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芽孢染色法的原理
芽孢染色法是一种用于检测和鉴定芽孢形成菌类的常用方法。
其原理基于芽孢的特殊结构和反应性。
首先，芽孢是一种形成于某些细菌和真菌细胞内的一种耐受性很高的休眠状态。
在适当条件下，芽孢可以在短时间内释放，使其周围环境进行细胞增殖。
这一特性使得芽孢成为了一种理想的适应生存环境恶劣的细菌的策略，也使得芽孢形成菌类在食品、环境和医疗等领域的检测工作中具有重要意义。
芽孢染色法的目的就是通过染色方法将芽孢从其他细胞和杂质中区分开来，并使其能够进行清晰可见的观察。
其中最常用的芽孢染色方法包括热染法、抗酸染色法和国际染色法等。
热染法是基于芽孢对高温的特殊耐受性，通过将样本加热到大约80-90℃，使其他非芽孢细胞受到破坏和溶解，而芽孢则保持完整且可染色。
一般使用石碱溶液对样品进行染色，然后使用显微镜观察。
抗酸染色法是通过将样品加入酸性以及带有对比染色剂的染色液中进行染色，然后使用显微镜观察。
正常的细胞会被酸性环境破坏，而芽孢则能够在酸性环境下存活并保持染色。
最常用的抗酸染色方法是梅尔候特染色法。
国际染色法则是通过将芽孢样品加入固定剂中，使其固定在载玻片上，然后使用Grocott染色进行处理。
这种染色法的优点是可清晰显示芽孢内部的结构，并能够区分不同种类的芽孢形
成菌类。
综上所述，芽孢染色法利用了芽孢的特殊结构和反应性，通过不同的染色方法能够使芽孢与其他细胞和杂质进行区分，并能够进行清晰可见的观察和鉴定工作。
实验四.细菌芽孢染色一. 目的要求：目的：掌握细菌芽孢染色方法内容：１．学习并掌握芽孢染色法２．初步了解芽孢杆菌的形态特征二. 基本原理：芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。
因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。
三. 器材1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃）2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液0.05%碱性复红蒸馏水3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等二甲苯.香柏油四. 操作步骤：一）方法1：1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。
2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗.6.制片干燥后用油镜观察。
芽孢呈绿色，菌体呈红色。
二）方法2：1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。
2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min .4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。
5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。
6.加复染液染2-3分钟，水洗。
7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。
五.实验报告：1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。
1. 了解芽孢的形态和结构特点；2. 掌握芽孢染色原理和操作方法；3. 观察芽孢的染色效果，加深对芽孢形态结构的认识。
二、实验原理芽孢是细菌在生长发育过程中形成的一种特殊细胞形态，具有厚而致密的壁，透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
芽孢染色法是一种特殊染色方法，通过使用特定染料对芽孢进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
三、实验材料1. 菌种：巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2. 染料：7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液（或石炭酸复红液和吕氏美蓝液）3. 仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、滴管等四、实验步骤1. 菌种培养：将巨大芽孢杆菌接种于营养琼脂斜面，37℃培养24小时。
2. 涂片：取一洁净无脂的载玻片，中央滴一小滴无菌水，用无菌操作的方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂片面积约为1-1.5cm²，涂片于室温中自然干燥。
3. 固定：将菌面朝上，通过火焰2-3次固定（温度以不烫手为宜）。
4. 初染：在制片上滴加7.6%饱和孔雀绿液，染色5-10分钟。
5. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
6. 复染：在制片上滴加0.5%蕃红液，染色1-2分钟。
7. 水洗：用自来水冲洗掉多余的染料。
8. 吸干：用吸水纸吸干制片上的水分。
9. 观察显微镜：将制片置于显微镜下观察，观察芽孢的染色效果。
在显微镜下观察到，巨大芽孢杆菌的菌体呈红色，芽孢呈绿色，两者颜色对比明显。
芽孢位于菌体中央或次极端，使菌体膨大呈梭状。
六、实验讨论1. 芽孢染色法是一种特殊染色方法，可以观察到芽孢的形态和结构特点。
通过染色，芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于观察和鉴别。
2. 在实验过程中，应注意控制染色时间，避免染色过度或不足。
染色时间过长，芽孢和菌体颜色过深，影响观察；染色时间过短，芽孢和菌体颜色过浅，难以观察。
3. 在实验操作过程中，应严格无菌操作，避免污染制片。
芽孢染色法的原理芽孢染色法，又称核酸染色法，是一种用于细菌和真菌的鉴定、分类和研究的常用技术。
芽孢染色法是一种使用有机染料的染色试验，其最大的特点是在无氧的环境中，如直接打开封闭瓶中染料液，或放置在非活性氣氛中，或加入抑制芽孢形成的剂量，就能有效阻抑细菌的芽孢形成，在残存的芽孢附近观察到明亮的染料色彩，而死芽孢则不显色，以此做为鉴定细菌芽孢形态特征的主要依据。
基本原理芽孢染色法的基本原理是细菌或真菌的芽孢在只要添加一些特定的有机染料，就会显示出特殊的颜色，而这种有机染料可以准确识别出对细菌或真菌的形态和生理特性，从而将不同的菌株区分开来，鉴定出菌体中的特定抗体类型。
比如，品尔梅斯染料可以用于染色结构紊乱，不稳定或不典型囊杆菌纲下（如普萤氏菌）等。
使用方法自从1897年芽孢染色法最初被提出以来，芽孢染色法一直都是最为受推崇的染色技术，它也可以被应用于更多种的菌株，也可以染出更加精确的芽孢形态特征和胞壁结构特征。
一般来说，芽孢染色的过程应该包括三个步骤：芽孢形成、染色和观察。
第一步：芽孢形成芽孢形成是一个关键步骤，用于制备样品，它是染色显色的前提：首先在染色板上用刮刀将所需观察的样品刮成大小末，然后将其加入恒定温度的热水池中温度维持37℃，为细菌的芽孢形成提供了良好的条件，在细菌的芽孢发育到一定的成熟时芽孢就会出现在细菌附近；然后用冻结剂或影响其芽孢形成的所有其他因素冻结细菌的芽孢形态，使其保持原样，以便染色和观察。
第二步：染色在细菌芽孢形成之后，即可进行染色，将特定的有机染料溶液（如品尔梅斯染料）加入细菌芽孢上，染红色，将芽孢完全包被，涂上一层薄膜，以使芽孢变得显著，而无芽孢的细菌则没有任何色彩变化。
第三步：观察在染色后，细菌芽孢的形态和特征就会变得十分明显，可以明亮的颜色就可以观察出来，这时就可以观察芽孢的数量、形状、分布和相互间的排列，这些芽孢的特性它可以用来鉴别和识别细菌的种类。
应用芽孢染色法的实际多是为了鉴定和诊断实现而设计的，芽孢染色法在病毒和细菌的鉴定检测中非常重要，可用来染出大量芽孢，有效鉴定出某些细菌的病原性和抗性。
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告一、引言芽孢染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以用来观察和鉴定细菌中的芽孢。
芽孢是细菌在逆境条件下形成的一种耐受性结构，具有较强的抵抗力和存活能力。
通过芽孢染色法，我们可以更好地了解细菌的生物学特性和生存机制。
本实验旨在探究芽孢染色法的原理和操作方法，并通过观察染色后的细菌样本，对细菌的芽孢形成进行分析。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 细菌培养物（含有芽孢的细菌）- 甲苯- 碘酒- 茴香醛- 无水乙醇- 碱性苏木精溶液- 0.5% 还原石蕊溶液2. 实验方法：1) 取一支无菌的铂丝，沾取细菌培养物，均匀涂抹在玻璃片上。
2) 将玻璃片放置在火焰上烘烤，使细菌固定在玻璃片上。
3) 在固定的细菌上滴加甲苯，静置片刻，使甲苯渗透细菌。
4) 用吸纸吸去多余的甲苯。
5) 滴加碘酒，静置片刻，使细菌芽孢固定。
6) 用吸纸吸去多余的碘酒。
7) 滴加茴香醛，静置片刻，使细菌芽孢显色。
8) 用吸纸吸去多余的茴香醛。
9) 用无水乙醇洗去茴香醛。
10) 滴加碱性苏木精溶液，静置片刻，使细菌细胞显色。
11) 用吸纸吸去多余的碱性苏木精溶液。
12) 用0.5% 还原石蕊溶液洗去碱性苏木精溶液。
13) 用吸纸吸去多余的还原石蕊溶液。
14) 将玻璃片放在显微镜下观察。
三、实验结果与分析经过芽孢染色法处理后，我们观察到细菌样本中出现了芽孢结构。
芽孢呈现为圆形或椭圆形，较小的细胞内包裹着较大的芽孢结构。
芽孢在染色后呈现出深紫色或棕色，而细菌细胞则呈现出浅红色。
这种染色方式使得芽孢与细菌细胞形成鲜明的对比，便于观察和分析。
通过观察芽孢的形态和分布情况，我们可以进一步了解细菌的生物学特性。
芽孢的形成通常与环境中的营养物质不足、温度变化等逆境条件有关。
细菌通过形成芽孢结构，可以在不利的环境中存活，并在条件适宜时再次发芽繁殖。
芽孢的形成是细菌的一种适应策略，它们可以在恶劣的环境中存活较长时间，等待适宜的时机再次生长和繁殖。
细菌的芽孢染色一、目的要求掌握芽孢染色的原理和方法二、实验材料1.菌种：枯草芽孢杆菌，肉汁斜面培养24h；2.染料：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液3.其他：显微镜、载玻片、接种环、香柏油、二甲苯等。
三、实验原理1 芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的依据。
2 芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
芽孢壁厚，透性低，着色、脱色均较困难，当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
若再用番红复染，则菌体呈红色而芽孢呈绿色。
四、操作步骤1.制备菌悬液加1~2滴水于小试管中，用接种环挑取2~3环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成浓的菌悬液。
2.染色加2~3滴孔雀绿于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的烧杯中，加热染色15~20min。
3.涂片固定用接种环取试管底部菌液数环于干净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过火焰3次温热固定。
4.脱色水洗，直至流出的水无绿色为止。
5.复染用蕃红染液染色2~3min，倾去染液并用滤纸吸干残液。
6.镜检干燥后用油镜观察，芽孢呈绿色，芽孢囊和营养细胞为红色。
五、注意事项1所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢为宜；2 注意控制水浴加热时间。
3 取菌不宜太少。
六、实验记录绘图（芽孢囊的形态；芽孢的形态；着生位置），并注明所观察菌名、各结构颜色及显微镜放大倍数。
芽孢染色是一种常用的微生物实验室技术，用于观察和鉴定细菌的孢子形态和结构。
以下是芽孢染色的常用方法：
1. 热锡烙法（Heat-fixed smear）：将含有芽孢的菌落用细火加热，使其附着在玻璃片上固定。
2. 革兰氏染色法（Gram staining）：首先用洗涤液将玻璃片上的菌落冲洗，接着用紫晶染液染色，再用碘液做固定，用乙醇洗去多余的染色剂，最后用洗涤液冲洗，接着用红素染液染色，最后用洗涤液冲洗干净。
3. 铁血素染色法（Iron-hematoxylin staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用铁血素溶液浸泡一段时间，最后用去离子水冲洗干净。
4. 格拉姆染色法（Spore staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用绿基（Malachite Green）染液浸泡，将玻璃片放入蒸汽中加热，再用水洗去多余染液，最后用红素染液进行反染。
以上是几种常用的芽孢染色方法，具体使用哪种方法取决于实验目的和需求。
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告引言：芽孢染色法是一种常用的微生物实验方法，用于鉴定和观察细菌的芽孢形态和结构。
本实验通过对芽孢的染色和显微镜观察，旨在了解芽孢的特征和鉴定微生物。
实验材料和方法：材料：培养基、细菌液、石蜡刀、石蜡、石蜡刷、显微镜等。
方法：1. 取一片培养基，加入细菌液并充分混合。
2. 将混合液倒入培养皿中，并在培养皿中心划出一条刀口。
3. 将培养皿置于恒温箱中，在适当的温度下培养一段时间，使菌落生长并形成芽孢。
4. 取一片玻片，将石蜡刀预热至适当温度，刮取培养皿中的芽孢。
5. 将刮取的芽孢涂在玻片上，并用石蜡刷均匀涂抹。
6. 将玻片放入石蜡中，使其固定。
7. 将固定的玻片放入显微镜下观察和拍摄。
结果与讨论：通过芽孢染色法，我们观察到了芽孢的形态和结构，并进行了鉴定。
芽孢的形态：芽孢是一种细菌的生殖结构，通常呈椭圆形或圆柱形。
在显微镜下观察，芽孢的外部有一个坚硬的壳，内部则是细胞质和核酸物质。
芽孢的大小和形状可能因不同的细菌而异。
芽孢的结构：芽孢的结构包括中心小体、核心区、内外壳等部分。
中心小体是芽孢的核心，含有DNA和其他重要的细胞质成分。
核心区是由中心小体周围的细胞质组成，其中包含了细胞的各种酶和营养物质。
内外壳是芽孢的保护层，能够抵抗外界环境的压力和不良条件。
鉴定微生物：通过观察芽孢的形态和结构，可以初步鉴定微生物的种类。
不同种类的微生物芽孢在形态和结构上可能存在差异，因此可以通过对比已知的芽孢特征，来判断未知微生物的种类。
此外，芽孢染色法还可以帮助鉴定微生物的生长条件和适应性。
实验中的注意事项：在进行芽孢染色实验时，需要注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，以避免外界细菌的污染。
2. 实验过程中要注意安全，避免接触有害物质和高温设备。
3. 实验前要熟悉显微镜的使用方法，并保持显微镜的清洁和调试。
4. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，以防止细菌的传播和感染。
芽孢染色法,实验报告(共4篇)第一篇：芽孢染色法的介绍芽孢染色法是一种常见的微生物学实验方法，用来鉴定芽孢菌属的微生物。
芽孢是一种耐热、抗干燥的微生物，具有高度的抵抗力。
芽孢染色法是通过对芽孢进行特定的染色方法，将其区分出来。
整个过程需要一定的技术和经验，但是准确性较高，具有广泛的应用价值。
芽孢染色法通常采用的是后盖玫瑰染色法，这种方法可以使芽孢显现为紫色或红色，而其他细胞则呈现粉红色。
这种异染色效应可以清晰地区分出芽孢与其他微生物。
整个实验流程需要先将样品制备，然后进行固定、染色、脱色和显微观察等过程。
其中，脱色工作至关重要，需要根据样品类型和染色结果进行不同程度的脱色处理。
芽孢染色法在微生物学研究、食品卫生监测、化学工业、制药、农业等领域都有广泛的应用，并被广泛视为一种可靠的检测手段。
芽孢染色法是鉴定芽孢菌的常用方法之一，样品制备是整个实验流程的关键步骤之一。
样品采集需要注意无菌操作，以免在采集、贮存、传递过程中造成样品的污染。
通常采集的样品包括饮用水、土壤、食品、医院等具有可能存在芽孢菌属的环境。
样品制备主要分为前处理和后处理两个环节。
前处理通常包括样品的筛选、洗涤和杀菌处理。
样品筛选的过程中需要去除杂质和不易筛选的部分。
洗涤过程是为了去除样品表面的污垢、腐殖质和防止其他细菌的污染。
杀菌处理时，要选择合适的杀菌方法，同时对杀菌剂的用量和时间进行控制。
后处理通常包括提取和处理芽孢。
提取芽孢的方法通常采用加热和化学处理的方法，让其他微生物死亡，而芽孢则不受影响。
具体的处理方法根据实验需要和样品类型进行定制。
整个样品制备过程需要注意的是，要保持严谨的无菌操作，避免在制备过程中引入其他细菌，影响实验结果。
芽孢染色法是一种特殊的染色方法，需要严格控制每一个步骤。
对于不同的样品类型和设备要求，具体的操作步骤可能会有所不同。
一般而言，芽孢染色法的操作流程包括：准备工作、固定样品、染色、脱色和显微观察。
准备工作：包括准备好所需试剂和设备，做好垃圾清理和无菌操作。
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告一、引言芽孢染色法是一种常用的实验方法，用于检测和鉴定细菌中的芽孢形成。
芽孢是一种细菌在不利环境下形成的一种生存形式，具有较强的耐热和抗干扰能力。
本实验旨在通过芽孢染色法，观察和分析细菌中芽孢的形成情况。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 细菌培养物- 芽孢染色试剂盒- 显微镜- 无菌平板- 石蜡刀2. 实验方法：1) 准备细菌培养物：从细菌培养基中取出待检测的细菌菌株，进行液体培养至对数生长期。
2) 制备芽孢悬液：将培养物转移到无菌平板上，用无菌平板划线法制备纯培养物。
将培养物转移到无菌蒸馏水中，轻轻搅拌，制备芽孢悬液。
3) 芽孢染色：取一滴芽孢悬液，滴于玻片上，用芽孢染色试剂盒按照说明书的要求进行染色处理。
4) 观察和分析：将染色后的玻片放在显微镜下观察，记录芽孢的形态和数量。
三、实验结果经过芽孢染色处理后，我们观察到细菌中出现了大量的芽孢。
芽孢呈圆形或椭圆形，外部有一层坚硬的壳，内部包裹着细菌的核酸和蛋白质。
芽孢的颜色因染色剂的不同而有所差异，有些呈红色，有些呈绿色。
芽孢的数量在不同的细菌菌株中也有差异，有些菌株的芽孢数量较多，而有些菌株的芽孢数量较少。
四、讨论与分析芽孢是细菌在不利环境下形成的一种生存形式，具有较强的耐热和抗干扰能力。
在本实验中，我们通过芽孢染色法观察到了细菌中芽孢的形成情况。
芽孢的形成与环境因素密切相关，如温度、湿度、营养物质等。
在适宜的环境条件下，细菌可以形成大量的芽孢，以增加自身的存活率。
芽孢染色法是一种快速且可靠的方法，用于检测和鉴定细菌中的芽孢形成。
通过染色处理，我们可以清晰地观察到芽孢的形态和数量，从而推断细菌的生长状态和环境适应能力。
此外，芽孢染色法还可以用于研究芽孢的形成机制和防治细菌感染的方法。
然而，芽孢染色法也存在一些限制。
首先，不同的细菌菌株对染色剂的反应可能不同，导致染色结果的差异。
其次，染色后的芽孢可能会受到染色剂的影响，使其形态和数量发生变化。
芽孢染色法实验报告
实验目的：
通过芽孢染色法观察芽孢的形态和结构，了解芽孢在细菌中的
作用和意义。
实验原理：
芽孢染色法是一种特殊的染色方法，常用于观察芽孢的形态和
结构。
菌落中的芽孢外层被环绕着角质层保护，因此一般的染色
方法难以有效地染色芽孢。
芽孢染色法则通过将芽孢煮热，使芽
孢角质层溶解，使染色剂浸透芽孢内层，从而实现芽孢的染色。
实验步骤：
1.准备好菌落涂片，将其煮沸10分钟。
2.待涂片冷却至室温后，加入孢子绿，静置5分钟。
3.倒掉孢子绿，用自来水清洗涂片。
4.涂片再次煮沸5分钟，取出晾干。
5.涂片点少量石蜡油，装片，显微镜下观察孢子的形态和结构。
实验结果：
在显微镜下观察到了圆形芽孢，其直径约为1μm。
芽孢表面有着一层亮白色的角质层，角质层稳定且保护了孢子内层。
在通过芽孢染色法染色的时候，染料能够在芽孢内层有效地染色，从而明显地展现出芽孢的内部结构。
芽孢内层由细胞壁、细胞膜和细胞质组成，芽孢内部还一般会有一条小的附属结构，称为芽管。
实验结论：
通过此次芽孢染色法实验，我们观察到了芽孢的形态和结构，同时了解到了芽孢在细菌生命周期及其繁殖过程中的重要性。
此外，此实验也向我们介绍了一种特殊的细胞染色方法，为我们今后的实验研究提供了有力的手段。
芽孢、荚膜和鞭毛染色，都是利用细菌细胞不同的构造部分与染料的亲和力不同，用各种特殊染色法使之显示出不同的颜色，籍以显微观察。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别，芽孢壁厚，透性低，着色，脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料—孔雀石绿在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色；而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（沙黄）进行复染色，此时菌体即被染成红色，而芽孢难着色，仍呈绿色。
使之显示出不同的颜色，籍以显微镜观察。
荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成份是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景染色而把不着色透明的荚膜衬托出来，荚膜很薄，易变形，因此制片时一般不用热固定。
细菌的鞭毛极为纤细，直径在0.1微米以下，因此在普通光学显微镜下不能见到，只有用特殊的染色方法，才能把鞭毛显示出来，鞭毛的染色方法很多，但主要的原理都是采用不稳定的胶体溶液作媒染剂，在鞭毛上生成沉淀，加大鞭毛的直径，然后再进行染色，同时，培养稍久的菌，鞭毛易脱落，所以要用新鲜的菌体，一般是用经3~5代（每代培养时间16~20小时）的斜面，最后一代接到含0.8~1.2%琼脂的软琼脂培养基（带有冷凝水）经12~16小时培养的菌体为佳。
三、实验材料和用具：1．菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）园褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）普通变形杆菌（Proteus vulgaris）萤光假单胞菌（Pseudomonas fluoroscens）丙酮丁醇梭状芽孢杆菌（Clostridium acetobutylicum）苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）北京棒状杆菌Asl.299（Corynebacterium pekinense）2．染液：（配方见附录Ⅰ）（1）芽孢染液：A、5%孔雀石绿水溶液B、0.5%沙黄水溶液（2）荚膜染液：34A、石碳酸复红染液B、5%黑色素水溶液（或用墨汁）（3）鞭毛染液：硝酸银染色：A液：鞭毛染色媒染剂B液：硝酸银溶液美蓝染色：媒染剂：同硝酸银染色A液美蓝染色液3．用具：显微镜、载玻片、玻片架、滤纸、接种环、无菌水、酒精灯、香柏油、二甲苯、火柴、擦镜纸等。
细菌芽孢染色法
一、基本原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的
亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的
颜色而便于区分。
芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入
菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进
入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
二、器材
枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭
菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
三、操作步骤
方法1、
（1）将培育24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加35滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，
切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从染液冒蒸汽
时开头计算约45分钟。
这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶
液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。
（6）待干燥后，置油镜观看，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、
（1）取二支干净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入12接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入12接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成深厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热35分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液23环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取12接种环黑色素溶液于涂片处，马上绽开涂薄，自然干燥后，油镜观看，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
四、试验报告。
