辛基-琼脂糖凝胶4FF使用说明

IgG Beads4FF使用说明货号：I8600规格：10ml产品说明：IgG Beads4FF是以人IgG为亲和配体，一步纯化原核表达系统产生的蛋白A融合产品。

Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc片段结合哺乳动物IgG。

IgG Beads4FF是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行纯化。

具体性能下表：指标性能基质高度交联的4%琼脂糖微球配体人IgG载量>2mg蛋白A/ml介质粒径(μm)45-165最大流速0.3MPa,3barpH稳定范围3-12储存缓冲液20%乙醇储存温度2°C-8°C纯化流程：1.Buffer的准备所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

结合/洗杂Buffer:0.15M NaCl,20mM Na2HPO4,pH7.0洗脱Buffer:0.1M甘氨酸，pH 3.0中和液：1M Tris-HCl，pH8.52.样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3.IgG Beads4FF装填IgG Beads4FF被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填装，下面介绍使用IgG Beads4FF填装层析柱的方法。

层析柱的装填（使用储液器装填）1.用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

2.将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。

用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。

3.如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。

ConA-琼脂糖凝胶4B使用说明货号：S8871规格：25ml一、简介ConA-琼脂糖凝胶4B将伴刀豆球蛋白（Con A）偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的化学稳定性。

Con A能和各类带甘露醇及葡萄糖残基的糖、糖蛋白、糖脂，所以Con A琼脂糖凝胶可以用于这类物质的分离纯化。

本产品稳定性好，基团脱落少，使用寿命长，使用方便，应用广泛。

二、亲和填料特性特点基团脱落少，结合特异性强基质4%的交联琼脂糖凝胶配基Con A配基密度5-10mg/ml载量10-25mg甲状腺球蛋白亲和填料的颗粒大小45-165μm最大流速100cm/hpH范围4-9使用温度4℃~常温保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇三、适用范围Con A琼脂糖凝胶用于各种带甘露醇及葡萄糖残基的糖、糖蛋白、糖脂的分离纯化。

四、操作说明（1）该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。

（2）吸附：10-30Tris-HCl缓冲液，pH7.5，其中含有0.2M NaCl，2mM MnCl2，2mM CaCl2。

平衡10个柱子床体积。

（3）洗脱：可以用pH4.5-6的缓冲液洗脱，也可以用100-500mM糖类竞争线性或阶段洗脱，例如用甲基葡萄糖等甲基吡喃糖，其中缓冲液可以是10-30Tris-HCl缓冲液，pH7.5，含有0.2M NaCl.洗脱最多可以到10个柱床体积。

（4）上样样品必须与平衡柱子的缓冲液pH、电导相同。

（5）Con A琼脂糖凝胶FF亲和填料的再生处理方法：先用0.1M Tris-HCl pH8.5缓冲液洗含0.2M NaCl洗10个柱床体积，然后用20mM醋酸缓冲液，pH 4.5洗3个床体积,最后用20%乙醇洗3个床体积即可。

（6）对于吸附力强的物质可以用0.1M硼酸盐缓冲液，pH6.5低流速洗3-5个柱床体积。

也可以用乙醇线性洗脱20-50%。

（7）该亲和填料保存条件为20%乙醇，+4~8℃。

羧基-琼脂糖凝胶4B的使用方法产品简介羧基-琼脂糖凝胶4B是用由环氧树脂耦合方法将6-氨基已酸共价键偶联到琼脂糖4B上。

羧基-琼脂糖凝胶4B含有一个10个碳原子连接臂自由羧基，耦合氨基基团的配体。

长长的间隔臂使它特别适合固定的小分子。

产品参数产品名称：羧基-琼脂糖凝胶4B(ECH Sepharose4B)货号：S9410基质：4%琼脂糖凝胶耦合基团：氨基颗粒大小：90μm最大流速：75cm/h工作pH：3-14操作温度：室温保存条件：贮存于4°C-8°C（保存溶液为20%乙醇）使用方法1.乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;2.无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；3.盐酸浸泡：在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；4.将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。

难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可；7.洗脱方法：可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；8.在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。

方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

Protein A Sepharose 4FF 产品使用说明书——高IgG结合特异性高流速低蛋白A脱落产品特点特点结合特异性强，基颗粒大小50-160 μm团脱落少推荐流速50-300cm/h基质4%的交联琼脂糖凝胶配基重组protein A 使用温度常温pH范围3-10配基密度6mg重组蛋白A/ml动态吸附载量60mg人IgG/ml 保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇蛋白A残留小于3ng蛋白A/mg IgG产品介绍Protein A sepharose介质是经过我们公司长期开发，在公司生产的native protein A 的基础上精致而成。

通过Protein A Sepharose 4FF，可分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。

本产品相对同类产品具有如下优势：1、偶联条件温和，更好的保持了protein A的构象，所以抗体载量高，同体积的介质，相同规模的纯化设备，相同体积介质，抗体的产量明显高于用同类产品，大大的降低了抗体药物生产成本。

2、非常稳定，不易脱落，用其生产的抗体中protein A的残留比同类产品的更少。

3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生产都是在清洁车间生产，符合制药企业生产需求。

4、公司生产的Protein A sepharose使用寿命长，常规条件下能够重复使用100次以上。

使用说明（1）缓冲液的准备：平衡缓冲液：纯化不同动物和不同亚型抗体平衡缓冲液成分时所用平衡缓冲液是不同的，部分参照如下：抗体种类人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b 10mM 磷酸盐缓冲液，150mM NaCl，pH7.21人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 50mM Tris-Cl，3M NaCl，pH7.8-8.5（2）样品的准备样品上柱前先用平衡缓冲液稀释5至10倍，从而确保样品液的成分和pH与平衡缓冲液相近。

琼脂糖凝胶电泳实验操作流程如下：
1.按所分离的DNA分子的大小范围，称取适量的琼脂糖粉末，
放到一锥形瓶中，加入适量的0.5×TBE电泳缓冲液。

稍摇匀，得胶液。

2.取有机玻璃制胶板槽，有透明胶带沿胶槽四周封严，并滴加少
量的胶液封好胶带与胶槽之间的缝隙。

3.水平放置胶槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60℃
左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。

4.待胶凝固后，小心拔起梳子，撕下透明胶带，使加样孔端置阴
极段放进电泳槽内。

5.在槽内加入0.5×TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。

6.把待检测的样品，按量在洁净载玻片上小心混匀，用移液枪加
至凝胶的加样孔中。

7.接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高
不超过5V/cm，开始电泳。

琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程琼脂糖凝胶电泳操作注意事项及流程在进行凝胶电泳操作时，需要注意以下事项：1.缓冲液的使用：缓冲液的离子强度会影响DNA的迁移速度，因此应选择合适的缓冲液，并定期更换或循环使用，避免电泳过程中出现DNA变性的情况。

2.琼脂糖的选择：不同品牌和批次的琼脂糖杂质含量不同，会影响DNA的迁移和荧光背景的强度，因此应有选择地使用。

3.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，避免出现凝固结块和气泡等影响电泳结果的情况。

4.样品加入量：加样量的多少应根据加样孔的大小和DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会导致超载，从而影响电泳结果。

5.DNA标准参照物的使用：电泳系统的变化会影响DNA的迁移，因此需要加入DNA标准参照物进行判定。

6.盐浓度的影响：DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，因此应使用同样的缓冲条件进行平行对照样品以消除这种影响。

7.凝胶浓度的选择：不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，应根据DNA分子的范围来选择凝胶的浓度。

小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。

在加样时，需要注意以下事项：1.使用移液抢将样品加至点样孔，每孔点样的体积一般少于25ul，操作要稳当且细心。

2.加入适量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。

3.加入水溶性的阴离子追踪染料，用以观察样品移动的距离。

4.加入标准分子质量样品进行标准曲线的制作。

5.在追踪染料泳动到胶的80%部位时停止电泳，注意电泳期间要安全盖好电泳槽盖，以防止液体蒸发和电击的可能性。

6、在电泳结束后，将凝胶浸泡在浓度为1mg/L的溴化乙锭（EB）中，经过5分钟后，可以看到DNA带的出现。

这是因为EB分子能够插入到DNA的双链核苷酸之间，从而与DNA结合。

另外一种方法是在电泳时向凝胶中加入EB。

7、通过在紫外灯下观察，由于EB分子会发出强烈的橘红色荧光，因此可以很明显地观察到DNA带的存在。

苯甲脒琼脂糖凝胶4FF使用说明货号：S9400规格：25mL产品简介：苯甲脒类物质是丝氨酸蛋白酶的广谱抑制剂，所以将这类物质偶联到琼脂糖凝胶上，可以从各种来源的样品中一步纯化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽释放酶、前激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶。

苯甲脒琼脂糖凝胶由于应用新的活化方法所以流速高，非特异吸附少，而且填料粒度均匀，所以分离效果好，是纯化丝氨酸蛋白酶类最适合的填料。

亲和填料特征：特点载量大，分辨率好，流速高，使用方便。

基质4%的交联琼脂糖凝胶配基苯甲脒配基密度7µmol/ml吸附载量13mg胰蛋白酶/ml填料的颗粒大小45-165µm最大流速300cm/hpH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇适用范围：一步从各种样品中纯化丝氨酸蛋白酶类物质。

应用实例:实验名称：苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离尿激酶。

实验步骤：（1）苯甲脒琼脂糖凝胶FF装柱，1.6×20m，柱床体积为10ml（2）用缓冲液1平衡2-5个床体积，流速为2ml/min（3）取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的缓冲液1中，用0.45µm的滤膜过滤，上样，流速为1ml/min（4）用缓冲液1再洗2-5个床体积，流速为2ml/min（5）最后缓冲液2进行洗脱，流速为2ml/min，收集洗脱峰，用SDS-PAGE纯化后的效果。

（6）用纯水洗5个柱床体积，然后分别用100mM，pH8.0Tris-HCl缓冲液含1M NaCl 和100mM,pH4.0的醋酸缓冲液含1M NaCl交替洗涤3次，再用纯水洗3个柱床体积，然后再用20%的乙醇流洗3个柱床体积，流速为2ml/min，柱子置于+4~8℃环境中保存。

（7）色谱图见图1，SDS-PAGE结果见图2。

缓冲液组成：缓冲液1：100mM pH7.4的PBS缓冲液；缓冲液2：100mM醋酸缓冲液，pH4.0。

也可以用这个填料特异去除各种融合蛋白酶切后的丝氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋白酶类蛋白酶。