Luxol Fast Blue髓鞘染色液(伊红法)使用说明书

考马斯亮蓝快染
用该方案可以在加入染色液后5-10min内得到染色的蛋白质条带。

该方案背景低，但没有基本方案1敏感。

材料：异丙醇固定液，考马斯亮蓝快染液，10%（v/v）乙酸。

步骤：
1)将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料或玻璃容器并以3-5倍体积的异丙醇
固定液覆盖，室温下缓慢摇动10-15min（0.7mm厚的胶）或30-60min（1.5mm厚胶）；
2)倾去固定液，以考马斯亮蓝快染液覆盖凝胶，室温下快速摇动直
至得到想要的亮度（2h至过夜）；
3)倾去染色液，以10%乙酸覆盖凝胶，室温下缓慢摇动≥2h，直
至得到干净的背景。

如需要，换新的10%乙酸；
4)保存；拍照或干燥凝胶。

异丙醇固定液：25%异丙醇，10%乙酸，65%水，室温长期保存；
快速考马斯亮蓝染色液：10%（v/v）乙酸，0.006%（m/V）考马斯亮
蓝G-250，90%水，室温长期保存；
考马斯亮蓝染色液：用固定液配制0.05%（v/v）考马斯亮蓝R-250染
色液。

但是，在加乙酸和水（一般不必过滤）之前
应将考马斯亮蓝R-250溶于甲醇。

室温下溶液可保
存6个月。

如果随保存时间延长出现沉淀，可过滤
去除沉淀获得均一的溶液。

脱色液：5%（v/v）甲醇，7￥（v/v）乙酸，88%水，室温下可保存1
个月。

伊红染色液使用说明及注意事项货号：G1100规格：100ml/500ml保存：本试剂常温保存，复检期为1年。

产品说明：伊红是一种酸性生物染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。

本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。

染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。

本产品为工作液，可直接使用。

操作说明：1、样品处理a)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟，无水乙醇5分钟，90%乙醇2分钟，70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。

b)对于冰冻切片：经固定的切片置蒸馏水2分钟。

c)对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上，蒸馏水洗涤2分钟，换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。

2、伊红染色伊红染色液染色染色2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。

用蒸馏水洗去多余染料，此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。

如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。

注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行伊红染色。

3、进行其它染色如果进行免疫荧光染色，伊红染色液染色后，蒸馏水洗去多余染料，70％乙醇洗涤2次，每次2分钟,再用PBS或生理盐水、TBS、TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟，然后就可以进行免疫荧光染色或其它的染色。

注意事项：1、染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。

样品数量很多时，可使用染色架和染色缸，以便于操作。

2、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

精子活体染色操作卡（3种方法）
精子活体染色操作卡
伊红染色法：
1. 滴新鲜精液 + 1滴伊红Y 溶液 30秒后高倍光学显微镜下立即观察、计数。

伊红-苯胺黑染色法：
1．10μl 新鲜精液+ 50μl 伊红-苯胺黑试剂室温放置30秒
2．取约5μl 染液-精子混合物涂片空气中干燥。

3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。

低渗膨胀法：
1．1ml 低渗膨胀液37℃预热约5min 。

2．加入0.1m1液化的精液在37℃下至少保持30min （不要超过2h ）。

3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。

注意事项
1．低渗膨胀液开瓶后，需分装放-20℃环境冷冻保存。

2．试剂盒放2－8℃环境保存，使用有效期为1年，开封后2－8℃保存可用45天
载玻片上混匀
盖上盖玻片轻轻混匀 Eppendorf 管
加盖混匀。

大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue染色作者：吕广明，吴辉群，栗卓，刘苏，韩笑，季达峰【摘要】目的：探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。

方法：选用正常成年SD大鼠延髓和脊髓冰冻切片，应用Luxol Fast Blue 染色法进行染色。

结果：Luxol Fast Blue染色后，在延髓和脊髓切片中可见灰质呈淡红色，白质呈蓝色，延髓锥体染成深蓝色。

锥体中Luxol Fast Blue标记的深蓝色阳性纤维，经锥体交叉后至脊髓灰质后连合背侧，沿脊髓后索腹侧深层下行，至荐段后逐渐消失。

在延髓锥体和脊髓颈、胸、腰段后索中，深蓝色的Luxol Fast Blue阳性纤维边界清晰，与周围结构区分明显。

结论：运用Luxol Fast Blue 染色可清楚显示大鼠皮质脊髓束在脊髓内的定位，是一种简便可靠的皮质脊髓束形态学研究方法。

【关键词】皮质脊髓束；Luxol Fast Blue；髓鞘染色；大鼠[Abstract] Objective: To explore the special staining method for revealing the localization of corticospinal tract in rats. Methods: Luxol Fast Blue staining method was utilized to stain the sections of medulla oblongta and spinal cord of the normal adult Sprague-Dawley rats. Results: In Luxol Fast Bluestaining sections, the gray matter of medulla oblongta and spinal cord was stained in light red, while the white matter around the gray matter was dyed in blue. The dark blue stained Luxol Fast Blue labeled fibers in the pyramid passed through the pyramidal decussation to the contralateral side, descended at the ventral part of posterior funiculus just dorsal to the gray commissure throughout most of the length of the spinal cord and progressively diminished to end at the sacral spinal segments. The Luxol Fast Blue positive fibers in the pyramid and the ventral part of posterior funiculus at cervical, thoracic, lumbar spinal segments were easily discriminated from the surrounding structures. Conclusion: Using Luxol Fast Blue staining method may demonstrate the localization and distribution of corticospinal tract in the spinal cord of rats, which is an easy and effective method in morphological study of corticospinal tract.[Key Words] Corticospinal tract；Luxol Fast Blue；Myelin stain；Rat长期以来，脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。

髓鞘染色液使用说明
规格：100ml×2
有效期：室温保存，6个月有效。

产品简介：
本产品是运用固蓝（luxol fast blue）染色法染脑和髓鞘。

髓鞘（myelin sheath）是一层脂肪组织，包裹在某些神经元的轴突外，具有绝缘作用并提高神经冲动的传导速度，在中枢和外周神经系统中起保护轴突作用。

本染色法可显示正常的髓鞘。

自备材料：
产品名称规格
髓鞘染液A100ml
髓鞘染液B100ml
操作步骤（仅供参考）：
1、石蜡切片脱蜡至水；
2、无水乙醇5min；
3、浸入髓鞘染液A在58-60℃条件下染色14h；
4、流水冲洗10min；
5、放入70%乙醇中（无固定时间）
6、浸入髓鞘染液B中，至分色完全（可见中间灰质部分颜色变淡）；
7、第5步、6步交替进行；
8、流水冲洗5min；
9、伊红复染数秒（可选）；
10，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。

染色结果：
正常髓鞘呈蓝色，脱髓鞘无色，余呈淡红色。

注意事项：
1、髓鞘染液常温密封放置，可保存6个月；100ml髓鞘染液染150张片子为宜，染液可重复利用。

因髓鞘染液中含有酒精所以加温染色时宜密封，不然溶液蒸发，影响染色效果；
2、酒精和髓鞘染液B分化为关键步骤，应交替分化，镜下观察，控制分色；
3、伊红复染可选，如选，宜浅染。

LFB髓鞘染色一、LFB髓鞘染色实验简介劳克坚牢蓝(LuxolFastBlueLFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。

应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。

二、染色步骤1、切片经蒸馏水清洗后，入0.1% LFB溶液，于60℃密封浸染8-16h2、经蒸馏水清洗后，入95%酒精3、以0.05%碳酸锂水溶液分色10s以上4、经70%酒精继续分色，直至显微镜下观察灰、白质区分清晰为止5、蒸馏水洗片后，用0.25%焦油紫溶液加数滴冰醋酸染液复染10min6、70%酒精将复染颜色分至细胞核及尼氏体呈红色三、样本说明1、石蜡切片取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。

固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。

固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。

若在短时间内即开展实验，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段时间。

5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精（最为常用）、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。

四、注意事项1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。

伊红染色液配制方法溶液的配制方法如下：华越洋伊红染色液：100ml伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。

有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。

为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。

改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点；制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。

将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。

染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。

伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。

伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。

它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。

苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。

苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。

2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。

3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。

组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。

华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。

本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。

本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。

一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。

本染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。

伊红染色步骤一、材料准备1. 玻璃片或塑料板；2. 载玻片和盖玻片；3. 洗液（自来水）；4. 蒸馏水；5. 生理盐水；6. 9%盐酸溶液；7. 8%氢氧化钠溶液；8. 碘液；9. 双氧水；10. 无菌吸管；11. 无菌滴管。

二、具体操作步骤：第一步，取材。

根据需要选择合适的组织块进行切片或者涂片。

注意要保证组织的完整性，避免损坏细胞膜等结构。

同时还要注意消毒工作，确保取材环境无菌。

这一步是为了保护细胞的活性以及保证染色效果。

第二步，漂洗。

将处理好的组织放在干净的玻璃片上，用洁净的自来水轻轻冲洗几遍以去除表面残留的血液或其他物质。

此过程可有效提高染色的准确性。

第三步，加碱性品红染液。

在室温下将染液均匀涂抹于组织表面，时间一般为几分钟到十几分钟不等。

第四步，水洗。

将染好的组织放入清水中清洗几遍，以去除多余的染料和杂质。

这一步骤是为了保证染色效果更加均匀、清晰。

第五步，加酸复红化。

为了防止碱性品红的颜色发生变化或退色，需要在酸性环境中将其还原为原生细胞质的颜色。

因此，需要用9%盐酸溶液进行冲洗并中和处理。

这一过程可以帮助提高染色的准确性，并且避免颜色变化或褪色的问题。

第六步，再次漂洗。

将经过酸复红化的组织放在干净的玻璃片上，再用蒸馏水轻轻冲洗几次，以确保没有残留的酸或其他物质影响染色效果。

第七步，封固。

使用无菌吸管吸取生理盐水滴在组织表面，然后用盖玻片覆盖即可完成封固工作。

注意要确保封固严密且不漏气，以免影响观察结果。

第八步，镜检观察。

三、注意事项1. 染色过程中要保持环境的清洁，避免污染。

2. 在使用染液和试剂时要注意消毒工作，确保无菌操作。

3. 在涂片或切片时要保证组织的完整性，以避免影响染色效果。

4. 观察结果时要仔细观察细胞的结构和颜色变化，以便更好地理解实验结果。

5. 注意记录实验数据和观察到的现象，为后续实验提供参考。

四、伊红染色的应用范围伊红染色是一种常用的组织学和病理学染色方法，适用于各种组织和细胞的染色。

髓鞘染色操作步骤试剂：Luxol 固蓝MBS（solvent blue 38），乙醇，碳酸锂，冰醋酸切片：8-12um溶液1. 0.1% 固蓝溶液固蓝0.1 g95%乙醇100 ml冰醋酸0.5 ml取固蓝0.1g 加入95%乙醇，在温度50-60℃条件下，于磁力搅拌器中搅拌，用冰乙酸0.5 ml。

2. 0.05%碳酸锂溶液碳酸锂0.05 g去离子水100 ml充分混均。

3. 0.1%甲苯酚紫溶液甲苯酚紫0.1 g95%乙醇100 ml冰醋酸0.5 ml取甲苯酚紫0.1g 加入95%乙醇，在温度50-60℃条件下，于磁力搅拌器中搅拌，用冰乙酸0.5 ml。

染色1. 取出切片，于95%乙醇溶液中浸泡3 min。

2. 取出切片，置于Luxol固蓝溶液中，在57℃温度下，孵育4小时。

3. 取出切片，于95%乙醇溶液中浸洗3 min。

4. 取出切片，于去离子水中浸洗3 min。

5. 切片于0.05%碳酸锂溶液中快速浸洗15 s。

6. 立即取出切片，置于70%乙醇溶液中分化10s，直到灰质和白质能够清晰辨别。

7. 立即取出切片，置于70%乙醇溶液中分化20s，直到灰质和白质能够清晰辨别。

8. 取出切片，于去离子水中冲洗3min。

9. 将切片置于Luxol固蓝溶液中，在57℃温度下，孵育10s。

10. 切片于95%乙醇溶液中浸泡2 min。

11.切片于95%乙醇溶液中浸泡2 min。

12.切片于100%乙醇溶液中浸泡2 min。

13.切片于100%乙醇溶液中浸泡2 min。

14.二甲苯透明2 min。

中性树胶封固。

15. 镜下观察髓鞘。

结果：髓鞘：蓝绿色。

尼氏体：紫色。