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等温滴定量热法（ITC）等温滴定量热技术摘要：⽣物⼤分⼦可以和很多配体特异性结合，当物质结合时，热量要么产⽣，要么吸收。
⽣物⼤分⼦与配体相互作⽤的定量描述需要确定反应过程中热⼒学参数的变化。
相互作⽤过程中产⽣的热量变化可以⽤量热计定量监测。
等温滴定量热技术（Isothermal Titration Calorimetry, ITC）是⼀种监测由结合成分的添加⽽起始的任何化学反应的热⼒学技术，它已经成为鉴定⽣物分⼦间相互作⽤的⾸选⽅法。
它通过⾼灵敏度、⾼⾃动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录⼀个变化过程的量热曲线，原位、在线和⽆损伤地同时提供热⼒学和动⼒学信息，如结合常数（Ka）、结合位点数（n），结合焓（△H）、熵（△S）、恒压热容（△Cp）和动⼒学数据（如酶促反应的Km和kcat ）。
这些信息提供了⽣物分⼦相互作⽤的真实写照。
由于⼏乎所有的⽣化反应过程都有热量变化，所以ITC具有很⼴泛的应⽤，它可以应⽤于蛋⽩质-蛋⽩质相互作⽤、蛋⽩质折叠/去折叠、蛋⽩质-⼩分⼦相互作⽤、酶-抑制剂相互作⽤、酶促反应动⼒学、药物-DNA/RNA相互作⽤、RNA折叠、蛋⽩质-核酸相互作⽤、核酸-⼩分⼦相互作⽤、核酸-核酸相互作⽤、⽣物分⼦-细胞相互作⽤等⽅⾯。
关键字：等温滴定量热技术、相互作⽤、热⼒学商业化的测量⽣物分⼦相互作⽤热量的灵敏的量热计出现在上世纪80年代后期[1]。
从此这种技术被⼴泛应⽤。
在过去的20年中，等温滴定量热技术（ITC）成为研究相互作⽤的常⽤⽅法。
随着现代ITC仪器的发展，ITC更加灵敏、快速、易⽤。
分⼦识别是⼀个复杂的过程，是⽣命活动的基础。
⽣物分⼦识别过程需要结合反应的热⼒学参数来阐明。
等温滴定微量量热法可以直接定量检测滴定反应过程中的热量变化，确定反应的结合常数K B 、结合计量⽐（n）、反应焓变（?H）、熵变（? S）、恒压热容（△Cp）和动⼒学数据（如酶促反应的Km和kcat ）等热⼒学参数，⽤来表征⽣物分⼦间的相互作⽤。
（完整版）等温滴定量热法在生命科学研究中应用等温滴定量热法在生命科学研究中应用等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线，原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。
微量热法具有许多独特之处。
它对被研究体系的溶剂性质、光谱性质和电学性质等没有任何限制条件，即具有非特异性的独特优势，样品用量小，方法灵敏度和精确度高(本仪器最小可检测热功率2 nW，最小可检测热效应0.125uJ，生物样品最小用量0.4ug，温度范围2 0C - 80 0C，滴定池体积1.43 ml)。
实验时间较短(典型的ITC实验只需30-60分钟，并加上几分钟的响应时间)，操作简单(整个实验由计算机控制，使用者只需输入实验的参数，如温度、注射次数、注射量等，计算机就可以完成整个实验，再由Origin软件分析ITC得到的数据)。
测量时不需要制成透明清澈的溶液, 而且量热实验完毕的样品未遭破坏，还可以进行后续生化分析。
尽管微量热法缺乏特异性但由于生物体系本身具有特异性，因此这种非特异性方法有时可以得到用特异方法得不到的结果，这有助于发现新现象和新规律，特别适应于研究生物体系中的各种特异过程。
ITC的用途获得生物分子相互作用的完整热力学参数，包括结合常数、结合位点数、摩尔结合焓、摩尔结合熵、摩尔恒压热容，和动力学参数(如酶活力、酶促反应米氏常数和酶转换数)。
ITC的应用范围蛋白质-蛋白质相互作用(包括抗原-抗体相互作用和分子伴侣-底物相互作用)；蛋白质折叠/去折叠；蛋白质-小分子相互作用以及酶-抑制剂相互作用；酶促反应动力学；药物-DNA/RN A相互作用；RNA折叠；蛋白质-核酸相互作用；核酸-小分子相互作用；核酸-核酸相互作用；生物分子-细胞相互作用；……加样体积：（实际体积）cell：1.43 ml，syringe：300 μl准备样品体积（最少量）cell：2 ml，syringe：500 μl样品浓度cell：几十μM到几mMsyringe：几百μM到几十mM测量Kb范围102-1012 M-1滴定实验前恒温30-60 min等温滴定量热实验所需时间，一般1.5-4 hr微量热技术(Microcalorimetry)(2008-05-27 19:58:14)标签：杂谈微量热法(包括等温滴定量热和差示扫描量热)是近年来发展起来的研究生物热力学与生物动力学的重要结构生物学方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续和准确地监测和记录一变化过程的量热曲线，原位(in situ)、在线(on-line)和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。
化学反应的热力学分析方法新技术一、引言化学反应的热力学分析是研究化学反应过程中能量变化的重要手段。
随着科技的发展，热力学分析方法也在不断更新和创新。
本文将介绍近年来涌现的化学反应热力学分析的新技术，并探讨其应用和优势。
二、等温滴定量热法等温滴定量热法是一种利用量热仪测量化学反应热的方法。
其原理是在恒温条件下，将反应物逐滴加入反应釜中，通过测量反应釜中温度的变化来计算反应热。
相比传统的等温量热法，等温滴定量热法具有较高的灵敏度和准确性，可以更精确地测量反应热。
三、热流量仪测定法热流量仪测定法是一种利用热流量仪测量化学反应热的方法。
热流量仪通过测量流过试样的热量，间接计算出反应热。
与传统的量热法相比，热流量仪测定法具有较高的灵敏度和快速响应的特点，可以实时监测反应过程中的热量变化。
四、微流控技术微流控技术是一种利用微流控芯片进行热力学分析的方法。
通过在微流控芯片中控制反应物的流动速度和反应时间，可以实现对反应过程的精确控制。
微流控技术在化学反应热力学分析中具有快速、自动和高效的优势，可以大大提高实验的效率和准确性。
五、差示扫描量热法差示扫描量热法是一种基于差示扫描量热仪的热力学分析方法。
其原理是将待测样品与参比样品同时加热，通过测量两者之间的温差来计算反应热。
相比传统的量热法，差示扫描量热法具有更高的敏感性和准确性，可以测量相对较小的反应热。
六、计算机模拟方法计算机模拟方法是一种通过数值计算来分析化学反应热力学的方法。
通过建立反应物的分子动力学模型，可以模拟和预测反应过程中的能量变化。
计算机模拟方法具有高度灵活性和可扩展性，可以在实验之前进行预测和优化，为实验提供理论指导。
七、结论近年来，化学反应的热力学分析方法得到了快速发展和创新。
等温滴定量热法、热流量仪测定法、微流控技术、差示扫描量热法和计算机模拟方法等新技术的出现，不仅提高了热力学分析的精确性和灵敏度，还加快了实验的速度和提高了效率。
随着科学技术的不断进步，我们相信这些新技术将会在热力学研究领域发挥更大的作用，并推动化学反应的热力学分析取得更多的突破。
等温滴定量热法浓度优化等温滴定量热法（Isothermal Titration Calorimetry，ITC）是一种广泛应用于生物化学、药物研发和生物医学领域的实验技术。
通过测量反应在等温条件下产生或吸收的热量，ITC可以帮助研究人员了解溶液中分子之间的相互作用，如配体和受体的结合、酶催化反应以及protein-protein 相互作用。
通过优化等温滴定量热法的浓度参数，可以提高实验结果的质量和可靠性。
在优化等温滴定量热法的浓度时，有几个关键因素需要考虑。
首先是实验物质的浓度范围。
选择适当的浓度范围可以确保反应产生的热量在仪器检测范围内，同时减少背景噪音的干扰。
一般来说，对于正常的反应热量，推荐使用0.1-2.0 mM的溶液浓度。
然而，对于特殊的反应系统，需要事先进行一些初步实验，以确定最佳的溶液浓度范围。
其次是选择合适的滴定量。
滴定量是指每一次滴加到反应体系中的试剂量。
在进行等温滴定量热法实验时，滴定量的选择将直接影响到实验的敏感性和准确性。
一般来说，滴定量应尽量小，以确保每一次反应的热效应可以被仪器检测到，同时避免反应溶液的剧烈稀释或稀释不足。
通常情况下，滴定量为0.5-2.5 μL。
还需要考虑实验温度和缓冲溶液的选择。
实验温度应根据实验系统的特性和要研究的反应进行合理的选择。
对于生物体系来说，一般选择25℃或37℃作为实验温度。
而对于非生物体系，可根据需要进行调整。
缓冲溶液的选择应该使得反应体系在所选温度下保持稳定，并且不对测量结果产生干扰。
在实施等温滴定量热法浓度优化实验时，以下是一些有效的实践经验和技巧：1. 从简单到复杂地确定浓度范围。
首先可以进行一些初步实验，选择几个不同浓度的溶液进行测试，进而找到适合体系的浓度范围。
可以根据实验结果调整溶液的浓度，并逐渐扩大范围。
2. 手动混匀溶液，确保均匀分布。
在进行实验前，用手动混匀的方法将溶液均匀混合，以确保反应物质在整个试验过程中处于均一的状态。
ITC等温滴定量热法的操作说明ITC等温滴定量热法的操作说明1：概述ITC（Isothermal Titration Calorimetry）等温滴定量热法是一种常用于测量化学反应热效应和热力学参数的实验技术。
本文档将详细介绍ITC等温滴定量热法的操作步骤，以及常见问题的解决方案。
2：实验前准备2.1 仪器准备- 确保ITC仪器处于良好的工作状态，并进行必要的校准和检修。
- 检查仪器和相关设备的供电和冷却系统，确保正常运行。
- 准备实验所需的试剂和溶液，确保其纯度和浓度符合要求。
2.2 样品准备- 准备待测样品，确保样品的纯度和浓度符合实验要求。
- 储存样品时，注意避免暴露在空气中，以免影响实验结果。
- 如有需要，进行样品的预处理或稀释，以适应实验要求。
3：实验操作3.1 基本操作步骤- 打开ITC仪器，并进行必要的初始化设置。
- 准备试样，通常包括两种液体：溶剂和待测样品。
- 启动实验程序，并按照程序指导添加试样。
- 进行实验过程中，根据实验需要，调整实验参数，如温度、压力、浓度等。
- 当实验结束后，关闭仪器，保存实验数据。
3.2 添加试样的注意事项- 添加试样时，应尽量避免形成气泡，以免影响测量结果。
- 在添加试样前，应将样品和溶剂在相同工作温度下达到热平衡。
- 添加样品时，应使用精确的加样装置，控制加样速度和时间。
4：数据分析4.1 数据处理与解读- 对实验数据进行处理和分析，包括热流曲线的积分和差分操作等。
- 利用数据做曲线拟合，计算反应热和其他热力学参数。
- 根据数据分析结果，解释实验现象和反应机制。
4.2 出现问题的解决方案- 如实验数据异常或与理论不符，可检查实验操作是否正确，并逐步排除可能的问题。
- 如仪器出现故障或异常，应及时联系厂家进行维修或咨询专业人员的意见。
5：附件本文档附带以下附件：- ITX仪器操作手册6：法律名词及注释本文档中涉及的法律名词及其注释如下：- 1：涉及附件: 本文档所附带的相关文件或资料。
等温滴定微量热仪(ITC)简介等温滴定量热法在生命科学研究中应用申明：本资料来源于网络，版权归原作者所有！等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线，原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。
微量热法具有许多独特之处。
它对被研究体系的溶剂性质、光谱性质和电学性质等没有任何限制条件，即具有非特异性的独最小可检测热效应0.125uJ，生物样品最小用量0.4ug，温度范围2 0C - 80 0C，滴定池体积1.43 ml)。
实验时间较短(典型的ITC实验只需30-60分钟，并加上几分钟的响应时间)，操作简单(整个实验由计算机控制，使用者只需输入实验的参数，如温度、注射次数、注射量等，计算机就可以完成整个实验，再由Origin 软件分析ITC得到的数据)。
测量时不需要制成透明清澈的溶液, 而且量热实验完毕的样品未遭破坏，还可以进行后续生化分析。
尽管微量热法缺乏特异性但由于生物体系本身具有特异性，因此这种非特异性方法有时可以得到用特异方法得不到的结果，这有助于发现新现象和新规律，特别适应于研究生物体系中的各种特异过程。
ITC的用途获得生物分子相互作用的完整热力学参数，包括结合常数、结合位点数、摩尔结合焓、摩尔结合熵、摩尔恒压热容，和动力学参数(如酶活力、酶促反应米氏常数和酶转换数)。
ITC的应用范围蛋白质-蛋白质相互作用(包括抗原-抗体相互作用和分子伴侣-底物相互作用)；蛋白质折叠/去折叠；蛋白质-小分子相互作用以及酶-抑制剂相互作用；酶促反应动力学；药物-DNA/RNA相互作用；RNA折叠；蛋白质-核酸相互作用；核酸-小分子相互作用；核酸-核酸相互作用；生物分子-细胞相互作用；……加样体积：（实际体积）cell：1.43 ml，syringe：300 μl准备样品体积（最少量）cell：2 ml，syringe：500 μl样品浓度cell：几十μM到几mMsyringe：几百μM到几十mM测量Kb范围102-1012 M-1滴定实验前恒温30-60 min等温滴定量热实验所需时间，一般1.5-4 hrSample Preparation Guidelines (ITC).Proper sample preparation is essential for successful ITC testing. In particular, the minimal guidelines below must be strictly followed to insure an accurate estimate of stoichiometry (n), heat of binding (H), and binding constant (Kb) (or dissociation constant Kd = 1/Kb).1.) The macromolecule solution (the sample to be placed in the reaction cell) must have a volume of at least2.1 ml. The lowest concentration which can be studied is 3 M and this is adequate only for tight binding where Kd is smaller than 1 M. For weaker interactions, the macromolecule concentration should be 5 times Kd, or higher if possible. Preferably, the macromolecule solution should be dialyzed exhaustively against buffer for final equilibration.2.) The ligand solution (the sample to be placed in the injection syringe) must have a volume of at least 0.7 ml. Its concentration should be at least 10 times higher than the concentration of macromolecule (if the macromolecule has multiple binding sites for ligand, then the ligand concentration must be increased accordingly). The buffer solution in which the ligand is dissolved should be exactly the same buffer against which the macromolecule has been equilibrated.3.) After both solutions have been prepared, the pH of each should be checked carefully. If they are different by more that 0.05 pH units, then one of the solutions must be back-titrated so they are within the limit of 0.05 pH units. If any particles are visible in either solution, they should be filtered out.4.) If possible, the concentrations of both solutions should be accurately determined after final preparation. Accurate determination of binding parameters is only possible if concentrations of binding components are known precisely.5.) At least 20 ml of buffer must be sent along with the two samples, since this is used for rinsing the cell and for dilution if necessary.6.) If possible, DTT should be avoided as a disulfide reagent and replaced by -mercaptoethanol or TCEP.等温滴定微量热仪（ITC）基本介绍等温滴定微量热仪（ITC）基本介绍（美国MicroCal ，美国微量热公司）仪器设备名称：等温滴定微量热仪制造国别：美国制造厂商：美国微量热公司规格型号：VP-ITC品牌：MicroCal总代理商：华嘉（香港）有限公司技术指标：短期噪音水平：0.5纳卡/秒(2 纳瓦)。
等温滴定量热法
等温滴定量热法是一种非常重要的实验方法，它可以用来测量溶液中温度与单位时间内所吸收的热量之间的关系。
自发明以来，它已经成为热力学实验中的一种重要方法，并在诸如热力学、物理化学等学科中得到广泛应用。
等温滴定量热法是一种相对简单的实验方法，它需要根据温度上升和下降的情况，来衡量溶液中的热量吸收情况。
它的实验原理是：在一段时间内，将溶液放置在可控温度的实验箱中，当温度提高时，溶质被溶液吸收的热量会比温度降低时要大，从而可以测量热力学的参数。
等温滴定量热法是一种比较常用的热力学实验方法，它不仅能够测量某一特定溶液的吸热或放热情况，而且可以用于测量热力学参数，如比热容、汽化温度、沸点等。
等温滴定量热法是一种比较有效的实验方法，它的测量结果可以反映出物理化学的实际状况。
它的实验过程比较简单，可以在室温下完成，而且测量的精确度很高，因此在化学、物理、热力学等学科中得到了广泛应用。
另外，等温滴定量热法在现代化工程中也得到了广泛应用。
比如，它可以用来测量热负荷和用于进行蒸汽锅炉安全运行时的安全参数，也可以用于溶剂萃取、蒸发空气冷却、热交换量的测量等，以及热分析中的热容量、热导率和热稳定性的测定等。
因此，等温滴定量热法是实验测量技术中的一种重要方法，它可以用来测量某一特定溶液的吸热或放热情况，以及热力学参数，如比
热容、汽化温度等。
它的简单性、精确度和准确性使其在化学、物理、热力学等学科中非常具有重要的意义，也使得它在现代化工程中得到了广泛的应用。
等温滴定量热技术等温滴定量热技术是一种能够研究溶解热、反应热、吸附热等反应热效应的实验技术，它可以定量测定物质的热化学性质，包括热力学参数、化学反应动力学参数等，是化学和材料学等领域重要的实验手段。
等温滴定量热技术的基本原理是利用微量热法，即将被测样品在等温条件下加入到反应池中，在一定时间间隔内持续注入滴定液，从而发生显著反应，这种反应释放或吸收能量，导致反应体系温度发生变化，采用高精度量热仪测量反应热效应，从而获得样品的热化学性质。
等温滴定量热技术主要分为平衡热量法和动态热量法两种方法。
平衡热量法是通过将反应池维持在等温状态，在一段时间内等待反应体系达到平衡状态，然后进行滴定，测量反应热量。
这种方法可以减小反应过程中外部因素的影响，同时也可以消除热失控导致的误差。
而动态热量法则是在滴定过程中，实时测量反应体系的温度变化，以获得较高的实验精度。
等温滴定量热技术具有以下优点：首先，利用等温条件进行反应，保证了反应的可重复性。
其次，在不需求外热量或热量损失的情况下，可以实现精确测量反应热，避免了因加热或冷却而导致的额外的误差。
最后，由于等温滴定量热技术对样品量非常少，因此可以进行昂贵或危险的试剂或实验条件下的实验。
应用等温滴定量热技术可以获得广泛的信息，例如热容、热力学参数、化学反应速率、表面化学结构和气体吸附等。
在实践中，等温滴定量热技术用于研究各种类型的化学反应，例如溶解、复分解、离子交换等。
它还可以应用于催化剂、生物大分子、纳米材料等重要领域的研究。
总之，等温滴定量热技术是一种非常强大的实验手段，它可以准确地测定物质的热化学性质，从而为学术研究和工业生产提供关键的信息。
随着技术的不断完善，这种实验技术将会发挥越来越重要的作用。
Example 2：Isothermal Titration Calorimetry for AIDS Drug Development
艾滋病药物的等温滴定量热法
人们付出了大量努力，试图利用药物帮助艾滋病受害者减少艾滋病流行所造成病毒感染。
热力学通过热力学解释实验热-滴定数据为此作出了贡献。
如图2-1所示，在艾滋病毒感染人体细胞后，产生一系列艾滋病毒的复制步骤。
受感染的细胞表达蛋白和蛋白酶；蛋白酶的作用在于蛋白酶切割聚蛋白，裂解的蛋白重新组装得到一个新的艾滋病病毒。
图2-1 HIV蛋白酶在病毒复制过程中合成新的病毒
为了防止形成新的病毒，可通过引入药物使使HIV蛋白酶失活。
这种药物叫做蛋白酶抑制剂，可阻止多聚蛋白的分裂，如图2 – 2所示。
图２-２通过一直HIV蛋白酶从而组织新病毒的生成
蛋白酶和抑制剂的关系可以用传统的锁钥机制描述，如图2 – 3所示。
抑制剂必须有正确的形状才能进入艾滋病毒蛋白酶的活性位点，其中，抑制剂是“钥匙”，必须保证适合蛋白酶这把“锁”。
然而，因为突变，艾滋病毒蛋白酶的活性位点可以以不同的形式存在，如图2 - 3所示；原株的活性位（锁）用“十”字表示，突变株活性位点（锁）用六边形表示。
我们需要寻找一种同时适合这两种形状的“锁”的药物（钥匙），不仅可以和原株蛋白酶的活性位点结合也与突变株蛋白酶的活性位点结合。
热力学可以帮助识别最佳候选药物。
图２-３传统“锁-匙”机制
图2-4列出两种候选药物1和2。
药物2比1具有更好的适应性，同药物1相比的，它具有不对称的功能；甲苯基团的称性比叔丁基弱。
此外，药物2更灵活，因为它有两个可旋转的键，而药物1只有一个。
不对称和灵活性为药物提供了额外的构象，可以适应一个艾滋病毒突变位点。
图２-４两种候选药物１和２
为定量衡量药物的效果，Ｏhtaka和Freire利用等温滴定量热（ITC）的热力学分析数据得到所需结果。
用A表示艾滋病毒蛋白酶，B表示抑制剂（药品）。
我们定义一个解离常数Kd和它的倒数，缔合常数Ka，下标d表示分离，ａ表示缔合。
其中，[]代表在水溶液中物质的浓度。
对于好的药物,我们希望Kd很小或者Ka很大。
在A + B ----AB的反应中，A(蛋白酶)和B(抑制剂)的结合由标准焓和标准熵决定。
上o标表示标准状态。
等温滴定量热(ITC)提供了Kd(或Ka)以及∆Ｈo。
从以上数据，我们可以计算∆G o和∆S o。
图2-５显示第一代12种候选药物实验结果∆Go, ∆Ho和T∆So，蛋白酶是原株状态。
在图2 – 5中，第一代药物包含相对刚性分子（不灵活）。
使得它与蛋白酶活性位点相互作用不牢固，组成别的蛋白酶，因此，对这些药物，∆ Ho越小越好；在某些情况下，它是负值，绝对值小，而在其他情况下，∆ho是正值，此时最不利的。
然而，-T∆So是有利的，是因为结合后的疏水性药物释放水合分子，随后的熵的增加。
图２-５１２种候选药物
因为刚性的药物分子没有的灵活药物分子那么适合突变株蛋白酶,第二代药物比第一代药物相对灵活一些，如图２-５所示，这些药物的∆Ｈo是负值，但-T／So不是很好，是因为：当灵活的钥匙进入被限制的锁，它不仅失去平移的自由，同时也失去了旋转的自由，这些损失导致了熵的降低，这是不好的，灵活的药物比刚性药物有更大的熵损失(|-T/So|更小)。
平衡的不利熵损失较好的方法是更有牢固的结合（也就是更大的负值∆Ｈo）。
有图2-5可知，药品11和12是最好的，因为∆Ｈo和∆Go都较大且都是负值。
蛋白酶基因的突变是很常见的，所以我们需要找出一种抑制剂，它对原株蛋白酶有效，同时至少也对一些突变株的蛋白酶有效
从图2-6显示了不同抑制剂对原株蛋白酶和突变株蛋白酶的等温滴定量热的结果，纵坐标是解离常数Kd，我们希望Kd越小越好。
从图中可知大的负值∆Ｈo是很重要的，适应性好的11和12号药物对原株蛋白酶和突变株蛋白酶都具有较小的解离常数。
我们从图2-5的结果可知抑制剂11和12拥有这两种有利的特点∆Ｈo和∆Go都较大且都是负值，但从图2-6我们可以知道，虽然抑制剂11和12对原株蛋白酶的抑制作用都很好，但11对突变株蛋白酶的抑制作用更好，11优于12.
图2-6 10种抑制剂对原株蛋白酶和突变株蛋白酶的解离常数对于灵活的抑制剂，熵损失更大，这个损失是不利的，因为它降低了负值∆Go的绝对值。
我们希望得到一种抑制剂，它既有大的负值∆Ho，同时对突变株的蛋白酶也是有用的。
这种抑制剂不必太灵活，以免熵损失很大。
这个例子表明热力学研究对识别最优的HIV抑制剂有指导作用。
