尼氏染色液(亚甲蓝法)操作步骤及注意事项

亚甲基蓝染色液(1%)说明书
货号：G1303
规格：100ml
保存：室温，避光，12个月。

产品说明：
亚甲基蓝(Methylene blue)又称美蓝、次甲基蓝、次甲蓝等，是一种芳香杂环化合物。

含水亚甲基蓝的分子式为C16H24ClN3O3S，分子量为373.9，CAS号为7220-79-3。

亚甲基蓝染色液常用于丝绸、纸张、细菌、细胞等染色。

因其容易氧化，染色结果不宜长久保存。

操作说明：（仅供参考）
1、样品处理
（1）对于石蜡切片：常规脱蜡复水。

（2）对于冰冻切片：蒸馏水2min。

（3）对于培养细胞：先用4%多聚甲醛固定，然后蒸馏水洗涤2min，最后换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

2、美蓝染色
（1）Methylene blue Stain(1%)染色。

（2）用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。

染色结果：
组织或细胞蓝色
注意事项：
1、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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亚甲基蓝染色液(1%)简介：亚甲基蓝(Methylene blue)又称美蓝、次甲基蓝、次甲蓝等，含水亚甲基蓝的分子式为C16H24ClN3O3S，分子量为373.9，CAS号为7220-79-3。

Leagene亚甲基蓝染色液常用于丝绸、纸张、细菌、细胞等染色。

因其容易氧化，染色结果不宜长久保存。

组成：编号DZ0097 Storage名称Methylene blue Stain(1%) 100ml RT 避光使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、样品处理①对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5～10min 。

更换新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10min。

无水乙醇5min。

蒸馏水2min。

②对于冰冻切片：蒸馏水2min。

③对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10min以上。

蒸馏水洗涤2min。

换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。

2、美蓝染色①Methylene blue Stain(1%)染色3～10min(可以根据染色结果和要求调整时间)。

②用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。

染色结果：组织或细胞蓝色注意事项：1、第一次使用本试剂时建议先取1～2个样品做预实验。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

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尼氏染色步骤
尼氏染色法，又称尼氏显色法或尼氏酸性显色法，是一种常用的微生物学染色方法。

它能够有效地检测出体内的细菌，以及对病原体的检测和鉴定，它的应用非常广泛，是现代细菌学中不可缺少的重要技术手段。

尼氏染色法是一种酸性染色法，它利用了细菌与细菌杆菌体内含有高浓度的酸性脂肪酸而形成的细菌染色体的特殊性，将其酸性染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体呈色，从而使细菌染色体可见，进而诊断出病原体。

一般情况下，尼氏染色步骤如下：
1.准备标本
通常情况下，从被检样品中提取的细菌，用培养基悬浮液作为染色标本，然后将其涂在载玻片上，形成薄膜，即可进行尼氏染色。

2.加入染料
将尼氏染料溶于0.8%的盐酸中，然后将其滴加在载玻片上，盖上盖玻片，放置20分钟左右，使染料与细菌染色体结合起来，使细菌染色体变色，从而可见细菌染色体。

3.洗涤
将染色好的载玻片放入10%的盐酸中洗涤，洗涤时间约为15-30分钟，使多余的染料从细菌染色体中除去，以便观察细菌染色体。

4.染色结果观察
观察染色结果，细菌染色体可见，呈蓝色或蓝绿色，从而实现病原体的检测和鉴定。

尼氏染色法是一种快速、准确、经济的检测病原体的方法，由于它简单易行，因此深受细菌学家和微生物医学家的青睐。

近年来，随着各种新型抗菌药物的开发，尼氏染色法也受到了更多的关注，它不仅能够检测出体内的细菌，而且还可以检测出病原体的抗药性，为新型抗菌药物的开发奠定了基础。

内镜染⾊⼤全之亚甲蓝内镜⾊素的使⽤及配制⽅法美兰在胃⾷管结合部的Barrett（BE）⾷管以及Barrett腺癌⽐较常⽤。

内镜下⾊素染⾊在指导BE活检中有重要意义。

亚甲蓝可被⼩肠和结肠上⽪主动吸收，⽽在鳞状
上⽪和胃黏膜等⾮吸收上⽪并不着染。

当⾷管或胃黏膜出现肠上⽪化⽣时，可被亚甲蓝染成蓝
⾊。

为获得较好效果，染⾊前⼀般先使⽤20ml去泡剂（如10%⼄酰半胱氨酸）喷洒以去除表⾯
黏液，2min后再喷洒0.5%的亚甲蓝液（5cm的病变约⽤20ml液体）。

2min后再⽤⽔冲洗。

因长
节段的BE有多量的肠上⽪化⽣⼏乎均呈弥漫性着染，⽽短节段BE因有胃型上⽪化⽣夹杂其中，
染⾊呈局灶或斑点状。

染⾊的原理：亚甲蓝吸收进⼊上⽪细胞内使细胞核着⾊。

染⾊阳性的意义：正常的肠道上⽪、⾷管和胃的肠化上⽪以及部分早期胃癌上⽪，⼗⼆指肠内
异位的胃化⽣细胞并不染⾊。

同时因美兰可以和细胞内的DNA结合，在⽩光下可诱导氧化损伤
甚⾄突变。

肠化/异型增⽣：浅蓝
癌性病灶：深蓝
主要⽤于慢性萎缩性胃炎的诊断。

亚甲蓝值试验操作规程-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
亚甲蓝值试验操作规程
1、将滤纸架空放置在敞口烧杯的顶部，使其不与任何其它物品接触。

2、细集料悬浊液在加入亚甲蓝溶液并经400r/min±40r／min转速搅拌1min后，在滤纸上进行第一次色晕检验。

即用玻璃棒沾取一滴悬浊液滴于滤纸上，液滴在滤纸上形成环状，中间是集料沉淀物，液滴的数量应使沉淀物直径在8mm～12mm之间。

外围环绕一圈无色的水环，当在沉淀物周围边缘放射出一个宽度约1mm左右的浅蓝色色晕时，试验结果称为阳性。

3、如果第一次的5mL亚甲蓝没有使沉淀物周围出现色晕，再向悬浊液中加入5mL亚甲蓝溶液，继续搅拌1min，再用玻璃棒沾取一滴悬浊液，滴于滤纸上，进行第二次色晕试验，若沉淀物周围仍来出现色晕，重复上述步骤，直到沉淀物周围放射出约1mm的稳定浅蓝色色晕。

4、停止滴加亚甲蓝溶液，但继续搅拌悬浊液，每1min进行一次色晕试验。

若色晕在最初的4min内消失，再加入
5mL亚甲蓝溶液；若色晕在第5min消失，再加入2mL亚甲蓝溶液。

两种情况下，均应继续搅拌并进行色晕试验，直至色晕可持续5min为止。

5、记录色晕持续5min时所加入的亚甲蓝溶液总体积，精确至1mL。

亚甲蓝染色原理和方法亚甲蓝染色是一种常见的细胞和组织染色方法，通过染色剂亚甲蓝将细胞核和细胞质染色，帮助研究人员观察细胞结构和功能。

下面来详细介绍亚甲蓝染色的原理和方法。

一、原理亚甲蓝染色的原理是利用染色剂亚甲蓝与DNA或RNA 结合后呈现不同的颜色，从而观察细胞核和细胞质的结构和形态。

亚甲蓝是一种带正电荷的碱性染料，可以与DNA 和RNA的负电荷结合形成亚甲蓝-DNA或亚甲蓝-RNA复合物。

当亚甲蓝与DNA或RNA结合时，会吸收特定波长的光线并反射出不同的颜色。

DNA和RNA与亚甲蓝结合的程度不同，因此呈现出颜色的深浅也不同，这使得亚甲蓝染色成为了观察细胞核结构及其他亲核物质定量分析的一种有效方法。

二、方法1. 前处理在进行亚甲蓝染色之前，需要对细胞进行前处理。

首先是细胞采集，采集后用PBS进行洗涤并离心。

然后将细胞加入适量的冰乙醇，冰乙醇会破坏细胞膜，使DNA裸露。

接着进行再次洗涤并离心，将细胞置于一个含有0.5%的氢氧化钠（NaOH, w/v）和0.5%的亚硫酸氢钠（NaHSO3, w/v）的缓冲液中，进行退火。

这个过程需要较高的温度和较长的时间。

2. 染色准备好前处理后的细胞样本，然后将样本涂沫在载玻片上。

然后将亚甲蓝染料加入，使其覆盖入完整的细胞。

让其静置15-20分钟，耗散残余亚甲蓝，最后用水冲洗玻片，把玻片晾干即可。

3. 观察将制片放入显微镜下，用透射光观察样品。

可以通过样品中不同部分颜色的不同来观察细胞结构和功能，这个技术在分离和诊断癌细胞等细胞学应用领域广泛应用。

三、优点与不足亚甲蓝染色具有以下优点：1. 可以清晰地观察细胞核和细胞质。

2. 操作简便，染色剂便宜易得。

3. 对细胞结构变形的情况下也可以使用。

但是，亚甲蓝染色也有着其不足，其中就包括：1. 亚甲蓝染色只能染色核酸，其他亲核物质不易染色。

2. 染色深浅不同会影响后续的细胞分析。

3. 可能会毒害或破坏细胞。

四、总结亚甲蓝染色是一种简便、有效的细胞核染色方法，已广泛应用于分离、鉴定和诊断不同类型的细胞研究。

尼氏染色法的原理和应用1. 原理尼氏染色法是一种常用的细胞染色技术，用来染色显示细胞核。

它是以尼氏酸为染色剂，可以与细胞核内的核蛋白质结合，使细胞核显色，从而方便观察细胞核形态和核染色质的结构。

尼氏染色法的原理主要包括以下几个步骤：1.细胞固定：首先，需要将待染细胞固定在载玻片上，一般使用甲醛等化学物质进行固定。

固定后的细胞可以保持形态和结构的完整性。

2.脱水：固定后的细胞需要经过脱水处理，即将细胞质内的水分逐渐脱除，以便后续的染色和显微观察。

一般用乙醇进行脱水处理。

3.染色：在脱水后的细胞上滴加尼氏酸染色剂，尼氏酸可以与细胞核内的核蛋白质结合，从而显色细胞核。

一般情况下，染色时间为几分钟至数十分钟。

4.水洗：尼氏染色完成后，需要用水充分洗去多余的染色剂，以防止染色过深。

5.固定：洗净后，可以用碘或碘酒溶液进行固定处理，同时也有助于增强染色效果。

2. 应用尼氏染色法在生物学和医学领域有广泛的应用，主要用于以下方面：2.1 细胞学研究尼氏染色法可以染色显示细胞核的形态和结构，对于研究细胞学过程以及细胞功能起着重要的作用。

通过尼氏染色，可以观察到细胞核的大小、形态以及染色质的状态，进而对细胞的生理状态和变化进行分析和研究。

2.2 病理学诊断在病理学中，尼氏染色法可用于诊断各种组织细胞核变化引起的疾病。

例如，在肿瘤病理学中，可以通过尼氏染色观察肿瘤细胞核的异常形态和结构，以便进行病理诊断和鉴定。

2.3 医学教学尼氏染色法是一种简单、易于操作的细胞染色技术，因此在医学教学中非常常用。

通过尼氏染色，可以展示细胞核的结构和变化，帮助学生更好地理解和掌握细胞学的基本知识和技术。

2.4 生物科研在生物科研中，尼氏染色法也是一种重要的实验手段。

通过染色显示细胞核的形态和结构，可以对细胞内基因组的组织和分布进行观察和研究，从而揭示细胞核的功能和调控机制。

3. 优点和注意事项尼氏染色法具有以下优点：•显色清晰：尼氏酸染色剂与核蛋白质结合后，显色效果清晰，细胞核易于观察和分析。

幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)使用说明书
货号：G1931
规格：100mL
保存：RT避光保存，12个月有效。

产品说明：
胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。

现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。

胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S形或海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。

该菌多见于胃黏膜表面上皮与黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦有此菌。

幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法、碱性品红法等。

硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存，但操作较为麻烦、耗时，其他方法较为简便，但染片容易褪色。

幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)采用亚甲蓝法，价格便宜，保存时间长，质量稳定。

临床上常亚甲蓝法对慢性胃炎和消化性溃疡的诊断和治疗效果的判断，推荐采用亚甲蓝法作为鉴别幽门螺旋杆菌的常规染色方法。

自备材料：
10%福尔马林固定液、蒸馏水、系列乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定于10%的福尔马林，常规脱水包埋。

2、切片厚4µm，常规脱蜡至水。

3、蒸馏水洗1次。

4、滴入HP Stain染色2～3min。

5、迅速水洗。

6、稍吹干或烤干切片。

7、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：
胃幽门螺旋杆菌蓝色
注意事项：
1、水洗后无需乙醇清洗，否则容易脱色。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。

研究脊椎动物中枢神经系统的细胞构筑学,最常用的方法是神经细胞染色,也称尼氏染色.虽然碱性染料都可用于中枢神经系统染色,但常用的有以下几种: 焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇.甲苯胺蓝属于人工合成的醌亚胺类碱性染料，有两个发色团，一个是亚胺基(- N =), 另一个是醌基，同类的有硫堇、亚甲兰，次甲基紫、中性红、焦油紫等；因为是碱性燃料，多作为细胞核染色剂－－细胞核中的核酸含有酸性物质对碱性燃料有亲和力，称之为“嗜碱性”。

硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇1g或2g溶于100mL 50%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠·3H2O 9.7g，巴比妥钠14.7g，溶于500mL蒸馏水中；③0.1 mol／L盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。

尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇等着染.受染后呈块状(形如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大 , 近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失 .因此取材时应尽量获取新鲜材料才能制作出满意的标本.mickeyzq wrote:焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。