Q-琼脂糖凝胶说明书

琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
准备工具：用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子。

配制琼脂糖凝胶：根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。

将一定量的琼脂糖干粉加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE）。

融化琼脂糖：将琼脂糖放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）。

浇灌凝胶：融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固。

凝固凝胶：室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样。

加入电泳缓冲液：在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面1mm左右，去除胶孔内的气泡。

上样：将DNA样品和对应体积的上样缓冲液（loading buffer）和染料混合，用抢混匀后加入到凝胶孔内。

电泳：上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v电压，电压30敏左右即可（<40min）。

观察结果：电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。

Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存：2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性，可重复多次使用。

左右），以利于维持抗体的生物活性，避免抗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。

产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。

Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。

它与Protein A 类似，通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。

但两者结合特异性有所不同。

Protein G 对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高亲和力。

天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。

重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。

能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温， 装柱， 避免产生气泡影响柱效。

2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5：3-2：1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。

3. 若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。

4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。

5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性，以延长亲和介质的使用寿命。

6. 洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.4体失活。

Q-琼脂糖凝胶HP的使用方法说明产品简介Q-琼脂糖凝胶HP是将季铵基团键合在琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。

具有高分辨率，高载量，回收率高和再生能力强等特点。

化学稳定性好，可用氢氧化钠在位清洗。

基质的亲水特性保证在洗脱过程中减少细胞衍生杂质的非特异性吸附。

可用于蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

产品参数产品名称：Q-琼脂糖凝胶HP (Q- Sepharose High Performance)货号：S9200基质：6% 交联琼脂糖凝胶配基：季铵交换基团：- N+(CH3)3离子容量：0.14-0.20 mmolCl-/mL颗粒大小：34μm蛋白载量：10mg lgG，24mg HAS/mL工作pH：1~14(短时间，在位清洗)；2~12(长时间)化学稳定性：在以下溶液中稳定- 1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；30%异丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈；使用方法1.装柱（1）将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。

打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。

用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：Tris、PBS等。

3.上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。

琼脂糖凝胶主要成分
琼脂糖凝胶是一种常用的实验室试剂，广泛应用于生物学、化学等领域。

它是由琼脂糖和其他添加剂组成的一种凝胶状物质。

本文将重点介绍琼脂糖凝胶的主要成分，包括琼脂糖、硼酸、EDTA、Tris 等。

一、琼脂糖
琼脂糖是琼脂的水解产物，是一种天然高分子聚糖。

它是一种无色、透明、呈块状的物质，具有良好的凝胶性和稳定性，广泛应用于食品、制药、化妆品等领域。

在实验室中，琼脂糖主要用于制备凝胶、缓冲液等。

二、硼酸
硼酸是一种无机化合物，化学式为H3BO3。

它是一种白色结晶体，具有良好的溶解性和稳定性。

硼酸在琼脂糖凝胶中的作用是维持凝胶的稳定性，防止凝胶变形或失去凝胶性。

三、EDTA
EDTA是一种螯合剂，全称为乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid）。

它是一种无色晶体，具有良好的稳定性和螯合性。

在琼脂糖凝胶中，EDTA的作用是螯合金属离子，防止金属离子对凝胶的影响，从而保持凝胶的稳定性。

四、Tris
Tris是三羟甲基氨基甲烷（tris(hydroxymethyl)aminomethane）的缩写。

它是一种有机化合物，具有良好的缓冲性能。

在琼脂糖凝胶
中，Tris的作用是调节凝胶的pH值，使其处于最适合实验的pH范围内。

综上所述，琼脂糖凝胶的主要成分包括琼脂糖、硼酸、EDTA和Tris等。

这些成分在琼脂糖凝胶中发挥着不同的作用，共同维持凝胶的稳定性和性能，为实验提供了重要的支持。

琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。

对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。

普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。

琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。

选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。

注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。

正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。

低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。

注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。

适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。

电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。

注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。

电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。

注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。

特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。

琼脂糖凝胶4B货号：S8711规格：100mL/500mL保存：产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。

不能冷冻。

用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。

保质期：5年。

产品说明：琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。

1理化指标项目指标基质4%琼脂糖凝胶分离范围70000~20×106(球蛋白)形状球型粒径45~165μm推荐流速11cm/h*耐压0.018MPapH适用范围4~9化学稳定性可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。

2应用本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。

3.1装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。

配制缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。

打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

3.2平衡让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液，以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。

对于各Sepharose凝胶的推荐流速，请参考推荐流速越低，分离度越高。

3.3上样（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。

（2）推荐的样品体积为总床体积的2-5%。

3.4洗脱用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

3.5再生一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

3%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是生命科学中常用的一种凝胶，能够用于电泳、色谱、免疫印迹等实验中。

下面介绍一下3%琼脂糖凝胶的配制方法：材料：
- 琼脂糖（海藻酸钠） 3g
- TAE缓冲液 100mL
- 蒸馏水
步骤：
1. 在100mL的TAE缓冲液中加入3g的琼脂糖，搅拌至溶解。

2. 将溶液加热至沸腾，持续加热1-2分钟。

3. 关闭火源，让溶液冷却至约60°C左右。

4. 将溶液倒入凝胶模具中，注意不要产生气泡。

5. 将凝胶模具放置于室温下静置，凝胶定型。

6. 凝胶定型后，可以将凝胶取出，用TAE缓冲液或PBS缓冲液进行清洗。

7. 凝胶清洗后即可用于实验中。

注意事项：
1. 请务必使用蒸馏水进行琼脂糖凝胶的配制。

2. 在加热琼脂糖溶液时，要注意不要加热时间过长，以免影响凝胶质量。

3. 在倒入凝胶模具时，要慢慢倒入，避免产生气泡。

4. 凝胶定型后，要小心取出凝胶，以免损坏凝胶结构。

5. 凝胶清洗时，要使用缓冲液轻柔地清洗，不要使用力过大。

琼脂糖凝胶什么是琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶是一种由琼脂素制成的凝胶状物质，具有较好的凝胶性能。

它是一种常见的实验室试剂，广泛用于分离、纯化和分析生物大分子如蛋白质、核酸和多糖等。

琼脂糖凝胶的制备方法材料•琼脂素（Agarose）•缓冲溶液步骤1.准备含有适量琼脂素的缓冲溶液，通常使用Tris缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液。

2.将缓冲溶液中的琼脂素加热至溶解，可以使用烧杯和加热板完成这一步骤。

3.琼脂素完全溶解后，将溶液倒入矩形或圆形的琼脂糖凝胶模具中。

4.等待琼脂糖凝胶冷却和凝胶化。

凝胶的结构可以通过调整琼脂素的浓度和凝胶化温度来进行控制，常见的琼脂糖凝胶浓度为0.5%-2.0%。

琼脂糖凝胶的应用琼脂糖凝胶在生物科学领域有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 蛋白质凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种常见的蛋白质分离技术。

凝胶中的孔隙结构可以根据蛋白质分子的大小、形状和电荷特性，实现对蛋白质的分离和纯化。

通过电泳电场的作用，蛋白质分子会迁移至电泳胶中，形成一系列条带，可以根据条带的位置和宽度来判断样品中蛋白质的相对含量和纯度。

2. 核酸凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳也被广泛应用于核酸分析和分离。

琼脂糖凝胶可以在电场中对核酸进行分子大小分离，并可通过DNA染料或放射性标记物对核酸进行可视化。

这种技术可以用于DNA片段的分离、纯化和定量分析，也可以用于RNA的分离和检测等。

3. 蛋白-核酸相互作用研究琼脂糖凝胶亦可用于研究蛋白与核酸之间的相互作用。

通过在琼脂糖凝胶中添加核酸和蛋白质样品，可以观察它们之间的相互作用。

这种方法可以用于研究蛋白与DNA或RNA之间的结合，还可以用于筛选与特定核酸序列结合的蛋白。

4. 免疫固定电泳琼脂糖凝胶亦可用于免疫固定电泳，用于研究蛋白质的抗原性质。

在这种方法中，将抗原与琼脂糖凝胶混合，使其固定在凝胶孔隙中，然后通过电泳将抗原从凝胶中迁移出来。

迁移过程中，抗原与抗体之间的特异性结合会引起凝胶中条带的出现，可以用于确定蛋白质的抗原性质。