当前位置：文档之家 › 几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及其能源物质含量的影响[1]

几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及其能源物质含量的影响[1]

  • 格式：pdf
  • 大小：297.03 KB
  • 文档页数：5

下载文档原格式

  / 5

合集下载

大蜡螟感染与治疗实验报告

大蜡螟感染与治疗实验报告

大蜡螟感染与治疗实验报告一、引言大蜡螟是一种常见的害虫，它会对农作物造成严重的损害。

目前针对大蜡螟的治疗方法主要包括化学药物、生物防治和物理防治等。

本实验旨在研究大蜡螟感染与治疗方法的效果，为农业生产提供科学依据。

二、材料与方法1.实验材料：大蜡螟样本、化学药物（防治虫害药剂）、生物防治剂、物理防治装置等。

2.实验方法：（1）实验前准备：收集大蜡螟样本并在实验室中饲养。

（2）感染实验：将大蜡螟样本分为四组，每组分别进行不同的感染方法，包括化学感染、生物感染、物理感染和对照组。

观察并记录蜡螟感染的情况。

（3）治疗实验：将大蜡螟样本分为四组，每组分别进行不同的治疗方法，包括化学治疗、生物治疗、物理治疗和对照组。

观察并记录蜡螟治疗效果。

三、结果与分析1.感染实验结果：（1）化学感染组：大蜡螟样本在接触到化学药物后表现出明显的运动减缓和死亡。

（2）生物感染组：大蜡螟样本在接触到生物防治剂后表现出减少运动和死亡的迹象。

（3）物理感染组：大蜡螟样本在暴露于物理防治装置后表现出运动减缓和死亡。

（4）对照组：大蜡螟样本没有接受任何感染处理，保持正常活动状态。

2.治疗实验结果：（1）化学治疗组：大蜡螟样本在接受化学药物治疗后表现出明显的死亡。

（2）生物治疗组：大蜡螟样本在接受生物防治剂治疗后表现出减少运动和死亡的迹象。

（3）物理治疗组：大蜡螟样本在接受物理防治装置治疗后表现出运动减缓和死亡。

（4）对照组：未接受任何治疗方法的大蜡螟样本继续保持正常活动状态。

四、讨论本实验结果显示，化学药物、生物防治剂和物理防治装置对大蜡螟的感染和治疗均有一定效果。

其中，化学药物对大蜡螟有较好的杀虫效果，但其可能会对环境产生负面影响，不利于生态平衡的维持。

生物防治剂对大蜡螟的杀虫效果较低，但其对环境和生态系统无害。

物理防治装置对大蜡螟的杀虫效果较好，而且无污染，但需要较高的成本和技术要求。

综合考虑各种因素，可以采取综合治疗的方法，即化学药物与生物防治相结合。

(完整版)森林昆虫学答案

(完整版)森林昆虫学答案

森林昆虫2答案一、名词解释（8*2）1、孤雌生殖:雌虫产生的受精卵不经过受精直接发育成新个体的现象。

2、多型现象:同种昆虫同一性别的个体间在大小、颜色、结构方面存在明显差异的现象称为多型现象。

3、世代交替:有些多化性昆虫在1年中的若干世代间生殖方式甚至生活习性等方面存在着明显差异,常以两性世代与孤雌生殖世代交替，这种现象称世代交替。

4、滞育:某些昆虫在不良环境到来之前，已经进入停育状态.即使不良环境条件消除后昆虫也不能马上能恢复生长发育的生命活动停滞现象。

必须经过一定阶段（或给它适当的刺激）才能打破停育状态.5、经济阈值：为防止害虫达到危害水平需要防治的害虫种群密度。

6、模式标本：第一发表新种时所依据的标本。

7、变态：昆虫的个体发育过程中。

特别是在胚后发育段要经过一系列的变化(形态变化、内部结构变化等），这种变化现象叫变态。

8、龄期：相邻两次脱皮所经历的时间称龄期.二、填空(35分)1、蝗虫口器由上颚、上唇、下颚、下唇、舌5部件构成。

2、蝉属____同__ 目，蝽象属____半_目，天牛属_____鞘目，白蚁属___等___目，蝼蛄属于直翅目。

3、消化道一般分为前肠、中肠和后肠3部分。

其中嗉囊属于前、胃盲囊属于中.4、昆虫的食性按食物的性质可分为植食性、肉食性、杂食性、腐食性四类。

5、根据蛹壳、附肢、翅与身体主体的接触情况,将昆虫的蛹分为3类：离蛹、围蛹、被蛹。

6、昆虫体躯分为头、胸、腹 3体段,对应功能分别为感觉和取食、运动、代谢和生殖。

7、不完全变态昆虫在发育的过程中经历的虫态分别为：卵、若虫、成虫。

8、根据昆虫对温度条件的适应性,可划分为致死高温区、亚致死高温区、适温区、亚致死低温区、致死低温区五个温区.9、天牛的触角为：丝状 ;蝶类的触角为: 棒状；三、简答题（24分）1、简述昆虫纲的特征。

一、体躯左右对称,由一系列含有几丁质外壳的体节组成,相邻的节间，以带有一定塑性的节间膜相连.整个体躯，可以明显的区分为头、胸、腹3个体段。

大蜡螟幼虫被昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n

大蜡螟幼虫被昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n

大蜡螟幼虫被昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n.sp.侵染后体内四种酶活性的变化摘要：为了解新种昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n.sp.侵染昆虫的作用机制及昆虫对这种线虫侵染的应激反应，本文研究了大蜡螟幼虫被这种昆虫病原线虫侵染后体内的酪氨酸酶（TYR）、乙酰胆碱酯酶（AChE）、羧酸酯酶（CarE）和谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）活性的变化情况。

实验结果表明：H.beicherriana 对大蜡螟幼虫的侵染在短时间内（0-40h）就能诱导其体内这四种酶活性发生显著变化，其中TYR和AChE的活性随侵染时间的增加而呈上升态势；而CarE和GSTs 的活性随侵染时间的增加而呈不同程度的波动，但在侵染40h时，其活性均大于0h的值。

另外，在20-80IJS/蜡螟剂量范围内，这四种酶的活性随线虫剂量的增大而增大，其活性大小顺序均为：80/IJS蜡螟>40/IJS蜡螟>20/IJS蜡螟。

大蜡螟幼虫体内这四种酶的活性因线虫侵染而增大，这就增强了其对侵入体内的线虫、共生菌及其分泌的具有杀虫活性物质的解毒能力或抵抗力。

INTRODUCTION昆虫病原线虫或其共生菌能产生一些具有杀虫活性的物质，如毒素toxin、毒素蛋白toxin protein、蛋白酶protease等，这些物质有助于线虫对寄主昆虫的侵染(AAAAA; Toubarro, 2009)。

这些具有杀虫活性的物质常会引起昆虫一些酶活性发生变化。

斯氏线虫S.carpocapsae的分泌物中含有的蛋白酶能抑制酪氨酸酶的活性(Balasubramanian, AAAAA; 2010)。

昆虫病原线虫共生菌嗜线虫致病杆菌产生的具杀虫活性的蛋白Tp40能诱导昆虫体内羧酸酯酶酶活性的增加（杨君，2008）；也能产生单萜化合物Benzylideneacetone来抑制磷脂酶A2的活性，从而一定程度地调控小菜蛾的免疫反应（Kim, 2011）。

昆虫病原线虫对舞毒蛾幼虫的侵染能力

昆虫病原线虫对舞毒蛾幼虫的侵染能力

昆虫病原线虫对舞毒蛾幼虫的侵染能力滑莎;赵红盈;王从丽;王鑫鹏;李春杰【摘要】为探讨昆虫病原线虫对舞毒蛾(Lymantria dispar)幼虫的侵染效果,用4种(品系)侵染期线虫的3个侵染剂量对2龄、4龄和6龄舞毒蛾幼虫进行室内生测.结果显示:从48 h时2龄和4龄幼虫的校正死亡率来看,Sc-All线虫与相应侵染剂量相比其侵染效果最好(P＜0.05),500、1 000条·头-1的侵染剂量校正死亡率为100％.从6龄幼虫生测结果看,Sf-IGA线虫用1 000条·头-1的剂量48 h与Sc-All 线虫效果相同,校正死亡率为100％.72 h时,4种线虫1000条·头-1剂量对舞毒蛾2龄幼虫的致死率差异不显著(P≥0.05),而Hb-NJ对4龄幼虫的侵染力最低.因此,Sc-All线虫对舞毒蛾2龄、4龄和6龄幼虫都具有很强的侵染能力,Sf-IGA线虫对6龄幼虫侵染效果较好.所以Sc-All和Sf-IGA是舞毒蛾潜在的生物杀虫剂,选择合适的昆虫病原线虫种(品系)及其合适剂量可以提高防治舞毒蛾幼虫效果.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2018(046)005【总页数】4页(P89-92)【关键词】舞毒蛾;幼虫;昆虫病原线虫;侵染力【作者】滑莎;赵红盈;王从丽;王鑫鹏;李春杰【作者单位】黑土区农业生态院重点实验室(中国科学院东北地理与农业生态研究所),哈尔滨,150081;黑龙江省森林保护研究所;黑土区农业生态院重点实验室(中国科学院东北地理与农业生态研究所);黑土区农业生态院重点实验室(中国科学院东北地理与农业生态研究所);黑土区农业生态院重点实验室(中国科学院东北地理与农业生态研究所)【正文语种】中文舞毒蛾(Lymantria dispar (Linnaeus))属鳞翅目(Lepidoptera)毒蛾科(Lymantriidae)毒蛾属(Lymantria)，是一种对林业危害严重的世界性害虫，其幼虫具有分布广，食性杂，危害重，顺风迁移等特点，可危害500多种植物[1-4]。

第一章 线虫

第一章 线虫

似蚓蛔线虫
寄生于人体的小肠，引起蛔虫病。蛔虫 分布广泛，感染率高，人群感染的特点为 农村高于城市，儿童高于成人
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
一、形 态 （一）成虫
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
（二）虫卵
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
第三节
蠕形住肠线虫
寄生于人体小肠末端、盲肠和结肠， 引起蛲虫病 蛲虫呈世界性分布，感染率儿童高于 成人，托儿所、幼儿园、小学等聚集的儿 童感染率更高
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
一、形 态 （一）成虫
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
1.成虫 班氏丝虫和马来丝虫成虫形态相似： 虫体丝线状，乳白色，体表光滑 雌虫较雄虫大，雄虫尾部向腹面卷曲
一、形态
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
模式图
2.幼虫——微丝蚴
虫体细长，头钝圆，尾
头间隙
尖细，外被有鞘膜
（2）消化道症状 （3）异嗜症 （4）婴幼儿钩虫病
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
四、实验诊断 1.粪便直接涂片法 2.饱和盐水浮聚法 最常用 3.定量透明法 4.钩蚴培养法 可以鉴别虫种 5.痰液查钩虫幼虫
全国高职高专检验专业教育部卫计委规划教材
《寄生虫学检验》第4版
56
体核
圆形，较小，大小均匀，排列疏 卵圆形，排列紧密，大小不等， 松，相互分离，清晰可数 常相互重叠，不易分清

第二章微生物农药线虫

第二章微生物农药线虫
如果(rúguǒ)通过口器或肛门进入，线虫刺破肠壁进入 血腔；如果(rúguǒ)通过气孔进入则直接进入血腔。
线虫一旦进入寄主昆虫血腔，就开始释放共生菌，共 生菌在血淋巴中迅速繁殖，通常昆虫在被侵染24~72 h之内 患败血病死亡。
第三十九页，共59页。
8、侵染期幼虫(yòuchóng)的扩散和存活
第九页，共59页。
昆虫病原(bìngyuán)线虫隶属于动物界线虫动物 门(Nematoda)尾感器纲(Secernentea)小杆目 (Rhabditida)。
主要包括5个科：斯氏线虫科(Steinernematidae) 、 异小杆线虫科(Heterorhabditidae)、索线虫科 (Mermithidae)、新垫刃科、滑刃科。
第六页，共59页。
成虫内部(nèibù) 构造
1）消化系统 (xiāohuà xìtǒng) 2）生殖系统 3）神经系统 4）排泄系统
第七页，共59页。
（2）虫卵 寄生线虫卵在光学显微镜下所见：一般
为椭圆形，黄色、黄棕色或无色，无卵盖。
外层很薄，称卵黄膜或受精(shòu jīng)膜 卵壳 中层较厚，称壳质层
第二十二页，共59页。
食蚊罗索线虫 (xiàn chónɡ)
第二十三页，共59页。
黑蝇被线虫(xiàn chónɡ)寄生
第二十四页，共59页。
蛞蝓(kuòyú)被线虫侵染
第二十五页，共59页。
➢4、仅病一原个(属BÌ，NGY斯UÁ氏N)线线虫虫属——斯氏线虫科 ➢ 在生活史中形成特殊的“带鞘”的侵染期幼虫 ➢ 发育有两个阶段：寄生阶段和腐生阶段 ➢ 侵染期线虫体内携带(xiédài)共生细菌：使昆虫
➢ 单菌半固体(gùtǐ)培养基培养 节减成本，保

研究生教学-昆虫天然免疫与信号传导


二 昆虫天然免疫的识别机制
2.3 类免疫球蛋白（immunoglobulin –like）
仅在鳞翅目昆虫体内发现，同哺乳动物的免疫球蛋白 类似，昆虫类免疫球蛋白由 4 个免疫球蛋白结构域组成，是 由昆虫体内的脂肪体合成。
图2
利用软件程序软件分析家蚕hemolin结果 类免疫球蛋白的结构和功能
Fig. 2
路 Toll signaling pathway; Imd: Imd信号通路Imd signaling pathway.(宁媛媛,2009)
三 昆虫细胞免疫
三 昆虫细胞免疫
当入侵信号被昆虫模式识别蛋白识别，昆虫体内的天 然免疫反应被迅速激发而产生效应分子(effectors) 以清 除外源物。昆虫的天然免疫反应分为细胞免疫和体液免疫 两种。
( Kaneko andSilverman，2005)
PGRPs 就是通过该结构域与细菌表面的肽聚糖分子结合，激活天然免疫反应中的 Toll 和 Imd 信号途径继而诱导抗菌肽的表达( 例如果蝇 PGRP-SA 和 PGRP-LE 等) ( Kaneko andSilverman，2005) ，也可以激活酚氧化酶原产生黑化反应 ( 例 如 烟 草 天 蛾 PGRP1 和 PGRP2 等 )( Sumathipala and Jiang，2010) ，还可以促进吞噬作用 ( 例如果蝇 PGRP-SA 等) ( Kaneko and Silverman，2005) 。
ApoLp-Ⅲ在昆虫免疫信号通路中的具体作用机制尚需进一步的研究。
二 昆虫天然免疫的识别机制
昆虫模式识别蛋白种类与功能 Categories and main functions of insect pattern recognition proteins

昆虫病原线虫对红火蚁的致病力及田间防控效果

昆虫病原线虫对红火蚁的致病力及田间防控效果易松望;李晓维;陈利民;王金超;黄俊;张娟;吕要斌【期刊名称】《环境昆虫学报》【年(卷),期】2024(46)3【摘要】红火蚁Solenopsis invicta Buren是一种国际重大外来入侵生物,严重危害农林生产、生命健康、公共安全和生态环境。

本研究在室内条件下测定了小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae All品系、长尾斯氏线虫S.longicaudum X-7品系和芫菁夜蛾斯氏线虫S.feltiae SN品系对红火蚁的致病力,并筛选出高致病力品系及其对红火蚁的田间防控效果。

结果表明,不同昆虫病原线虫对红火蚁不同虫态的致病力存在显著差异。

3种线虫对红火蚁幼虫具有较高的致病力,处理3 d 后,幼虫的累计校正致死率均为100%。

3种线虫对工蚁的致病力均较弱,处理10 d 后的校正死亡率均小于30%。

与芫菁夜蛾斯氏线虫SN品系相比,长尾斯氏线虫X-7品系和小卷蛾斯氏线虫All品系对蛹和生殖蚁具有较强的致病能力,10 d后累计校正死亡率均达到90%以上。

田间试验表明,施用小卷蛾斯氏线虫All品系对红火蚁工蚁的防控效果最高可达63.7%,且不会增加红火蚁的迁巢风险。

综上所述,小卷蛾斯氏线虫All品系和长尾斯氏线虫X-7品系为红火蚁的高致病品系,田间施用小卷蛾斯氏线虫All品系对红火蚁工蚁具有显著的控制作用,可推荐用于红火蚁的生物防治。

【总页数】7页(P711-717)【作者】易松望;李晓维;陈利民;王金超;黄俊;张娟;吕要斌【作者单位】浙江农林大学现代农学院;浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所;浙江省园林植物与花卉研究所【正文语种】中文【中图分类】Q968.1;S433【相关文献】1.昆虫病原线虫斯氏线虫和异小杆线虫对长角血蜱雌蜱的致病力2.昆虫病原线虫生物防控草地贪夜蛾的室内及田间效果和影响因素3.昆虫病原线虫对小地老虎的致病力测定及防治效果4.对铜绿丽金龟具有高致病力的昆虫病原线虫的筛选5.高温季节利用昆虫病原线虫防控白菜黄曲条跳甲的效果因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

昆虫病原线虫共生细菌研究进展

&
剂量下对 Q.:+,79+<5
血 淋 巴 的 降 解 ，对 大 蜡 螟 的 血 细 胞 有 毒 性（ @;-89A5 .75 ) :4 ， 8;-E7+L.I) 有 B%% \ 的 致 死 作 用 ， 在 !1 42;L[E* & 下 ， 死亡率为 但 未 死 亡 的 昆 虫 有 ZM 41\ 的 个 体 与 对 照 比 较 ， 体重明 B’ 4’\ ， 显减轻， 说明这种组分以某种方式阻碍着幼虫的取食。共生菌 次级代谢物对昆虫幼虫的拒食和杀死作用说明， 共生菌代谢物 可能与杀虫机理有关，尽管这种杀虫作用比一般的杀虫剂弱， 但它可能参与了与其它致病因子的共同作用， 这些代谢物在线 四、 3.-,I9)FJ;<5 <88 45 和 >9,7,I9)FJ;<5 基因工程 基因工程即 @]Y 重组技术是把带有所需要性状的基因插 入 到 缺 乏 这 种 性 状 的 有 机 体 中 ， 以 改 变 生 物 的 品 质 。 ^+I. 但 对 斯 氏 科 ?7.+-.I-. R 的， 这方面的研究虽已进行了近 !%)O ， *)7+J). 和异小杆科 Q.7.I,I9)FJ+ R7+J). 病原线虫而言基因重 报道以 >_HB’ 为 组的工作则仅刚刚起步。^I)E/*)-（ B0’0 ） 载 体 建 立 了 异 小 杆 线 虫 的 > 4O :;*+-.<E.-< 发 光 共 生 菌 的 克隆了生物发光的基因。变体中的每个染色体中 （ 3;O .7O ) :4 ， 这些突变体在生 都 插 入 了 多 个 V-2 片 段 B00B ）， 化特性、 营养和菌落特性上都有所不同， 有各自的 V-2 插入位 点。这些研究为分离毒性基因， 明确其在致病过程中的作用提 供了可能。昆虫病原线虫共 生 菌 的 外 毒 素 蛋 白 由 于 杀 虫 效 果 好、 杀虫谱宽， 是很有应用前景的杀虫毒蛋白。 五、 目前昆虫病原线虫及其共生菌研究中存在的问题 虽 然 C;I*)- （ B0’& ） 发 现 ， 新 线 ].,)8:.E7)-)O E)I R 能周期性产生毒素， 但到目前为止， 8,E)8<). 在培养过程中， 还没有异小杆线虫产生毒素的报道 ， 而且， 也没有在无菌条件 报导以 >_HB’ 为载体 下培育出无菌线虫。^I)E/*)-（ B0’0 ） 建立了异小杆线虫的 > 4O :;*+-.<E. 4O :;*+-.<E.-<O UBM

第二章昆虫病原线虫保存条件对线虫...

兰一２５Ｘ一＝２０∞２言壹１５翌耋·ｏ告“￡５Ｏ３结论与讨论图５２００：ｌ昆虫病原线虫２０ｄ产量（注：ＬＮ为鳞翅夜蛾科目幼虫，ＧＬ为大蜡螟）Ｆｉｇｕｒｅ５ＯｕｔｐｕｔｏｆＥＰＮｆｏｒ２０ｄｗｉｎｌ２００：ｌｒａｔｉｏ（ＬＮ－Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎｏｃｔｕｉｄａｅａ，ＧＬ－Ｇａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）●ＧＬ口ＬＮ昆虫病原线虫侵染鳞翅目夜蛾科幼虫和大蜡螟后，线虫Ｓｃ－Ａｌｌ和Ｈｂ—Ｈｒｂｂ品系在鳞翅目夜蛾科幼虫内均能繁殖，且繁殖Ｈｂ．Ｈｒｂｂ品系线虫的产量随接种浓度增加而增加，且各接种浓度繁殖的产量间差异不显著，线虫接种浓度加大，就增加了与寄主的接触机会，接触机会增加就意味着钻入寄主体内的线虫量增加Ｍｃｉｎｅｍｅｙ，Ｇｒｅｇｓｏｎ（１９９１，进入寄主体内的线虫雌雄比例增加（Ｐｏｉｎａｒ，１９９０），即繁殖能力变强，由此便可增加线虫的产量。

Ｓｃ．～ｌ品系线虫繁殖能力较Ｈｂ．Ｈｒｂｂ品系强。

线虫侵染大蜡螟和鳞翅日夜蛾科幼虫繁殖的产量大都呈现出先增加后下降的趋势，但其中所有线虫都是从被侵染的第７ｄ开始有线虫爬出，且都会有一个产量上的峰值出现。

虽然鳞翅目夜蛾科幼虫较大蜡螟的产线虫量稍低，但鳞翅目夜蛾科幼虫虫体较大，因此可收集线虫时间较长，到收集２０ｄ后，仍可收集到线虫，以此可弥补产量上的差额。

用保存６３ｄ线虫侵染大蜡螟１２、２４、３６和４８ｈ时的累计死亡率分别为５０％、７３．３％、８６．７％和１００％，与新繁殖出的线虫侵染力没有显著差异，以此对储存技术进行评价，证明经过两个月的储存，线虫的侵染能力没有下降。

表１不同线虫来源对大蜡螟致病力的影响（％）ＴａｂｌｅｌＥｆｆｅｃｔｏｆＥＰＮｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔＳＯｔ］ＩＣｅｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＧａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ（％）２．２保存温度对线虫存活率的影响在保存介质矿山土中，线虫悬浮液浓度为１．０Ｘ１０５ＩＪｓ／ｍｌ时，当线虫保存在１０℃时，从７．６３ｄ的保存时间内存活率下降缓慢，从第７ｄ的８３．４％到第６３ｄ的７３％，其次是室温条件下的存活率较好，４＂Ｃ条件保存的线虫存活率最低（图９）。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及其能源物质含量的影响丁晓帆,林茂松3,刘亮山(南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室,江苏南京210095)摘要:用异小杆线虫(Heterorhabditis s pp.)和斯氏线虫(S teinerne m a s pp.)处理大蜡螟5龄幼虫。

结果显示:处理后12h 昆虫血细胞开始变形、崩解,且血细胞数量急剧下降,到昆虫接近死亡时(24～32h 左右),血细胞数比正常水平下降85%;处理后24h 血淋巴总量下降73161%,酯酶活性不断增强,蛋白含量明显高于对照,总糖含量降低14%～70%。

上述结果表明:昆虫病原线虫的侵入破坏了寄主的防御系统,改变了寄主血淋巴能源物质含量。

关键词:昆虫病原线虫;大蜡螟;血淋巴;酯酶活性;蛋白质;总糖中图分类号:S43211 文献标识码:A 文章编号:10002030(2005)03004305Effects of ento mopathogen i c ne matodes on energeti c contentsi n he moly mph of Ga lleria m ellonellaD I N G Xiao 2fan,L I N Mao 2s ong 3,L I U L iang 2shan(Key Laborat ory of Monit oring and Manage ment of Plant D iseases and I nsects,M inistry of Agriculture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China )Abstract:Effects of 5s pecies of ent omopathogenic ne mat odes (Heterorhabditis s pp.and S teinerne m a s pp.)on the energetic con 2tents in he moly mph of 5th larvae of Galleria m ellonella was p resented .I n all the s pecies the nu mber of he mocytes decreased by over85%and he mocyte shape was obvi ously changed 24hours after treat m ent .The t otal volu me of he moly mph of 5th larvae infectedwith ne mat odes decreased by 73161%,while esterase activity and content of p r otein increased .The decrease rate of t otal carbohy 2drate content was 14%70%.The results revealed that the ent omopathogenic ne mat odes destr oyed the host i m mune system anddra matically changed the content of energy s ource in the hemoly mph of the host .Key words:ent omopathogenic ne mat odes;Galleria m ellonella ;he moly mph;esterase activity;p r otein;t otal carbohydrate 昆虫病原线虫(ent omopathogenic ne mat ode )是昆虫专化性寄生性天敌,一般指斯氏线虫科(Stein 2erne matidae )和异小杆线虫科(Heter orhabdidae )种类[1]。

目前,国外学者主要集中于昆虫病原线虫行为学、病原线虫共生菌代谢产物资源开发、病原线虫生物防治推广应用等研究[2～5];国内学者主要开展生物防治研究,应用昆虫病原线虫防治农、林、牧、卫生等害虫,并取得了明显的经济效益和社会效益[6,7];而有关病原线虫感染寄主昆虫的病理学研究较少。

肖猛[8]研究表明,昆虫病原线虫明显改变寄主昆虫血淋巴中蛋白含量、血糖含量和酯酶活性。

为利用昆虫病原线虫防治害虫提供更多的基础理论,笔者用国外引进的5种昆虫病原线虫处理大蜡螟(Galleria m ellonella )5龄幼虫,观察、检测其对昆虫血淋巴中血细胞和各种能源物质的影响,进一步探讨昆虫病原线虫的杀虫机制。

1　材料与方法111　供试线虫与昆虫 病原线虫:异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora (缩略为Hb,来自加拿大)和H.m egid is (Hm ,比利时);斯氏线虫S teinerne m a carpocapsae (Sc,比利时)、S.feltiae (Sf,比利时)和S.glaseri (Sg,美国)。

线虫均由大蜡螟老熟幼虫培养、繁殖。

试验用的感染期线虫均新鲜培养,并用012%(体积分数) 收稿日期:20041123 作者简介:丁晓帆(1979),硕士研究生。

3通讯作者Corres ponding author:林茂松(1948),教授,从事植物病原线虫学研究,E 2mail:linm s@njau 1edu 1cn 。

南京农业大学学报　2005,28(3):43～47Journal of N anjing A gricultural U niversity柳硫汞进行表面消毒,贮存于4℃备用。

供试昆虫:大蜡螟Ga lleria m ellonella 由南京农业大学植物保护学院线虫实验室养殖。

由于大蜡螟幼虫各个龄期血淋巴能源物质含量不同,且5龄幼虫能源含量较高,利于测定其变化,因而均以5龄幼虫作为供试昆虫。

112　受侵染幼虫血细胞形态观察、血细胞数量及血淋巴总量的测定将5种线虫按每头大蜡螟幼虫10条线虫(约5μL 线虫悬液)的剂量用微量进样器(MC ∶25μL )经腹足注入大蜡螟幼虫血腔内,每处理20头幼虫,以灭菌水为对照。

每处理3次重复。

处理后每隔4h 在幼虫最后腹足上剪小口收集血淋巴样,每头10μL 。

11211　血细胞形态观察　将幼虫血淋巴移入适当倍数的血细胞稀释液(2%(体积分数)醋酸与10g ・L -1次甲基蓝的体积比为100∶1)中染色,尽快置光学显微镜下观察、拍照。

11212　血细胞数量测定　每头幼虫取10μL 血淋巴移入390μL 血细胞稀释液中摇匀,用血球计数器计数[9]。

11213　血淋巴总量测定　采用排空法[10]测定。

用电子天平准确称量处理后12h 和24h 的大蜡螟幼虫(精确至01001g ),然后剪破腹足,挤出血淋巴,并让其在吸水纸上爬行,015h 后再次称重,最后计算血淋巴总含量(幼虫体重(g )中血淋巴的量(mg ),以mg ・g -1表示)。

113　受侵染幼虫血淋巴酯酶活性、蛋白质含量及总血糖的测定大蜡螟幼虫处理方法同112,每处理60头,共3次重复,以灭菌水为对照。

处理后每隔4h 取1次血样(每头10μL )于115mL 的eppendorf 管内,并加少许苯基硫脲(占总体积的1%～5%)以防止氧化,每管共收集600μL 血样,冻贮待用。

11311　血淋巴酯酶活性测定　按陈长琨[9]的方法,稍有改动。

在3mL 浓度为3×10-4mol ・L -1的α醋酸萘酯溶液中,加0104mol ・L -1磷酸缓冲液(P BS )0145mL 。

摇匀后置于25℃条件下平衡5m in,各加入血淋巴0105mL,立刻摇匀计时。

在25℃条件下温育25m in,迅速加入显色剂015mL (10g ・L -1固蓝RR 盐溶液+15g ・L -1S DS,使用前2∶5混用),终止反应并显色,30m in 后,待出现稳定的蓝绿色后,测定光密度值(D 600)。

对照(以灭菌水代替)调零。

11312　血淋巴蛋白含量测定　采用考马斯亮蓝G 250法[11,12]测定蛋白质含量(血淋巴(mL )中蛋白质的量(mg ),以mg ・mL -1表示)。

11313　血淋巴总糖含量测定　首先制备无蛋白血清[8],取各处理待测血淋巴400μL,加入218mL 灭菌水,充分混匀后加入0133mol ・L -1H 2S O 4014mL,随加随摇,最后加入100g ・L -1钨酸钠溶液014mL,充分摇匀后静置10m in,4000r ・m in -1离心15m in 除去沉淀,制得无蛋白血清。

然后用蒽酮比色法[13]测定处理后8h 、16h 和24h 试虫血淋巴总糖含量(血淋巴(mL )中葡萄糖的量(mg ),以mg ・mL -1表示)。

2　结果与分析211　受侵染大蜡螟幼虫血细胞形态变化 从图1可以看出,对照虫血细胞内含物饱满、细胞核清晰可见。

而处理组幼虫受侵染后12h的血CK 12h after treat m ent 24h after treat m ent图1　S.glaseri 对大蜡螟幼虫血细胞形态的影响(×400)F i g 11　Effect of S.glaseri on hem ocyte shape to the 5th l arvae of G 1m ellonella・44・ 南　京　农　业　大　学　学　报 第28卷细胞核界限开始变得模糊;24h 时,血细胞膜完全破裂,细胞内含物流出。

说明昆虫病原线虫能忍受寄主的防御反应,并且抑制、破坏了寄主的防御系统,引起寄主患败血症而死亡。

212　受侵染大蜡螟幼虫血细胞总数变化从图2看出,对照虫血细胞数量变化不大,在36h 内趋于不变。

而处理虫在处理后4h 时,其血细胞数量略少于对照处理;随后逐渐增加,但由于各种线虫侵染能力强弱不同,不同处理虫血细胞数量高峰出现的时间不同(分别在处理后8h 和12h 时);随后又迅速下降,在濒临死亡时(24h ～32h 左右),其血细胞数量不到正常水平的15%。

5种线虫对大蜡螟幼虫血细胞总数变化的影响基本是一致的。

但在产生相对低点和相对高峰的时间上均存在差异:Sc 、Sg 处理后8h 左右大蜡螟幼虫才有血细胞数量的低点出现,稍迟于Hb 、Hm 和Sf (4h 左右)处理虫;同样,从产生血细胞数量高峰来看,Sc 、Sg 处理虫产生血细胞数量高峰在时间上比其他3种处理虫迟。

另外,结合笔者进行的注射致死率试验得出:①各种线虫对大蜡螟的致死时间与处理虫血细胞数量下降到最低点的时间是一致的;②Sc 、Sf 和Sg 处理虫血细胞数量达到最低点的时间比Hb 、Hm 处理虫出现得早。