番红O乙醇溶液(0.5%)

他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。

刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。

三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。

苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。

被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。

常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。

单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。

常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。

（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。

1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

番红O固绿染色液
货号M025
原理:
番红(也称作番红O或基本红2)是个用在组织学和细胞学的生物染色剂。

番红在一些染色的实验计划表中用作复染剂，将所有的细胞核染成红色。

这在革兰氏染色和内孢子染色都
试剂盒组成:
操作流程：
1. 石蜡切片脱蜡至水，自来水冲洗3min;
2. (取等量的A液B液混合，即为铁苏木素溶液。

现用现配，用多少配多少，用后丢弃。

混合后的染色液为紫黑色，染色能力强，并不易褪色。

但不易久存，24小时后失去染色能力。

)铁苏木精染色3min;自来水冲洗3min;
3. 盐酸酒精溶液分化3-5Sec；自来水冲洗3min。

4. 入固绿染色液中染色8min；
5. 在1％的醋酸中快速分化3Sec；
6. 速洗1min;
7. 入番红O染色液中染色3min（最多）
8. 95％酒精冲洗浮色；
9. 100%酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。

结果：
细胞核呈黑色，细胞浆、软骨下骨区呈绿色，粘蛋白、软骨及钙化软骨、肥大细胞颗粒呈橙色/红色。

染色注意事项:
1.标本固定尽可能用多聚甲醛固定.脱钙后一定要流水冲洗过夜后再脱水包埋.否则番红不
易着色.
2.如果染色不理想可以考虑在细胞核染色后用饱和苦味酸水溶液处理30min,水洗后再入
固绿染色液染色.
3.番红O固绿染色液分化很关键,步骤5、6时要快；步骤8速度要快，否则红色褪色。

结晶紫的配制和相关信息分子式为：C25H30ClN3变色范围pH6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。

...取间甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氢氧化钠溶液10ml使溶解,再加水稀释至100ml,即得。

...取结晶紫0.5g,加冰醋酸100ml使溶解,即得。

...结晶紫的变色范围较复杂，颜色变化有紫、蓝、蓝绿、黄绿、黄，突跃点附近指示剂的颜色变化不明显，而显著的变色点明显早于滴定终点。

色范围pH6.0～7.0～9.0(黄→紫→紫红)。

...取间甲酚紫0.1g,加0.01mol/L氢氧化钠溶液10ml 使溶解,再加水稀释至100ml,即得。

...取结晶紫0.5g,加冰醋酸100ml使溶解,即得。

...结晶紫就是甲基紫，龙胆紫（1）0.13-0.5 黄色→绿色（2）1.0-1.5 绿色→蓝色(3) 2.0-3.0 蓝色→紫色好像是这样的: 结晶紫染色液：结晶紫 1 g95％乙醇20 mL1％草酸铵水溶液80 mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

结晶紫染液、番红染液如何配制？这个是革兰氏染色液的两种主要试剂，常规配法如下，如果用量少可以订购现成的，用量大自己配合算。

(1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。

(4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

PH试剂有甲基红、溴甲酚绿、百里酚蓝这三种指示剂酸碱指示剂用于酸碱滴定的指示剂，称为酸碱指示剂。

（acid-base indicator)。

这是一类结构较复杂的有机弱酸或有机弱碱，它们在溶液中能部分电离成指示剂的离子和氢离子（或氢氧根离子），并且由于结构上的变化，它们的分子和离子具有不同的颜色，因而在pH不同的溶液中呈现不同的颜色。

A液：结晶紫2.5g，95%乙醇25mL。

B液：草酸铵1.0g，蒸馏水1000mL。

制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合静止48h后，过滤后使用。

2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液碘1.0g，KI 2.0g，蒸馏水300mL。

先用3~5 mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。

3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL4．沙黄（番红）染色液2.5％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红）2.5g，95%乙醇100mL。

此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。

5．0.1％美兰染色液0.1g溶解于100mL蒸馏水中。

6．吕氏碱性美蓝色染色液A液：美蓝0.3g，95%乙醇30mL。

B液：KOH 0.01g，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。

7．瑞氏染色液瑞氏染料粉未0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。

将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。

8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用）孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。

先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。

9．黑色素水溶液（荚膜负染色用）黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）0.5mL。

将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。

A液：单宁酸5.0g，FeCL3 1.5g，福尔马林(15%) 2.0mL，1%NaOH 1.0mL，蒸馏水100mL。

B液：AgNO3 2.0g,蒸馏水100mL。

将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。

再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。

番红固绿染色法制取水稻茎穗部石蜡切片1.苯胺番红溶液配制：番红：5g；95%酒精：50ml；苯胺油：20ml；蒸馏水：100ml先将番红溶于95%酒精，使其充分溶解后加入苯胺油，充分搅拌，再加入蒸馏水，过滤备用。

2.苯胺固绿染色液配制：固绿：1g；无水酒精：100ml；苯胺油：4ml 先将固绿溶于无水酒精中，使其充分溶解后过滤，再加入苯胺油即成。

（苯胺油具毒，不能与粘膜接触）3.番红——固绿双重染色法适用于高等植物根，茎，叶的染色，染色结果是木质化的细胞壁及核呈红色，薄壁细胞，细胞质等呈绿色。

步骤如下：固定后的水稻茎穗部流水冲洗24h番红苯胺液染色3天系列脱水，透明，包埋切片，粘片，烘片纯二甲苯脱蜡（蜡脱完为止）1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液5-10分钟纯酒精5分钟饱和苦味酸95%酒精溶液分色（镜检适度）纯酒精冲洗1分钟固绿酒精苯胺溶液复染1分钟纯酒精冲洗1分钟1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液5分钟纯二甲苯5分钟封片4.脱水：按照以下乙醇质量分数梯度进行脱水，括号里面的是每一级的时间：30%（15min）→50%（15min）→70%（15min，如果当天做不完可将材料放入其中过夜，第二天再处理）→83%（30min，用83%代替85%是因为83%正好处于85%与95%之间，效果最好）→90%（30min）→100%（15min）→100%（15min）→1/2酒精+1/2二甲苯35.透明：（1）滴加纯二甲苯至与100%乙醇等量，此时二甲苯占总体积的1/2；（若此时溶液变浑浊，证明脱水不彻底，要重新退回到100%乙醇中）；（2）再滴加二甲苯超过100%乙醇的量，此时乙醇占总体积的1/3，二甲苯占总体积的2/3；（3）换纯二甲苯直到材料变得透明为止。

6.浸蜡与包埋：（1）室温浸蜡：往含有二甲苯及已经透明材料的坩埚中加入蜡屑至过饱和，放置3d或者更长（“更长”的意思是做到这一步可以停下来，以后可以想什么时候做下面的步骤都行）。

番红O-固绿染色方法 1、0.02%固绿溶液：固绿0.02g，蒸馏水100ml 2、0.1%番红O溶液：番红0.1g，蒸馏水100ml 3、1%盐酸酒精分化液：弄HCI1份，95%乙醇99份 染色 1、石蜡切片脱蜡至水 2、苏木精染细胞核1-3min，显微镜观察染色情况决定染色时间长短 3、自来水充分洗涤，去除残留苏木精。 4、1%盐酸酒精分化15-30s，分化时间视颜色深浅而定。 5、自来水充分洗涤，去除残留染液。 6、0.02%固绿水溶液染色3min，固绿为一种酸性染料，呈碱性细胞质或细胞外基质呈绿色 7、1%冰醋酸洗涤切片，去除残留固绿 8、0.1%番红O染色3min，番红是一种碱性染料，呈酸性细胞质或细胞外基质呈橙黄/红色。 9、95%乙醇侵洗，洗去残留番红 10、95%乙醇、无水乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。 番红O-固绿染色改良版 1、石蜡切片脱蜡至水 2、Weigert氏苏木素染色3分钟 3、1%盐酸酒精分化 4、水洗 5、0.2%固绿水溶液内染色5分钟 6、水洗 7、0.1%番红O水溶液内染色1-2分钟 8、水洗 9、0.1%醋酸水溶液分化 10、水洗 11、95%乙醇、无水乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。 Solutions and Reagents:

Weigert's Iron Hematoxylin Solution:

Stock Solution A: Hematoxylin ----------------------------- 1 g 95% Alcohol ----------------------------- 100 ml

Stock Solution B: 29% Ferric chloride in water ----------- 4 ml Distilled water -------------------------- 95 ml Hydrochloric acid, concentrated ---- 1ml

软骨染色液(番红O法)简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。

软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。

软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

软骨染色液(番红O法)染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。

番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。

当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。

通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，番红O分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

组成：编号名称DB00712×100mlStorage试剂(A): Safranin O stain 100ml RT 避光试剂(B): Safranin分化液100ml RT使用说明书1份自备材料：1、10%福尔马林固定液2、脱钙液3、蒸馏水4、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、标本的处理：福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。

2、常规脱蜡至水。

3、蒸馏水洗。

4、入Safranin O stain内浸染，蒸馏水洗。

5、用Safranin分化液洗涤切片，蒸馏水洗。

6、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

7、二甲苯透明，光学树脂封固。

染色结果：软骨基质红色注意事项：1、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。

2、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。

3、Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。

4、95%乙醇脱水时间不宜过长。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称DC0032Masson三色染色液TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

番红染色液染色原理
番红-固绿（软骨）染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨和碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或者蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。

对植物进行番红整染，即在材料漂洗掉固定液后，直接将整个材料投入到1%的番红溶液（50%酒精配制）中，染色24小时左右，其后再对染色的材料进行脱水包埋的方法，其便捷性以及优势更大，主要体现在以下几点。

其一，材料整染后，从脱水开始就一直带有番红的颜色，包括后面的切片环节，这样我们切出的蜡带都是带有颜色的，进而方便于我们在切片环节进行删选淘汰，尤其是一些需要大量切片，并从中挑选出特定位置结构的材料，如花药横切观察某个特定的减数分裂时期、花芽分化等等，从蜡带开始，我们就能大量淘汰不符合要求的切片片段。

带番红颜色的蜡带
其二，整染番红可以节省染料，1%的番红染色液，我们是可以重复使用的，直至明显看到染料变稀为止，尤其是在大量染色的后期操作时，相比较于我们需要一定的染液淹没半截载片，整染我们只需要在前期使染液淹没材料即可。

其三，简化了分色，1%的番红整染，其实对材料是一种过染的状态，后续依次的70%、80%…酒精脱水，脱水液会吸收多余的染料，
正好起到一个分色的作用，复染固绿时，只需根据材料的状态稍加处理即可。

相对于后期片染番红，对很多新手来说，其操作更加简单便捷。

番红染色原理
番红(也称作番红O或基本红2或藏红T)是个用在组织学和细胞学的生物染色剂。

番红在一些染色的实验计划表中用作复染剂，将所有的细胞核染成红色。

这在革兰氏染色和内孢子染色都是典型的复染剂。

它也可以被用来检测软骨、黏蛋白和肥大细胞的颗粒。

番红是从藏红花柱头中提取的一种天然染色剂，为橙红色粉末。

是植物组织学实验中最常用的染色剂之一。

可溶解于水和乙醇。

通常配成1%水溶液染植物的木质部，也可以按照以下配方配成苯胺番红液对组织进行块染：番红5g，95%乙醇50mL，苯胺20mL，蒸馏水450mL。

番红能够对植物的木质化、栓质化和角质化部分进行染色，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。

染色时间一般为2~24hrs，常与固绿等进行合作染色。

油红O染色所需试剂：蓝色：暂时可不做红色：需准备的10% 胎牛血清的RM1640完全培养液，无胎牛血清的RM1640培养液，oxLDL①法：PMA ，4% 多聚甲醛，丙二醇，0.5% 油红O的丙二醇溶液（0.5g油红O+100ml丙二醇），PBS②法：异丙醇，油红O原液，蒸馏水（简便）油红O储备液配制：油红O 0.5g异丙醇（含量98%） 100ml用前以40% 水稀释，混合后静置10分钟，过滤，即可染色。

所需仪器：6孔板，盖玻片，移液枪，吸管，显微镜盖玻片常规处理：自来水冲洗-泡酸过夜-纯水洗涤-酒精浸泡过夜（可免）-晾干-热压灭菌若为新盖玻片：直接用酒精加盐酸泡-纯水洗涤-晾干-热压灭菌注：纯水洗后，竖着放，在超净台里吹干，就不至于有水印。

细胞爬片准备：（1）如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。

可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。

如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。

要轻轻地镊取，以防破裂。

为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。

（2）在无菌状态下，把干燥的玻片放于适当的培养皿中。

盖玻片可以用金属镊子镊取（3）将悬浮的细胞放入组织培养皿中，培养至少24小时，让细胞贴附在玻片上。

要想得到一个较好的结果，在加细胞时，密度应低，以防细胞密度过高。

（4）如果细胞数目有限，可把细胞悬液直接滴在玻片上，静置4小时后再轻轻加入培养液。

通过这种方式，大部分细胞将粘附于玻片上，然后再培养约24小时，使细胞适当扩增。

此时，取出载玻片或盖玻片可进行固定油红染色步骤：1.建模：（无菌操作）取对数生长期的细胞，分为正常组和模型组，调整细胞浓度为106个/mL，接种于6孔培养板（预先放有无菌盖玻片），每孔2mL。

正常组含160nmol/L的PMA的RM1640基础培养液中培养24h，贴壁后轻轻吸去上清液，换含无胎牛血清的RM1640培养液，静止24h。