亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理

实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。

3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。

二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。

它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。

能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。

放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。

菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

【实验目的】1、回顾细胞培养的有关知识；2、学习小鼠脾细胞的分离技术及简单的细胞培养技术3、掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；4、了解细胞原代培养的基本方法及操作过程；5、学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；6、学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数；7、学习实验过程的详细描述及实验记录。

【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。

当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。

传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体的功能活动是十分困难的。

但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。

被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。

因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。

活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。

实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。

3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。

二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。

它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。

能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。

放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。

菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。

细菌活菌亚甲蓝染色原理
亚甲蓝染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以使细菌的染色体染上蓝色，同时可以区分细菌活菌与死菌。

该染色法的原理是利用亚甲蓝对细菌细胞壁和染色体的亲和力，使细菌染上蓝色。

在进行亚甲蓝染色前，需要先将菌液平铺于玻璃片上，晾干后进行固定。

固定的方法有多种，如火焰法、甲醛固定法等。

然后将亚甲蓝溶液滴于细菌上，静置2-3分钟后用水轻轻冲洗几遍，使多余的染料洗掉。

最后用纸巾将玻璃片吸干，即可观察到染色结果。

在染色结果中，活菌的染色体呈现出深蓝色，而死菌则呈现出浅蓝色或无色。

这是因为亚甲蓝对细胞膜和染色体的亲和力较弱，只有在活菌中才能充分渗透并染色。

而死菌细胞膜已经破裂，亚甲蓝无法渗透到细胞内部染色体上。

细菌活菌亚甲蓝染色法是一种简单、快速、易于操作的染色方法，可以用于鉴定细菌的形态、大小和排列方式，同时也是一种常用的生物学实验技术。

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姓名程开源系年级2010级临床医学八年制组别同组者孙琳科目分子细胞生物学目细胞培养与细胞生死状态的鉴别学号201000232012【实验目的】1.学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

2.了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。

3.熟练掌握动物细胞传代培养的实验方法。

4.学习细胞生死状态鉴别的方法。

5.了解细胞生死状态鉴别的原理。

6.熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。

7.掌握细胞技术方法，计算细胞存货率。

【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。

当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。

传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。

但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。

被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。

因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。

活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。

2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。

六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。

2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

酵母菌死活鉴别原理嘿，咱今天就来讲讲酵母菌死活鉴别原理。

你说这酵母菌啊，就像一群小小的精灵，在我们看不见的地方忙碌着。

咱先想想啊，活的酵母菌和死的酵母菌那肯定不一样呀！就好像活蹦乱跳的小兔子和已经没了气的小兔子，差别大了去了嘛！那怎么来分辨它们呢？其实啊，有个挺简单的办法，就是利用一种染料。

这染料可神奇了，它能跟活的酵母菌玩个小把戏，却对死的酵母菌不理不睬。

就好像是一个聪明的小伙伴，能分得清谁是好朋友，谁只是个路人甲。

你看啊，当我们把染料加进去的时候，活的酵母菌就会把染料拒之门外，嘿，它可精着呢，不让染料进去捣乱。

而死的酵母菌呢，就没办法啦，染料就会大摇大摆地进去，给它染上颜色。

这不就一下子区分开了嘛！这就好像在一个大派对上，活的酵母菌是那些穿着漂亮衣服尽情跳舞的人，而死的酵母菌就是那些倒在一边没动静的。

我们用这个染料的办法，不就像是有了一双火眼金睛，能清楚地看到谁在活跃，谁已经歇菜了嘛！咱再深入想想，这酵母菌在我们生活里可重要啦！做面包要靠它，酿酒也要靠它。

要是分不清它们是死是活，那做出的面包能好吃吗？酿出的酒能香醇吗？那肯定不行啊！所以学会这个鉴别原理，就像是掌握了一门神奇的魔法，能让我们更好地利用这些小家伙们。

你说这多有意思啊！就这么一个小小的鉴别方法，却有着大大的用处。

它能让我们知道酵母菌们的状态，就像了解我们身边朋友的心情一样。

难道不是很神奇吗？而且啊，这也提醒我们，生活中的很多小细节其实都有着大学问呢！我们可不能小瞧了它们。

总之啊，酵母菌死活鉴别原理就是这么一个实用又有趣的东西，学会了它，你就能更好地和酵母菌这些小精灵打交道啦！原创不易，请尊重原创，谢谢!。

实验八酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；2. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；3.掌握酵母子囊孢子的观察方法。

二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。

但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。

本实验通过美蓝染液水浸片法来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝溶液对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)培养1天的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2. 溶液或试剂0.1%吕氏碱性美蓝溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、95%乙醇，等。

3．器材显微镜，擦镜纸，吸水纸，载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等。

四、实验步骤1、酵母菌出出芽方式的观察及死活鉴定（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种蘸取取少量液体酵母放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平放，以免产生气泡。

（3）将制片立即放在显微镜下镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

亚甲基蓝染色法亚甲基蓝染色法是一种常用的生物化学染色方法，广泛应用于细胞和组织的染色研究中。

本文将介绍亚甲基蓝染色法的原理、步骤和应用。

一、原理亚甲基蓝是一种亲水性染料，它可以与细胞质中的核酸结合形成蓝色的染色体。

亚甲基蓝染色法利用亚甲基蓝与DNA分子中的负电荷结合，从而使细胞核和染色体显现出深蓝色的特点。

这种染色方法简便、快速，而且染色效果清晰，所以在生物学研究中得到了广泛的应用。

二、步骤亚甲基蓝染色法的步骤相对简单，主要包括固定、染色和洗涤三个步骤。

1.固定：将待染细胞或组织用4%的多聚甲醛或其他适当的固定液固定，一般固定时间为10-30分钟。

2.染色：将固定的细胞或组织连续浸入亚甲基蓝染色液中，染色时间一般为5-15分钟。

染色液的配制可以根据实验需要进行调整。

3.洗涤：用去离子水或缓冲液轻轻洗涤染色的细胞或组织。

洗涤时间根据需要可重复进行。

三、应用亚甲基蓝染色法在生物学研究中有多个应用领域。

1.细胞染色：亚甲基蓝染色法可以用于观察细胞形态、细胞核的大小和形状等细胞特征。

2.染色体分析：通过亚甲基蓝染色法可以观察和分析染色体的数量、结构和缺陷等。

3.核酸染色：亚甲基蓝染色法可以用于检测DNA和RNA的存在和定量。

4.细胞增殖分析：亚甲基蓝染色法可以用于观察细胞增殖和细胞周期。

5.细胞毒性分析：通过亚甲基蓝染色法可以评估药物或化合物对细胞的毒性。

四、注意事项亚甲基蓝染色法虽然简便易行，但在操作过程中仍需注意以下事项：1.固定液的选择和浓度要适当，过浓或过稀都会影响染色效果。

2.染色液的浓度和染色时间要控制好，过浓或过浅都会导致染色不均匀。

3.洗涤过程要轻柔，避免造成细胞或组织的破坏。

4.染色后要及时观察和记录结果，避免染色体颜色褪色或变化。

总结：亚甲基蓝染色法是一种常用的生物化学染色方法，可以用于细胞和组织的染色研究。

通过固定、染色和洗涤三个步骤，可以清晰地观察细胞核和染色体的形态和结构。

亚甲基蓝染色法在细胞学、遗传学和分子生物学等领域有广泛的应用，为科学研究提供了重要的实验手段。

实验八酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；2. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；3.掌握酵母子囊孢子的观察方法。

二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。

但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。

本实验通过美蓝染液水浸片法来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝溶液对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)培养1天的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2. 溶液或试剂0.1%吕氏碱性美蓝溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、95%乙醇，等。

3．器材显微镜，擦镜纸，吸水纸，载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、镊子等等。

四、实验步骤1、酵母菌出出芽方式的观察及死活鉴定（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种蘸取取少量液体酵母放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平放，以免产生气泡。

（3）将制片立即放在显微镜下镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

亚甲基蓝染色原理亚甲基蓝是一种常用的生物染色剂，广泛应用于生物学和医学领域。

它的染色原理主要是利用其分子结构的特殊性质，与生物样品中的特定成分发生化学反应，从而实现对样品的染色和显色。

下面将详细介绍亚甲基蓝染色的原理及其应用。

亚甲基蓝是一种亲电性染料，其分子中含有许多芳香环和氮原子，使得其分子具有较强的亲电性。

在生物样品中，许多生物大分子（如DNA、RNA等）都含有丰富的负电荷，而亚甲基蓝的亲电性使得它能够与这些负电荷部分发生静电作用，从而吸附在生物大分子表面。

在染色过程中，亚甲基蓝可以与DNA、RNA等生物大分子中的磷酸基团发生离子键或氢键，使得亚甲基蓝分子紧密地结合在这些分子上。

同时，亚甲基蓝分子本身也具有颜色，可以赋予生物样品明显的颜色，使得样品在显微镜下能够清晰可见。

除了静电作用外，亚甲基蓝还可以与生物大分子中的其他官能团发生化学反应。

例如，亚甲基蓝可以与蛋白质中的羟基发生氢键，与羧基发生酰胺键等，从而实现对蛋白质的染色。

这种化学反应使得亚甲基蓝在染色过程中具有较强的特异性，能够选择性地染色目标生物分子，而不影响其他成分。

亚甲基蓝染色不仅可以用于显微镜下的观察，还可以应用于凝胶电泳、蛋白质分离等实验中。

在凝胶电泳中，亚甲基蓝可以与DNA或蛋白质结合，使得其在凝胶上呈现出清晰的条带，有利于对生物分子的分离和分析。

在蛋白质分离实验中，亚甲基蓝可以与蛋白质结合并显色，帮助研究人员观察和分析蛋白质的分布和纯度。

总之，亚甲基蓝染色原理是基于其分子结构的特殊性质，与生物样品中的特定成分发生化学反应，从而实现对样品的染色和显色。

它在生物学和医学领域有着广泛的应用，为科研工作者提供了重要的实验手段，有助于对生物分子进行观察、分离和分析。

药物名称：亚甲蓝药物别名：次甲蓝，美蓝，Methvlene Blue，Methylenum Caeruleum英文名称：Methyltltioninium Chloride功用作用：为一氧化还原剂，在还原型辅酶Ⅰ脱氢酶（NADPH）的作用下，本品还原成为还原型亚甲蓝。

美蓝是一种无毒性的燃料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母菌的活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母菌活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

.1美蓝染色法4.1.1吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0.3g95％乙醇 30mL0.01％氢氧化钾溶液 100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后于氢氧化钾溶液混合。

4.1.2染色法将涂片在火焰上固定，待冷却后滴加染液，染1min～3min，水洗，待干，镜检。

4.1.3结果菌体呈蓝色。

3.4.2酵母细胞数的测定操作方法(1)血球计数板的构造血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。

计数室通常有两种规格。

一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。

(2)血球计数板的使用①用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。

②样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4～5个酵母细胞为宜。

③将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。

④将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。

⑤计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。

山东大学实验报告2017年11月20日_________________________________________________________________科目：微生物学实验题目：酵母菌死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：丁志康一、目的要求1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

3、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。

二、基本原理1、酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。

大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2、美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化形成蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化性变为无色的还原性。

因此。

具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

3、子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母菌要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏培养基（葡萄糖—醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

三、器材1、菌种：酿酒酵母2、培养基:液体合成培养基，麦氏琼脂斜面培养基。

3、溶液或试剂：吕氏碱性美蓝染液。

4、仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（一）酵母菌死活细胞的鉴别观察1、按无菌操作用用一洁净的吸管从培养了一周的酵母菌液体培养基中吸取少量菌液，滴半滴于洁净载玻片中央，然后在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染液，混合均匀。

（染液不宜过多或过少，否则再盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。

繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。

用它采对酵母细胞进行染色。

活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。

而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。

然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。

(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。

先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。

2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定一、目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构及出芽繁殖。

2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色技术。

二、基本原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。

用美蓝染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。

美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。

活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞呈无色；而死细胞已失去还原能力，则被染料染成蓝色。

需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。

三、材料及器材1. 菌种：酵母菌。

2. 溶液和试剂：0.05%和0.1%吕氏美蓝染色液。

3. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，试管，蒸馏水等。

四、方法与步骤1. 在干净载玻片上加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在美蓝液中，混合均匀。

2. 取一块盖玻片，先将一边与染液接触，然后慢慢将盖玻片放下，避免产生气泡，将多余染液用吸水纸吸干。

3. 将载玻片置于载物台上，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

4. 染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。

5. 用0.05%吕氏美蓝染色液重复上述操作。

五、实验作业及实验报告1. 绘图说明你所观察到的酵母形态特征。

2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?3. 酵母水浸片制作时应注意什么?4. 吕氏美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室。

亚甲基蓝对菌体染色被染成蓝色写的是
正常的活细胞，细胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，细胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

另一种鉴别细胞死活的染料是亚甲基蓝。

亚甲基蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。

活细胞因具有较强的还原能力，能使亚甲基蓝从蓝色的氧化型变成无色的还原型，故活的酵母细胞在用亚甲基蓝染色后显示无色。

死亡酵母细胞或代谢缓慢的衰老酵母细胞，因无还原能力或还原能力极弱，使亚甲基蓝仍处于氧化态，故呈现蓝色或淡蓝色。

综上，被台盼蓝和亚甲基蓝染成蓝色的都是死细胞。