徒手切片制作方法
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临时装片及徒手切片方法一、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。
2、学习徒手切片技术。
3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。
二、材料和用品1、自备材料:解剖器(镊子、解剖针、单面刀片或双面刀片);洋葱鳞茎、青红椒、芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。
2、其它材料和用品:显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、10%甘油水溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘—碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。
三、实验内容1、临时装片的制作方法2、徒手切片方法四、实验方法要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构,以及一些很微小的藻、菌植物等,这些用肉眼是无法看到的,必须借助于显微镜来观察,要用显微镜观察,首先必须制成各种制片,放在显微镜下才能观察。
制片的方法很多,这里着重介绍临时装片法和徒手切片的方法技术。
1、临时装片的制作方法临时装片法是用少量的新鲜植物材料,如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小的或扁平的材料(如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植物等等),把这些材料放在载玻片的水滴中,再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。
这种方法制成的标本,可以保持材料的生活状态和天然的色彩。
此法一般多做为临时观察使用,也可根据需要选择适宜的染料染色,制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反应。
临时装片的制作方法和步骤如下:(1)清洁玻片:将盖玻片和载玻片用清水洗净,再用纱布擦干,擦玻片时用左手食指和拇指夹住玻片的两边,右手食指和拇指包住纱布,同时擦到的玻片的两面,用力要均匀。
注意:由于盖玻片很薄,所以擦盖玻片时要特别小心,用力要轻,右手食指和拇指要轻轻捻动,以免把盖玻片捏破。
(2)放置材料:先将载玻片平放在桌面上,于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油,然后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料(如洋葱鳞叶表皮或水绵……),放在载玻片中央的水滴或甘油中,再用镊子和解剖针将材料展平或分散开,勿使材料折叠或干燥。
徒手切片法的主要方法步骤嘿,朋友们!今天咱就来讲讲这徒手切片法的主要方法步骤。
你想想啊,就好像咱要盖一座小房子,那得先有个计划,一步一步来不是?这徒手切片法也是一样的道理。
首先呢,得准备好材料。
就像做饭得有菜有肉一样,咱得有合适的植物材料呀。
可别随便找个啥就开始切,那可不行。
然后就是切片啦。
这就像是雕刻一件艺术品,得小心翼翼的。
用那把小小的刀片,轻轻地、慢慢地切下去。
哎呀,你可别一下子太用力了,不然切坏了可咋整!
切的时候还得注意角度和厚度呢。
这就跟切面条似的,你要是切得太厚了,那煮都煮不熟;太薄了呢,又容易断。
得掌握好那个度,这可是个技术活呀!
切完了片,接下来就得把它放到载玻片上了。
这就好像给小宝贝找个舒服的小床一样,得放得稳稳当当的。
要是放歪了,那可就不好看啦。
然后呢,还得给它染色。
这染色就像是给小宝贝穿上漂亮的衣服,让它变得更加显眼、更加好看。
在整个过程中,可得有耐心呀。
你想想,要是心急火燎的,能做好吗?就像跑步一样,得一步一步稳稳地跑,才能跑到终点呀。
而且呀,这每一步都不能马虎。
就好比建房子,一块砖没砌好,可能整座房子都不牢固了呢。
咱做徒手切片法也是这样,每个步骤都得认真对待。
只有这样,才能做出漂亮的切片,才能更好地观察和研究呀。
所以说呀,朋友们,这徒手切片法看着简单,做起来可不容易呢。
但只要咱用心去学,用心去做,就一定能掌握好这门技术。
加油吧,让我们一起成为徒手切片法的小能手!。
徒手切片法用光学显微镜观察的样品必须是透明的,因此,无论是临时装片还是永久制片的玻片标本,制作前都必须先将材料切成薄片。
徒手切片法简称手切片法,即以手持刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。
是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的切片方法,也是最重要的基本技能之一。
这种切片方法简便易行,节省时间;而且所需工具简单,只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就可以操作。
还有一个独特的优点,就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。
其缺点是不易做到将整个切面切得薄而完整,往往厚薄不一;过软过硬的材料比较难切。
徒手切片一般处理的是新鲜材料,有时也可将材料预先固定好。
一般材料的徒手切片的方法如下:1.材料的准备:一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料,直接切成长约2〜3厘米的小段,削平切面。
所取的新鲜材料应及时放入水中,以免萎蔫。
取材的大小,一般直径不超过5mm,长度以15-25mm为宜。
过于柔软或微小的材料,难以直接执握手切,可夹入坚固而易切的夹持物中切。
常用的夹持物有去除木质部的胡萝卜根、土豆块茎、接骨木的髓部等。
切前先将夹持物切成长方小体,上端削平。
对于较薄的叶状体材料,可将夹持物纵切一缝,材料夹于其中即可;如不是叶状体,即将材料夹于其中,或在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷,把材料夹在凹陷里。
然后用手握住夹持物,采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片,除去夹持物的薄片,便得到材料的薄片。
坚硬的材料要经软化处理后再切。
软化的方法:对于比较硬的材料,切成小块煮沸3〜4 h,再浸入软化剂(50%酒精:甘油 =1 : 1)中数天至更长些时间,而后再切。
对于已干或含有矿物质,更为坚硬的材料,要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周,充分浸洗后,再置入甘油里软化后再切。
2.执握刀片和材料的方法:左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料,使之固定不动。
为防止刀伤,拇指应略低于食指,并使材料上端超出手指2〜3毫米,不可高出过多,否则切片时材料容易弯折,也不容易切薄。
徒手制作叶片横切的临时切片步骤一:准备工作1.需要的材料包括:新鲜的叶片、刀片、毛细管、显微镜片、盖玻片、甘油或蒸馏水、显微镜。
2.将所有实验器材清洗干净,尤其是显微镜片和盖玻片,以确保无尘和污染。
步骤二:取样1.选择一个新鲜、健康的叶片,尽可能避免受伤或变色的叶片。
2.使用剪刀或手指轻轻取下一片叶片。
小心不要太用力,以免造成叶片组织损伤。
步骤三:固定样品1.将取下的叶片放入甘油或蒸馏水中,以保持叶片的湿润并避免组织干燥或变形。
2.如果使用甘油,将叶片放入甘油中浸泡2-3分钟,以提高透明度。
如果使用蒸馏水,则直接将叶片放入蒸馏水中。
步骤四:切片1.将刀片用火烤热,然后用镊子夹住刀片,用酒精擦拭刀片,以确保刀片的清洁和无菌。
2.将叶片取出,用镊子夹住叶片的边缘,将叶片在刀片上水平切割约1-2毫米的厚度。
要保持手稳定,尽量用均匀的力度进行切割。
3.将切下的叶片放入显微镜片上,轻轻按压叶片,使其展平并在显微镜片上固定。
步骤五:加盖玻片1.用镊子夹住盖玻片,将玻片垂直放在显微镜片上,轻轻地从一侧放下,以避免形成气泡和切片变形。
2.缓慢而均匀地按压盖玻片,使其与显微镜片上的切片充分接触,同时确保没有空气被困在切片下。
步骤六:观察和分析1.将装有切片的显微镜片放到显微镜的载物台上。
2.将显微镜调整到适当的倍数,并使用聚焦轮来调整切片的清晰度。
3.通过目镜观察并记录切片中的形态、结构和细胞组织特征。
最后,完成实验后,要小心处理显微镜片和盖玻片,清洗并保存好实验器材,以便下次使用。
总结:徒手制作叶片横切的临时切片是一种简便快速的实验技术,既可以用于学术研究,也可以用于教学实验。
通过这种方法,可以观察到叶片的细胞结构、细胞器和组织特征,有助于对植物的生理功能和结构的理解。
但需要注意的是,这种制作方法适用于较为便捷和简单的实验,对于一些复杂和特殊的研究,可能需要更加专业的切片设备和技术。
实验二临时装片的制作方法和徒手切片法以及植物细胞、组织观察一、实验目的1、掌握临时装片的制片方法、掌握徒手切片的方法2、了解植物细胞结构。
二、实验材料显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、吸水纸、解剖针、培养皿、毛笔、滴管、纱布、0.9%的NaCl溶液;洋葱、马铃薯、芹菜、番茄三、实验内容和实验方法(一)临时装片的制作1、擦净载玻片和盖玻片(1)擦载玻片用左手的拇指和食指捏信载玻片的边缘,右手用纱布将载玻片上下两面包住,然后反复擦拭,擦好后放在干净处备用。
(2)擦盖玻片先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角,再将右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住,然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦试。
2、取样用滴管滴一点水或其他溶液(根据需要)于载玻片的中央,把观察物放于载玻片上的液滴中,展开或摇匀。
3、盖盖玻片右手持镊子,轻轻夹住盖玻片的一角,使盖玻片的边缘与液滴的边缘接触,然后慢慢倾斜下落,最后平放于载玻片上,避免气泡的产生。
如盖玻片下的液体过多,可用吸水纸将多余的液体吸掉。
(二)徒手切片法徒手切片法不需要任何的机械设备,只需要一把锋利的刀片就可以完成切片的制作,方法简单,也容易保持物的生活状态,有很大的实用价值。
1、选材选择软适度的材料,先截成适当的段块。
一般直径大小以3~5mm、长度以20~30mm为宜。
若材料太软,如幼叶等,不能直接拿在手中进行切片,可用适当大小的马铃薯块茎或萝卜块根等作支持物,将材料夹入其中,一起切片。
2、切片用左手拇指、食品指和中指夹住材料,使其稍突出在手指之上,拇指略低于食指,以免刀口损伤手指。
材料和刀刃上蘸水,使其湿润。
右手拇指和食指横向平握刀片,刀片要与材料断面平行,刀刃放在材料左前方稍低于材料断面的位置,以均匀的力量和平稳的动作从左前方向向右后方拉切。
切片时要用臂力而不用腕力,手腕不要动,靠肘、肩关节的屈伸来切片,拉切要快,中途不要停顿,更不能用拉锯方式进行切片。
每切2~3片就要把刀片上的薄片用湿毛笔移入盛有清水的培养皿中暂存备用。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------徒手切片方法(精品)徒手切片法特特点化学学、、生点不不需需要要机机械械设设备备,,能能保保持持活活体体的的情情况况。
主主要要用用在在组组织织化生药药鉴鉴定定、、石石蜡蜡切切片片选选材材等等。
方方法法要茎的的横横切要领切面面,,无领切切片片最最要要紧紧是是平平而而薄薄,,无无需需切切成成完完整整的的。
例例如如茎无须须切切成成整整圆圆形形,,只只需需一一角角就就足足够够了了。
步步骤材料料,,使骤①①一一般般用用左左手手的的大大拇拇指指、、食食指指和和中中指指这这三三个个手手指指拿拿住住材使材材料料突突出出在在指指尖尖上上面面,,使使刀刀片片不不会会割割伤伤它它们们。
用用右右手手拿拿刀刀片片。
两两只只手手应应该该可可以以自自由由活活动动,,不不1 / 5要要使使它它们们靠靠紧紧身身体体,,或或压压在在桌桌子子上上。
②②刀刀片片刀刀口口放放在在切切面面上上,,从从刀刀片片刀刀口口下下方方起起,,斜斜向向后后拉拉切切,,切切时时要要用用臂臂力力,,不不用用腕腕力力。
不不必必太太用用力力,,否否则则就就不不易易切切薄薄。
③③连连续续切切几几片片后后,,取取下下切切片片,,转转移移到到载载玻玻片片上上的的一一滴滴水水中中,,放放在在低低倍倍显显微微镜镜下下检检查查。
假假如如切切片片充充分分透透明明,,细细胞胞重重叠叠不不明明显显,,就就可可使使用用。
否否则则得得重重切切。
④④过过于于柔柔嫩嫩的的植植物物器器官官,,如如叶叶片片,,难难以以直直接接拿拿住住,,可可以以用用坚坚固固而而易易切切的的材材料料夹夹后后再再切切,,如如胡胡萝萝卜卜片片。
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、目的要求
徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。
所需的仪器用具简单,药品经济,操作方便,费时较短,且易于保持材料的天然色泽和活体结构,必要时,也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。
但是徒手制片对于体积过小,质地太软或太硬的材料,则难于处理,同时,也不能制成连续切片,这些均为不足之处。
二、材料、用品
1、用品
显微镜、剃头刀(或刀片)、毛笔、镊子、培养皿、染色皿(或小酒杯)、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。
1%番红水溶液(或50%酒精溶液),
0.5%固绿95%酒精溶液,70%、85%、95%酒精,纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。
三、方法与步骤
1、选材
所用材料不宜太软或太硬。
一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。
质地较薄的材料,如叶片,可沿主脉两侧切成宽约5〜6毫米,长1〜
1.5 厘米的小块,夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。
使用夹持物时,先将夹持物的中央切成两半,然后将切好的材料夹入,合拢夹持物进行切片,也可将叶片卷成筒状再切。
2、切片
(1 )盛清洁的水于培养皿中。
然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料,拇指的位置要低于食指,并使材料的上端伸出指外2〜3毫米,材料的切面必须保持水平方向。
(2) 右手执刀(剃头刀或刀片),平放在左手食指之上,刀口向内,自左前方向右后方滑行切割,要用臂力,不要用腕力,不可向内平切。
(3) 拉切的速度宜快,一次切下,不要中途停顿或似拉锯式,以免损伤材料或切得不平。
(4) 切片过程中,如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时,必须立即削平。
(5) 刀片或剃刀必须锋利,材料及切片均需经常沾水,以保持材料湿润、润滑。
(6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中,以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。
如想短期保存,可用水或甘油封藏。
如希望长期保存所切的材料,则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。
3、固定
挑选出符合要求的切片,用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。
固定时间为16 分钟或更长时间。
4、染色、脱水、透明
( 1)用吸水管吸去70%酒精,染以1%番红( 50%酒精溶液)约30 分钟。
(2)再用吸管吸去番红,换用70%>85%>95%酒精进行冲洗、脱水,每级酒精3〜5分钟。
( 3)复染色。
吸去酒精,用
0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色,时间为
0.5 分钟。
( 4)冲洗、脱水。
用95%酒精冲洗1 次,时间10 秒。
后移入纯酒精中脱水2〜3 次,每次3〜5 分钟。
(5)透明。
吸去纯酒精,放入二甲苯—纯酒精溶液中脱水和透明1 次,时间5 分钟。
(6)吸去脱水透明液,换以纯二甲苯透明2次,时间5 分钟。
5、封片、贴标签将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上,滴上中性树胶,盖上盖玻片进行干燥。
在已封好的切片左边贴上标签,注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项,以便查考。
较好的切片,其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色,细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色,
红绿相衬,有利于观察、分辨植物体的内部结构。
现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下:
选材-切片-固定(70%酒精)-1%|红(50%酒精溶液)染色-70%酉精冲洗- 脱水(85%酒精、95%酒精)-
0.5%固绿(95%酉精溶液)复染色-冲洗(95%酉精1 次)-进一步脱水(纯酉精2〜3次)—透明纯酒精十二甲苯及纯二甲苯各二次)—封片(中性树胶)—贴标签。
附:
药品的简单配方
(1)1%番红:
于蒸馏水或50%酒精100毫升中溶入番红粉末l 克,过滤后使用。
(2)
0.5%固绿:95%酒精1 00毫升中加入固绿粉末
0.5xx。
徒手切片方法的改进
徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久,在石蜡切片之前,基本上使用徒手切片。
它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩,看到活体细胞结构状态,所以徒手切片运用在植物学实验教学中比较普遍。
为了克服传统徒手切片技术中的不足,我们进行了改进,改为皮套加刀片。
这种切片方法切片速度快,软硬质材料都可以切,不需要任何夹物,既经济适用,又简单易行。
1 材料用品
双面刀片1个,直径1~
1.5cm的乳胶管,毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸,质量分数1%的中性红染液或红墨水,新鲜的植物根、茎、叶、花药和子房等。
2 切法
将直径1 ~
1.5cm 的乳胶管剪成
3.5cm 长的一段,用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上,注意皮套一定要高于拇指,把要切的植物材料,紧贴在皮套的外侧。
如果是叶可以把它卷紧,所切的材料不可过长,大约2~
2.5cm 即可。
此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住,幼嫩的材料捏时不可用力过猛,以免损坏组织细胞。
右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧,手腕端平,把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态,先切平材料,然后用腕力向内连续切片,刀片只要搭住材料就可以垂直切片。
另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切,如此连续切下去,然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿的水中,避免干燥。
3 染色、封片
把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净,放在实验台上,加上1 滴中性红染液或红墨水,用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上,用解剖针轻轻拨入染色液中,大约30 s后吸去染色液加1滴清水封片。
为了防止气泡的产生,用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧,使盖玻片的基部与滴液先接触,右手握解剖针挑着盖玻片从左向右徐徐放下盖玻片,使气体从一侧排出,如果有多余的水溢出,可用吸水纸吸干,再进行下一步的镜下观察。
4 镜检
镜下观察时,对好光源,让视野光线均匀一致,放上临时切片,从低到高进行观察。
一个好的皮套切片,镜下观察有4 点标准:
材料完整,薄而透明;镜下结构清晰;无气泡;封藏剂合适。
通过染色后的材料, 凡
是死细胞均被染成红色,而生活细胞仍然保持活体的自然色彩。