非标记型和标记型两类免疫传感器，其关键步骤是抗原､抗体的制备和抗原或抗体的固定｡Valerie等[16]用ELISA和生物传感器方法检测了牛奶中的GM 残留量，与ELISA试剂盒比较，样品预处理简单，不仅检测结果准确，还可消除假阳性结果，防止漏检｡因此，免疫传感器是一种稳定､灵敏､准确､重复性好的检测筛选方法，但目前实际应用较少｡3．2．5 gICA其基本原理是HAuCl4在还原剂作用下聚合成金颗粒，由于金颗粒之间的静电作用和布朗运动，使其保持水溶胶状态，胶体金富含电子和强大的给电子能力，在胶体溶液pH8．2条件下，以非共价键与GM单克隆抗体结合形成金标抗体(Ab－Au)，将金标抗体干燥在玻璃纤维棉上，一端与固定有GM 完全抗原(检测线)和二抗兔抗鼠IgG(质控线)的硝酸纤维素膜(NC膜)相连，另一端与样品垫相连，加入待测样品后，金标抗体重新水化并与样品相互反应，在毛细管的扩散作用下沿着吸水纸方向移动，至检测线时，若样品中不含GM，金标抗体就会与完全抗原反应而被部分截获，金颗粒富集而出现明显直观的红色条带，至质控线时，金标抗体与兔抗鼠IgG反应同样会出现红色条带；若样品中含有GM，GM已与金标抗体反应而占据了金标抗体上的有限位点，不再与完全抗原反应而越过检测线，不出现红色条带，仅在质控线与兔抗鼠IgG反应，p参考文献：[1]WALKER E M，FAZEKAS M A，BOWEN W R．Nephrotoxic and ototoxic agents[J]．Clin Lab Med，1990，10(2)：323－54．[2]YAMADA T．Studies on the mechanisms of renal damages induced by nephrotoxic compounds[J]．Nihon Hoigaku Zasshi，1995，49(6)：447－457．[3]DU X H，YANG C L．Mechanism of gentamicin nephrotoxicity in rats and the protective effect of zinc－induced metallothionein synthesis[J]．Nephrol Dial Transplant，1994，14：135－140．[4]WU W J，SHA S H，SCHACHT J．Recent advances in understanding aminoglycoside ototoxicity and its prevention[J]．Audiol Neurootol，2002，7(3)：171－174．[5]MAYHEW J W，gORBACH S L．gas－liquid chromatographic method for the assay of aminoglycoside antibiotics in serum[J]．Journal of Chromatogrphy，1978，151：133－146．[6]ORGENSON J W．Zone 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