卡他莫拉菌快速鉴定的方法学及耐药性研究_陈东科

呼吸道卡他莫拉菌的培养和药敏结果分析【摘要】目的对呼吸道卡他莫拉菌的细菌培养和药物敏感试验结果进行分析，以期为临床治疗提供参考的理论依据。

方法对呼吸系统感染患者的痰液标本进行细菌培养和药物敏感试验，对检测结果进行统计学分析。

结果（1）肺炎链球菌占43.46%，流感嗜血杆菌占37.13%，卡他莫拉菌占30.80%，克雷伯菌属占24.89%，金黄色葡萄球菌占22.36%；（2）卡他莫拉菌菌株对青霉素的耐药率最高（93.15%），对喹诺酮类的耐药率最低（9.59%）。

结论卡他莫拉菌对临床呼吸系统感染有着比较重要的作用，临床医务人员应重视卡他莫拉菌引起的感染性疾病。

【关键词】卡他莫拉菌；细菌培养；药物敏感试验卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis，MC）常定植在人群的鼻咽部，可诱发急性呼吸道各种感染，需要引起临床医务人员的重视[1-2]。

我院调查MC在临床呼吸系统感染疾病中的致病性，并通过药物敏感试验了解MC的耐药性，以期为临床有效治疗MC导致的感染性疾病提供可以参考的理论依据。

1 资料与方法1.1 一般资料收集呼吸系统感染的患者共427例，其中男42例，女54例；其中肺炎213例、慢性阻塞性肺疾病（COPD）105例、急性支气管炎72例、支气管扩张伴感染24例、肺脓肿13例。

1.2方法1.2.1痰标本的采集和检测全部患者在清洁漱口后进行扣背排痰，取呼吸道深部的新鲜痰液1-2 ml，放入有生理盐水的无菌试管中，将其振荡混匀后送检进行痰培养。

可以接种的痰标本的合格标准：涂片镜检痰标本，白细胞数量>25个/低倍视野，鳞状上皮细胞数量<10个/ 低倍视野。

使用血琼脂培养皿和巧克力平皿接种痰标本，置于培养箱孵育18-24h。

采用法国生物梅里埃公司VITEK2-compact进行菌株鉴定。

1.2.2药物敏感试验采用纸片扩散法（Kirby-Bauer method）测定MC菌株对12种抗菌药物的耐药性。

卡他莫拉菌快速鉴定及耐药性分析材料和方法（1）材料2.培养基：5%羊血琼脂培养基（SBA），5%兔血巧克力琼脂培养基（RChoc），5%羊血巧克力琼脂培养基（SChoc），含50µg/ml万古霉素的兔血巧克力琼脂培养基（Choc—V），淋病奈瑟菌培养基（NGA），MH培养基（MHA），5%羊血MH培养基（MHB），脑心琼脂培养基（BCA），营养琼脂培养基（NUA），中国蓝琼脂培养基（ZLA），DNA琼脂培养基均为本室自制。

3.试剂：蛋白胨、DNA琼脂粉、MH琼脂粉、VlTEK-（NHI和GNI）鉴定试卡购自生物梅里埃公司。

万古霉素为英国BD公司产品，盐酸四甲基对苯二胺、3一乙酰吲哚购自SIGMA公司，Nitrocefin购自O某OID公司（英国）。

氧化酶纸片（1%盐酸四甲基对苯二胺溶液浸泡纸片后吹干备用），乙酰酯酶纸片（100mg/ml3.乙酰吲哚丙酮溶液浸泡50片纸片后吹干备用）[3]，Nitrocefin纸片（12.5µg/片，Nitrocefin吹干备用）。

4.抗生素：哌拉西林（PIP）；氨苄西林（AMP），哌拉西林/舒巴坦（PIPC/SBT）（4：1），哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TAZ）（8：1），氨苄西林/舒巴坦（AMP/SBT）（2：1），头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SBT）（1：1），亚胺培南/西司他丁（M/CST）（1：1），均购于英国BD公司。

（2）方法1.菌株分离与鉴定：将可疑标本接种于SBA和Choc-V琼脂平板上，置5%C02孵箱，35℃培养24-72h观察结果。

细菌的分离培养和鉴定按文献[4]进行，分离到的菌株经涂片革兰染色镜检、触酶、氧化酶试验后，用VlTEK（NHI和GNI）鉴定试卡鉴定到种。

2.氧化酶试验：按文献[4]进行。

3.DNA酶试验：按文献[4]进行。

4.乙酰酯酶试验：用无菌生理盐水将3-乙酰吲哚纸片沾湿，取待检菌落涂在纸片上，3min内出现蓝绿色为阳性反应。

婴幼儿与老年人感染卡他莫拉菌的耐药性分析目的了解临床卡他莫拉菌感染的药敏变化，比较婴幼儿与老年人卡他莫拉菌的耐药性，分析婴幼儿与老年人卡他莫拉菌的耐药性差异及其原因，为临床合理应用抗菌药物提供参考。

方法随机收集本院2010年6月～2013年9月婴幼儿与老年人感染患者呼吸道分泌物标本中分离的卡他莫拉菌各40株，分别称婴幼儿组与老年人组，采用VITEK-32微生物分析系统进行病原菌鉴定，药敏试验采用K-B纸片法，应用SPSS19.0对临床分离细菌的药敏试验结果进行统计分析。

结果卡他莫拉菌对克林霉素（86.25%）、红霉素（37.5%）、复方新诺明（51.25%）、氨苄青霉素（70%）、罗红霉素（48.75%）等5種抗菌药物耐药率较高；对阿莫西林/克拉维酸（2.5%）、美洛西林（1.25%）、头孢呋辛（8.75%）、头孢哌酮（0%）、头孢哌酮/舒巴坦（0%）、头孢他啶（0%）、妥布霉素（7.5%）、氯霉素（0%）、头孢克洛（0%）等抗菌药物的耐药率均较低；对庆大霉素（0%，17.5%）、环丙沙星（0%，45%）、氧氟沙星（0%，35%）、四环素（0%，42.5%）、复方新诺明（13%，70%）、左氧氟沙星（3%，47.5%）、妥布霉素（0%，15%）、罗红霉素（15，60%）等8种抗菌药物，老年人组感染卡他莫拉菌耐药率高于婴幼儿组感染卡他莫拉菌，差异有显著统计学意义（P＜0.05）。

结论老年人感染卡他莫拉菌耐药率高于婴幼儿感染卡他莫拉菌，其耐药性与临床上儿童与老年人的用药特点、使用次数及用药习惯有关，因此，在临床选用抗菌药物治疗卡他莫拉菌感染时要根据不同年龄患者的生理特点，结合细菌耐药监测报告合理选用抗菌药物，以避免抗生素使用不当而诱导细菌多重耐药产生。

标签：婴幼儿；老年人；卡他莫拉菌；耐药性；抗菌药物卡他莫拉菌是人呼吸道感染常见病原菌之一，尤其与老年人及小儿呼吸道感染最常见[1，2]，监测婴幼儿与老年人感染卡他莫拉菌的耐药特点有利于批导临床合理选用抗菌药物；现将我院婴幼儿与老年人感染卡他莫拉菌的药敏结果进行统计对比分析报道如下。

儿童呼吸道卡他莫拉菌感染分布及耐药分析摘要】目的：探究儿童卡他莫拉菌（MC）在儿童呼吸道中感染分布情况以及耐药分析。

方法：资料随机选取本院门诊和住院部2015年1月—2016年12月收入1024例呼吸道感染患儿痰标本进行MC分离培养，其中呼吸道中检测出110例，并进行鉴定以及药敏试验，对患儿细菌感染分布情况以及耐药情况进行分析。

结果：所有MC分布情况 2015年与2016年分布情况比较两个年份阳性率以及合并其他感染之间差异无意义（P＞0.05），其中阳性菌对氨苄西林耐药率高达82.7%，四环素耐药率为10.9%，其中二三代头孢、左氧氟沙星、复方新诺明对MC具有较高敏感性。

结论：临床上对MC治疗首选β-内酰胺类药物、二三代头孢，但是由于临床耐药性严重，应当加强对MC耐药性监测。

【关键词】呼吸道；卡他莫拉菌；感染；耐药【中图分类号】R72 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）10-0113-02卡他莫拉菌（MC）是属于儿童呼吸道中最为常见一类病原菌，其临床致病性仅次于肺炎链球菌以及流感嗜血杆菌，主要会引起患儿出现急性呼吸道感染、鼻窦炎以及中耳炎。

研究证实呼吸道感染中MC是属于一种重要条件致病菌，其临床检出率处于不断上升阶段[1]。

近年来，随着临床上抗生素广泛应用，此菌对于抗生素产生耐药性报道不断增多，由于患儿治疗中使用抗生素治疗上具有一定局限性，为临床儿科治疗带来一定困难[2]。

本文就儿童MC细菌在儿童呼吸道中感染分布情况以及耐药分析情况进行探究，具体如下。

1.资料与方法1.1 一般资料资料随机选取本院门诊和住院部2015年1月—2016年12月收入1024例呼吸道感染患儿，并对此1024例患儿痰标本进行卡他莫拉真菌分离培养，呼吸道中检测出110例，并作为本次观察对象，其中男79例，女31例，年龄6个月～12岁，平均（6.4±1.2）岁。

1.2 方法1.2.1仪器与设备鉴定卡以及Vitek-2compact全自动分析仪均由发过生物梅里埃公司生产，本次使用血平板、巧克力平板由广州迪景微生物科技有效公司生产，使用微生物室配置MH培养基由英国Oxoid生产。

细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。

也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。

（2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。

（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。

若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。

2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。

临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。

如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。

3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA 基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。

检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA测序4．特殊耐药菌检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。

・论　著・卡他莫拉菌的致病性及耐药性的临床研究潘韶霞1,徐洪玉1,潘韶华2,李戈阳1,郑　文1(1.山东省交通医院,山东济南250031;　2.山东省政府医院,山东济南250001)摘要:目的　研究卡他莫拉菌的致病性及该菌在国内产β2内酰胺酶和超广谱β2内酰胺酶(ESBLs)的情况。

方法　抗菌药物敏感试验为纸片扩散法,β2内酰胺酶为Nitrocefin,ESBLs确证试验为双纸片增效方法,均按NCCL S提出的标准实施。

结果　从860例各类标本中分离出180株卡他莫拉菌,慢性阻塞性肺疾患2612%,支气管肺炎2715%,老年性上呼吸道感染25.8%,耳鼻喉疾患16.3%,皮肤科疾患1715%,小儿上呼吸道感染1713%,产β2内酰胺酶83.88%、超广谱β2内酰胺酶11.1%。

结论　卡他莫拉菌为条件致病菌,可引起多种感染性疾病,其致病性和耐药性都呈上升趋势,尤其对产酶卡他莫拉菌应引起临床的高度重视。

关键词:卡他莫拉菌;致病性;耐药性;ESBLs中图分类号:R446.5 文献标识码:A 文章编号:100524529(2003)0620583203Pathogenicity and R esistance of Moraxella cata rr halisPAN Shao2xia1,XU Hong2yu1,PAN Shao2hua2,L I G e2yang1,ZHEN G Wen1(1.T raf f ic Hospital of S handong Provi nce,Ji nan250031,Chi na;2.S handong Provi nce Government Hospital,Ji nan250001,Chi na)Abstract:OB JECTIVE To study the pathogenicity andβ2lactamases and extended2spectrumβ2lactamases of the Moraxella catarrhalis.METH ODS Diffusion test to measure antibiotic sensitivity,Nitrocefin toβ2lactamases,efficient enhancing diffusion test to ESBLs were used.All were done under NCCL S standard.RESU LTS A total of180strains of M.catarrhalis were isolated from860s pecimens.The infection rate in various diseases were as follows:2612%in COPD(chronic obstructive pulmonary disease),27.5%in bronchopneumonia,25.8%in senile u pper respiratory tract infection,16.3%in otorhinolaryngologic diseases,17.5%in dermatologic diseases(nongonococcal),17.3%in children upper respiratory infections.83.88%of the M.catarrhalis producedβ2lactamases,11.1%produced extended2spectrumβ2lactamases.CONC L USIONS M.catarrhalis is an opportunistic pathogen.It can cause a lot of infectious diseases.The infection rate and drug resistance are increasing.A great attention toβ2lactamases producing M.catarrhalis in clinic should paid.K ey w ords:Pathogenicity;Antibiotic resistance;Extended2spectrumβ2lactamase 卡他莫拉菌Moraxella(B ranhamella) catarrhalis,以前归奈瑟球菌属,后根据生化反应和DNA碱基含量另立为莫拉菌属的布兰汉亚属(Subgenes B ranhamella)。