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UL timate3000高效液相色谱仪确认方案编号：VP-AI-2017001*生物科技股份有限公司确认方案审批表确认小组人员名单：目录1.概述 (4)2.确认目的 (4)3.确认范围 (4)4.确认小组人员及职责 (4)5.验证相关文件依据 (5)6.验证项目和时间安排 (5)7. 安装确认 (5)8 运行确认 (8)9.性能确认 (14)10. 确认过程中的偏差及处理措施 (14)11．再确认周期 (14)12.确认结果评定与结论 (14)13.附件 (14)1.概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
2.确认目的：按照GMP的要求，对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定仪器是否有具有良好的检测性能，能否满足日常分析测试工作的需要。
3.确认范围：本确认方案适用于本公司的UL timate3000高效液相色谱仪的确认。
4.确认小组人员及职责4.1 确认小组4.2 验证小组职责组长：负责验证管理的日常工作和验证的协调，验证方案和报告的批准。
组员：QC，化验室。
起草验证方案和验证报告，并参与实施验证。
组员：QC主管，化验室。
审核验证方案和报告，协调与本次验证相关的化验室工作。
组员：QA主管，质量保证部。
负责审核验证方案和验证报告，如果验证中出现偏差，应对偏差进行调查。
5.验证相关文件依据6.验证项目和时间安排计划于年月日 - 月日对UL timate3000高效液相色谱仪进行确认，内容严格按照本确认方案，检查UL timate3000高效液相色谱仪其安装确认、运行确认、性能确认达到规定的标准要求。
Ultimate 3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材福州大学测试中心2018年9月第一部分Ultimate 3000型高效液相色谱原理和仪器配置一、液相色谱原理简介1、色谱法起源色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
2、液相色谱法的分离原理溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相(stationary phase)时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
英文为High Performance Liquid Chromatography，简称为HPLC。
3、HPLC分离模式包括反相模式 (RP-LC)；正相模式 (NP-LC)；离子对色谱 (IPC)；离子交换色谱 (IEC)；体积排阻色谱 (GPC/GFC)；亲和色谱（AC）等。
其中，反相和正相模式又属于液液分配色谱。
•流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。
正相与反相的出峰顺序相反；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。
C-18柱（常用反相柱）。
4、HPLC与经典液相色谱方法以及气相色谱（GC）方法的比较4.1 HPLC与经典液相色谱方法比较高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。
可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。
自动进样器技术指标
规格如有变更，恕不另行通知。
赛默飞世尔科技（中国）有限公司
泵技术指标
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快速泵技术指标
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荧光检测器技术指标
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库伦电化学检测器技术指标
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ECD-3000RS电化学检测器技术指标
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示差折光检测器技术指标
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Corona Veo(RS) 电雾式检测器技术指标
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蒸发光散射检测器技术指标
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规格如有变更，恕不另行通知。
UItiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程起草人日期年月日审核人日期年月日日期年月日日期年月日质量部审核日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部执行日期年月日分发部门检测中心〔3〕替换的文件名及编号修订的原因、目的：1.目的建立UItiMate 3000型高效液相色谱仪操作规程，使高效液相色谱仪的操作标准化、规范化。
2.适用范围适用于本公司UItiMate 3000型高效液相色谱仪的操作。
3.责任仪器使用人员负责本文件的执行，检测中心主任负责监督和指导。
4.依据UItiMate 3000型高效液相色谱仪使用说明书。
5.内容5.1.型号及仪器组成5.1.1.型号：UItiMate 3000型5.1.2.仪器组成：UItiMate 3000四元泵+UV检测器+自动进样器+柱温箱5.2.操作程序5.2.1.使用前的准备工作5.2.1.1.接入稳压电源将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。
5.2.1.2.打开电源开关按下稳压电源前面板的“ON”键，大约一分钟后，稳压电源将正常供电。
5.2.1.3.更换泵头清洗瓶中溶液：必须采用非循环模式进行冲洗，将一只1000mL容量的清洗瓶置于U3000系统上方的托盘中，清洗液为10%左右的甲醇或异丙醇的水溶液，所使用的试剂必须为色谱纯，用超纯水或二次蒸馏水来配置。
5.2.2.打开仪器电源开关打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。
各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。
（备注：各电源开关没有先后顺序；）；5.2.2.1.打开电脑:打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。
然后双击桌面的变色图标，打开软件。
5.2.3.四元泵：5.2.3.1.确定好各通道的流动相后，先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。
然后在软件中按此“冲洗”键，泵将以3.0 mL/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止（备注：需要依次对各通道单独进行排气，不能同时进行）5.2.3.2.排气结束后，将清洗阀拧紧，调节好各通道的流动相比例及流速，启动“马达”按钮即可；5.2.4.自动进样器的清洗：自动进样器的清洗分三个部分，一般在每天或每次使用自动进样器前需先进行如下三个步骤排除自动进样器的气泡。
高效液相色谱仪确认方案
齐全，要求内容详尽，优秀的文档可获得好的分数。
一、引言
随着制药行业的发展，高效液相色谱仪确认方案已经在GMP（Good Manufacturing Practice）准则中得到重视，从而成为GMP的一部分。
GMP是一种以确保制剂质量、安全性和有效性为基础的生产质量管理系统，可以确保制药厂在生产过程中符合有关药品的质量标准，以保证其安全有
效性，符合法律和规章的要求。
二、高效液相色谱仪确认方案
1.目的和范围
本确认方案的目的是为了确保制药厂在使用高效液相色谱仪质量控制
和分析的过程中符合GMP要求。
本确认方案所涉及的范围是该设备的安装、校准、维护和使用。
2.建议
2.1设备
（1）设备必须符合有关国家有关质量标准；
（2）设备必须具有相应的技术特性，可用于质量控制和分析；
（3）设备必须具有可靠的记录。
2.2安全性
（1）高效液相色谱仪在使用过程中应确保安全；
（2）为了保护用户及周围环境，应遵循安全操作规程，并配备必要
的安全设施，包括使用压缩空气、保护眼睛、严格控制电源连接；
（3）操作人员应遵守严格的安全防护措施，并配备必要的安全用具，包括安全帽、安全衣、安全鞋等。
赛默飞（U3000）液相色谱仪作业指导书文件编号：编制人：审核人：批准人：持有人：分发号：1.目的规范赛默飞（U3000）液相色谱仪开关机注意事项，正确操作和使用仪器，保证检测工作顺利进行，操作员人身安全和设备安全。
2.适用范围适用于赛默飞U3000型液相色谱仪的使用操作。
3.职责3.1使用人员：按照本作业指导书，正确对仪器使用、维护，做使用登记。
3.2保管人员：负责对仪器进行定期维护、保养。
3.3设备管理员：负责仪器综合管理。
4.操作规程4.1开机前的准备工作4.1.1流动相配制根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
（根据流动相的性质确定采用有机膜还是水相膜对流动相进行过滤；将过滤后的流动相进行超声脱气10分钟。
4.1.2准备泵头清洗液和洗针液确认清洗瓶中的清洗液为10%的甲醇水或异丙醇水溶液；确认洗针的D通道或者洗针液瓶中为10%甲醇水。
注意查看剩余量，不够请及时配制。
4.1.3确认色谱柱的型号规格，确认仪器管线已正确连接上。
4.2开机操作程序4.2.1依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；4.2.2打开电脑，打开变色龙软件，确认各模块连接正常；4.2.3泵排气泡（一个通道一个通道的排，排哪个通道比例直接设成100%就行，最好是每个通道都排一下）。
最后设定好排气的流速，打开排气阀，勾上冲洗开始排气第 1 页共7 页4.2.4在自动进样器控制界面，依次执行“灌注注射器”、“外部洗针、“清洗缓冲环”三个命令。
4.2.5设置流动相的比例及流速后，点击“马达”开泵；4.2.6设置柱温4.2.7打开紫外灯或可见光灯，设置检测波长；4.2.8监视基线，等待仪器平衡。
4.3紫外检测器仪器方法及序列的建立4.3.1序列的建立第一步打开数据栏，左上角创建新序列选择好自己需要放样品的位置，(RA1-RA8表示红色样品盘对应的第一排，以此类推。
蓝色样品盘是BA1和绿色GA1以此类推）。
赛默飞高效液相色谱使用方法
赛默飞高效液相色谱（HPLC）是一种用于分离和分析样品的精密仪器。
具体的使用方法如下：
1.准备工作：
○确保仪器电源已开启。
○安装∗∗谱柱和其他相关配件。
○准备样品和流动相。
2.建立方法：
○进入液相色谱仪的操作界面，选择适宜的色谱柱。
○设置流动相的种类、比例和流速。
○设置样品进样体积和积分时间。
3.进样：
○将样品溶液注入进样器。
○按下开始按钮，液相色谱仪会自动进行分离和检测。
4.数据处理：
○分析结束后，仪器会自动生成色谱图。
○通过数据分析软件对色谱图进行处理，获取目标物质的保留时间、峰面积等数据。
5.清洗和维护：
○实验结束后，关闭仪器电源。
○清洗色谱柱和其他配件。
○定期检查仪器状态，确保正常运行。
需要注意的是，具体操作步骤可能因仪器型号和实验需求而有所不同。
在使用液相色谱仪时，请务必参考相应的说明书并进行培训。
。
UltiMate3000高效液相色谱仪配置说明南京途威仪器设备有限公司免费热线：4008-585-600优谱佳UHPLC+高效液相色谱系统• UHPLC+设计理念贯穿纳升液相、常规液相和快速液相整个范围• 基础型和标准分析型系统的最大压力创立了高效液相的新标准—620bar • 双三元液相系统—为常规分析设计，增加产率并拓展色谱分析技术应用范围• 变色龙色谱软件—智能化、专业化、人性化• Viper和nanoViper接头系统—可手动安装拆卸，适应超快速液相范围并保证零死体积。
RSLCnano系统• 提供20 nL/min到50 μL/min的纳升/毛细管/微升流速范围• 柱最高耐压可达800bar• 连续直流输送• 上样泵可提供从10 μL/min到2.5 mL/min的流速RSLC系统• 二元或四元系统都可用于超快速液相和常规液相的应用• 更广的压力—流速范围兼容超快速、超高分离度的分析应用• 系统最高耐压1000bar• 可提供高效双三元RSLC系统标准分析型系统• 为常规液相应用提供最佳性能和可靠性• 620bar耐压和100Hz的数据采集频率均兼容超快速液相应用• 可根据不同应用灵活配置• 最高流速可达10mL/min，满足全方位应用需求基础型系统• 满足常规应用需求且更加耐用• 分析结果一致可靠• 提供620bar耐压和高达100Hz数据采集频率，全面兼容UHPLC应用• 自动进样器与柱温箱整合，可提供样品和色谱柱温控功能检测器选项• 提供多种光学检测器选择－紫外/可见，荧光和示差折光检测器• 创新型Corona通用电喷雾式检测器• 高灵敏度库仑电化学检测器• 支持AB、布鲁克和赛默飞质谱检测器软件与备件• 变色龙软件—直观的仪器控制，先进的数据处理• D-Library数据库提供应用搜索支持• Viper与nanoViper手旋接头系统，真正零死体积，简化安装拆卸过程• 色谱柱加工制造—包括整体柱技术和先进的多基质键合技术UltiMate® 3000 RSLCnano 系统目前，RSLCnano系统研发的重点是提高样品通量。
Ultimate 3000型高效液相色谱仪的培训资料一、仪器原理：流动相被高压泵打入系统，样品经进样器进入流动相，然后被流动相载入色谱柱。
由于样品各组分在两相中具有不同的分配系数，因此在两相中作相对运动，经过吸附、解吸的分配过程，依次从色谱柱内流出通过检测器，转换成电信号。
以峰面积形式表现出来。
正相色谱：采用极性固定相和相对非极性流动相。
一般可用于分离极性化合物。
正相色谱住一般采用极性强的硅胶等填料，洗脱顺序由弱到强。
一般流动相用正己烷、氯仿、二氯甲烷等。
反相色谱：采用相对非极性固定相和极性流动相。
一般可用于分离非极性化合物或弱极性化合物。
反相色谱柱的填料一般以硅胶为基质，表面健合极性相对弱的官能团的健合相。
如C18、C8、C4等。
流动相一般用极性强的水、缓冲液、甲醇、乙腈等。
洗脱顺序由强到弱。
二、硬件介绍：1、试剂架2、泵3、自动进样器4、柱温箱5、紫外检测器三、其他：1、流动相、清洗液存量和配置时间。
流动相过滤原则：含有有机相的要用有机系滤膜，不能用水系滤膜。
因为有机溶剂可以溶解水系滤膜，被溶解的滤膜容易损坏密封圈和柱塞杆。
（如果不小心用了水系的滤膜，过滤了有机相，把滤头堵了，可把滤头泡在有机相里超声清洗）流动相超声脱气：超声10到20分钟。
超声机水位尽量高于流动相水位，效果更好。
时间不宜过长。
2、溶剂滤头：溶剂充足，压力低于下限报警，或者脱气机前管道频繁出现大量气泡。
超声处理后无效更换新的滤片。
3、不明原因时间飘移，可能滤头堵了，纯水超声处理（安捷伦的玻璃滤头不能超声）。
4、滤片冒白沫或长绿毛就要用3%或5%稀硝酸超声10min，再换纯水超声。
四、LPG-3400泵内部构造（低压四元泵，最高耐压620bar）：流动相从储液瓶出来，经过真空脱气机，到时间比例阀，经过泵头，到毛细管混合器，再到静态混合器，最后进入自动进样器，然后把样品环里的样品送入色谱柱，再到检测器。
泵工作原理：注意：●绝对不允许泵在无液体的情况下运行，会损坏柱塞杆或柱塞密封垫。
UL timate3000高效液相色谱仪确认方案编号：VP-AI-2017001*生物科技股份有限公司确认方案审批表验证项目名称：UL timate3000液相色谱仪确认方案编号：V P-A I-2017001起草人：日期：年月日审核部门/职务审核人日期备注审核Q C/主管Q A/主管批准人：日期：年月日执行日期：年月日确认小组人员名单：小组职务姓名所在部门职务组长质管部经理组员化验室主管组员QA 主管组员化验室QC目录1.概述 (4)2.确认目的 (4)3.确认范围 (4)4.确认小组人员及职责 (4)5.验证相关文件依据 (5)6.验证项目和时间安排 (5)7. 安装确认 (5)8 运行确认 (7)9.性能确认 (13)10. 确认过程中的偏差及处理措施 (14)11．再确认周期 (14)12.确认结果评定与结论 (14)13.附件 (14)1.概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
2.确认目的：按照GMP的要求，对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定仪器是否有具有良好的检测性能，能否满足日常分析测试工作的需要。
3.确认范围：本确认方案适用于本公司的UL timate3000高效液相色谱仪的确认。
4.确认小组人员及职责4.1 确认小组验证分工所在部门职务组长质量部经理组员质量部QC主管组员质量部 QC组员质量部QA主管4.2 验证小组职责组长：负责验证管理的日常工作和验证的协调，验证方案和报告的批准。
组员：QC，化验室。
起草验证方案和验证报告，并参与实施验证。
组员：QC主管，化验室。
审核验证方案和报告，协调与本次验证相关的化验室工作。
组员：QA主管，质量保证部。
负责审核验证方案和验证报告，如果验证中出现偏差，应对偏差进行调查。
5.验证相关文件依据参考文献药品生产质量管理规范（2010年版）药品生产验证指南（2003年版）药品生产质量管理规范实施指南液相色谱仪国标GBT26792-2011液相色谱仪JJG 705-20026.验证项目和时间安排计划于年月日 - 月日对UL timate3000高效液相色谱仪进行确认，内容严格按照本确认方案，检查UL timate3000高效液相色谱仪其安装确认、运行确认、性能确认达到规定的标准要求。
确认开始前所有参与人员应经过本方案的培训，培训记录见附件1。
7.安装确认7.1.概述UL timate3000液相色谱仪由赛默飞公司提供，安装于质量控制室的仪器室，用于成品，原料，中间样品的含量和有关物质检测。
安装确认目的：证实所供应的设备规格符合要求,设备所应备有的技术资料齐全。
开箱验收应合格，并确认安装条件（或场所）及整个安装过程符合设计要求。
7.2.安装确认内容7.2.1.基本资料检查：检查是否有各种必需的书面资料，如表1。
表1 资料检查确认项目有无备注采购定单使用说明书设备的合格证书装箱单保修卡7.2.2.设备所需外部环境确认目的：确认设备的安装是否符合原设计的条件，如表2。
表2 外部环境确认确认项目合格要求是否符合要求备注温度5-40℃□是□否相对湿度≤85%□是□否地面平滑、不易起尘□是□否环境无腐蚀性气体□是□否7.2.3.设备型号确认目的：确认设备各部件的型号，保证其与订单和装箱单所描述的一致，如表3。
表3 设备型号确认部件设备型号序列号是否一致输液泵□是□否自动进样器□是□否柱温箱□是□否紫外检测器□是□否7.2.4.设备外观确认目的：确认设备外观符合标准要求，如表4。
表4 设备外观确认确认项目合格要求是否符合要求设备外表面仪器外表应光洁平整、字迹清晰，表面涂覆色泽均匀，不应有明显划伤、露底、裂纹、气泡等现象□是□否各按键、旋钮、开关各调节旋钮、按键、开关等工作正常，无松动；指示、显示清晰完整□是□否7.2.5.公用设施确认目的：确认公用设施，使其满足设计要求，如表4。
表5 公用设施确认项目设计要求确认结果备注电压220V□是□否电源适配三孔插座□是□否7.2.6.软件版本确认目的：确认安装的软件与采购软件版本是相同的。
软件版本与采购版本□相同□不相同7.2.7.硬件环境与安装确认目的：根据生产商硬件和系统设计规格标准，确认仪器和控制器工作区域符合要求，如表6。
表6 硬件环境与安装确认序号描述是否符合要求1仪器放在水平的工作台上，计算机在仪器旁边。
□是□否2仪器各部件之间正确连接。
□是□否3温度在10-30℃，湿度在20-85%之间。
□是□否4室内无强电磁干扰源及有害有毒气体。
□是□否5排风口和进风口对仪器和计算机无污染。
□是□否7.2.8.部件清单目的：确认仪器日常维护和操作所需要的消耗品和备用品，如表6。
表7 部件清单部件名称数量存放地点备注7.2.9.仪器、仪表、衡器的确认目的：确认仪器、仪表、衡器经过校验，并在校验期内。
如表8。
表8 仪器、仪表、衡器确认记录仪器仪表衡器名称仪器仪表衡器编号校验周期校验证书编号有效期至7.2.10.维修服务确认目的：确认仪器出现故障后能及时的处理，不影响操作。
每本操作手册上都有简单的维护方法，经过仪器培训的操作人员可以根据说明书进行简单的维修和零部件的更换。
如果有其它比较大的问题，用户不能解决的，可以电话通知厂家的维修工程师。
维修电话：7.3.安装确认结论及批准结论：检查人：日期：批准人：日期：8.运行确认：8.1.测试项目和认可标准8.2.运行确认所需的材料8.2.1.玻璃仪器设备计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。
8.2.2.试剂、标准溶液a) 萘（AR）b) 甲醇（色谱纯）c) 丙酮（AR）d) 去离子水:电导率不大于0.1μs/cme) 紫外波长标准物质8.1.2.3 其它辅助设备a) 玻璃仪器：经检定、其它玻璃器皿b) C18色谱柱c) 铂电阻温度计（Pt100）准确度≤0.3℃d) 秒表分度值不大于0.1秒e) 进样器20μlf) 分析天平g) 游标卡尺 15cm/0.02mm8.3.运行确认的实施8.3.1.输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表7设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。
按式(1)、式(2)计算 SS和 SR。
表7流量设定值（mL/min）0.5 1.0 2.0测量次数333流动相收集时间（min）1055SS5%3%2%接受标准SR3%2%2%SS＝(Fm－FS)/FS×100% (1)SR＝(Fmax－Fmin)/F×100% (2)式中：SS——流量设定值误差(％)；SR——流量稳定性误差(％)；Fm＝(W2－W1)/ （ρ·t），流量实测值(mL/min)；W2——容量瓶＋流动相的重量(g)；W1——容量瓶的重量(g)；FS——流量设定值(mL/min)；ρ——实验温度下流动相的密度(g/cm3)；t——收集流动相的时间(min)；Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)；Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)；F——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。
输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录。
见附件2。
8.3.2.梯度误差的检定由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，C溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，C经由5个阶梯从0变到100%。
将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。
求出A，C溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。
从C溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci 最大者作为仪器梯度误差，应不超过±3%。
波长为254nm，检定记录见附件3。
梯度洗脱表时间A通道：超纯水C通道：0.1%丙酮水溶液0.00min100%0%3.00min100%0%3.0180%20%13.00min80%20%13.01min60%40%23.00min60%40%23.01min40%60%33.00min40%60%33.01min 20%80%43.00min 20%80%43.01min 0%100%53.00min 0%100%53.01min 100%0%58min 100%0%Gci =（ –）/ ×100%—Li— Lm —Lm 式中：Gci —— 第i 段梯度误差 ( % ) ； —— 第i 段输出信号值（或记录仪读数）增量平均值；— Li —— 各段输出信号（或记录仪读数）增量平均值的平均值。
—Lm 8.3.3.前后进样带入量的确认方法：选用4.6mm×250mm 的C18或C8柱，流动相：甲醇：水=75：25，检测器254nm ，流速1.0ml/min,进样量5ul ，使用下列商业标准品进样。
标准溶液(a):咖啡因溶液100ug/ml 标准溶液(b):咖啡因溶液1ug/ml 空白溶液:水备注：标准溶液的分析证书必须作为附件以证明标准溶液是适用的。
进以下序列样：——咖啡因溶液100ug/ml，1针——水，1针——咖啡因溶液1ug/ml，1针记录色谱并对咖啡因峰进行积分。
可接受标准空白溶液中相应的峰面积百分比不超过标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.1%；标准溶液(b)中咖啡因的峰面积是标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.9%-1.1%。
记录见附件4.8.3.4.柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择20℃和50℃进行检定。
按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。
平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录见附件5。
8.3.5.检测器的检定a.检测器基线噪声和基线漂移的测定取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。
