实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色

细菌芽孢染色实验报告2页实验名称：细菌芽孢染色实验目的：1.掌握细菌芽孢染色的基本原理和步骤；2.学习观察细菌芽孢染色的结果和注意事项；3.通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。

实验原理：细菌芽孢染色是一种利用染料对细菌芽孢进行染色的方法。

由于细菌芽孢具有特殊的结构和功能，能够抵抗不利环境，因此在染色过程中需要使用一些特殊的染料和处理方法。

其中，最常用的染料是孔雀绿和甲基蓝，最常用的处理方法是加热和干燥。

通过细菌芽孢染色，可以观察到芽孢的形态、大小、着色情况等特征，进而推断出芽孢的种类和分布情况。

实验步骤：1.样品采集：采集含有芽孢的样品，并进行预处理，如离心、过滤等；2.芽孢分离：将样品中的芽孢分离出来，可以使用物理、化学等方法；3.加热和干燥：将分离出来的芽孢进行加热和干燥处理，以促进染色效果；4.染色处理：将加热和干燥后的芽孢与染料混合，用玻璃棒搅拌均匀；5.观察和分析：将染色后的样品放在显微镜下观察，记录芽孢的形态、大小、着色情况等特征，并进行分析和判断。

实验结果：通过本次实验，我们观察到了不同种类的芽孢，如枯草芽孢杆菌、肉毒梭菌等。

这些芽孢在染色过程中表现出不同的着色情况和形态特征。

例如，枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，肉毒梭菌的芽孢呈蓝色。

通过观察和分析，我们发现这些芽孢在样品中的分布情况也不同，有的呈单个存在，有的呈链状存在。

实验结论：通过本次细菌芽孢染色实验，我们掌握了细菌芽孢染色的基本原理和步骤，学习观察了细菌芽孢染色的结果和注意事项。

同时，通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。

这些知识和技能对于我们进一步了解和研究细菌及其芽孢具有重要意义。

注意事项和思考题：1.在样品采集和预处理过程中，应该注意避免污染和交叉感染。

对于含有芽孢的样品，应该进行灭菌处理，以避免对实验结果造成影响。

2.在进行芽孢分离时，应该根据不同样品的特点选择合适的分离方法。

对于一些难以分离的芽孢，可以尝试采用其他方法进行分离和纯化。

(实验)细菌的荚膜染色（一）实验目的：学习细菌的荚膜染色法：（二）实验原理：由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。

由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。

（三）实验器材1.活材料：培养3-5天的胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus，俗称“钾细菌”）。

该菌在甘露醇作碳源的培养基上生长时，荚膜丰厚。

2.染色液和试剂：Tyler法染色液：（见附二、（一）、14）、用滤纸过滤后的绘图墨水、复红染色液（见附二、（一）、2）、黑素（见附二、（一）、7）、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯。

3.器材：载玻片、玻片搁架，擦镜纸、显微镜等。

（四）实验方法推荐以下四种染色法，其中以湿墨水方法较简便，并且适用于各种有荚膜的细菌。

如用相差显微镜检查则效果更佳。

1.负染色法：（1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。

（2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。

（3）染色：在涂面上加复红染色液染色2—3min。

（4）水洗：用水洗去复红染液。

（5）干燥：将染色片放空气中晾干或用电吹风冷风吹干。

（6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴黑素，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触黑素，使黑素沿玻片边缘散开，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。

（7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。

结果：背影灰色，菌体红色，荚膜无色透明。

2.湿墨水法（1）制菌液：加1滴墨水于洁净的载玻片上，挑少量菌体与其充分混合均匀。

（2）加盖玻片放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸去多余的菌液。

（3）镜检：先用低倍镜、再用高倍镜观察。

结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即为荚膜。

3.干墨水法（1）制菌液：加1滴6%葡萄糖液于洁净载玻片一端，挑少量胶质芽胞杆菌与其充分混合，再加1环墨水，充分混匀。

实验二细菌的芽孢染色, 鞭毛染色, 荚膜染色生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一、实验目的1 学习细菌的芽孢染色法2 学习细菌的鞭毛染色法3 学习细菌的荚膜染色法二、实验原理1 芽孢染色的原理:细菌的芽孢具有厚而致密的壁。

透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。

芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色但一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。

所有的芽孢染色法都基于同一个原则；除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。

当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。

然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。

2 鞭毛染色的原理:细菌的鞭毛极细，直径一般为0.01～0.02μm，只有用电子显微镜才能观察到。

但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。

鞭毛染色的方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理、让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。

常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。

3 荚膜染色的原理:荚膜是细菌分泌到菌体周围的一层黏液状物质,通常是多糖和多肽类物质. 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。

由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定。

以免荚膜皱缩变形。

三、实验器材1菌种：培养24h的枯草杆菌（Bacillcus subtilis）、培养12-16h的变形杆菌斜面,培养3d的固氮菌。

2染色液和试剂：5％孔雀绿水溶液、番红水溶液, 鞭毛染色液A液与B液，蒸馏水，香柏油，显微镜擦拭液,绘图墨水或黑色素溶液．3器材：酒精灯、接种环、镊子、载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、试管夹、显微镜等。

四、实验方法（一）芽孢染色：1涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。

实验二细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。

2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。

3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。

二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。

由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。

用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。

发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。

染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。

酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。

三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。

2、酒精灯、接种环、载玻片。

3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。

四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。

1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。

2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。

3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。

4、染色玻片置于水平位置。

加石炭酸复红液于菌膜部位。

染1-2min。

5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。

6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。

7、镜检。

（二）革兰氏染色法步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗干燥镜检。

实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色生物111班杨明轩1102040128一、实验目的1、学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法。

2、学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法。

二、实验原理（一）细菌的芽孢染色芽孢通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含水量极低而抗逆性极强的内生休眠体。

芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈现出不同的颜色而加以区别。

芽孢通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽孢和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。

经对比度大的复染液番红染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而菌体被复染剂染成红色，易于区别。

（二）细菌的荚膜染色荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。

荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来。

三、实验材料1、菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），26~28℃培养2~3天；钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28℃培养3天。

2、染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤）3、其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具四、实验方法（一）细菌的芽孢染色1、制片：将枯草芽孢杆菌涂片、干燥固定。

2、染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和。

加热使染液微冒蒸汽后，保持5min。

加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥。

3、水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止。

4、复染：用番红染液染色2~3min。