感受态细胞吸收DNA分子三将目的基因导入受体细胞-牡丹江一中

牡一中高二学年下学期4月份月考生物试卷一、选择题1.以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。

据图分析，下列说法正确的是（）A. 催化①过程的酶是RNA聚合酶B. ④过程发生的变化是引物与单链DNA结合C. 催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温D. 如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%2.在DNA测序工作中，需要将某些限制性核酸内切酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA分子中的物理参照点，这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。

假设有以下一项实验：用限制酶HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。

据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA分子上的限制位点数目是以下哪一组？()A. HindⅢ1个，BamHⅠ2个B. HindⅢ2个，BamHⅠ3个C. HindⅢ2个，BamHⅠ1个D. HindⅢ和BamHⅠ各有2个3.下列关于基因工程的叙述，正确的是( )A. 构建表达载体时需要在目的基因前加上起始密码子B. 农杆菌转化法可以将目的基因随机插入受体细胞的染色体DNA上C. 标记基因中不能有限制酶的识别位点以防止其被破坏而失去作用D. 导入人胰岛素基因的大肠杆菌可直接生产出有活性的人胰岛素4.SPL蛋白是植物中广泛存在的一类调控基因转录的分子。

不同植物的SPL蛋白结构不同，但均有一个大约由80个氨基酸构成的结构相同的功能区，可识别并结合到某些基因的特定区域。

SPL基因最初是从植物花序cDNA文库中得到的。

下列相关叙述正确的是A. SPL是80个氨基酸构成的蛋白质B. SPL基因能在花序细胞中表达C. SPL可催化特定基因的翻译过程D. SPL在不同绿色植物中功能差异较大5.基因工程是在DNA分子水平进行设计施工的，在基因操作的以下步骤中,不进行碱基互补配对的是( )①人工合成目的基因②E.coliDNA连接酶结合目的基因与运载体③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测和鉴定⑤个体生物学水平的鉴定A. ①③B. ③⑤C. ①⑤D. ②③④6.下列有关生物技术应用的叙述，正确的是（）A. 利用植物组织培养技术培育花药获得单倍体植株属于单倍体育种B.动物细胞培养液通常含有葡萄糖，蛋白质，无机盐，维生素和动物血清C. 将愈伤组织细胞进行诱变处理并筛选得到抗盐碱的烟草新品种D. 将α-抗胰蛋白酶基因转入乳腺细胞培育乳汁中含有该酶的转基因羊7. 某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。

1．基因工程的操作过程与应用（1）基因工程的操作步骤（2）基因工程的应用：培育转基因植物和转基因动物，生产基因工程药物，进行基因治疗。

（3）目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞到受体细胞染色体的DNA上→表达精卵发育→获得具有新性状的动物混合→感受态细胞吸收DNA分子（4）基因治疗与基因诊断的不同点原理操作过程进展基因治疗基因表达利用正常基因导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗(疾病)临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况临床应用2．蛋白质工程（1）流程图写出流程图中字母代表的含义：A．转录，B．翻译，C．分子设计，D．多肽链，E．预期功能。

（2）结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。

（3）应用：主要集中应用于对现有蛋白质进行改造，改良生物性状。

学科&网考向一目的基因的获取及基因表达载体的构建1．利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素，下列相关叙述正确的是A．人和大肠杆菌在合成胰岛素时，转录和翻译的场所都是相同的B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C．通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌D．选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高【参考答案】D【试题解析】人是真核生物，大肠杆菌是原核生物，真核细胞转录在细胞核内，原核细胞在拟核中，A 错误；不同的限制酶识别不同的核苷酸序列，B错误；通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌或虽已导入受体，但没有表达，C错误；D.利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素时，选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高，D正确。

第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[学习目标] 1.熟悉目的基因导入受体细胞的方法。

2.了解农杆菌转化法。

3.画出DNA 分子杂交示意图。

4.目的基因的检测方法的比较。

知识点一 将目的基因导入受体细胞知识梳理1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内□01维持稳定和表达的过程。

2．将目的基因导入植物细胞(1)□01农杆菌转化法：将目的基因导入□02双子叶植物和裸子植物最常用的方法 ①农杆菌特点：当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的□03酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的□04Ti 质料上的T －DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的□05DNA 上。

②受体细胞：植物□06体细胞或受精卵。

③操作过程：将目的基因插入到□07Ti 质粒的T­DNA 上―→转入□08农杆菌―→导入□09植物细胞―→目的基因整合到□10受体细胞染色体的DNA 上―→目的基因表达。

(2)基因枪法：适用于□11单子叶植物，成本较高。

是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的□12表达载体DNA 打入受体细胞中，使目的基因与其整合并□13表达的方法。

(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□14柱头；然后，滴加□15DNA(含目的基因)，使目的基因借助□16花粉管通道进入受体细胞。

该方法十分简单经济。

我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。

3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：□01显微注射技术，采用最多、最有效的方法。

(2)受体细胞：动物的□02受精卵。

(3)操作过程：将含有□03目的基因的表达载体提纯―→取卵(□04受精卵)―→□05显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，□06移植到雌性动物的□07输卵管或子宫内―→获得□08新性状的动物。

4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法01Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细①用□胞称为□02感受态细胞)。

专题21（押江苏卷非选择题）基因工程从近几年的新课标卷的考查知识点来看，第23题主要考查基因工程知识。

基因工程的流程和应用是高考的必考点，且常考常新，预计2022年高考也不例外，依然会对其进行考查，有可能与新的科研实事结合，综合考查基因工程的流程和应用，比如新冠病毒疫苗的研发，还可能与细胞工程、胚胎工程等综合起来考查。

能准确识记课本内容，会正确分析图形，并从题干中摘取关键信息，规范答题。

能够结合背景材料分析问题、解决问题。

从题图中提取有效信息并结合这些信息，运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确结论。

把握知识间的内在联系，要求能运用所学知识解决生活中的一些实际问题，或运用所学知识解释生活中的一些现象1．（2021江苏高考真题）某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag 标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题：(1)目的基因的扩增①提取真菌细胞______，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。

②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致______。

③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有______A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性(2)重组质粒的构建①将Sma I切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进______，形成A-m结合体。

将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及______酶等，完成质粒的环化。

2023年高考生物模拟试卷注意事项1．考生要认真填写考场号和座位序号。

2．试题所有答案必须填涂或书写在答题卡上，在试卷上作答无效。

第一部分必须用2B 铅笔作答；第二部分必须用黑色字迹的签字笔作答。

3．考试结束后，考生须将试卷和答题卡放在桌面上，待监考员收回。

一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。

每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列关于生物变异和进化的叙述，正确的是（）A．基因突变会改变基因的结构和排列顺序B．二倍体植物和四倍体植物之间存在地理隔离C．秋水仙素诱导染色体数目加倍过程中可能发生基因重组D．在工业污染的条件下，桦尺蠖群体中黑色基因频率定向升高2．在人体内环境中可以发生的生化反应是（）A．组织液中某些蛋白质的合成B．麦芽糖的水解C．抗原与抗体的特异性结合D．葡萄糖的氧化分解3．二倍体百合（2n=24）形成配子过程中的细胞图像如下，下列叙述错误的是（）A．图②处于减数第二次分裂后期B．图③中，同源染色体的姐妹染色单体发生交叉互换C．图⑤中，移向两极的基因组成有可能不相同D．上述细胞分裂图像按进行时序排序为①→③→⑤→②→④4．澳大利亚一项新研究发现，女性在怀孕期间除多吃富含蛋白质和脂质的食物外，还应多吃富含植物纤维素的食物，这有利于胎儿免疫系统的发育。

下列相关叙述错误的是（）A．蛋白质、核酸和纤维素都以碳链作为基本骨架B．组成人体蛋白质的某些氨基酸必须从食物中获得C．人体内的细胞能分泌分解纤维素的酶将其水解为单糖D．胆固醇既参与人体血脂的运输，也参与细胞膜的构成5．如图表示桑基鱼塘生态系统部分能量流动示意图，图中字母代表相应的能量。

下列叙述错误的是（）A．b表示桑树呼吸作用散失的能量B．d表示桑树用于生长、发育、繁殖的能量C．如果g表示蚕传递给分解者的能量，则f表示未被利用的能量D．d/a×100%可以表示第一营养级到第二营养级的能量传递效率6．用含32P的培养基培养醋酸杆菌一段时间，能在醋酸杆菌中检测出放射性的化合物是（）A．油脂B．腺苷C．核苷酸D．丙酮酸二、综合题：本大题共4小题7．（9分）蛛丝蛋白纤维是目前已知的最坚韧的天然纤维之一，又被称为“生物钢”。

2020年牡丹江市第一高级中学高三生物第二次联考试卷及答案解析一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。

每小题只有一个选项符合题目要求。

1. 形成蛋白质结构的层次，从小到大依次是（）①氨基酸①C、H、O、N等元素①氨基酸脱水缩合①多肽链盘曲、折叠①多肽①蛋白质A.①→①→①→①→①→①B.①→①→①→①→①→①C.①→①→①→①→①→①D.①→①→①→①→①→①2. 下列有关细胞的表述，正确的是（）A. 所有细胞都能通过减数分裂、有丝分裂或无丝分裂方式进行细胞增殖B. 有细胞结构生物，体内细胞衰老就是个体的衰老C. 细胞凋亡是正常的生理过程，是由基因决定的细胞编程性死亡D. 克隆羊多利的核移植和植物组织培养实验能分别证明动、植物细胞具有全能性3. 下列关于细胞代谢的叙述,正确的是()A. 适宜条件下,水稻幼苗叶肉细胞中O2浓度:叶绿体>细胞质基质>线粒体B. 一定条件下乳酸菌细胞呼吸产生的NADPH可来自水和有机物C. 水稻幼苗在成长的过程中,叶肉细胞中产生ATP最多的场所是线粒体内膜D. 同一细胞中同时存在催化丙酮酸生成乳酸或酒精的酶4. 下列有关糖类的叙述，错误的是（）A.糖类可以简写为（CH2O）B.白糖属于单糖C.淀粉的水解产物是还原糖D.虾和蟹的外壳中都含有多糖5. 下列有关酶的叙述中，正确的是（）①酶是由具有分泌功能的活细胞产生的①酶催化化学反应的原理是提供化学反应所需的能量①酶是活细胞产生的①酶都是蛋白质①酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸①酶在代谢中有多种功能①酶在生物的新陈代谢和生长发育中起调控作用①酶只起催化作用A.①①①B.①①①C.①①①D.①①①6. 图甲、乙、丙为某一动物细胞分裂后期的示意图。

下列相关叙述错误的是（）A. 由图示判断该动物是雌性B. 甲细胞通过分裂最终形成4个成熟的生殖细胞C. 三个细胞都含有同源染色体D. 丙细胞变异的原因是减数第一次分裂后期一对同源染色体没有分开7. 下列关于实验原理或实验结果的叙述正确的是（）A.根据叶绿体色素在层析液中溶解度不同可以分离色素B.显微镜下观察到的质壁分离是细胞质与细胞壁的分开C.探究温度对酶活性的影响时最好选用过氧化氢酶作为实验材料D.观察植物根尖分生区细胞有丝分裂时，可观察活细胞中染色体的变化8. “种豆南山下,草盛豆苗稀。

2020届牡丹江市第一高级中学高三生物上学期期末试卷及答案解析一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。

每小题只有一个选项符合题目要求。

1. 下列关于分泌蛋白的合成、加工、运输和分泌的叙述中错误的是（）A. 分泌的方式是胞吐，需要细胞呼吸提供A TPB. 分泌过程说明了细胞膜具有一定流动性C. 该过程前后高尔基体的膜面积基本保持不变D. 参与该过程的具膜细胞器有核糖体、内质网、高尔基体、线粒体2. 如图为动、植物细胞亚显微结构模式图，下列有关该图的叙述错误的是（）A.图的下半部分可以表示洋葱根尖成熟区细胞B.动物细胞有丝分裂时纺锤体的形成与a有关C.动物细胞在清水中会胀破，是因为没有结构iD.是否具有h不能作为确定植物细胞的标志3. 下列关于“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”实验的叙述，错误的是（）A. 将酵母菌接种到培养液中，并进行第一次计数B. 从静置的培养液中取适量上清液，用血细胞计数板计数C 每天定时取样，测定酵母菌细胞数量，绘制种群数量动态变化曲线D. 营养条件是影响酵母菌种群数量动态变化的因素之一4. 下列关于植物生长素的叙述，错误的是（）A. 保留有芽的插条易生根是因为芽能产生生长素B. 单侧光照射导致胚芽鞘背光侧合成的生长素较多C. 植物的顶端优势现象能体现生长素作用的两重性D. 生长素的作用会因细胞的成熟情况不同而有较大差异5. 科研人员研究核质互作的实验过程中，发现T-CMS细胞质雄性不育玉米可被显性核恢复基因Rf2（R基因）恢复育性，T-URF13基因（T基因）表示雄性不育基因，其作用机理如右图所示。

下列叙述正确的是A.在线粒体的内外均有核糖体分布B.细胞中R基因和T基因均成对存在C.R基因通常不会通过父本传递给下一代D.核（质）基因型为Rr（T）的个体自交，后代中出现雄性不育的概率是1/26. 如图为人体血糖平衡的调节示意图，图中字母表示物质，甲和乙代表不同的细胞，抗体1和抗体2只与相应的受体结合。

分子生物学综合实验论文题目:绿色荧光蛋白(GFP)的基因克隆及表达中国·黄石2010年12月绿色荧光蛋白（GFP）基因的克隆与表达胡丽丹（湖北师范学院生命科学院0803班湖北黄石 43500）摘要：绿色荧光蛋白（GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。

用碱裂解法提取的的质粒pEGFP-N3和pET-28α经过Bam HI和Not I双酶切连接后，得到pET-28α-pEGFP-N3重组质粒。

取部分的重组质粒做酶切实验，验证重组质粒的存在性，剩下的重组质粒导入表达菌 E. coLi BL-21大肠杆菌感受态细胞中。

重组有GFP基因的E. coLi BL-21，在含有1μL/mL的卡纳霉素的LB培养基上培养。

当A600达到0.7时，用终浓度为0.8mM 的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养3小时，离心得到下层绿蓝色沉淀物即可。

关键词：绿色荧光蛋白 GFP 基因的克隆荧光蛋白水母CLoning and Expression of Green FLuorescent Protein GeneHU Li-Dan( Class three Grade eight,College of Life Sciences department,Hubei Normal university ,Huangshi 435000)Abstract：Green fluorescent protein（GFP）,one kind of bioluminenscent proteins ,hasbeen found existing in the internal of Coelenterates,such as fellyfish,polyp and coral pEGFP-N3 and pET-28αwas harvested by sodium dodecylsulfate(SDS) alkaline process extraction and Agarose Gel Electrophoresis.After treating the two targeted plasmids with Bam HI and Not I,the recombinant plasmid,namely pET-28α-pEGFP-N3, can be retrieved by furthermore Agarose Gel Electrophoresis. Taking slight recombinant plasmid proves that recombinant plasmid does exist by dienzyme cutting(Bam H I and Not I).The recombinant plasmid lefting would be transported to E. coLi BL-21the competent cells. E. coLi BL-21containing recombinant GFP gene was grown overnight in LB solid medium containing kanamycin (Final concentration: 1 μL/mL). When absorbance at 600 nm value was 0.7, isopropyL β-D-thiogalactopyranoside was added to 0.8 mM and the incubation was continued an addition 3 h.Key words:Green fluorescent protein Fellyfish Genetic Cloning Fluorescin目录1.前言：01.1绿色荧光蛋白（GREEN FLUORESCENT PROTEIN，GFP）01.1.1 GFP研究背景01.1.2 GFP研究应用11.2基因的克隆与表达22.实验试剂及实验仪器：42.1实验试剂与材料：52.2实验仪器：63.实验方法63.1质粒提取方法:63.2琼脂糖凝胶电泳及回收:83.3酶切及连接：93.4E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入：113.5酶切验证重组质粒：123.6GFP基因的表达133.6.1活化菌种133.6.2扩大培养133.6.3 IPTG诱导GFP基因的表达134.结果与分析134.1质粒提取过程中现象与结果：134.2琼脂糖凝胶电泳144.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入结果：154.4酶切验证重组质粒154.5GFP基因的表达结果：165.讨论：165.1提取质粒出现图六的原因是：165.2琼脂糖凝胶电泳出现图七、图八原因：175.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入出现图九、十原因:17 5.4酶切验证重组质粒出现图十一原因：195.5GFP基因的表达结果如图十二、十三原因：196.参考文献20前言：1.1绿色荧光蛋白（green fluorescent protein ，GFP ）1.1.1 GFP 研究背景绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。

2019-2020学年牡丹江市第一高级中学高三生物上学期期中考试试卷及答案一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。

每小题只有一个选项符合题目要求。

1.下列关于人体各级神经中枢的叙述，错误的是（）A. 下丘脑与人体血糖平衡和水盐平衡调节相关B. 脑干受撞击严重损伤后可能导致呼吸骤停C. 醉酒后走路不稳与小脑功能紊乱相关D. 排尿反射必须经过大脑皮层和脊髓的协调配合才能完成2.下列有关生命系统的叙述正确的是（）A. 生命系统中各生物体均具有多种组织、器官和系统组成的有机体B. 生物圈是地球上最基本的生命系统和最大的生态系统C.H7N9流感病毒不属于生命系统，因此它不属于生物D. 一个池塘里的全部蝌蚪不是一个种群3.人体皮肤瘙痒的感觉与一种神经递质——5-羟色胺有关。

下列有关叙述,正确的是A.痒觉和痛觉的形成都属于人体的非条件反射B.当神经细胞兴奋时,Na+会内流，但胞内Na+浓度仍低于胞外C.当神经递质进入受体细胞后,会引起后者兴奋或抑制D.神经递质、激素、酶等细胞间信息分子发挥完作用后会被灭活4.如图为人体免疫细胞参与免疫过程的图解，其中①表示抗原，②、③表示物质，④~⑧代表细胞，虚线箭头表示间接作用。

下列叙述错误的是（）A.③是受体，能特异性结合①B.人体内的细胞④能合成分泌细胞因子C.⑧是细胞毒性T细胞D.相同抗原再次侵入时，⑦快速分泌②5.下列有关生物学实验的叙述，正确的是（）A.用苏丹Ⅲ染液可将花生子叶细胞染成橘红色B.观察洋葱根尖的成熟区细胞染色体清晰可见C.检测产生酒精时，向试管中缓慢滴加溶有重铬酸钾的浓硫酸溶液D.分离细胞中各种细胞器和叶绿体中的色素都用差速离心法6.如图表示人体和人体细胞内某些信息传递机制的模式图，图示中箭头表示信息传递的方向，下列有关叙述中，不正确的是（）A. 如果该图表示二次免疫反应，若c为抗体，则a表示记忆细胞，b表示浆细胞B. 如果a表示抗原，b表示吞噬细胞和T细胞，c为B细胞，则该过程表示体液免疫C. 如果该图表示反射弧，则其中的信息是以局部电流的形式传导的D. 如果图中a为下丘脑，b为垂体，c为肾小管和集合管，则d和e为同一种物质7.通过突触和神经递质可以实现两个神经元之间兴奋的传递，下列说法正确的是（）A.神经递质都是大分子物质，在突触前膜以胞吐方式释放B.突触后膜通常为另一个神经元的树突膜或轴突膜C.神经递质作用于突触后膜，使突触后膜电位变为外负内正D.神经元间传递信息的方式与精子和卵细胞间的识别方式不同8.在25Ⅲ左右的环境里，喜马拉雅兔的毛色呈现“八端黑”的特点，即四肢和头部的尖端、尾巴和耳部的毛为黑色，其余部分为白色；但在>30Ⅲ的环境里长出的毛全为白色。