凝血因子抗体检测(王学锋)

4种活化部分凝血活酶时间试剂因子敏感性的量化评估及临床应用探讨王威;何晓璇;仝晓宁;刘哲;邓凯;王刚【摘要】目的量化评估4种活化部分凝血活酶时间(APT T)试剂的FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ 敏感性,分析其临床适用范围.方法采用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)H47-A2的APTT 试剂敏感性评估方法,检测由标准血浆和单因子缺乏血浆配制的<1% ~100% 不同因子水平混合血浆的APTT值.APTT试剂敏感性由非线性回归曲线与正常参考区间上限的交叉点确定,并用百分活度(%)表示.结果试剂A(上海太阳生物技术有限公司,鞣花酸)的因子敏感性为FⅧ 54.0%,FⅨ37.3%,FⅪ56.5%,FⅫ 36.4%;试剂B(上海太阳生物技术有限公司,白陶土)的因子敏感性为FⅧ 25.6%,FⅨ16.5%,FⅪ23.8%,FⅫ 18.6%;试剂C(西门子公司)的因子敏感性为FⅧ 42.9%,FⅨ 30.0%,FⅪ 45.3%,FⅫ 28.4%;试剂D(思塔高公司)的因子敏感性为FⅧ26.1%,FⅨ 17.6%,FⅪ 19.1%,FⅫ 21.0%.结论 4种A PT T 试剂的内源性因子敏感性差异较大.试剂A适用于亚临床型血友病A、B的筛查;试剂C适用于术前筛查;试剂B和试剂D适用于内源性单因子缺乏的确证试验.%Objective To evaluate the responsiveness to single factor levels of four APTT reagents,and an-alyze the different scopes of clinical application.Methods We evaluated,according to the recommendation of the CLSI H47-A2 guideline,the responsiveness to single factor levels of four APT T reagents by using factor-deficient plasmas spiked with a calibration plasma to produce individual factor activities ranging from <1% to 100%.The APTT responsiveness in percent activity(%)could be determined from the intersection of the curve and the upper limit of the APTT normal referencerange for that APTT reagent.Results APTT re-sponsiveness ofSUNBIO(ellagic acid)was as follows:F Ⅷ 54.0%,F Ⅸ 37.3%,F Ⅺ 56.5%,F Ⅻ 36.4%;APTT responsiveness of SUNBIO(kaolin)was as follows:FⅧ25.6%,FⅨ16.5%,FⅪ23.8%,FⅫ 18.6%;APTT responsiveness of Siemens Dade Actin was as follows:F Ⅷ 42.9%,F Ⅸ 30.0%,F Ⅺ 45.3%,F Ⅻ28.4%;APTT responsiveness of STAO ?-PTTA was as follows:FⅧ 26.1%,FⅨ 17.6%,FⅪ 19.1%,FⅫ21.0%.Conclusion The responsiveness of the tested APTT reagents to single factor deficiency is highly vari-able.SUNBIO(ellagic acid)is suitable for assisting diagnosis of subclinical hemophilia A andB;Siemens Dade Actin is suitable for preoperativescreening;SUNBIO(kaolin)and STAO?-PTTA is suitable for identifying single intrinsic pathway factor deficiencies.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2018(015)008【总页数】4页(P1118-1120,1124)【关键词】APTT试剂;CLSIH47-A2;内源性凝血因子;敏感性【作者】王威;何晓璇;仝晓宁;刘哲;邓凯;王刚【作者单位】西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061;西安交通大学第一附属医院检验科,西安710061【正文语种】中文【中图分类】R446.1活化部分凝血活酶时间(APTT)可以反映内源性凝血途径和(或)共同途径的因子缺乏，并且在多因子缺乏或者明显的单因子缺乏时表现为时间延长，但当因子缺乏时，APTT是否延长及延长的程度取决于APTT试剂对内源性凝血因子的敏感性。

凝血因子检测及临床意义一、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅱ：72.9%~118.9%。

2、凝血因子Ⅴ：64.5%~140.3%。

3、凝血因子Ⅶ：85.8%~123.2%。

4、凝血因子Ⅹ：89.5%~120.3%。

（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。

2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。

（三）临床意义测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。

1、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ增高，意义同内源性凝血因子测定，但肝病除外。

2、血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减低，见于先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，但较少见，获得性减低者见于维生素K缺乏症、肝脏疾病，DIC和口服抗凝剂等。

二、凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的促凝活性测定（一）正常值（一期法）1、凝血因子Ⅷ：77.3%~128.7%。

2、凝血因子Ⅸ：67.6%~128.5%。

3、凝血因子Ⅺ︰C：81.6%~118.4%。

4、凝血因子Ⅻ︰C：71.7%~113.1%。

（二）影响因素1、血和抗凝剂比例应准确。

2、标本要及时送检，不能久置，时间长了活性减低。

（三）临床意义可测定单一凝血因子缺乏和缺乏程度，用于先天性或获得性凝血因子缺乏疾病的检查。

1、血浆量：Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ增高，主要见于高凝状态和血栓性疾病，尤其是静脉血栓形成性疾病，如深静脉血栓形成、肺栓塞、肾病综合征、口服避孕药、妊娠高血压综合征、恶性肿瘤、肝病时Ⅷ升高。

2、血浆中凝血因子Ⅷ降低，见于血友病A。

按减低的程度分为重（＜2%）、中型（2%~5%）、轻型（5%~25%）以及亚临床型（25%~45%），血管性血友病（vWD）的降低程度不如血友病明显，一般在20%~40%，DIC时凝血因子Ⅷ被消耗，故也减少。

3、凝血因子Ⅸ降低，见于血友病B，临床分型同血友病A，其次见于肝脏疾病、维生素K缺乏症：CDIC和口服抗凝剂等。

4、凝血因子Ⅺ降低，见于凝血因子Ⅺ缺乏症、肝脏疾病和DIC等。

小鼠小鼠凝血因子凝血因子凝血因子ⅪⅪ（F Ⅺ）酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围检测范围：： 96T0.1ng/ml - 5ng/ml使用目的使用目的：：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）水平。

用纯化的小鼠凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入凝血因子Ⅺ（F Ⅺ），再与HRP 标记的凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠凝血因子Ⅺ（F Ⅺ）浓度。

试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（8ng/ml ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

4ng/ml 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 2ng/ml 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 1ng/ml 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 0.5ng/ml 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 0.25ng/ml 1号标准品150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液IBL2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

人凝血因子检验方法引言人凝血因子是一组在血液凝固过程中起关键作用的蛋白质。

凝血因子检验是评估一个人的凝血功能是否正常的重要方法。

本文将介绍人凝血因子检验的方法，包括常用的实验室检测方法和新兴的分子诊断技术。

1. 凝血因子简介人体内共有13种已知的凝血因子，它们按照其参与凝血反应的顺序被编号为Ⅰ至ⅩⅢ。

这些凝血因子在正常情况下相互协作，形成一个复杂而精确的平衡系统，以维持正常的止血和溶栓过程。

2. 常用实验室检测方法2.1 凝血酶原时间（PT）PT是评估外源性凝血通路功能的指标。

该测试使用钠柠檬酸抗凝剂处理患者的血液样本，然后添加磷酸钙和组织因子来启动凝血反应。

通过计算患者样本中形成凝块所需时间来确定PT值。

2.2 部分凝血活酶时间（APTT）APTT是评估内源性凝血通路功能的指标。

该测试使用钠柠檬酸抗凝剂处理患者的血液样本，然后添加磷酸钙和活化的部分凝血活酶来启动凝血反应。

通过计算患者样本中形成凝块所需时间来确定APTT值。

2.3 血小板计数和出血时间除了凝血因子本身，血小板也是维持正常止血过程中不可或缺的组成部分。

进行完整的凝血功能检查时，还需要评估患者的血小板计数和出血时间。

3. 分子诊断技术近年来，随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的新兴检测方法被应用于人凝血因子检验中。

3.1 多重PCR多重PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种高效且灵敏的分子生物学技术，可以同时检测多个基因突变。

在人凝血因子检验中，多重PCR可以用于快速筛查常见突变引起的凝血因子缺陷。

3.2 基因测序基因测序是一种直接测定DNA序列的方法。

通过对凝血因子相关基因进行全序列测定，可以发现罕见突变或新的基因变异，为凝血功能异常的诊断提供更准确的依据。

3.3 基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的基因分析方法，可以同时检测上千个基因。

在人凝血因子检验中，基因芯片技术可以用于快速筛查多个凝血相关基因的变异。

凝血因子抗体检测凝血因子抗体检测是一种检测机体是否出现对凝血因子产生抗体的方法。

凝血因子是血液中参与凝血过程的一类蛋白质，它们在正常情况下能够协同作用，形成血凝块，并阻止血液过多流失。

而当机体出现对凝血因子产生抗体时，会造成凝血功能异常，导致出血倾向或血栓形成等疾病。

凝血因子抗体检测主要用于排除或诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症、自身免疫系统性疾病和其他疾病引起的抗凝血因子免疫血液病。

其中，自身抗凝血因子免疫血液病是一类自身免疫性疾病，常见的有抗磷脂抗体综合征（APS）、自身抗凝血酶抗体综合征（CAC）、抗凝血酶抗体和抗磷脂抗体同时存在等。

凝血因子抗体检测一般包括两个方面：常规凝血因子抗体和磷脂抗体的检测。

常规凝血因子抗体检测可以检测循环中凝血因子特异性抗体，用于诊断先天性或后天性凝血因子缺乏症。

而磷脂抗体检测主要用于检测一些自身免疫性疾病，如APS，由于自身产生的抗体可与凝血系统相关的磷脂结合，导致凝血系统功能异常。

常规凝血因子抗体检测主要包括凝血因子八、凝血因子九、凝血因子十一、凝血因子十二、凝血因子十三等凝血因子的抗体检测。

这些抗体的检测一般采用酶联免疫吸附试验（ELISA），通过对患者血清中的抗体与特定凝血因子抗原进行结合，然后用特定的辅助试剂检测反应的产物，从而判断血液中的抗体含量。

磷脂抗体检测一般采用磷脂筛选试验和磷脂抗体定量试验。

磷脂筛选试验通常采用凝集试验、凝血试验等方法，通过观察血浆与磷脂之间的凝集程度来判断是否存在磷脂抗体。

而磷脂抗体定量试验则可以进一步确定磷脂抗体的水平。

常用的磷脂抗体定量试验有凝血抑制试验、酶联免疫吸附试验等。

凝血因子抗体检测的结果可以帮助医生判断病情、指导治疗以及评估疗效。

对于先天性或后天性凝血因子缺乏症患者来说，抗体检测可以帮助确定凝血因子缺乏的类型和程度，并制定相应的治疗方案。

对于自身免疫性凝血功能障碍患者来说，抗体检测可以帮助明确诊断，并指导治疗。

应用血凝、ELISA试验检测牛口蹄疫免疫抗体、非结构蛋白
抗体
徐继鹏;王仕刚;李丙文;靳桂君;孙春玲
【期刊名称】《兽药市场指南》
【年(卷),期】2007(000)003
【摘要】口蹄疫（FMD）被O正列为A类传染病之首，从九十年代开始，随着人们防疫意识的增强。

天津市武清区采用每年春、秋两次集中防疫。

并随时补针的措施。

使口蹄疫的预防工作卓有成效。

但是，由于周边国家和地区常有口蹄疫发生的报道．为了掌握天津市武清区口蹄疫的免疫状况，天津市武清区动物疫病监测中心于2006年10月开始应用血凝、ELISA试验方法在全区29个乡镇进行了FMD 免疫抗体、非结构蛋白抗体（自然强毒感染抗体）的检测。

【总页数】1页(P45)
【作者】徐继鹏;王仕刚;李丙文;靳桂君;孙春玲
【作者单位】天津市武清区畜牧兽医技术服务中心
【正文语种】中文
【中图分类】S855.3
【相关文献】
1.4种ELISA方法检测牛口蹄疫非结构蛋白抗体的ROC评价 [J], 王欢;张润祥;李迪;曹永生;高明春;王君伟
2.ELISA法检测牛口蹄疫免疫非结构蛋白抗体的试验研究 [J], 才让吉
3.应用正向间接血凝试验与酶联免疫吸附试验检测猪 O 型口蹄疫免疫抗体的比较分析 [J], 汤海平;林映升;林跃华;陈祝茗
4.应用ELISA试验检测猪瘟免疫抗体 [J], 周秋平;黄绍明;黄章生;王家涛
5.ELISA检测牛口蹄疫非结构蛋白抗体 [J], 索南卓玛
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血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定摘要】目的讨论血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定。

方法对样本进行临床检验。

结论参考范围(一期法)FⅧ：C 54.29%～168.51%，FⅨ：C 50.09%～222.05%，FⅪ：C 81%～118%， FⅫ：C 61 %～148%。

因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性检测与Ⅱ：C、V：C、Ⅶ：C、X： C等一样，都是以相当正常人的百分活性来表示的，故工作参考值很重要，志愿者以100例为好，且年龄段分布要有代表性，制成的混合血浆在一30℃下也只能保持3个月。

每次检测都必须制作标准曲线。

【关键词】血浆凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ促凝血活性测定参考范围(一期法)FⅧ：C54.29%～168.51%，FⅨ：C50.09%～222.05%，FⅪ：C81%～118%，FⅫ：C61 %～148%。

结果评价1.生理情况血浆凝血因子Ⅷ曾称为抗血友病因子(antihemophilic factor，AHF)或抗血友病球蛋白(antihemophilic globulin，AHG)，正常人血浆浓度很不稳定，一般为0.1mg/L，分子质量为3330000，肝脏可能是主要的合成场所，其基因定位于X性染色体(Xq28)，长度为186kb。

凝血因子Ⅸ也称为凝血活酶成分(plasma thromboplastin com-ponent，或叫christmas因子，分子质量为56000，正常血浆浓度为3～4mg/L，为肝脏合成的维生素K依赖性凝血因子，其基因定位于X染色体(Xq27.1)，长度为34kb。

凝血因子Ⅺ，又称血浆凝血活酶前质(plasma thromboplastin antecedent，PTA)，是一种较为稳定的凝血蛋白，血浆正常浓度为4～6mg/L，分子质量为160 000，由肝脏合成，基因定位于4号染色体(4q35)，长度为23kb。

因子Ⅻ，也称Hageman因子，正常血浆浓度为29mg/L，分子质量为80 000，主要由肝脏合成，基因定位于第5号染色体(5q33-ter)，长度为11.9kb。

一、实验目的本实验旨在研究凝血抗体的产生机制、影响因素及其与凝血功能的关系。

通过体外实验，观察凝血抗体对凝血酶原激活复合物（PCA）的抑制作用，探讨凝血抗体在凝血过程中的作用。

二、实验原理凝血抗体是一种自身抗体，可识别并结合凝血因子，从而抑制凝血过程。

本实验采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测凝血抗体水平，并通过凝血酶原激活复合物（PCA）活性测定分析凝血抗体对凝血功能的影响。

三、实验材料1. 主要试剂：凝血酶原激活复合物（PCA）试剂盒、抗凝血酶原抗体（ATP）酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒、羊抗小鼠IgG-HRP、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗小鼠IgG、底物A、底物B、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、双蒸水等。

2. 主要仪器：酶标仪、微量移液器、恒温箱、离心机、涡旋器、紫外可见分光光度计等。

3. 实验动物：小鼠。

四、实验方法1. 样本采集：取小鼠血液，分离血清，分为实验组和对照组。

2. ELISA检测凝血抗体：按照ATP ELISA试剂盒说明书操作，检测实验组和对照组血清中的ATP水平。

3. PCA活性测定：按照PCA试剂盒说明书操作，检测实验组和对照组血清中的PCA 活性。

4. 数据分析：采用统计学软件对实验数据进行分析，比较实验组和对照组的差异。

五、实验结果1. ELISA检测结果：实验组ATP水平显著高于对照组（P<0.05），表明实验组小鼠血清中存在较高水平的ATP。

2. PCA活性测定结果：实验组PCA活性显著低于对照组（P<0.05），表明实验组小鼠血清中的ATP对PCA活性具有抑制作用。

六、讨论1. 本实验结果表明，凝血抗体（ATP）在实验组小鼠血清中存在较高水平，且对PCA活性具有抑制作用。

这表明凝血抗体在凝血过程中发挥重要作用。

2. 凝血抗体可能通过以下途径抑制凝血过程：（1）结合凝血因子，干扰凝血因子之间的相互作用；（2）结合凝血酶原激活复合物（PCA），降低PCA活性；（3）激活补体系统，导致细胞损伤和炎症反应。

凝血因子方法学
凝血因子检测的方法主要有以下几种：
1. 凝血酶凝固法（Clauss法）：这种方法是利用凝血酶作用于待测血浆中
的纤维蛋白原，使其转变为纤维蛋白，血浆凝固。

血浆中纤维蛋白原的含量与凝固时间成负相关，检测结果与参比血浆制成的标准曲线对比可得出纤维蛋白原的含量。

2. 比浊法（PT衍生法）：当PT测定完成时，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，其形成的浊度与FIB的含量成正比，因此无需另加任何试剂，即可由产生的浊度，用终点法或速率法算出FIB含量。

3. 免疫学方法：利用抗FIB多克隆抗体与FIB特异性结合反应进行测定。

方法有免疫浊度、单向免疫扩散和ELISA等。

4. 血浆因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性测定：一期法是将待测血浆分别与乏FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ基质血浆混合，进行APTT测定。

以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业医生。