DL-苯丙氨酸的合成和拆分

酶法拆分技术研究作者：刘正威来源：《管理观察》2009年第13期摘要：生物酶法具有转化率及光学纯度高、成本低、反应条件温和、环境污染小等绿色工艺优点，随着生物技术的不断发展，酶法拆分越来越广泛应用于手性药物的制备中。

关键词：酶手性药物拆分法在有机药物合成及天然药物中，有许多具有手性碳或手性中心，因而具有光学异构体。

结构特异性药物是作用于受体、酶、蛋白质、离予通道等作用机制，在结构及电性效应上与这些物质互补，而产生激动或拮抗作用，表现出不同的生理效应。

因此，光学异构体往往在生物活性上具有较大的差异。

但目前临床应用的合成药物约有500多种为外消旋体，而单一对映体的疗效高、副作用低，服用的剂量小，更符合临床应用要求。

近几年手性药的年增长率已经超过20%，2005年全世界上市的新药中约有60%为具有手性的单一对映体药物。

因此，手性药物的开发已非常重要。

手性药物的制备可采用不对称合成方法、生物酶法或经化学合一成方法先制备药物的消旋体，然后再进行拆分而制得。

消旋体药物的拆分有多种方法，传统拆分方法是采用手性拆分剂与不同对映体一形成盐或复合物，根据其在溶剂中的不同溶解性进行分离，或采用物理方法进行诱导析晶分离得到有效的单旋体。

该方法具有拆分效，效率低，光学纯度差，另一单旋体需要消旋化后进行再拆分，操作繁琐，配套设备多、拆分剂及溶剂的消耗量较大，拆分成本较高。

近年来上市的手性药物不断增长，手性药物的制备和拆分技术也有较，大的发展，如液相酶法、固相酶法、不对称转换法、包结法等拆分技术，均较传统的拆分方法拆分效率高，且光学纯度好，拆分成本低，对环境友好。

酶是一种高活性、高特异性和高立体选择性的催化剂，可催化多种化学反应。

由于生物酶有很高的对映体选择性，利用生物酶作催化剂拆分手性药物，具有选择性定向、拆分效率高、光学纯度好的优点，可得到光学纯度很高的单对映体药物，这一方法优越。

酶法拆分有液相酶法和固相酶法两种，液相酶法是经微物发酵产生生物酶，直接利用其酶液进行拆分。

河北科技大学硕士学位论文苯丙氨酸的生产工艺研究姓名：张朝晖申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：刘守信20100501摘要摘要目前，国内外苯丙氨酸的生产方法主要有生物法和化学法。

其中生物法的缺点是发酵产物浓度低，生产周期长，工艺管理要求严格并且这种方法只适合于合成天然的L-苯丙氨酸。

化学法则存在污染严重，路线长，拆分困难等问题。

D-苯丙氨酸的生产主要是作为制备L-苯丙氨酸的副产物，目前也有报道发酵法生产D-苯丙氨酸的文章出现，但未见规模生产。

鉴于此，我们根据多年的研究提出了一条新的苯丙氨酸生产工艺路线，首先以丙二酸二乙酯和氯化苄为原料，在碱性条件下合成苄基丙二酸二乙酯，再以亚硝酸酯为肟化剂，乙醇钠为碱，对苄基丙二酸二乙酯进行肟化，得到α-苯丙酮肟酸酯。

最后对α-苯丙酮肟酸乙酯进行了还原，得到DL-苯丙氨酸或其衍生物。

产品再经生物拆分即可得到单一构型的苯丙氨酸。

在第一步反应中，我们用超细微复合碳酸盐代替传统的醇钠，进行反应，从而解决了传统方法易生成二取代物及对设备腐蚀严重的问题，并且工艺过程大为简单，收率可达83%以上。

在第二步反应中，肟化和羧酯的脱去一步完成，减少了反应步骤，提高了收率，此外我们通过工艺研究，解决了亚硝酸酯难易工业化的问题，得到了较好的工艺条件，反应温度为0℃，反应时间为9小时，在20升的放大实验中，收率稳定在90%以上。

在最后的还原步骤中，我们首次采用非晶态镍作为催化剂，硼氢化钠为还原剂，催化还原了碳氮双键，得到了混旋的苯丙氨酸，收率在85%以上，并对非晶态镍的催化机理进行了初步的研究。

另外，我们研究了锌/醋酸体系和催化加氢对α-苯丙酮肟酸乙酯的还原方法，收率均可达90%以上。

关键词苯丙氨酸；肟化；硼氢化钠；非晶态镍；催化加氢I河北科技大学硕士学位论文AbstractAt present, there are two major methods to produce L-phenylalanine, one is the biotransformation and the other is chemical method. The former has some disadvantages, such as a lower concentration of the fermentation product, a long time in a cycle-period of product, and more strict requirements for process control; what’s more, this method is only suitable for the sysnthsis of natural L-phenylalanine. As for the chemical method, its disadvantages including serious pollutions, long route and tedious procedure of chemical resolution.The D-phenylalanine is mainly as a by-product of producing L-phenylalanine. Although there are some reports about producing D-phenylalanine by fermentation method, it is no large scale.Here, a new procedure to produce Phenylalanine was developed in large scale. First, diethyl malonate and benzyl chloride as starting materials were used to produce diethyl benzyl malonate under basic condition. Then it reacted with ethyl nitrited to give α-benzene pyruvic acid oximide ethyl in the presence of sodium ethylate. At last, the production above was reduced to give DL-phenylalanine or derivatives of DL-phenylalanine. The optical purity compound L- and D-phenylalanein is obtained by biocatalysts resolution.In the first step, superfine compound carbonate was instead of sodium ethoxide which was used in traditional method. By this way, the problems caused by sodium ethoxide could be solved, such as di-replacement, serious corrosion to the apparatus and danger. More important , a far more simple procedure was got,meanwhile the yield was over 83%. In the second step, the oximation and the leaving of carboxylester were completed in one step that, shorted the procedures and improved yields. In addition, a large scale produced was realized and a better condition was got by optimized the reaction conditions,that the reaction tempreture was 0℃, reacted for 9 hours. The yields were up to 90% in a 20L reactor. At last, the oximes above was reduced by NaBH4/amorphous Ni to give DL-phenylalanine, yield up to 85% and studied the catalysis mechanism of amorphous Ni. What’ more, ethyl N-acetyl-3- phenylalanine（ethyl phenylalanine）was got by reducing α-benzene pyruvic acid oximide ethyl reduced with Zn/acetic acid system or catalytic hydrogenation, and the yields were up to 90%.Key Words phenylalanine；oxime；sodium borohydride；amorphous nickel；catalytic hydrogenationII第1章绪论第1章绪论1.1 引言氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。

苯丙氨酸的应用及发展刘浩鹏河北化工医药职业技术学院石化30901班18号摘要L-苯丙氨酸是人体必需但自身无法合成的八大氨基酸之一，也是一种重要的医药和食用化学品中间体。

在医药行业主要用于生产氨基酸输液和合成氨基酸类药物；在食品行业主要用于合成甜味剂阿斯巴甜。

其中合成阿斯巴甜是L-苯丙氨酸目前的主要用途，在其消费构成中约占90%。

关键词L-苯丙氨酸应用发展前景第一章L-苯丙氨酸的生产工艺1.1理化性能L一苯丙氨酸(L一Phenyl习a苗ne)又名L一苯基一a一氨基丙酸，为白色结晶粉末。

有苦味。

熔点:283℃(分解)。

在自然界中广泛存在于卵、乳和动物蛋白中，含量5%~6%，植物性蛋白质中约含1%。

L一苯丙氨酸可溶于水，在水中的溶解度为3%，难溶于乙醇、乙醚，在10耐水中的溶解度为51℃:4·49。

100℃:109。

旋光度一34.5(25℃)。

苯丙氨酸有外消旋DL 一型，L型和D型。

其中最重要的是L一苯丙氨酸。

[1]1.2生产工艺[1]~[5]1.2.1提取法此法是使脱脂大豆在盐酸存在下水解，除去酸性氨基酸后，再用树脂吸附苯丙酮酸和酪氨酸，用溶剂将苯丙氮酸溶出，利用溶剂差从氨基酸中分出，此法由于提纯难度大，产物收率不高。

其提取方法很多，主要有锌盐沉淀法、等电点中和法、有机溶剂萃取法、活性炭吸附提取以及离子交换法。

在这些方法中，最为重要的是离子交换法。

离子交换法所用的离子交换树脂为高分子产品，在其分子结构中高分子聚合物骨架十分稳定，可逆交换反应在树脂上可以反复进行，使用寿命长，因此离子交换法是一种目前较为普遍的氨基酸提取方法。

可以选用阳离子型离子交换树脂对体系中的L一苯丙氨酸进行吸附提取。

1.2.2发酵法20世纪60年代日本中山公司用糖质发酵制苯丙氨酸获得成功，并由协合发酵公司实现了工业化生产。

20世纪70年代用糖质发酵的发酵液苯丙氨酸浓度可达42.6%。

用苯丙酮酸为原料，经发酵法制得的工艺是首先用氯化节与co合成苯丙酮酸，再使L一天冬氨酸与苯丙酮酸在固定床反应器内用固定化细胞提取，进行离子交换、提浓得产品，选用的菌株能使L 一苯丙氨酸的转化率不小于90%。

酶法拆分D,L-苯丙氨酸制备D-苯丙氨酸黄冠华;夏仕文【摘要】在固定化青霉素酰化酶(IPA-750)存在下,通过N-苯乙酰-D,L-苯丙氨酸(2)的选择性水解完成了酶法拆分D,L-苯丙氨酸(1)制备D-苯丙氨酸(5)的过程.选择性水解的较适宜反应条件为:2 2.83 g, m(2):m(IPA-750)=6:1, pH 7.0,于30 ℃反应5 h,产物为N-苯乙酰-D-苯丙氨酸(4)和L-苯丙氨酸(3,收率63%,光学纯度99%). 4用6 mol·L-1盐酸于120 ℃水解反应8 h,经脱盐处理得5,收率67%,光学纯度91%.3在含醋酸酐的醋酸溶液中进行消旋化处理,得到100%消旋的1可继续进行下一轮酶法拆分.【期刊名称】《合成化学》【年(卷),期】2007(015)001【总页数】4页(P69-72)【关键词】D,L-苯丙氨酸;L-苯丙氨酸;D-苯丙氨酸;固定化青霉素酰化酶;酶拆分【作者】黄冠华;夏仕文【作者单位】中国科学院,成都有机化学研究所,四川,成都,610041;中国科学院,研究生院,北京,100039;中国科学院,成都有机化学研究所,四川,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】O629.71L-苯丙氨酸(3)[1]又称α-氨基-β-苯丙氨酸，是人和动物必需的氨基酸。

生物体内不能自身合成3，必须从外界摄取。

D-苯丙氨酸(5)能增强人体免疫功能，具有出色的镇痛作用，常用于生产药物，如作抗肿瘤药物(百士欣)和糖尿病治疗药物(钠格列那)的生产原料，作HIV蛋白酶(艾滋病)抑制剂的关键中间体等。

由于5是非天然氨基酸，目前尚无法通过发酵法生产，主要通过拆分D,L-苯丙氨酸(1)获得。

拆分1的方法很多，有酶法拆分[2，3]和化学法拆分[4]。

其中酶法拆分具有条件温和、催化效率高、专一性强等特点。

固定化青霉素酰化酶[5](IPA-750)具有立体选择性水解苯乙酰酰胺键的特性[6]。

手性拆分膜的拆分原理及制备方法∗王雪;梁晓桐;张强;谷梦鑫;赵义平;冯霞;陈莉【摘要】It is an urgent problem for effective separation of chiral compounds in the field of pharmaceutical, chemical,food and other fields.As one of the important methods of chiral separation,the research and develop-ment of chiral separation membrane has important academic and application value.In this work,the research progress of chiral separation membrane in China and abroad was reviewed.The chiral separation principle,prep-aration method,latest research progress and the existing problems were analyzed,and the future development direction of chiral separation membrane was discussed.%实现手性化合物的有效分离是当前制药、化工、食品等领域急需解决的技术难题。

作为手性拆分的重要方法之一，手性拆分膜的研究开发具有重要的学术和应用价值。

对近年来国内外手性拆分膜的研究进展进行了综述，重点分析了其手性拆分原理、制备方法、国内外最新研究进展，以及目前存在的问题等，并且对手性拆分膜的未来发展方向进行了展望。

【期刊名称】《功能材料》【年(卷),期】2016(047)0z1【总页数】5页(P61-65)【关键词】手性拆分;拆分膜;拆分原理;制备方法【作者】王雪;梁晓桐;张强;谷梦鑫;赵义平;冯霞;陈莉【作者单位】天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387;天津工业大学材料科学与工程学院，省部共建分离膜与膜过程国家重点实验室，天津 300387【正文语种】中文【中图分类】TQ028.8手性是自然界的本质属性之一，是指碳原子连接的四个不同原子或基团在空间排布上可能存在的两种或两种以上的异构体形式，彼此两两对称，互成镜像而不重合[1-2]。

第二章　色谱法拆分Ｄ／Ｌ－氨基酸2.1 氨基酸手性拆分概述早在二十世纪初食品添加剂10重现性最低检测限等参数值还需要和生物样品中dopa的回收方法有效的衔接考虑到样品量大光不稳定性化合物)和经济实用等因素因为D-NNA的体内手性转化现象得到了证实且相关的CEC手性分析方法也较为成熟[36]±¾Ñо¿ÔÚ¿¼²ì¶à°Íת°±Ã¸µÄÒÖÖƼÁ¿¨±È¶à°ÍµÄµ×ÎïÑ¡ÔñÐÔʱ¾ßÌåÊÇÒò´Ë2.2手性配体交换法概述手性配体交换法(ligand-exchange´ÓÄÇÒÔºó³ÉΪ·ÖÀëÊÖÐÔ°±»ùËáµÄÓÐÁ¦¹¤¾ßËûÓÃ×é°±Ëá-Cu2+以及阿斯巴甜-Cu2+成功的实现了多种丹酰化氨基酸的手性分离[42]Ëüͨ³£Ö¸Á½À໯ºÏÎï-环糊精比如L-Pro°¢Ë¾°ÍÌðÇ°Ò»ÀàµÄÖ÷Òª½á¹¹ÊÇÓÉ6-8个呋喃糖通过因为每个呋喃糖上都有5个手性碳原子可以和氨基酸的对映异构体进行手性识别从而使对应异构体被拆分不过两者的具体分离机制还是不同的它主要是通过在流动相中添加L-氨基酸和螯合剂比如Cu2+等金属离子D/L氨基酸衍生物)与之形成螯合化的非对应异构体物这对形成的非对应异构体因为存在疏水性的差异保留时间)就不同11动态的解离-螯合过程中实现了氨基酸手性异构体的分离[42, 43]ÊÖÐÔÅäÌå½»»»·¨µÄ·ÖÀëÔ-ÀíÕýÊÇ»ùÓÚÕâ¶Ô·Ç¶ÔÓ¦Òì¹¹ÌåµÄÊèË®ÐÔ²îÒìÔÚÊÖÐÔÒì¹¹ÌåµÄ²ð·ÖÉϾݲé¶ÔD/L-Ala D/L-甲硫氨酸实现了手性对照对D/L-Ser此外事实上也可以广泛的应用于基于毛细管电泳的分析方法ＬＥ－ＭＥＫＣ比如手性选择性差异不显著有了更多的解决途径使用LE-MEKCp D/L-酪氨酸和o p 氟-D/L-Phe 可以同时对o共12种单体实现同时分离[45]³ýÁËÒÇÆ÷Ó²¼þÌõ¼þÒÔ´ïµ½ÀíÏëµÄ·ÖÀëЧ¹û½ðÊôÀë×ÓÁ÷¶¯ÏàpH值流动相离子强度1LE-LC 中的常用的金属离子有Cu2+, Ni2+, Co2+等在色谱柱中有效分离其它离子形成的络合物稳定性相对较差122Á÷¶¯Ï಻ͬµÄpH 值会改变金属离子的平衡状态非极性氨基酸的分离度通常会随着pH 值的升高而升高由于过低的pH 值环境中而使分离度下降因而通常是实际情况中选用pH5.0~6.0 之间洗脱的先后顺序也可能会发生改变　有机改性剂甲醇降低有机流动相中的有机溶剂会促进溶质和吸附剂之间的疏水作用4Àë×ÓÇ¿¶È²»½ö»áÓ°ÏìÒì¹¹ÌåµÄ±£Áôʱ¼ä5²»Í¬µÄÑ¡ÔñÌåÒòÓëÒì¹¹ÌåÐγÉÂçºÏÎïµÄÎȶ¨ÐÔ²»Í¬½ÏΪ³£ÓõÄÓÐL-脯氨酸N,N-双甲基-L-苯丙氨酸在众多基于手性配体交换的分析方法中手性固定相法(CSP)虽然灵敏但是手性柱价格昂贵生命周期短柱前衍生化方法虽然常以荧光检测器提高灵敏度也比CSP便宜操作步骤相对繁琐不利于热不稳定性化合物的定量分析结果的重现性更好它本身的优点是适用范围广操作方便总之因此我课题中的dopa手性分离也采用LE-LCËüÒ²Óв»¿ÉºöÊÓµÄȱµã1mM-5mM Cu2+介入流动相导致检测器的检测背景显著升高在分离某些极性的螯合化三重化合物的过程中有机改性13剂比如甲醇然而2.3　Ｌ／Ｄ－ｄｏｐａ的手性分离方法关于D-dopa的动物药效学研究资料显示而且药效较L-dopa有时滞D-dopa虽然是其药效的源头而是以D-dopa为底物我们推测这个物质可能就是由D-dopa转化生成的L-dopa×îÖ±¹Û×îÎÞи¿É»÷µÄÊֶξÍÊÇÈκη½·¨Ñ§µÄ½¨Á¢ÄǾÍÊÇ·ÖÎö·½·¨ÒªÊʺÏÑо¿¶ÔÏóµÄÀí»¯ÐÔÖʽ«¶à°ÍµÄÀí»¯ÐÔÖÊÏêÊöÈçÏÂÔÚ1mM盐酸溶液中的最佳吸收值在280nmË®ÖеÄÈܽâ¶ÈΪ1.5mg/ml ÂÈ·ÂÈÝÒ×±»¿ÕÆøÖеÄÑõÑõ»¯²¢ËæÖ®±äºÚ其实在体内的代谢也是非常活跃的dopa主要被儿茶酚胺-O-甲基转移酶(COMT)代谢为3-O-甲基多巴多巴胺进一步迅速的被单胺氧化酶氧化脱氨形成3DOPAC)HVA)[48]×óÐýdopa的人体药代动力学数据显示脑脊液中的浓度则仅相当于10-20%相应的目前常用的分析方法是采用离子对色谱法原理在于被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后从而使流动相中各组分的分离因子改善通常是采用C18反相柱在磷酸盐或柠檬酸缓冲体系中添加离子对试剂辛基磺14酸钠乙腈采用电化学检测器进行分离分析[50, 51, 52, 53]±È³£¹æµÄ×ÏÍâ¼ì²âÆ÷ÖÁÉÙÒª¸ß2-3个数量级该方法不仅可以对L-dopa 的体内代谢浓度进行检测４－二羟基苯乙酸(DOPAC)去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)È»¶øÆä´ÎʹÓ÷ÑÓðº¹óÑ°ÕÒеķ½·¨ÅäÖÃ×ÏÍâ¼ì²âÆ÷µÄLE-LC方法就是一个可以实现D/L-dopa 分离分析的方案采用LE-LCÒÔ3 mM Cu2+为络合金属离子添加到去离子水中这两个非对映异构体螯合物在疏水性上的差异即从而实现手性分离日本岛津LC-2010C高效液相仪４．６ｍｍ上海通微分析技术有限公司)2.3.2药物和主要试剂L/D-dopa(Sigma乙腈(Fisher, 美国)其余试剂均为国产优质纯250 ~300 g2.3.4大鼠肾匀浆制备大鼠断头处死取双肾３置于冰预冷的100mM15Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)中再用匀浆器按1000 r pm/min的转速匀浆数分钟吸上清存放于-202.3.5样品处理由100 l空白肾匀浆和100 l Tris-HCl缓冲液组成的样品２缓慢滴加0.6M高氯酸避光静置15分钟后下20,000×g 离心15分钟2.3.6方法学考察2.3.6.1 Ｄ／Ｌ多巴的手性分离取100 ìl D-dopa(1mg/ml, 溶于0.01M盐酸)和100 ìl肾匀浆至1.5ml 离心管立刻按2.3.5所示方法处理后进行高效液相分析５同法处理同法处理空白对照组以等体积的50mM Tris-HCl代替dopa的标准溶液１０２０４０并用100mM Tris再按2.3.5中的方法处理样品以L-dopa峰面积对匀浆中L-dopa的浓度进行线性回归2.3.6.3 方法回收率取空白匀浆100 l数份２５并用Tris制成终浓度为25按2.3.5中方法除蛋白计算方法回收率162.3.6.4 提取回收率另取相应浓度的标准液直接进样得到提取回收率172.3.6.5 精密度取空白肾匀浆100 l数份制成浓度为12.5 g/ml按样品处理方法处理后计算精密度(RSD)ÅäÖÆ0.003MCu2+-0.006M L-Phe的去离子水溶液0.22 ìm滤膜过滤并超声脱气10分钟;以1%乙腈和99%的上述溶液实行等度洗脱280nm0.5ml/ml;柱温D/L-dopa的分离度Rs两个对映异构体可以实现基线分离图1出峰位置不受蛋白杂峰的干扰18Fig. 1 Typical chromatograph of drug free kidney homogenate (A); unequal concentration of D/L-dopa recovered from kidney homogenate (B); L-dopa recovered (C); D-dopa recovered (D). Mobile phase consisted of 1 mM Cu (II)-3 mM L-phenylalanine in aqueous solution containing 0.01% trifluoroacetic acid and 1% CAN. The flow rate was 0.5 ml/min and the column temperature was at 20µÃ»Ø¹é·½³ÌY = 9675.3X–46371R2 =0.9947 3时０．０１５　ｍＭ表2 方法回收率２．７０１０３．４７４．０１９５．６０４．３１９８．１５2.3.8.4绝对回收率L-dopa按本文描述方法提取时中又称提取回收率６．８８％４．１２％３．２１％192.3.8.5 精密度低高浓度组的精密度分别为8.49%2.3.9讨论生物样品如血浆1980年代常用的方法是固相萃取法(Solid Phase Extract简单来说以便样品中的待检物质如dopa等吸附于具有强表面自由能的三氧化铝表面达到回收的目的高速离心得到的上清直接检测[54, 56, 57]ËäȻǰÕߵľø¶Ô»ØÊÕÂʽϸß(80-90%)[55, 59, 56]¼´ÑùÆ·´¦Àí·½·¨¼òµ¥ÊʺϴóÅúÁ¿µÄÑùÆ·´¦ÀíºóÕߵľø¶Ô»ØÊÕÂÊËäÈ»ÉÔµÍ但是也基本满足药代动力学的回收率要求[57]Ïà¶ÔÎó²îÉпÉÎÒÃDzÉÓøßÂÈËáÖ±½Ó³ýµ°°×µÄ·½·¨À´´¦ÀíÉúÎïÑùÆ·¸ßÂÈËáÊÇÒ»ÖÖµäÐ͵ÄÀë×Ó¶ÔÊÔ¼Á由于流动相的PH呈中性在非极性固定相中的溶解度增大此外我们选用的柱温是20预试验数据表明故而添加1%的乙腈以增加流动相的非极性另一方面随PH升高紫外吸收背景过高可能影响检测的灵敏度弥补温度降低对峰型的影响我们参照Husain等分离D/L-dopa标准品的方法[58]³É¹¦µØ½¨Á¢ÁËHPLC上应用手性配体交换法分离定量20生物样品中D/L-dopa 的方法2.4L/D-硝基精氨酸的手性分离方法通过对硝基精氨酸体内手性转化的研究动物实验中D-NNA表现出来的类L-NNA的升压效应正是源于D-NNA在体内的生物学手性转化这些定性定量的研究进展都是基于HPLC的色谱方法首创了基于手性配体交换法来分离分析D/L-NNA 的毛细管电色谱方法[36]Êǽ«¹Ì¶¨ÏàÌî³äÓÚëϸ¹ÜÖùÄÚ»òÍ¿²¼ÒÔµçÉøÁ÷»òµçÉøÁ÷½áºÏѹÁ¦Á÷Íƶ¯Á÷¶¯Ïà¸ÅÀ¨µÄÀ´ËµÒò´ËÒ²¼¯ºÏÁËÕâÁ½ÖÖ·ÖÎö·½·¨µÄÓŵã¾ßÓиßЧ¾-¼ÃµÈÌصãÐí¶àÑо¿ÕßÔÚ·ÖÀëÀíÂÛËûÃǵľ-Ñé±íÃ÷¸ßËÙ·ÖÀë´øµçºÉµÄÐý¹âÒì¹¹Ìå[58]ÊǼ«¾ßDZÁ¦µÄÊÖÐÔ·ÖÀë·½·¨C18 反相毛细管柱上海通微分析技术有限公司2.4.2药物和主要试剂D-NNA(Bachem Bioscience, 美国)甲醇(Fisher, 美国)其余试剂均为国产优质纯212.4.3样品处理空白对照组加入用100mM Tris-HCl 补足体积至200 ìläöÎлìÔȺó离心15 min ÓÃÀëÐÄŨËõÒǻӸÉÈܼÁ¸ÃÑùÆ·ÒºÔÙ¾-12,000rpm离心10分钟后取上清进行CEC分析精密量取100 ìl 空白肾匀浆用100mM Tris-HCl 补足体积至200 ìl37700rpmÔÙ°´ÉÏÊö·½·¨´¦ÀíÑùÆ·ºó½øÐÐCEC分析包括两个PU2080 plus 输送泵, 10 nl 进样环, UV-20全波长紫外检测器和Trisep-2000GV 高压模块检测波长280 nm含有2 mM Aspartame5%甲醇２．４．５D-NNA手性转化的典型图谱A2223B图2 大鼠肾匀浆中D/L-NNA手性转化的典型图谱Fig. 2 Typical CEC chromatograph of rat kidney homogenate blank (A); 1.8mM D-NNA incubated in rat kidney homogenate (B). CEC conditionsÓ¦ÓÃÊÖÐÔÁ÷¶¯ÏàºÍ·´ÏàÖù°´2.4.3中的方法图2且血浆组分无干扰2.4.6讨论该实验采用CEC仪器在不加电渗流的情况下即24可有效的实施对生物样品中D/L-NNA的手性分离和定量省去了电极缓冲液的配制步骤从实验结果分析[20, 36]±ê×¼ÇúÏßÏà¹ØϵÊý¿É´ï0.99 以上此外检测样品量和流动相用量少等突出优点25。

D,L-苯丙氨酸对映体拆分的研究进展M140101006 高金伟摘要：氨基酸是组成蛋白质的基本单元，在人体及动物生命活动中起着举足轻重的作用。

不同旋光异构性的氨基酸在动物体内代谢途径不同，发挥着不同的生理作用和生物活性。

对近年来采用手性试剂拆分法、色谱拆分法、电泳拆分法、膜拆分法、酶促拆分法、萃取法等分离方法拆分D,L-苯丙氨酸对映异构体的研究进展进行了简要的概述。

关键词：D,L-苯丙氨酸；对映异构体；拆分手性是指原子组成相同，在立体结构上互为镜像，可以比喻为人的左手和右手。

互为镜像关系而不能重合的一对分子称对映异构体(对映体)。

对映异构体都有旋光性(其中一个是左旋体，另一个是右旋体)，又称旋光异构体(光学异构体)。

一对对映异构体右旋体和左旋体的等量混合物称外消旋体。

对映异构体在药物中占很大比例，常用药物中40%为外消旋体，天然药物中98%为旋光异构体[1,2]。

虽然对映异构体物化性质基本相同，但由于药物所作用的受体或靶位是蛋白质和核酸等手性大分子，对与其结合的药物分子空间构型有特殊要求，因此对映异构体药物在体内往往呈现很大药理、毒理作用及药效学、药动学方面的差异[3]。

典型的例子是“Thalidomide(沙利度胺)事件”，研究表明其R-Thalidomide具有治疗呕吐的作用，而S-Thalidomide却具有很强的致畸作用。

该外消旋药物在20世纪60年代的广泛使用，使数千名婴儿致畸，成为上世纪医疗界的悲剧[4]。

鉴于此，在制药工业，许多国家规定必须对药物的对映体限度进行控制。

美国食品与药品监督管理局(FDA)1992年颁布了手性药物指导原则，要求新型手性药物在上市前必须对其对映体分别进行药效研究，说明对映体各自的生理活性、药理作用、毒性和临床效果，如果其对映体药理、毒理等数据表明该对映体不具有治疗作用，则该对映体的含量应进行严格控制。

因此，对映体拆分和控制在药物合成及质量控制中已成为一个不可回避的问题。