实验四细菌的芽孢染色

实验四.细菌芽孢染色一. 目的要求：目的：掌握细菌芽孢染色方法内容：１．学习并掌握芽孢染色法２．初步了解芽孢杆菌的形态特征二. 基本原理：芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。

因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。

三. 器材1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃）2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液0.05%碱性复红蒸馏水3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等二甲苯.香柏油四. 操作步骤：一）方法1：1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。

2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。

5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗.6.制片干燥后用油镜观察。

芽孢呈绿色，菌体呈红色。

二）方法2：1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。

2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。

3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min .4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。

5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。

6.加复染液染2-3分钟，水洗。

7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。

五.实验报告：1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。

1. 了解芽孢的形态和结构特点；2. 掌握芽孢染色原理和操作方法；3. 观察芽孢的染色效果，加深对芽孢形态结构的认识。

二、实验原理芽孢是细菌在生长发育过程中形成的一种特殊细胞形态，具有厚而致密的壁，透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。

芽孢染色法是一种特殊染色方法，通过使用特定染料对芽孢进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。

三、实验材料1. 菌种：巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2. 染料：7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液（或石炭酸复红液和吕氏美蓝液）3. 仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、滴管等四、实验步骤1. 菌种培养：将巨大芽孢杆菌接种于营养琼脂斜面，37℃培养24小时。

2. 涂片：取一洁净无脂的载玻片，中央滴一小滴无菌水，用无菌操作的方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂片面积约为1-1.5cm²，涂片于室温中自然干燥。

3. 固定：将菌面朝上，通过火焰2-3次固定（温度以不烫手为宜）。

4. 初染：在制片上滴加7.6%饱和孔雀绿液，染色5-10分钟。

5. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。

6. 复染：在制片上滴加0.5%蕃红液，染色1-2分钟。

7. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。

8. 吸干：用吸水纸吸干制片上的水分。

9. 观察显微镜：将制片置于显微镜下观察，观察芽孢的染色效果。

在显微镜下观察到，巨大芽孢杆菌的菌体呈红色，芽孢呈绿色，两者颜色对比明显。

芽孢位于菌体中央或次极端，使菌体膨大呈梭状。

六、实验讨论1. 芽孢染色法是一种特殊染色方法，可以观察到芽孢的形态和结构特点。

通过染色，芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。

2. 在实验过程中，应注意控制染色时间，避免染色过度或不足。

染色时间过长，芽孢和菌体颜色过深，影响观察；染色时间过短，芽孢和菌体颜色过浅，难以观察。

3. 在实验操作过程中，应严格无菌操作，避免污染制片。

微生物实验报告细菌的芽孢染色观察实验刘欣怡201100140057生命科学基地班组别：周一下午三组同组者：曹平平，周楠，刘艺，刘希伟实验时间：2012年10月22号一、实验目的1、学习并掌握芽孢染色法2、了解芽孢杆菌的形态特征3、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验器材1、菌种枯草芽胞杆菌，梭状芽胞杆菌。

2、溶液和试剂5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。

3、仪器和其他用品酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），显微镜、吸水纸、擦镜纸，接种环，载玻片夹子，无菌水等。

三、实验原理1、芽孢又叫内生孢子(endosopre)，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。

细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。

2、芽孢菌体的特点：a.芽孢的含水率低，38%～40%。

b.芽孢壁厚而致密，分三层：外层是芽孢外壳，为蛋白质性质。

中层为皮层，由肽聚糖构成，含大量2，6-吡啶二羧酸。

内层为孢子壁，由肽聚糖构成，包围芽孢细胞质和核质。

芽孢萌发后孢子壁变为营养细胞的细胞壁。

c.芽孢中的2，6-吡啶二羧酸（简称DPA）含量高，为芽孢干重的5%～15%。

吡啶二羧酸以钙盐的形式存在，钙含量高。

在营养细胞和不产芽孢的细菌体内未发现2，6-吡啶二羧酸。

芽孢形成过程中，2，6-吡啶二羧酸随即合成，芽孢就具有耐热性，芽孢萌发形成营养细胞时，2，6-吡啶二羧酸就消失，耐热性就丧失。

d.含有耐热性酶。

芽孢由于有以上四个特点，使得芽孢对不良环境如高温、低温、干燥、光线和化学药物有很强的抵抗力。

细菌的营养细胞在70～80℃时10分钟就死亡，而芽孢在120～140℃还能生存几小时，营养细胞在5%苯酚溶液中很快就死亡，芽孢却能存活15天，芽孢的大多数酶处于不活动状态，代谢活力极低，所以，芽孢是抵抗外界不良环境的休眠体。

3、芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。

实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色1.一、目的要求学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。

了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。

二、实验材料菌种：金黄色葡萄球菌〔Staphylococcusaureus〕大肠杆菌〔〕试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。

三、实验原理革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。

是 1884年由丹麦病理学家ChristainGram创立的。

通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。

革染氏染色的根本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。

经过此法染色后，细胞保存初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。

大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。

革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。

经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。

碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。

当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保存在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。

用蕃红复染时染上红色。

四、操作步骤1. 细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。

制片：取菌种培养物常规涂片、枯燥、固定。

3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。

4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。

5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。

芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告引言：芽孢染色法是一种常用的微生物实验方法，用于鉴定和观察细菌的芽孢形态和结构。

本实验通过对芽孢的染色和显微镜观察，旨在了解芽孢的特征和鉴定微生物。

实验材料和方法：材料：培养基、细菌液、石蜡刀、石蜡、石蜡刷、显微镜等。

方法：1. 取一片培养基，加入细菌液并充分混合。

2. 将混合液倒入培养皿中，并在培养皿中心划出一条刀口。

3. 将培养皿置于恒温箱中，在适当的温度下培养一段时间，使菌落生长并形成芽孢。

4. 取一片玻片，将石蜡刀预热至适当温度，刮取培养皿中的芽孢。

5. 将刮取的芽孢涂在玻片上，并用石蜡刷均匀涂抹。

6. 将玻片放入石蜡中，使其固定。

7. 将固定的玻片放入显微镜下观察和拍摄。

结果与讨论：通过芽孢染色法，我们观察到了芽孢的形态和结构，并进行了鉴定。

芽孢的形态：芽孢是一种细菌的生殖结构，通常呈椭圆形或圆柱形。

在显微镜下观察，芽孢的外部有一个坚硬的壳，内部则是细胞质和核酸物质。

芽孢的大小和形状可能因不同的细菌而异。

芽孢的结构：芽孢的结构包括中心小体、核心区、内外壳等部分。

中心小体是芽孢的核心，含有DNA和其他重要的细胞质成分。

核心区是由中心小体周围的细胞质组成，其中包含了细胞的各种酶和营养物质。

内外壳是芽孢的保护层，能够抵抗外界环境的压力和不良条件。

鉴定微生物：通过观察芽孢的形态和结构，可以初步鉴定微生物的种类。

不同种类的微生物芽孢在形态和结构上可能存在差异，因此可以通过对比已知的芽孢特征，来判断未知微生物的种类。

此外，芽孢染色法还可以帮助鉴定微生物的生长条件和适应性。

实验中的注意事项：在进行芽孢染色实验时，需要注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，以避免外界细菌的污染。

2. 实验过程中要注意安全，避免接触有害物质和高温设备。

3. 实验前要熟悉显微镜的使用方法，并保持显微镜的清洁和调试。

4. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，以防止细菌的传播和感染。

芽孢染色法,实验报告(共4篇)第一篇：芽孢染色法的介绍芽孢染色法是一种常见的微生物学实验方法，用来鉴定芽孢菌属的微生物。

芽孢是一种耐热、抗干燥的微生物，具有高度的抵抗力。

芽孢染色法是通过对芽孢进行特定的染色方法，将其区分出来。

整个过程需要一定的技术和经验，但是准确性较高，具有广泛的应用价值。

芽孢染色法通常采用的是后盖玫瑰染色法，这种方法可以使芽孢显现为紫色或红色，而其他细胞则呈现粉红色。

这种异染色效应可以清晰地区分出芽孢与其他微生物。

整个实验流程需要先将样品制备，然后进行固定、染色、脱色和显微观察等过程。

其中，脱色工作至关重要，需要根据样品类型和染色结果进行不同程度的脱色处理。

芽孢染色法在微生物学研究、食品卫生监测、化学工业、制药、农业等领域都有广泛的应用，并被广泛视为一种可靠的检测手段。

芽孢染色法是鉴定芽孢菌的常用方法之一，样品制备是整个实验流程的关键步骤之一。

样品采集需要注意无菌操作，以免在采集、贮存、传递过程中造成样品的污染。

通常采集的样品包括饮用水、土壤、食品、医院等具有可能存在芽孢菌属的环境。

样品制备主要分为前处理和后处理两个环节。

前处理通常包括样品的筛选、洗涤和杀菌处理。

样品筛选的过程中需要去除杂质和不易筛选的部分。

洗涤过程是为了去除样品表面的污垢、腐殖质和防止其他细菌的污染。

杀菌处理时，要选择合适的杀菌方法，同时对杀菌剂的用量和时间进行控制。

后处理通常包括提取和处理芽孢。

提取芽孢的方法通常采用加热和化学处理的方法，让其他微生物死亡，而芽孢则不受影响。

具体的处理方法根据实验需要和样品类型进行定制。

整个样品制备过程需要注意的是，要保持严谨的无菌操作，避免在制备过程中引入其他细菌，影响实验结果。

芽孢染色法是一种特殊的染色方法，需要严格控制每一个步骤。

对于不同的样品类型和设备要求，具体的操作步骤可能会有所不同。

一般而言，芽孢染色法的操作流程包括：准备工作、固定样品、染色、脱色和显微观察。

准备工作：包括准备好所需试剂和设备，做好垃圾清理和无菌操作。

芽孢染色法实验报告
实验目的：
通过芽孢染色法观察芽孢的形态和结构，了解芽孢在细菌中的
作用和意义。

实验原理：
芽孢染色法是一种特殊的染色方法，常用于观察芽孢的形态和
结构。

菌落中的芽孢外层被环绕着角质层保护，因此一般的染色
方法难以有效地染色芽孢。

芽孢染色法则通过将芽孢煮热，使芽
孢角质层溶解，使染色剂浸透芽孢内层，从而实现芽孢的染色。

实验步骤：
1.准备好菌落涂片，将其煮沸10分钟。

2.待涂片冷却至室温后，加入孢子绿，静置5分钟。

3.倒掉孢子绿，用自来水清洗涂片。

4.涂片再次煮沸5分钟，取出晾干。

5.涂片点少量石蜡油，装片，显微镜下观察孢子的形态和结构。

实验结果：
在显微镜下观察到了圆形芽孢，其直径约为1μm。

芽孢表面有着一层亮白色的角质层，角质层稳定且保护了孢子内层。

在通过芽孢染色法染色的时候，染料能够在芽孢内层有效地染色，从而明显地展现出芽孢的内部结构。

芽孢内层由细胞壁、细胞膜和细胞质组成，芽孢内部还一般会有一条小的附属结构，称为芽管。

实验结论：
通过此次芽孢染色法实验，我们观察到了芽孢的形态和结构，同时了解到了芽孢在细菌生命周期及其繁殖过程中的重要性。

此外，此实验也向我们介绍了一种特殊的细胞染色方法，为我们今后的实验研究提供了有力的手段。

细菌芽孢染色实验报告细菌芽孢染色实验报告引言：细菌芽孢染色是一种常用的实验方法，用于鉴定细菌中是否存在芽孢。

芽孢是细菌在不利环境下形成的一种耐受性很强的结构，能够在干燥、高温等条件下存活。

通过芽孢染色实验，我们可以观察和鉴定细菌的芽孢形态和分布情况，进一步了解细菌的生物学特性。

材料与方法：1. 细菌培养物：我们选择了常见的大肠杆菌和枯草杆菌作为实验材料。

2. 芽孢染色试剂：我们使用了石碱法染色试剂，包括马来酸、石碱和碘液。

3. 显微镜：用于观察染色后的细菌样本。

实验步骤：1. 取一小滴细菌培养物放在玻璃片上。

2. 等待培养物干燥后，加入适量的马来酸，使其覆盖整个细菌样本。

3. 在马来酸上滴加适量的石碱，使其与马来酸充分混合。

4. 加入适量的碘液，静置片刻。

5. 用水冲洗玻璃片，直至水清澈无色。

6. 将玻璃片放在显微镜下，用100倍镜观察细菌样本。

结果与讨论：在观察大肠杆菌样本时，我们发现细菌呈现出长而细的形态，没有明显的芽孢结构。

这与大肠杆菌不具备芽孢形成能力的特点相符。

而在观察枯草杆菌样本时，我们发现细菌呈现出短而粗的形态，并且有明显的椭圆形芽孢结构。

这表明枯草杆菌具备芽孢形成能力，能够在不利环境下形成芽孢以保护自身。

细菌芽孢的形成是一种适应环境的生存策略。

在不利条件下，细菌通过形成芽孢来保护自身免受干燥、高温、辐射等不利因素的伤害。

芽孢是一种具有高度耐受性的结构，能够在极端条件下存活多年甚至几十年。

这种生存策略使得细菌能够在不利环境中存活并传播，从而保持种群的持续存在。

细菌芽孢染色实验是一种简单而有效的方法，可以用于鉴定细菌中是否存在芽孢。

通过观察细菌样本的形态和分布情况，我们可以初步判断细菌的生物学特性和环境适应能力。

然而，芽孢染色实验并不能提供细菌的详细分类和鉴定结果，需要结合其他实验方法和技术进行进一步的分析。

总结：细菌芽孢染色实验是一种常用的实验方法，通过观察细菌样本的形态和分布情况，可以初步判断细菌是否具备芽孢形成能力。

实验九细菌的芽胞染色
实验目的：学习细菌的芽胞染色法，初步了解芽孢杆菌的形态特征。

实验原理：
细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透明状）。

芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。

所有的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。

当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。

然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观察。

实验器材
1.菌种：培养36小时的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或者苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。

2.溶液和试剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液。

3. 仪器或其他用具：小试管（75mm×10mm），烧杯（300mL），滴管，接种环，擦镜纸，镊子，显微镜等。

实验内容：
1.改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
（1）制备菌悬液：加1—2滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2—3环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。

（2）加染色液：加5%孔雀绿水溶液2—3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。

实验四细菌的芽孢染色生物112 周泓兆1102040226一、目的学习并掌握细菌芽孢染色的原理及方法。

二、原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而加以区别。

芽孢具有厚而致密的壁，因此想要将芽孢染色需要在较高的温度（煮沸）的条件下，用强染色剂（孔雀绿）将菌体和芽孢同时染色。

而同时，实验利用了孔雀绿可经水洗脱色的特点，通过水洗将菌体的着色洗脱，而芽孢因具有致密的壁而不会被水将染色洗脱。

接下来用番红染色，将菌体染为红色，而在常温下品红无法将芽孢着色，因此在显微镜下形成了芽孢为绿色而菌体为红色的现象。

而实验中如果要观察芽孢在菌体中的着生位置，一定要根据各菌的特点来确定培养时间。

三、材料1.菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26℃-28℃，培养2-3天。

2.染色剂：孔雀绿染液，番红染液。

3.其它：载玻片，无菌水，洗瓶，酒精棉球，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，接种环，酒精灯，镊子。

四、实验步骤1.制片：将枯草芽孢杆菌涂片并干燥固定。

2.染色：撕取一块比载玻片略窄的吸水纸，覆盖在涂片出，在吸水纸上滴加孔雀绿直至饱和。

用酒精灯加热是染液保持微沸，其间不断添加适量孔雀绿染液，保持吸水纸湿润，染色5min。

3.水洗：待玻片冷却后，用镊子出去吸水纸，再用水瓶轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。

4.复染：用番红染液染色1-2分钟，水洗。

5.镜检：涂片干燥后，滴加香柏油置于油镜下观察。

6.清理：用二甲苯与干净擦镜纸擦净镜头，将涂片放入废片缸，将固体垃圾放入垃圾桶，液体垃圾倒入废液缸，无腐蚀性毒性液体可倒入下水道，用酒精棉球擦洗器材将溅出的染料擦除。

五、结果与讨论：这个实验成功率很高，主要原因是步骤简单，染色效果明显而且影响因素少，洗脱时间对结果影响要比革兰氏染色中酒精脱色时间的影响小很多。

最后结果的小遗憾是孔雀绿绿色的着色较浅，我觉得可以通过适当增加涂片的菌体密度和增加染液煮沸时间，可能会获得更好地效果。