无菌室检验方法.

1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。

3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。

4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。

5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。

在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。

缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。

在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。

5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。

取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。

无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。

5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。

5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。

无尘车间无菌室的检验规章制度无尘车间和无菌室是现代医药和生物制药企业非常重要的装备，它们的设计和运作要求非常高，能够保证生产过程中产品的无菌性和无尘性。

为了确保无尘车间和无菌室的工作环境符合要求，减少污染物的产生和传播，需要严格检验和管理。

下面是无尘车间和无菌室的检验规章制度，以供参考。

一、检验内容无尘车间和无菌室的检验内容主要包括以下几个方面：1. 空气洁净度检验：空气洁净度是无尘车间和无菌室的核心指标之一，必须在定期时间内进行检验。

主要检验参数为颗粒物的数量和大小，常用的检测方法有悬浮颗粒计数和沉降膜法，其中悬浮颗粒计数适用于粒径在0.5μm~5.0μm的颗粒计数，而沉降膜法适用于大于5.0μm的颗粒计数。

2. 温度和湿度检验：无尘车间和无菌室的温度和湿度对产品生产的影响较大，因此必须定期检验，以确保其处于规定的范围内，从而保证产品的质量和有效期。

3. 压差检验：无尘车间和无菌室的压差要求必须符合国家相关标准。

检验过程应该注意根据不同的生产工艺，设定不同的压差标准，并严格按照标准要求进行测量。

4. 照明强度和噪音检验：无尘车间和无菌室的照明强度和噪声控制是生产过程中的重要环境指标。

需要通过定期的检验来保证这两个指标处于合适的范围内。

5. 清洁度检验：清洁度指的是对生产设备、物品和人员的卫生状况进行检验。

由于无尘车间和无菌室的使用需要穿着特殊的服装进入，因此在设备和物品上的残留物需格外重视。

二、检验人员的资质要求无尘车间和无菌室的检验人员应该具备如下资质：1. 具备高中以上文化程度，有一定的医药或生物制药知识。

2. 有相关的检验经验和资质证书。

3. 具备合理的身体条件和稳定的工作状态。

4. 诚实可靠，遵守职业道德和工厂纪律。

5. 遵守保密法律法规，保护企业商业机密和产品质量。

三、检验频率和检验记录无尘车间和无菌室的检验频率应该根据工艺要求进行定期检验，检验记录完整、准确、及时。

具体要求如下：1. 空气洁净度：根据操作生产要求进行检验，按照相关标准进行记录并保证符合要求。

无菌检查SOP（薄膜过滤法）1.目的为规范无菌检查方法及无菌检查全过程的操作，最大限度防止试验操作过程造成的污染，确保结果准确。

2.范围本SOP适用于生物制品的中间产品（包括原液、纯化产物、半成品、生产中的液体、辅料等）、成品的无菌检查。

只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。

3.定义无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

4.职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行；4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核；4.3.质量总监负责批准本规程；4.4.QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部6.材料6.1.无菌检查用物品、物料要求：所有物品、物料进入无菌室前，均应经过高压蒸汽灭菌（121℃40分钟，放灭菌指示卡）或180℃干烤2小时或其它经过验证的方法消毒后传入无菌室；如不能用前者消毒方式消毒的物品，须经消毒液浸泡、擦拭后传入无菌室。

6.2.无菌检查环境要求：应在环境洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

6.3.仪器、设备与设施集菌仪、显微镜、台式灭菌器、无菌试验室（万级）、超净工作台（万级背景下的局部百级）：每月环境检测（沉降菌、浮游菌、尘埃粒子）合格后，方可使用。

20-25℃培养房或培养箱、30-35℃培养房或培养箱。

6.4.试验用具：洁净工作服（洁净底服、十万级工作服、万级工作服、鞋套）、工作鞋、口罩及帽子；无菌医用手套或一次性乳胶医用手套：试验前及试验过程中用消毒液浸泡消毒；封闭式集菌培养器（双针头、三联及单针头、三联）：薄膜孔径不大于0.45μm，直径约为 50mm。

根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。

无菌室沉降菌测试标准操作规程一、目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证微生物检验在规定洁净级别内进行。

二、范围：无菌室的沉降菌的监测。

三、依据：国家标准GB/T 16294-1996。

四、职责：微生物检验人员对本制度的实施负责。

五、内容1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。

通常用个数表示。

2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。

3、所用的仪器和设备1）高压灭菌锅锅2）恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。

3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。

4、培养基：普通营养琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。

5、测试步骤1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。

2）培养，时间不少于48小时。

每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

6、注意事项1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

2）采取一切措施防止人为对样本的污染。

3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程无菌室(洁净室)是微生物检验室的核心。

无菌室普通是在微生物试验室内开拓的一个自立小房间。

无菌室的规划设计、建设要符合《洁净室施工及验收规范》(GB50591-2010)的要求。

(一)无菌室洁净标准无菌操作间洁净度应达到10000级，超净工作负清净度应达到100级，室内温度维持在18～27℃，湿度保持在30%～70%。

详细要求见表4-3。

表4-3 无菌室(洁净室)空气洁净度级别注：1.浮游菌m3和沉降菌/皿可任测一种。

2.100级洁净室(区)0.8m高工作区的截面最低风速：垂直单向流0.25m/s，水平单向流0.35m/s。

(二)无菌室操作规程 (1)无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

(2)无菌室应定期用相宜的消毒液灭菌清洁，以保证洁净度符合要求。

按照无菌室的净化状况和空气中含有的杂菌种类，可采纳不同的消毒剂，如、、、3%气溶胶喷雾(20mL/m3)、(配成1%浓度喷洒)、5%气溶胶喷雾(2.5mL/m2)等。

(3)工作人员进入无菌室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。

(4)无菌室用法前，应将全部物品置于操作部位(待检物除外)，然后打开紫外灯杀菌30min以上，并同时打开超净工作台举行吹风。

操作完毕，应准时清理无菌室，再打开紫外灯灭菌20min。

(5)凡带有活菌的物品，必需经高压灭菌后才干清洗或丢弃。

(6)每2～3周用3%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌椅及地面。

(7)无菌室应每月检查菌落数。

在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的养分琼脂平板3～5个，分离放置在工作位置的左、中、右等处，开盖裸露30min后，倒置于30～35℃培养箱内培养48h，取出检查。

100级洁净室平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平板杂菌数平均不得超过3个菌落。

如超过限度，应对无菌室举行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。