革兰氏染色法各种染液的配制
实验室诊断2009-06-20 08:18
革兰氏染色法是细菌学中最常用的一种鉴别染色法。
细菌经结晶紫染色，并用碘液媒染后，用95％酒精脱色，最后用番红液复染，倘若细菌经结晶紫、碘液染色后不被酒精脱色，仍保持紫兰颜色，则为革兰氏染色阳性；如果细菌被酒精脱色，则可被番红液复染成红色，乃为革兰氏染色阴性。此染色法将细菌分为两大类，可以帮助鉴别细菌及治疗时选择适当的抗菌药物。
目的要求
掌握细菌涂片制作及革兰氏染色法的操作技术。
材料
1．葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。
2．结晶紫染色液。
3．革兰氏碘液。
4．95％酒精。
5．番红染液。
6．载玻片。
方法
一、涂片标本的制备（见实验一）
二、革兰氏染色法
1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。
2．媒染：滴加革兰氏碘液，作用1—3分钟，水洗。
3．脱色：滴加95％酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。
4．复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。
结果：视野中可以察见两种细菌：
葡萄球菌：紫色、球形、葡萄状排列。
大肠杆菌：红色、杆状、散在排列。
【附】革兰氏染色法各种染液的配制
一、结晶紫（Ｃｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔ）染液
结晶紫 2.0g
草酸铵0.8g
95％酒精20ml
蒸馏水80ml
先将结晶紫溶于酒精，草酸铵溶于蒸馏水中，然后将两液混合，静置４８小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。
二、革兰氏碘液
碘 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水300ml
先将碘与碘化钾混合，加水少许，略加摇动，待碘完全溶解后再加蒸馏水至定量。
三、脱色剂：95％酒精
四、复染剂：番红（沙黄ＳａｆｒａｍｉｎｅＯ）染液
沙黄（ＳａｆｒａｍｉｎｅＯ）０．２５ｇ
９５％乙醇１０ｍｌ
蒸馏水适量
将沙黄溶解于９５％乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ
