单克隆抗体ELISA法测定IgG、IgA、IgM的轻链比率

血清免疫球蛋白M测定【基本信息】[简要描述]·免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)是初次免疫应答反应中的免疫球蛋白(Ig)，也是相对分子质量最大的Ig，约占血清总Ig的5%-10%。

·IgM测定用于体液免疫活性、子宫感染可能性或急性感染评价，IgM型多发性骨髓瘤和华氏巨球蛋白血症诊断和治疗检测。

[其他名称]IgM【测定方法及参考值范围】可通过单向免疫扩散法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法测定。

参考值范围：成人血清IgM为0.5-2.6g/L；新生儿为0.01-0.06g/L。

【结果及临床意义】[增高]◇疾病因素·华氏巨球蛋白血症注释：IgM呈单克隆性明显增高。

·IgM型多发性骨髓瘤·初期病毒性肝炎(A型病毒性肝炎急性早期等)·类风湿关节炎·系统性红斑狼疮·宫内感染注释：宫内感染可能引起IgM浓度急剧升高，若脐血中IgM＞0.2g/L时，表示有宫内感染。

·慢性感染·淋巴瘤·肝硬化(原发性胆汁性肝硬化的早期等)·B型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。

·C型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。

·慢性肝病·类狼疮性肝炎注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。

·肝细胞癌注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。

·链球菌感染·传染性单核细胞增多症·肾病综合征微小病变型恶化时·浆细胞骨髓瘤·施尼茨勒综合征注释：表现为慢性荨麻疹、不明原因发热、骨关节痛、骨硬化X线像。

·伴性IgM增高免疫球蛋白缺乏症·先天性高IgM综合征[降低]◇疾病因素·IgG型重链病·IgA型多发性骨髓瘤·先天性免疫缺陷症(原发性无丙种球蛋白血症、网状细胞异常形成症等)注释：网状细胞异常形成症属于复合性免疫缺陷症的一种类型，T、B和NK细胞显著减少，免疫球蛋白减少以至IgA和IgM多有测不出的程度。

免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法
【申请单】请完成申请单所要求项目
×××市人民医院检验申请单
姓名
性别年龄
门诊号住院号
诊断或症状
检验标本
检验目的
送检科室医师
送检日期年月日
【方法选择】
表13-2 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测
方法单向琼脂扩散法火箭免疫电泳速率散射比浊法ELISA 放射免疫分析法本次检查选择√
以检测待检人血清IgG为例。

【材料准备】
1.抗原：待检人血清、IgG免疫球蛋白工作标准品（IgG含量为10mg/ml）。

2.抗体：羊抗人IgG抗血清（单扩效价1：100）。

琼脂糖或琼脂粉、生理盐水、NaN3，载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸耳球、三角烧瓶、湿盒、水浴箱、温箱、半对数坐标纸。

【操作方法】
将1.0%～1.5%琼脂（用PH8.2、0.05M的巴比妥缓冲液配成）加热溶化，加0.01%（0.1g/L）NaN3，置于56℃水浴中备用。

吸取99ml已经融化的琼脂于三角烧瓶中，置于56℃水浴中，将预温的羊抗人IgG抗血清1ml与琼脂充分混合，继续保温于56℃水浴中备用。

免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。

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即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

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【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

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免疫学实验考试题⽬免疫学实验考试题⽬1、何谓免疫?请简述免疫系统的基本功能。

免疫(immunity)：是免疫系统抵御抗原异物的侵⼊，识别“⾃⼰”和“⾮⼰”的抗原，对“⾃⼰”的抗原形成天然免疫耐受，对“⾮⼰”抗原进⾏排除，维持机体内环境平衡和稳定的⽣理功能。

三种功能：（1）免疫防御：即抗感染免疫，机体针对病原微⽣物及其毒素的免疫清除作⽤，保护机体免受病原微⽣物的侵袭；（2）免疫⾃⾝稳定：机体可及时清除体内衰⽼或损伤的体细胞，对⾃⾝成分处于耐受，以维系机体内环境的相对稳定；（3）免疫监视：机体免疫系统可识别和清除畸形和突变细胞的功能。

在某些情况下，免疫过强或低下也能产⽣对机体有害的结果，如引发超敏反应、⾃⾝免疫病、肿瘤、病毒持续感染等。

2、何谓免疫应答?试述适应性免疫应答的主要特点。

免疫应答（immune response）：是指免疫系统识别和清除抗原的整个过程。

分为固有免疫和适应性免疫主要特点①特异性②耐受性③记忆性3、简述免疫系统的构成及基本的组成成分。

免疫系统是执⾏免疫功能的组织系统，包括：（1）免疫器官：由中枢免疫器官（⾻髓、胸腺）和外周免疫器官（脾脏、淋巴结和黏膜免疫系统）组成；（2）免疫细胞：主要有T淋巴细胞、B淋巴细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞、⾃然杀伤细胞、树突状细胞等；（3）免疫分⼦：如抗体、补体、细胞因⼦和免疫细胞表⾯的多种膜分⼦，4、简述中枢免疫器官的组成及其功能。

中枢免疫器官是免疫细胞发⽣、分化、发育和成熟的场所，包括⾻髓和胸腺⾻髓的功能⒈各类⾎细胞和免疫细胞发⽣的场所⒉B细胞分化成熟的场所⒊体液免疫应答发⽣的场所再次体液免疫应答的主要部位胸腺功能⒈T细胞分化、成熟的场所⒉免疫调节⒊⾃⾝耐受的建⽴与维持5、简述外周免疫器官和组织的组成及基本功能？外周免疫器官是成熟淋巴细胞定居的场所，也是这些淋巴细胞针对外来抗原刺激启动初次免疫应答的主要部位包括淋巴结，脾和粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴结功能1.T、B细胞定居的场所⒉免疫应答发⽣的场所⒊参与淋巴细胞再循环⒋过滤作⽤（过滤淋巴液）脾功能⒈T、B细胞定居的场所⒉免疫应答发⽣的场所⒊合成某些⽣物活性物质⒋过滤作⽤（过滤⾎液）粘膜相关淋巴组织（MALT）主要指呼吸道、胃肠道及泌尿⽣殖道粘膜固有层和上⽪细胞下散在的⽆被膜淋巴组织，以及某些带有⽣发中⼼的器官化的淋巴组织⒈参与黏膜局部免疫应答⒉（B细胞）产⽣分泌型IgA6、何谓抗原?何谓半抗原?简述抗原的基本特性。

临床探索恶性肿瘤患者血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检验分析王静玉，丁莉，陆奎英（扬州大学附属医院，江苏扬州 225000） 摘要：目的:分析恶性肿瘤患者血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检验价值。

方法:选择2020年1月～2021年6月扬州大学附属医院收治的70例恶性肿瘤患者开展这次研究，设置为实验组，选择同期在本院进行健康体检的60名健康体检者作为研究参照组，对两组入选者的血清免疫球蛋白水平进行检测，并对比两组检测结果。

结果:实验组中，肺癌、食管癌、原发性肝癌、大肠癌等恶性肿瘤患者的IgA、IgG、IgM 水平均显著高于参照组的健康体检者。

对比P ＜ 0.05，实验组的乳腺癌、鼻咽癌、宫颈癌等恶性肿瘤患者的IgA水平比参照组健康体检者的高；对比P ＜ 0.05，而IgG、IgM水平与参照组比较P ＞ 0.05。

结论:大多数恶性肿瘤患者其机体的免疫功能都会受到影响，与健康人群相比具有明显差异性，因此，通过检测恶性肿瘤的免疫功能指标可以有效判断是否存在恶性肿瘤病变，可为临床诊断相关疾病提供诊断依据。

关键词：恶性肿瘤；IgG；IgA；IgM；体液免疫；检验价值正常情况下，人体正常细胞能够通过生长与分裂形成新的细胞，且细胞出现衰老或者受到损伤之后便会死亡，这样能够维持人体的动态平衡。

但如果人体细胞出现无限制的分裂与扩散情况之后，将会形成新的生物即称做肿瘤。

癌症主要是指一系列恶性肿瘤的统称，通常意义其便指代了所有恶性肿瘤，但是从病理学角度分析，是来源于上皮组织的癌症才是所有恶性肿瘤的总称，如果是来源于间叶组织（包括结缔组织和肌肉） 的恶性肿瘤称为肉瘤。

临床研究可知，肿瘤疾病具备特异性抗原，而人体免疫系统与肿瘤产生、发展与转归等都存在相关性，大多数肿瘤患者其机体中都会存在免疫功能异常现象，而临床通过调节人体免疫功能可以对肿瘤进展进行控制[1]。

在人体蛋白质中，Ig属于其中的一种，它具备多样性，存在抗体作用，主要是人体免疫细胞遭受外部病原体或者相关物质刺激之后和产生的免疫分子，属于机体免疫能力中一个关键指标[2]。

免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊号住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期年月日【方法选择】表13-2 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测方法单向琼脂扩散法火箭免疫电泳速率散射比浊法ELISA 放射免疫分析法本次检查选择√以检测待检人血清IgG为例。

【材料准备】1.抗原：待检人血清、IgG免疫球蛋白工作标准品（IgG含量为10mg/ml）。

2.抗体：羊抗人IgG抗血清（单扩效价1：100）。

琼脂糖或琼脂粉、生理盐水、NaN3，载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸耳球、三角烧瓶、湿盒、水浴箱、温箱、半对数坐标纸。

【操作方法】将1.0%～1.5%琼脂（用PH8.2、0.05M的巴比妥缓冲液配成）加热溶化，加0.01%（0.1g/L）NaN3，置于56℃水浴中备用。

吸取99ml已经融化的琼脂于三角烧瓶中，置于56℃水浴中，将预温的羊抗人IgG抗血清1ml与琼脂充分混合，继续保温于56℃水浴中备用。

制板：取4ml抗体琼脂溶液倾注于玻片中上，制成厚1.5mm的琼脂板，置室温冷却凝固。

浇板时要薄厚均匀、平整、无气泡。

打孔：待琼脂凝固后，用打孔器打孔，孔径为3mm，孔距10～12mm。

要求孔打得圆整光滑，孔缘不能破裂、底部勿与玻片分离。

稀释免疫球蛋白工作标准及待检人血清：1支IgG免疫球蛋白工作标准品加0.5ml蒸馏水溶解后使用。

加样：将上述稀释的IgG免疫球蛋白工作标准品分别滴入相应的抗体孔内，其余孔滴加待检的稀释血清，每个检样加两个孔，每孔滴加10微升。

扩散：将琼脂板置水平湿盘内，放进37℃温箱，IgG免疫板扩散24小时后取出置黑色背景前观察结果，（如果沉淀环不清晰，可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小时后观察，或者用生理盐水浸泡2～3小时候观察），必要时可以染色后观察。

ELISA和IFA法检测SARS患者病毒抗体IgG和IgM的比较作者：李穗芬谭奕洲唐漾波刘丽儿袁小珍唐小平尹炽标【关键词】 ELISA【摘要】目的探讨SARS患者体内SARS病毒抗体产生的规律及比较IFA和ELISA法的特点。

方法采用间接免疫荧光技术（IFA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）对43例SARS患者双份血清及10例正常人双份血清的SARS病毒IgM/IgG抗体进行检测。

结果 43例患者中新近感染SARS病毒40例（93.02%），3例未检出其感染。

发病10天内检出率较低，发病10天后检出率较高。

阳性率随发病时间而上升。

在SARS病毒IgG的检测中，ELISA法较IFA法敏感。

结论 IFA法和ELISA法均适合于SARS发病10天后实验室辅助诊断方法，ELISA法较IFA法敏感。

关键词 SARS病毒酶联免疫吸附试验间接免疫荧光技术 IgM IgGThe comparison between ELISA and IFA methods for determining antibodies of IgG and IgM in patients with SARS 【Abstract】 Objective To study and discuss the rules of the SARS virus antibody production in patients with severe acute respiratory syndrome（SARS），compare the characteristics of IFA and ELISA.Methods The SARS virus IgM/IgG antibodies of doubleserums of43patients with SARS and10normal controls were detected by IFA and ELISA.Results 40out of43（93.02%）patients with SARS infected SARS virus recently and other three patients can't be detected the antibody.The antibody detection rate that with in10days of the disease taking bad is lower than that after10days，the positive rate of the detection raises following the increase of the time of disease taking bad ELISA is more sensitive than IFA in the detection of SARS virus antibody IgG.Conclusion Both IFA and ELISA are fit for the lab assistant diagnosis of SARS that taking bad more than10days，ELISA is more sensitive than IFA.Key words SARS virus enzyme linked immunoadsorbed assay indirect immune fluorescent assay IgM IgG在临床上有多种病原体可以引起肺炎等呼吸道疾病，较常见的有细菌、病毒、衣原体、支原体、立克次体等。

浅析血清IgG、IgA、IgM测定方法及临床意义发表时间：2019-09-04T16:16:41.193Z 来源：《中国结合医学杂志》2019年7期作者：张英辉1 富荣威（通讯作者）2 [导读] 测定免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）能够提供有关体液免疫状态的重要信息，预见原发性免疫缺陷病，具有重大的临床意义。

1.北部战区总医院检验科；2.沈阳二四五医院检验科【摘要】目的掌握IgG、IgA、IgM测定方法及临床意义。

方法采集标本，运用免疫散射比浊法测定血清中IgG、IgA、IgM，送检。

结论测定免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）能够提供有关体液免疫状态的重要信息，预见原发性免疫缺陷病，具有重大的临床意义。

【关键词】IgG；IgA；IgM；测定方法；临床意义IgG、IgA、IgM是三种免疫球蛋白，也就是抗体。

三种抗体结构不同，功能亦不同。

IgG是主要的再次免疫反应抗体，IgM是主要的初次免疫抗体，IgA是粘膜免疫中的主要分泌型抗体。

1测定方法1.1检测原理免疫球蛋白是由浆细胞分泌的，是免疫系统与抗原接触后的体液免疫反应物。

采用免疫散射比浊法检测，检测原理为人体液标本中的蛋白与特异性的抗体形成免疫复合物。

这些免疫复合物会使穿过标本的光束发生散射。

散射光的强度与标本中IgA／G／M的浓度成正比。

与已知的标准浓度对比即可得出结果。

计算公式为：IgA／G／M浓度（g／L）=A样品／A标准×标准液浓度。

1.2标本采集1.2.1采血方法：空腹不抗凝静脉血、肝素或EDTA抗凝血浆2～3ml、脑脊液。

新鲜的尿液也适用于IgG测定，如要分析对应的血清和脑脊液样品，则应同时抽取。

1.2.2标本处理：以2500～3000r／min离心6～10min，分离血清上机测定[1]。

若标本不能及时检测，将分离的血清冷藏于2～8℃的冰箱内保存。

1.2.3标本保存：使用新鲜或冰冻的血清样本或脑脊液，2～8℃保存不超过8d，-20℃条件下保存不超过3个月。