徒手切片技术

徒手切片法用光学显微镜观察的样品必须是透明的，因此，无论是临时装片还是永久制片的玻片标本，制作前都必须先将材料切成薄片。

徒手切片法简称手切片法，即以手持刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片的方法。

是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的切片方法，也是最重要的基本技能之一。

这种切片方法简便易行，节省时间；而且所需工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片就可以操作。

还有一个独特的优点，就是可以看到组织细胞内的自然结构和天然颜色。

其缺点是不易做到将整个切面切得薄而完整，往往厚薄不一；过软过硬的材料比较难切。

徒手切片一般处理的是新鲜材料，有时也可将材料预先固定好。

一般材料的徒手切片的方法如下：1.材料的准备：一般选择正常、软硬适中的植物器官或组织为材料，直接切成长约2〜3厘米的小段，削平切面。

所取的新鲜材料应及时放入水中，以免萎蔫。

取材的大小，一般直径不超过5mm,长度以15-25mm为宜。

过于柔软或微小的材料，难以直接执握手切，可夹入坚固而易切的夹持物中切。

常用的夹持物有去除木质部的胡萝卜根、土豆块茎、接骨木的髓部等。

切前先将夹持物切成长方小体,上端削平。

对于较薄的叶状体材料,可将夹持物纵切一缝,材料夹于其中即可；如不是叶状体,即将材料夹于其中,或在缝里挖一个和材料形状相似、大小相同的凹陷,把材料夹在凹陷里。

然后用手握住夹持物,采用上述方法将夹持物和其中的材料一齐切成薄片,除去夹持物的薄片,便得到材料的薄片。

坚硬的材料要经软化处理后再切。

软化的方法：对于比较硬的材料，切成小块煮沸3〜4 h,再浸入软化剂（50%酒精：甘油 =1 : 1）中数天至更长些时间，而后再切。

对于已干或含有矿物质，更为坚硬的材料,要先在15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周,充分浸洗后,再置入甘油里软化后再切。

2.执握刀片和材料的方法：左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动。

为防止刀伤，拇指应略低于食指，并使材料上端超出手指2〜3毫米，不可高出过多，否则切片时材料容易弯折，也不容易切薄。

植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。

限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。

(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。

常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。

1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。

2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。

刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。

浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。

3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。

如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。

4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。

用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。

(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------徒手切片方法（精品）徒手切片法特特点化学学、、生点不不需需要要机机械械设设备备，，能能保保持持活活体体的的情情况况。

主主要要用用在在组组织织化生药药鉴鉴定定、、石石蜡蜡切切片片选选材材等等。

方方法法要茎的的横横切要领切面面，，无领切切片片最最要要紧紧是是平平而而薄薄，，无无需需切切成成完完整整的的。

例例如如茎无须须切切成成整整圆圆形形，，只只需需一一角角就就足足够够了了。

步步骤材料料，，使骤①①一一般般用用左左手手的的大大拇拇指指、、食食指指和和中中指指这这三三个个手手指指拿拿住住材使材材料料突突出出在在指指尖尖上上面面，，使使刀刀片片不不会会割割伤伤它它们们。

用用右右手手拿拿刀刀片片。

两两只只手手应应该该可可以以自自由由活活动动，，不不1 / 5要要使使它它们们靠靠紧紧身身体体，，或或压压在在桌桌子子上上。

②②刀刀片片刀刀口口放放在在切切面面上上，，从从刀刀片片刀刀口口下下方方起起，，斜斜向向后后拉拉切切，，切切时时要要用用臂臂力力，，不不用用腕腕力力。

不不必必太太用用力力，，否否则则就就不不易易切切薄薄。

③③连连续续切切几几片片后后，，取取下下切切片片，，转转移移到到载载玻玻片片上上的的一一滴滴水水中中，，放放在在低低倍倍显显微微镜镜下下检检查查。

假假如如切切片片充充分分透透明明，，细细胞胞重重叠叠不不明明显显，，就就可可使使用用。

否否则则得得重重切切。

④④过过于于柔柔嫩嫩的的植植物物器器官官，，如如叶叶片片，，难难以以直直接接拿拿住住，，可可以以用用坚坚固固而而易易切切的的材材料料夹夹后后再再切切，，如如胡胡萝萝卜卜片片。

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实验九徒手切片法制片技术实验九徒手切片法制片技术一、目的要求徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。

所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。

但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。

二、材料、用品1、用品显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。

1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。

三、方法与步骤1、选材所用材料不宜太软或太硬。

一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。

质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约5～6毫米，长1～1.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。

使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。

2、切片（1）盛清洁的水于培养皿中。

然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外2～3毫米，材料的切面必须保持水平方向。

(2)右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。

(3)拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。

(4)切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。

(5)刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。

(6)切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。

如想短期保存，可用水或甘油封藏。

如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。

第三章徒手切片法徒手切片法是指用手拿刀片（或剃刀）把新鲜材料切成薄片，徒手切片法所作的切片通常不经染色或经简易染色后，封藏于水中即可观察，但也可制成永久制片。

观察但也可制成永久制片优点不需用切片机等贵重仪器有一刀片或剃刀就可 不需用切片机等贵重仪器，有一刀片或剃刀就可以进行切片；制片简单迅速能及时观察植物生活组织结构 制片简单、迅速，能及时观察植物生活组织结构和颜色。

缺点微小、柔嫩、含水过多以及坚硬的材料，很难用此法切成薄片。

此法切成薄片不经过严格的操作训练，易切成薄厚不均或不完整的切片。

切出的片子厚于切片机切片，也不适合对植物子房及胚胎等材料做连续切片。

操作步骤选取待观察的植物材料初步切取大约3长的小块1.取材选取待观察的植物材料，初步切取大约3cm长的小块，再依切片的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料块。

2.切片以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。

切片时，使刀片与材料的断面保持平行刀口自左上方斜向使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，动作要均匀有力。

材料与刀片须常以水湿润。

切下的薄片立即用毛笔蘸水后粘取移入盛有清水的培养内培养皿内。

胡萝卜木髓观察材料剃刀双面刀片切片33.选片切片完整，在培养皿中选择薄而均匀且切面完整的组织切片，捞在载玻片上作临时水装片，然后置于显微镜下观察，如结构能被清晰地显示出来，则可制成永久保存封片。

4.固定与染色FAA中固定15分钟至1小时，取镜检合格的切片投入小时将切片移入蒸发皿或小培养皿中，依次用50%、0%浓度乙醇脱水然后60%、70%各级浓度乙醇脱水，然后放入含1%番红的70%乙醇溶液中染色30min以上。

5. 脱水染好色的切片移入70%、80% 、90%、95%乙醇各级脱水5min 。

滴加含1%固绿的95%乙醇溶液染色30s 。

再换入95%乙醇中分色，最后进入无水乙醇脱水5min 。

切片移入1二甲苯混合溶液6. 透明1 ：1的无水乙醇：二甲苯混合溶液4min ，再移入纯二甲苯5min ，组织切片呈透明状。

植物徒手切片法植物徒手切片法是一种基于人工操作的植物组织切片技术，在植物科学领域中被广泛应用。

与机械切片法和冷冻切片法相比，植物徒手切片法具有操作简便、花费低廉、得到的切片形态更完整等优点。

下面将详细阐述植物徒手切片法的具体操作流程及其在各个领域中的应用。

一、操作流程植物徒手切片法主要是通过手工操作来制备植物组织切片，其步骤如下：1、准备植物材料首先应选择质地较软的植物组织，如果肉、嫩叶、茎尖等部位。

在制备切片前，需要将植物材料沿着纵向切开成薄片，并在切片表面涂上几滴液体切片液，使切片更易于切割。

2、切片将植物材料置于平板上，使用手工刀片沿着组织指定的方向进行切割，制备出薄片。

为使切片均匀，则需细心、耐心地调整刀片角度和切割力度，避免损伤植物组织。

3、染色和封片经过切片制备后，需要进行染色和封片处理，以保证切片的结构完整和细胞形态的清晰显示。

不同的组织染色方法不同，一般采用常见的克罗姆酸盐染色或吉姆萨染色。

然后用封片剂将切片封装，保证切片在显微镜下不受光线干扰。

二、应用领域在植物科学领域中，植物徒手切片法得到了广泛的应用。

以下为其在各个领域中具体的应用。

1、生理学和解剖学研究植物徒手切片法可以用于研究植物组织器官的内部结构和功能，进而揭示植物生理生态的内在机理。

该方法也被广泛应用于植物生长发育、光合作用及植物对环境适应性等方面的研究。

2、细胞学研究植物徒手切片法也可用于分析植物细胞的形态和功能，进一步研究细胞在不同生理生态条件下的变化。

例如，在植物育种中，利用植物徒手切片法可以对遗传育种材料进行细胞形态学评价，从而为植物品种改良提供理论和技术支持。

3、药物和化学物质筛选研究植物徒手切片法可应用于筛选具有抗氧化、抗肿瘤、复含、抗病毒等生物活性物质的植物成分。

通过对植物样品进行切片、染色、显微镜观测等步骤，可以对植物中所含物质的活性和生理效应等进行初步研究。

4、教学与科普植物徒手切片法是学生学习植物科学的基础实验，在学校的植物科学教学中经常用到。

徒手切片法特点不需要机械设备，能保持活体的情况。

主要用在组织化学、生药鉴定、石蜡切片选材等。

方法要领切片最要紧是平而薄，无需切成完整的。

例如茎的横切面，无须切成整圆形，只需一角就足够了。

步骤①一般用左手的大拇指、食指和中指这三个手指拿住材料，使材料突出在指尖上面，使刀片不会割伤它们。

用右手拿刀片。

两只手应该可以自由活动，不要使它们靠紧身体，或压在桌子上。

②刀片刀口放在切面上，从刀片刀口下方起，斜向后拉切，切时要用臂力，不用腕力。

不必太用力，否则就不易切薄。

③连续切几片后，取下切片，转移到载玻片上的一滴水中，放在低倍显微镜下检查。

假如切片充分透明，细胞重叠不明显，就可使用。

否则得重切。

④过于柔嫩的植物器官，如叶片，难以直接拿住，可以用坚固而易切的材料夹后再切，如胡萝卜片。

⑤作临时观察的话，直接用水或甘油封片就行。

如果要更清楚地显示细胞结构及其化学成分，则可以进一步染色。

徒手切片法▪实验材料：印度橡皮树叶片；芹菜叶柄；柳树枝条▪实验用具：双面刀片，镊子，毛笔，培养皿，载片和盖片，吸水纸，光学显微镜▪药品：蒸馏水，95％叔丁醇，甘油细胞内含物观察——橡皮树叶片▪材料：橡皮树叶片▪方法：徒手切片▪观察重点：复表皮、钟乳体–钟乳体：碳酸钙结晶–形态：呈桑葚状–问题：若在盖玻片一侧滴入盐酸，钟乳体如何变化？结晶体——背景知识▪种类：–草酸钙晶体：针状、晶簇状等–碳酸钙晶体：桑葚状–二氧化硅结晶：禾本科▪细胞化学检验方法：–酸检法：醋酸（－）；浓盐酸/硫酸（＋）–醋酸铜－硫酸铁法：▪醋酸铜溶解草酸钙，形成草酸铜；▪加硫酸铁：黄色结晶机械组织——芹菜叶柄▪实验材料：芹菜叶柄▪观察重点：–芹菜叶柄：厚角组织植物茎的次生结构——柳树茎▪观察重点：–多年生植物茎的次生结构；–年轮，周皮等植物组织染色–番红——固绿对染。

《实验八徒手切片技术》教案实验九徒手切片技术一、教学目标学生学会植物组织徒手切片技术二、材料与用品显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、镊子、滴管、0.1%碘液、实验材料及夹持物、吸水纸、擦镜纸、毛笔、培养皿三、实验原理用光学显微镜观察的样品，必须是透明的薄片，因此，首先要把观察的材料制成透明的切片后才能在显微镜下观察。

徒手切片法是指手拿刀片把新鲜材料切成薄片，制成临时装片的方法。

此法简单方便，不需设备即可保留植物活体状态。

四、教学过程1．组织教学。

各组检查实验材料与用品。

2．检查实验预习情况：（1）实验内容；（2）实验原理；（3）实验目的要求；（4）实验方法。

3．入门（示范操作）指导。

教师演示：（1）用双面刀片截取材料（芹菜叶柄），削平切面。

左手三个手指拿住材料，使材料突出于手指上面。

（安全教育）把刀刃放在经过削平的平面上，然后轻轻地压住它，以均匀的力量和平稳的动作，从刀刃的右侧，斜着向左的方向切，继续切片，一连切几个切片，然后用毛笔取下，切下的切片放在有水的培养皿中。

（2）叶片夹在莴苣茎中进行切片。

（制片、染色和显微镜的使用技术，前面几次实验已重点练习过，教师简单讲解，不再演示操作。

）4．学生练习，教师巡查指导。

讲解注意点：（1）切片时,右手平稳地拿住刀片，两手应该可以自由活动，切时两臂不要过于紧张，也不要使肘臂紧靠身体或压在桌子上，要用臂力而不要用腕力而且不要用力过大。

（2）切片时为了避免材料枯干，应使材料的切面及刀刃上保持有水，呈湿润状态。

（3）切片时，所切的材料和刀片一定要保持水平方向。

如果斜向切下材料，虽然切片很薄，但会由于细胞切面偏斜而影响观察。

（4）徒手切片时，最重要的是要切下一小片平而薄的组织，而不是要求切下一个完整的切片。

例如切一茎的横切片，不要求切下圆形的一片，而只需切下一小部分即可。

5．点评：实验中存在的主要问题及改进的方法。

6．学生练习，教师巡查指导。

7．评比：哪些组运用徒手切片技术制作的切片质量比较好。

实验三根茎叶显微观察与徒手切片一、目的要求1、学习植物的徒手切片技术2、了解植物细胞的多样性，积累植物组织的知识，建立组织与功能协调一致的概念。

二、基本原理根茎叶是植物的营养器官，都是由各种细胞和组织组成的。

通过切片，我们可以在不同的切片中分别看到保护组织、机械组织、营养组织、输导组织、分生组织等。

徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，制成临时的水装片用于观察的植物组织制片技术之一。

所作的切片通常不经染色或经简单染色，也可以通过脱水与染色制成永久制片。

徒手切片的优点是简单、方便，不要复杂的设备，不经化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。

其操作要点是：在培养皿中放入清水。

用左手大拇指、食指、中指等拿住材料，拇指略低于食指，且拇指要伸直呈反弯状态，中指等在下部稳定材料。

材料切面要高于拇指，但略低于食指，双面刀片放在食指上，只有给它略加一个向下的力时，刀刃才能接触到材料。

右手用食指和大拇指捏住双面刀片的一角，留出所有的刀刃部分，使刀刃近手指的一端首选接触到材料，然后让刀刃在材料上斜切下去，如果把材料切面看作是一个长方形的活，那么刀刃在材料上拉的是长方形的一条对角线，即从左前方向右后方拉切，注意不是垂直切向材料，一片，一片⋯⋯，轻松、快速地切，估计有满意的了，再一起放入盛有清水的培养皿中，挑选最薄的一片，装片观察。

不要试图每一片都很薄，也不要追求切片形状的完整。

其次，一定要注意，切片时不论是站着还是坐着，都要挺胸、放松地进行，是整个手臂在用力，也就是你在切片时，是肩关节在动，而不是肘关节，更不是腕关节。

另外，切片时水是润滑剂，你的手指上、材料上、刀片上随时都应该有水。

三、实验材料、试剂与仪器设备生物显微镜、载玻片、盖玻片、双面刀片、培养皿、滴管、吸水纸、毛笔，根茎叶结构的相关切片、鸢尾Iris tectorum的根、某种合适的双子叶植物的根、蚕豆Vicia faba的茎、蚕豆的叶、南瓜Cucurbita moschata茎、大叶黄杨 Euonymus japonicus的嫩茎、芹菜Apium graveoiens的叶柄、海桐Pittos-porum tobira或大叶黄杨的叶、小麦Triticum aestivum或其他禾本科小草的叶、萝卜的肉质直根，清水、I2-KI水溶液、0.1%番红染液四、实验步骤(一)根的显微结构1、根尖的内部结构取玉米或洋葱根尖纵切永久制片，置于显微镜下，由根的最先端逐渐向上观察根尖的各区，注意各区细胞的特点。